烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

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3.烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

基金项目:河南省科技厅“烟草细胞和发状根培养中茄尼醇的合成研究”(524420033)项目和郑州大学青年骨干教师资助项目“烟草中萜烯类次生代谢物的合成研究”资助。

作者简介:岳彩鹏(1974-),女,博士,郑州大学讲师,主要从事烟草生理研究。

E 2mail:yuecai peng@zzu .edu .cn 收稿日期:2007-05-21责任编辑:董志坚　E 2mail:yckj2256@yahoo 电话:0371267672650烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立岳彩鹏,李　品,黄象男,朱大恒郑州大学生物工程系,郑州市科学大道100号　450001关键词:烟草;愈伤组织;悬浮培养;白肋烟;鄂烟1号摘要:以鄂烟1号无菌苗的叶为材料进行愈伤组织的诱导,筛选出生长培养基的最佳激素配比,初步建立了烟草细胞悬浮培养体系。

结果表明,愈伤组织诱导的最优基本培养基为MS 培养基,以MS +NAA 110mg /L +6-BA 0.5mg/L 为最佳配方;愈伤组织最佳生长培养基为MS +2,4-D 011mg/L +NAA 115mg/L +6-BA 013mg/L,愈伤组织培养第6天进入对数生长期,第14天干重增至最初干重的12.536倍,并以此配方建立了烟草细胞悬浮培养体系。

中图分类号:S572.01　文献标识码:B 文章编号:1002-0861(2007)10-0056-04Tobacco Ca llus I nducti on and Est ablish m en t of Cell Suspen si on Culture Syste m Y UE CA I 2PENG,L I P I N ,HUANG X I A NG 2NAN,and Z HU DA 2HENG B i oengineering Depart m ent,Zhengzhou University,Zhengzhou 450001,China Keywords:T obacco;Callus;Sus pensi on culture;Burley t obacco;E ’yan 1Abstract:The callus inducti on was carried out with the leaves of asep tic seedling of t obacco E ’yan 1,and the op ti m al hor mone p r oporti on in culture medium was screened out,and the syste m of t obacco cell sus pensi on culture was established p reli m inarily .The results showed thatMS was the op ti m al basic mediu m for callus inducti on,and the op ti m al f or mula was MS +NAA 1.0mg/L +62BA 0.5mg/L;while the op ti m al f or mula for culture mediu m of callus wasMS +2,42D 0.1mg/L +NAA 1.5mg/L +62BA 0.3mg/L.On the 6th day of callus culturing,the l ogarith m gr owth peri od started;and on the 14th day,the dry weight increased t o 12.536ti m es of its initial dry weight .The syste m of t obacco cell sus pensi on culture was established based on this f or mula . 组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径[1]。

烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立分析

实验原理
分化了的植物叶片细胞往往具有全能性，因此将烟草叶片从植株上分离后，给予一定的培养条件，可以诱导叶片细胞脱分化，脱分化的细胞不断分裂就形成愈伤组织，愈伤组织再在合适的培养条件下又能够再分化形成完整植株，烟草愈伤组织的再分化是以不定芽的方式，即愈伤组织先形成不定芽，再由不定芽形成完整植株，从而完成了再生体系的建立。
接种第一天
接种第二天，因为外植体细胞开始被诱导脱分化，并不断分裂增殖，造成叶片中央与边缘的细胞分裂不均匀，因此，叶片中央凸起。
接种第五天，脱分化细胞不断分裂增殖，形成愈伤组织，表现为叶片边缘泛黄增脱分化细胞不断增值，愈伤组织不断增厚，整个叶片都翘起，并且已经开始再分化形成绿色生长点。
实验十
烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立
实验目的： 1.通过实验，掌握无菌操作方法，熟悉烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立的整个过程。 2.学习再生体系的建立方法，为掌握其他植物的组织培养奠定基础；同时为转基因技术提供一个平台。
再生体系的建立主要应用于以下几个方面： 1、用于验证植物细胞的全能性。 2、是植物基因工程的重要基础，外源基因转入受体细胞，受体细胞通过脱分化形成愈伤组织，愈伤组织通过再分化形成植株，从而获得转基因植株。 3、也是植物快繁的一种方式，通过诱导愈伤组织再分化，能够在短时间内形成大量的不定芽或胚状体，从而获得大量的植株。
第九天（诱导生成愈伤组织）
接种第十九天，绿色生长点进一步发育形成了不定芽，不定芽长度最长可达1 cm 。
第十九天（长出幼叶）
将不定芽在无菌条件下，从芽的基部切下，然后插入生根培养基中（1/2 MS），诱导生根。
芽的生根情况
实验步骤一）材料的消毒： 1）剪取生长健壮的叶片，最好带有叶柄。 2）将整个叶片（包括叶柄）全部浸入70％的乙醇中，不断振荡30 s。 3）将乙醇倒掉，迅速加入0.1％的升汞，再将整个叶片（包括叶柄）全部浸入0.1％的升汞中，不断振荡 10 min。 4）于工作台上用无菌镊子将上述叶片夹入无菌烧杯中，同时将升汞倒入盛有硫化钠的桶里。 5）用无菌水冲洗上述叶片3－5遍，取出后用无菌滤纸吸干，备用。

烟草光能兼养型愈伤组织的诱导和培养条件

ｉｃｅｓｇｙｔｒｒｅ．Ｈｏｅｅ，ｅｈｏｃｎｒｔｎｏｕｒｓｓｒｄｃｄｔｅｏ．％，ｉｅｓｌｕｅｒｗｎｒａｉｌｕｎｇｅｎｎｗｖｒｗｈｎｔｅｃｎｅｔｉｆｓｃｏｅｗａｅｕｅｏｂｌｗ１５ａｏｔａｉｔｒｄｂｏｎ．ｙｎ
第３卷第２期１２１０２年６月
中南民族大学学报（自然科学版）
Ｊｕａｏｏｔ－ｅｔｌｎｖｒｉｒａｉａｉｅ（ａ．ｃ．ｄｉ）ｏｒｌｆｕｈＣｎｒｉｓｙｆｔｎｌｉｓＮｔＳｉＥｉｏｎＳａＵｅｔｏＮｏｔｔｎ
ＩｄｕｃｉｎｆＰｈｔａｔｔｏｉｃｔｔｖｌｕｓｏｃｔａａｎｔｏｏｏｏｕｏｒｐｈｃＦａｕｌａｉｅＣａｌｆＮｉｏｉｎ
ｔｂｃｍｎｔｌｕｒｎｄｔｏａａｕａｄＩｓＣｕｔｅＣｏｉｉｎ
（－６糖基氨基嘌呤）＋％蔗糖＋．％琼脂的固体培养基成功诱导了叶片的愈伤组织．３０８通过改变蔗糖浓度和激素配比，对兼性愈伤组织的培养基进行了筛选．结果表明：５０ｌｓ在０光照下，ｘ蔗糖浓度由３％降至１５．％时，愈伤组织有变绿趋势；蔗糖浓度＜１５．％时，愈伤组织容易出现褐化．２ｍｇＬＮＡ（萘乙酸）＋．５ｍ／Ｔ的激素组合可／Ａ一０２ｇＬＫ有效诱导愈伤组织的光合兼养，而单一植物激素如ＮＡ和６Ｂ６苄氨基腺嘌呤）不是理想的诱导配方．Ａ－Ａ（－，关键词愈伤诱导；组织培养；光兼养型；烟草Ｑ４．文献标识码９３１Ａ文章编号１７４３１２１）２０４－３６２２（０２０－ｉａｏｆ２ｍ／Ａ（－ａｈｌｔ）ｗｔ０２ｍ／ＴｃｎｅｅｔｅｎｕｅｔｒｄｃｏｆｈｏｂｎｔｎｏｇＬＮＡ１ｎｐｔｃｉｉｈｅｃｉ．５ｇＬＫａｆｃｉｌｉｃｈｐｏｕｔｎｏｈｆｖｙｄｅｉｐｏｏｕｏｏｈｃｆｃｌｔｅｃｌｓｗｅｅｓｈｎｕｌｔｏｏｅｕｈａＮＡｏ－Ａ（－ｅｚｌｉｏｕｉ）ｃｎｈｔｔｒｐｉａｕｔｉａｕ，ｈｒａｔｅｕｉｅｐｎｒｎ，ｓｃｓＡｒＢ６ｂｎｙｍｎｐｒｅａａｔａｖｌｑａｈｍ６ａｎ

烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立一、概述烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立，是植物组织培养领域中的一项重要研究。

烟草作为一种重要的经济作物，其组织培养技术的研究对于提高其生产效率、优化品质具有重要意义。

愈伤组织的诱导是植物组织培养的第一步，也是后续细胞悬浮培养、基因工程操作等的基础。

烟草愈伤组织的诱导，通常通过无菌操作，利用激素等生长因子刺激烟草叶片等外植体细胞脱分化形成。

这一过程不仅受到激素种类和浓度的影响，还受到光照、温度、湿度等培养条件的影响。

优化诱导条件，降低褐化等不利因素的影响，是烟草愈伤组织诱导研究的关键。

细胞悬浮培养体系的建立，则是进一步将愈伤组织转化为可用于大规模生产和基因操作的细胞悬浮液。

通过选择适当的培养基、调节生长条件、优化细胞悬浮密度等手段，可以实现烟草细胞的稳定增殖和高效表达。

本文旨在探索烟草愈伤组织的诱导条件以及细胞悬浮培养体系的建立方法，通过系统的实验设计和优化，为烟草组织培养技术的发展和应用提供理论基础和实践指导。

这一研究也将为其他植物的组织培养提供有益的参考和借鉴。

1. 烟草愈伤组织诱导与细胞悬浮培养体系的重要性烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立，在植物组织培养、基因工程以及植物快繁等多个领域都具有重要的科学意义和实践价值。

愈伤组织的诱导是植物组织培养中的关键环节。

通过特定的培养基和培养条件，可以诱导烟草叶片等外植体脱分化形成愈伤组织。

这一过程不仅验证了植物细胞的全能性，而且为后续的细胞悬浮培养提供了适宜的起始材料。

细胞悬浮培养体系的建立为植物细胞的大规模培养和遗传转化提供了平台。

通过优化悬浮培养条件，可以获得大量生长状态良好的细胞，进而用于后续的基因转化、次生代谢产物生产等研究。

悬浮培养体系还可以用于筛选具有优良性状或抗性的细胞株系，为烟草育种提供新的途径。

烟草愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系在植物快繁方面也具有潜在的应用价值。

通过诱导愈伤组织再分化形成不定芽或胚状体，可以在短时间内获得大量的植株，从而实现烟草的快速繁殖。

本生烟草愈伤组织的诱导和再生体系的建立

的关键。本研究探索了本生烟草愈伤组织诱导和植株再生的
。有关本生烟草转基因的研究也
基金项目：山东省自然科学基金（编号：ＺＲ２０１２ＣＬ１４）；滨州学院博士
基金（编号：２０１０Ｙ０８）。
作者简介：陆玉建（１９７９一），男，河南南阳人，博士，讲师，研究方向为植
林业科技，２００５，３２（１）：１３０—１３４．
［７］于福科，张广军．玫瑰组织培养污染控制技术措施［Ｊ］．陕西农
业科学，２００２（１１）：４７—４８．
［８］周俊辉，周厚高，刘花全．植物组织培养中的内生细菌污染问题［Ｊ］．广西植物，２００３，２３（１）：４１ — ４７．［９］王利民，周毅，陈龙友，等．植物组织培养中消毒剂的运用［Ｊ］．贵州师范大学学报：自然科学版，２００２，２０（１）：１５— １７．［１Ｏ］王黎波，李晓燕．抗生素在植物组织培养中控制污染的应用［Ｊ］．辽宁农业科学，２００７（３）：６９ — ７０．［１１］纪纯阳，矫丽曼，刘巍，等．植物组织培养中污染产生的原因及防止措施［Ｊ］．辽宁林业科技，２０１１（２）：４０ — ４４．［１２］郝云风，李可伟，张培宏，等．植物组织培养操作过程中常见的污染问题及解决办法［Ｊ］．内蒙古农业科技，２００４（增刊）：

本生烟草愈伤组织的诱导和再生体系的建立

本生烟草愈伤组织的诱导和再生体系的建立作者：陆玉建刘俊华王书平高春明刘晓君任宇灵来源：《江苏农业科学》2014年第01期摘要：以本生烟草为材料，研究了不同激素组合对本生烟草愈伤组织诱导和植株再生的影响。

结果表明：当本生烟草叶片在MS+1.0 mg/L 2，4-D+0.2 mg/L KT培养基中培养时，其出愈率最高，愈伤组织生长状况最好；在MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中不定芽生长最快，但存在一定程度的玻璃化现象；MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中不定芽长势较慢，但玻璃化程度较轻；对于生根诱导，MS、1/2MS培养基都可诱导不定根的产生，但NAA对根的生长更有效。

关键词：本生烟草；愈伤组织；不定芽；诱导；再生体系中图分类号： S572.043；Q943.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0052-03收稿日期：2013-05-17基金项目：山东省自然科学基金（编号：ZR2012CL14）；滨州学院博士基金（编号：2010Y08）。

作者简介：陆玉建（1979—），男，河南南阳人，博士，讲师，研究方向为植物生物技术。

Tel：（0543）3190096；E-mail：luyujian79@。

烟草是重要的经济作物，常被作为基因工程和分子生物学研究中重要的模式植物[1-5]。

目前烟草遗传转化研究多用普通烟草（Nicotiana tabacum）作为受体，而对本生烟草（Nicotiana benthamiana）的研究相对较少。

本生烟草和普通烟草有密切的亲缘关系[6-7]，由于其植株矮小，生长速度快，生命周期短，对植物病毒非常敏感，所以是基因功能分析和植物病害研究的重要工具[4-8]。

有关本生烟草转基因的研究也见诸报道，通过在本生烟草中瞬时表达促红细胞生成素基因，能够生产重组蛋白-促红细胞生成素[9]。

利用本生烟草建立的质体转化系统，可以用来研究质体和细胞核基因间的相互作用，以及检测质体中相关基因的表达情况[7]。

烟草叶片愈伤组织的诱导与植株再生

烟草叶⽚愈伤组织的诱导与植株再⽣烟草叶⽚愈伤组织的诱导与植株再⽣2001级⽣物科学1班 200113515 黄麟飞摘要：在MS培养基上,接种烟草⽆菌苗的叶⽚,分别放在光照和⿊暗条件下诱导愈伤组织,接种于MS分化培养基上,在光照下分化再⽣植株。

结果表明:光照和植物⽣长调节剂对植物愈伤组织的诱导和植株再⽣产⽣影响。

关键词: 烟草愈伤组织植株再⽣Callus Inducement and Plant Regegeration Of TobaccoHuang LinfeiAbstract: culture the leaves of tobacco into MS inducing medium separately under light and darkness. Then culture the induced callus into MSregeneration medium under under light. The result sayed that callus inducement and plant regeneration of tobacco was effected by light and plant grow regulators.Key Word: tobacco callus plant regeneration⼆⼗⼀世纪是⽣命科学的时代，这⼀上世纪末科学家的语预⾔现在已经真切地在众多科技领域强⼤背景下款款⽽来了。

1998年8⽉12⽇美国总统克林顿发表了美国⽣物物质研究战略,决定2000年拨款2.1亿美元作为研究经费。

⽇本于2000年制定了“21世纪⽣物技术发展规划”，并提出了“⽣物产业利国”的⼝号[1]。

⽣物技术在医疗、保健、农业、环保、轻化⼯、⾷品等重要领域对改善⼈类健康与⽣存环境，提⾼农牧业与⼯业产量与质量都开始发挥越来越重要的作⽤。

⽣物技术涵盖的技术领域范围很⼴，包括遗传⼯程、细胞融合、细胞组织培养、胚胎及细胞核移植等技术。

花生愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

花生愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立黄文静;许春燕;何虎翼;邓伦武;李创珍;韦善清;何龙飞【摘要】With Zhonghua2 as material, the optimum culture conditions of callus induction and cell suspension culture were studied, the growth characteristics of suspension cell were detected, and a cell suspension culture system was established. The results showed that leaf was the best explant for callus induction and cell suspension culture, the optimal medium for callus induction was MS-+- 6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L,the optimal formula for suspension culture was MS+6-BA 2.0 rag/L+ 2,4-D 2. 0 mg/L + KT 1. 5 mg/L. The growth of suspension cells exhibited an S-shaped curve, growth mass reached the maximum after 12d culture, the optimal subculture cycle was around 12d. In the process of suspension culture, the suspension cell number exhibited the change trend: firstly increased, then decreased. The change trends of pH value and conductivity showed the same: firstly decreased, then increased, and then became stable.%以中花2号无菌苗为材料，对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的最佳条件进行探讨，并对悬浮细胞的生长特性进行检测，建立了花生悬浮细胞培养体系。

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作者简介:岳彩鹏(1974-),女,博士,郑州大学讲师,主要从事烟草生理研究。

有关烟草组织和细胞培养已有不少报道[225],近年来在抗性研究、基因转化和次生物质生产等方面也取得一些进展[629]。

有研究表明[10],以植物悬浮培养细胞为材料生产次生代谢物具有培养周期短、材料均一、重复性好等优点。

烟草中含有大量次生代谢物,因此,建立稳定而具有高活力的烟草悬浮培养细胞体系对次生代谢物的生产有重要意义。

到目前在白肋烟的愈伤组织培养和细胞悬浮培养方面的研究报道较少。

本试验以白肋烟鄂烟1号的叶为材料进行了愈伤组织的诱导,确定获得脆散性愈伤组织的最佳激素配比,并以此为基础建立起烟草细胞悬浮培养体系,旨在为烟草中次生物质的生物开发利用提供依据。

1　材料与方法1.1　试验材料鄂烟1号烟草种子,由郑州烟草研究院提供。

1.2　试验方法1.2.1　无菌苗的获得将烟草种子用70%酒精浸泡1m in,10% NaCl O消毒10m in,经无菌水漂洗后接种于无激素的MS固体培养基,28℃下暗培养,之后将未污染的发芽种子转接到MS固体培养基上,于28℃下光照培养16h,得无菌种子幼苗。

1.2.2　初始愈伤组织诱导和基本生长培养基的筛选取无菌苗叶片外植体,切成5mm×5mm的小块,接种在加有激素的3种基本培养基上,各处理见表1。

28℃下暗培养,15d后得到初始愈伤组织。

1.2.3　愈伤组织的继代和最佳生长培养基激素配比的筛选在基本培养基筛选的基础上,筛选出最优基本培养基为MS培养基,其对激素配比做进一步的调整细化,见表2,选取长势较好的愈伤组织继代培养,筛选最佳生长培养基。

1.2.4　脆散性愈伤组织的获得按已确定的生长培养基配方配制固体生长培养基,选择长势较好、黄白色的愈伤组织进行继代,28℃下暗培养,第4代后获得脆散性愈伤组织。

1.2.5　愈伤组织的鲜重、干重生长倍增曲线的绘制按已确定的最优生长培养基配方配制固体培养基,灭菌分装于三角瓶中。

将切好的脆散性愈伤组织称重后接种于编号的三角瓶中,记录m1;于28℃下暗培养,每2d取样1次,每次取样3瓶,称取愈伤组织鲜重,记录m2;将愈伤组织烘干至恒重,称重记录m3。

每次取样的愈伤组织鲜重与干重倍增值的计算方法:愈伤组织鲜重倍增值F=m2/m1愈伤组织干重倍增值D=m3/(m1・115%)式中:115%为接种愈伤组织的生物干重百分率。

依据愈伤组织鲜重与干重倍增值的平均值绘制生长曲线。

1.2.6　烟草细胞悬浮培养体系的建立按已确定的生长培养基配方配制液体生长培养基,将疏松愈伤组织用玻璃棒碾碎,每瓶加入一定量的愈伤组织,pH值为5.7～518,28℃下摇床暗培养,摇床转速110r pm。

表1　诱导培养基的激素配比激素(mg/L)M S①B5②NT③MS1M S2MS3MS4B51B52B53B54NT1NT2NT3NT4NT5NT6NT72,4-D④3.01.0——1.0———2.01.02.0————KT⑤0.20.5——0.5———0.20.50.5————NAA⑥——1.00.5—0.51.00.5———0.51.02.00.5 6-BA⑦——0.51.0—0.50.51.0———0.50.50.51.0　注:①M urashige-Skoog培养基;②Ga mborg培养基;③Nagata-Takebe培养基;④2,4-二氯苯氧乙酸;⑤激动素;⑥萘乙酸;⑦6-苄基氨基嘌呤。

表2　生长培养基的激素配比编号2,4-D(mg/L)KT(mg/L)NAA(mg/L)6-BA(mg/L)MS5——0.50.3 MS6——0.50.5 MS4——0.51.0 MS7——0.750.5 MS8——0.750.75 MS9——1.00.3 MS3——1.00.5 M S10——1.00.75 M S11——1.50.3 M S12——2.00.3 M S130.10.02——M S140.10.05——M S150.10.1——编号2,4-D(mg/L)KT(mg/L)NAA(mg/L)6-BA(mg/L) MS160.10.2——MS170.10.3——MS180.50.1——MS190.50.2——MS200.50.3——MS210.30.02——MS221.00.2——MS232.00.2——MS240.1—0.50.5 MS250.1—0.50.3 MS260.1—1.50.3 MS270.3—1.50.3 MS280.1—2.00.32　结果与讨论2.1　烟草愈伤组织的诱导和基本培养基的筛选将烟草外植体接种到基本培养基上,28℃下暗培养15d,观察外植体生长分化的情况,获得一系列不同分化程度的烟草愈伤组织,见表3。

由表3可见,3种基本培养基中激素组合NAA+6-BA的烟草愈伤组织诱导率优于2,4-D+KT,NT基本培养基上烟草愈伤组织的诱导率很低。

MS培养基的各种处理诱导出愈伤组织最快,约6～8d;B5基本培养基约为10～12d;在NT 基本培养基上的诱导时间较长,约35～40d,而且外植体的死亡率也比MS和B5基本培养基高。

因此NT培养基不适合本实验材料愈伤组织的诱导。

在MS培养基和B5培养基上,加2,4-D激素虽然有抑制芽分化的作用,但是浓度高于1.0 mg/L时会使愈伤组织变黑,对细胞生长不利。

MS培养基上,MS3(NAA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L)的效果最好,烟草胚性愈伤组织的诱导率较高,没有褐化,MS4(NAA0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L)次之,MS1(2,4-D3.0mg/L+KT0.2 mg/L)褐化严重;B5基本培养基上,B53(NAA 1.0mg/L+6-BA0.5mg/L)的效果最好,B54 (NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L)次之。

可见, 3种培养基中MS基本培养基适合本实验材料外植体的诱导。

2.2　最佳生长培养基激素配比的筛选和脆散性愈伤组织的获得在基本培养基中选择烟草细胞脱分化程度高、生长快的培养基配方MS+NAA1.0mg/L+6 -BA0.5mg/L、MS+NAA0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L和MS+2,4-D1.0mg/L+KT0.5mg/ L,以此为基础对激素配比作进一步的调整(表2),选择长势较好,淡黄色的愈伤组织切成小块,接种到新鲜的培养基上。

28℃下暗培养15d,观察结果见表4。

表3　不同基本培养基烟草外植体愈伤组织的诱导项目MS B5NTMS1MS2M S3MS4B51B52B53B54NT1NT2NT3NT4NT5NT6NT7外植体数(个)2319141418991412161413141218愈伤组织数(个)231614141789120204120颜色发褐数(个)23801238010000000诱导率(%)10084.210010094.488.910085.7012.5030.87.116.70表4　M S培养基上愈伤组织的生长状况编号褐化程度①分化程度②愈伤组织体积大小MS5+++++ MS6+++++ MS4+++++++++ MS7++++ MS8++++++ MS9++++ MS3+++++ M S10+++++ M S11++++ M S12++ M S13++++ M S14+++++ M S15+++++编号褐化程度①分化程度②愈伤组织体积大小MS16++++++ MS17+++++++ MS18++++ MS19+++ MS20++++++ MS21++++ MS22++++MS23++++++ MS24+++++ MS25+++++ MS26+++++ MS27++++ MS28+++　注:①“+”表示程度的高低。