烟草植物组织培养
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术，理解植物细胞的全能性。
二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NA D和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IP A和吲哚丁酸IBA）细胞分裂素（6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤（K T）氯吡苯脲（KT-30，CPPU））等。
分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。
烟草组织培养
题目 ： 烟草组织培养
组员 ：刘耀敏（组长）黄净 任艳芳 钟小程 刘瑞莲 黄勺舒 周燕梅
• 研究目的：近年来随着先进的烟草工 厂化育苗的推广，传统的育种方法难 以克服自然退化的问题，而通过组织 培养可以克服这样一个问题。故烟草 组培在市场上将占有很大的优势。所 以我们组想对烟草进行组织培养研究， 这大部分也是我们个人的兴趣。 • 参考文献：烟草快速繁殖及培养的研 究（云南农业大学学报，第十三卷， 第四期）
研究内容：用试管快繁技术繁殖, 可节约繁 殖材料，只取原材料上的一小块组织或 器官就能在短期内生产出大量市场所需 的优质苗木, 每年可以繁殖出几万甚至数 百万的小植株，既不损伤原材料又可获 得较高的经济效益。 采用茎尖培养的方法或结合热处理除去绝 大数植物的病毒、真菌和细菌，使植株 生长势强、色泽鲜艳、抗逆能力提高
• 试管繁殖是一种微型的无性繁殖,它取材于 同一个体的体细胞而不是性细胞,因此其后 代遗传性非常一致,能保持原有品种的优良 性状。对保质、保纯有着特殊作用。可获 得大量的统一规格、高质量的苗木。
• 研究意义：1、繁殖速度快、繁殖 系数大; 2、繁殖方式多;有短枝扦 插、芽增殖、原球茎、器官分化和 胚状体发生 3、繁殖后代整齐一致, 能保持原有品种的优良性状 4、可 获得无毒苗 5、可进行周年工厂化、培养基的制备 在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种 适合的培养基，最好先由一种已被广泛彩的基本 培养基开始，烟草的培养采用的是MS基本培养 基。在实际培养过程中，分为三种培养基进行使 用： 1 1、诱导愈伤组织的培养基：MS+6MS+6BA2+NAA0.5 2、诱导芽的培养基：MS+6-BA2+NAA0.1 3、诱导根的培养基：MS+6-BA2+IBA0.5 各种培养基所用琼脂为9g/L，蔗糖均为30g/L， PH为5.5-6.0
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术。
深刻理解植物细胞的全能性。
二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸IBA）细胞分裂素（6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（KT-30，CPPU））等。
分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。
烟草组织培养实验方案
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
烟草开放式组培的探究
09018开放式植物组培的探究作者: 上海市延安中学赵程摘要：植物组织培养在现代生命科学的研究中有着重要价值，相关的知识点在高中生物课本中也有涉及，但在实际教学过程中，由于很多学校没有专用的无菌室及相关的灭菌设备，烟草组织培养的探究教学内容无法在中学正常开展。
本课题选用最易获得的抑菌物质——大蒜汁作为抑菌剂，用其抑制组培过程中的污染，同时调整不同NAA浓度加快烟草愈伤组织的形成，在普通实验室条件下进行烟草组织培养的实验探究。
结果表明：大蒜汁浓度越高，污染率越少，大蒜汁浓度越低，愈伤组织的形成越快，越多，芽点的出现率越早越高； NAA对于烟草生长有一定作用，浓度越高，烟草生长越缓慢。
根据以上实验结果，以2.5g/L大蒜汁浓度及0.5mg/ml NAA浓度进行开放式烟草的组织培养效果最佳，基本可以满足中学课堂教学的要求，具有辅助教学推广价值，使同学在常规实验室里也能够进行组织培养技术的学习。
关键词：开放式组培；烟草；大蒜汁；激素1 课题由来植物组织培养是指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养需要在严格无菌的环境中操作，主要因为营养丰富的培养基为细菌、真菌提供了适宜的滋生场所。
如果在有菌的环境中接种，细菌、真菌的大量繁殖，从而导致外植体组织污染、坏死。
植物组织培养的理论依据是细胞的全能性，相关的知识点在高中生命科学课本中也有涉及。
烟草组织培养及细胞全能性的探究实验是课堂教学内容，但因实验条件限制，需要在专用的无菌室中进行，使大多不具备相关实验条件的学校，在实际教学过程中删去了这一实验内容，使同学无法直观的领略组织培养及细胞全能性的神奇魅力。
那么能不能通过选择适当的抑菌剂，在抑制细菌、真菌生长，同时又基本不影响烟草生长的基础上，在有菌环境中完成烟草的组织培养呢？众所周知，大蒜易取、具有很强大抑菌作用，能否通过在烟草组织培养的培养基中添加大蒜汁作为抑菌剂，在开放环境中完成烟草组培实验呢？另外，在组织培养过程中，培养基能保证培养物的基本生存与最低生理活动，需配合使用适当的外源激素才能诱导细胞分裂的启动、愈伤组织生长以及芽、根的分化等，添加大蒜汁后正常的组织培养过程中添加的激素浓度产生影响呢？带着以上问题，我查阅了相关资料和咨询了植物学的专家，在我指导老师的帮助下，开始了开放性烟草组织培养的实验探究。
烟草叶片组织培养及植株再生
1、选取的叶片应尽可能健康， 无病虫害。
2、消毒过程中要避免过度浸泡， 以免对叶片造成损伤。
3、培养基的成分和浓度是诱导愈伤组织的关键因素，需要根据实验目的进 行调整。
4、培养过程中的温度和光照也是影响愈伤组织生长的重要环境因素，需要 保持恒定。
步骤2：红花烟草叶片愈伤组织诱导后的处理措施以及后续的筛选和优化 在红花烟草叶片愈伤组织诱导成功后，需要进行以下处理措施：
谢谢观看
通过对红花烟草叶片愈伤组织的诱导与植株再生研究，可以为提高烟草的产 量和品质以及植物生物技术的进一步发展提供有力的支持。
步骤1：红花烟草叶片愈伤组织 诱导的基本步骤和注意事项
红花烟草叶片愈伤组织的诱导主要分为以下几个步骤：
1、选取健康的红花烟草叶片， 将其用自来水冲洗干净。
2、将洗净的叶片置于消毒液中浸泡一定时间，以杀死叶片表面的微生物。 常用的消毒液有70%酒精和0.1%升汞等。
烟草叶片组织培养及植株再生
01 一、引言
目录Leabharlann 02二、烟草叶片组织培 养
03 三、烟草植株再生
04 四、分析比较叶片组 织培养和植株再生
05 五、总结
06 参考内容
一、引言
随着生物技术的迅速发展，植物组织培养技术已成为一种重要的研究手段， 广泛应用于农业、林业、医药等领域。在烟草行业，叶片组织培养和植株再生技 术的运用对于提高烟草产量、品质以及抗病抗逆性等方面具有重要意义。本次演 示将详细介绍烟草叶片组织培养和植株再生的基本原理、方法及应用，并对其优 缺点进行分析和比较。
（1）方法：烟草叶片组织培养的主要流程包括选取叶片、消毒、接种、培 养、增殖和移栽等步骤。
（2）设备：实验室进行烟草叶片组织培养需要的基本设备包括超净工作台、 酒精灯、解剖刀、镊子、培养皿、三角瓶、摇床等。
烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立
烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立一、概述烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立，是植物组织培养领域中的一项重要研究。
烟草作为一种重要的经济作物，其组织培养技术的研究对于提高其生产效率、优化品质具有重要意义。
愈伤组织的诱导是植物组织培养的第一步，也是后续细胞悬浮培养、基因工程操作等的基础。
烟草愈伤组织的诱导，通常通过无菌操作，利用激素等生长因子刺激烟草叶片等外植体细胞脱分化形成。
这一过程不仅受到激素种类和浓度的影响，还受到光照、温度、湿度等培养条件的影响。
优化诱导条件，降低褐化等不利因素的影响，是烟草愈伤组织诱导研究的关键。
细胞悬浮培养体系的建立，则是进一步将愈伤组织转化为可用于大规模生产和基因操作的细胞悬浮液。
通过选择适当的培养基、调节生长条件、优化细胞悬浮密度等手段，可以实现烟草细胞的稳定增殖和高效表达。
本文旨在探索烟草愈伤组织的诱导条件以及细胞悬浮培养体系的建立方法，通过系统的实验设计和优化，为烟草组织培养技术的发展和应用提供理论基础和实践指导。
这一研究也将为其他植物的组织培养提供有益的参考和借鉴。
1. 烟草愈伤组织诱导与细胞悬浮培养体系的重要性烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立，在植物组织培养、基因工程以及植物快繁等多个领域都具有重要的科学意义和实践价值。
愈伤组织的诱导是植物组织培养中的关键环节。
通过特定的培养基和培养条件，可以诱导烟草叶片等外植体脱分化形成愈伤组织。
这一过程不仅验证了植物细胞的全能性，而且为后续的细胞悬浮培养提供了适宜的起始材料。
细胞悬浮培养体系的建立为植物细胞的大规模培养和遗传转化提供了平台。
通过优化悬浮培养条件，可以获得大量生长状态良好的细胞，进而用于后续的基因转化、次生代谢产物生产等研究。
悬浮培养体系还可以用于筛选具有优良性状或抗性的细胞株系，为烟草育种提供新的途径。
烟草愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系在植物快繁方面也具有潜在的应用价值。
通过诱导愈伤组织再分化形成不定芽或胚状体，可以在短时间内获得大量的植株，从而实现烟草的快速繁殖。
烟草幼苗的组织培养实验报告
烟草幼苗的组织培养实验报告一，实验名称：烟草幼苗的组织培养二，实验原理：植物组织培养是指在无菌条件下，分离并在培养基中培养立体植物组织（器官和细胞）的技术。
植物组织培养的理论基础是植物细胞具有全能型。
植物组织当中原本已经分化的细胞，在脱离原有机体环境成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化的细胞发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞（本实验中用到的是愈伤组织，是由植物的一个离体的细胞，一块组织或一个器官的细胞脱分化形成的），并重新生长发育成完整的植株。
生长素，细胞分裂素浓度之间的平衡可以决定烟草组织幼苗的叶片或茎髓将产生根，茎或仅仅是愈伤组织。
三，实验材料和用具：1、材料：烟草幼茎2、用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术器械、20ml量筒、PH试纸、烧杯、玻璃棒、三角烧瓶、封口膜、高压橡皮筋。
3、试剂：MS培养基、NAA、6-BA四，实验步骤：1、培养基的配置成分实际称取量大量元素（10×）40 ml蒸馏水300 ml微量元素（100×） 4 ml有机成分（100×） 4 ml铁盐（100×） 4 ml蔗糖12 g定容至400 ml激素（1 mg/ml）每130 ml MS加：生根6-BA=13 μl NAA=65 μl生芽6-BA=65 μl NAA=13 μl对照组（不加激素）pH值 5.8分瓶30 ml/瓶琼脂0.24 g2、培养基、剪子、镊子、枪头需在高压灭菌锅120摄氏度灭菌20分钟。
3、接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30分钟4、肥皂洗手和手腕，关闭无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，并关掉超净工作台上的紫外灯。
再用百分之七十的酒精喷手。
5、点燃酒精灯6、将橡皮筋解开（不掀开封口膜），放到无菌风道侧面。
将镊子见到放到酒精灯外焰灼烧，冷却后剪取外肢体。
迅速用另一手持三角瓶，去下封口膜，瓶口略倾斜，在酒精灯外焰上灼烧数秒。
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烟草植物组织培养实验实验目的一学习和掌握植物组织培养技术，理解植物细胞的全能性。
实验原理二年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地世纪30植物组织培养是从20少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物、萘乙4-D4-二氯苯氧乙酸2，，质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2）细胞分裂素IBA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸NAA酸、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA））等。
分裂期是，KT-30CPPU糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（6-（苄氨基嘌呤6-BA、6-指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。
分化期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。
这些细胞类型有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。
外植体的细胞经过起动、分裂和分化等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。
如果在原来的培养基上继续培养愈伤组织，会由于培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。
如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地（如2～4周）将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。
愈伤组织的形态发生方式经过起动、分裂和分化期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。
只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。
愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式（器官发生型）和胚状体方式两种。
不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。
胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。
这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过有性生殖过程，直接产生类似于胚的结构，叫做胚状体。
在植物组织培养中，不定芽方式和胚状体方式是愈伤组织形态发生的两种最常见和最重要的方式。
胚状体方式比不定芽方式有更多的优点，如胚状体产生的数量比不定芽多，胚状体可以制成人工种子，等等。
培养基的主要指标为营养的组分，植物生长物质的浓度，特别是后者对外植体的分化1 / 5矿质营养。
矿质营养又叫无机营起着极其重要的作用。
培养基的组织成分主要包括： 1.、养，是指植物在生长发育的过程中所需要的各种化学元素，其中包括大量的元素如N、P 2. Mn、Zn、Cu等，其对植物的生长发育中有着重要的生理作用。
FeK和微量元素如、B、维生素。
维生素能够以辅酶的形式参与多种酶系的反映，直接影响到蛋白质、糖、脂肪等植物生长物质。
其在较低浓度 3. 、Vb5等。
、物质的代谢活动。
主要有Vb、Vb1Vc、Vu碳源。
其不仅为外 4. 下能够对植物产生显著生理作用，主要包括：细胞分裂素和生长素。
琼脂。
琼脂是 5. 植体提供能量，而且也能维持一定的渗透压。
如果糖、葡萄糖、蔗糖等。
辅助添加物。
添加物主要有6. 组织培养中固体培养基的凝固剂，用来控制培养基的硬度。
氨基酸与植物材料，前者包括丙氨酸、甘氨酸、谷氨酰氨、酪氨酸、天冬酰氨等是主要的有机氮源，有助于外植体的蛋白质合成。
而后者成分十分繁杂，如马铃薯、香蕉、椰乳培养基MS等，但有助于外植体分化提高繁殖系数。
植物组织培养的培养基种类很多，培养基上进行。
此外，在兰花的MS（如表一）是使用最广泛，很多花卉的组织培养均在。
培养基配方设计是组培法育苗中的关键步骤。
根据理论与VW培养基组织培养中常使用实际经验，对不同种类的花卉及不同的取材部位，需设计出相适应的配方，并从中筛选出最佳者。
周的培养即可分化出大量的不定芽。
根据情况继代芽增殖培养：很多花卉植物经过2-6可以将这些增殖了大量新芽的外植体重新分割进行几代培养，以扩大繁殖规模直至满足繁殖需要为止。
三实验用品(5.5-9.0) 、培养瓶若干1、每组：1 玻璃烧杯、1玻璃棒、1pH试纸个无菌白瓷板11瓶无菌水、个无菌烧杯、1包无菌滤纸、1 干粉式培养基、冷凝脂、蔗糖、2、公用用品：1/2MS1N HCl、NAA6-BA均为1mg/ml）、1N NaOH、激素（2,4-D、蒸馏水、70%酒精、0.01%升汞、移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子实验材料四烟草叶片实验内容五、培养基配置与分装1 培养基配置：大量、微量、有机、铁盐30g/l搅拌7g/l 蔗糖琼指调节pH为5.8 加热溶解加激素分装50ml/瓶注意：认真计算由储备液配制成工作液所需添加的各种溶液的量计算公式：母液吸取量（ml）=待配培养基总量（ml）/母液扩大倍数MS培养基中加激素的量和组合如下：①MS+2,4D0.5②MS+6-BA+NAA 0.50.1③MS+6-BA+NAA0.50.5注意：右下角标数值单位为mg/l，添加激素前认真计算激素储备液配制成工作液所需的量计算公式：生长调节物质母液吸取量（ml）=工作液中所需激素浓度（mg/l）/每毫升母液中含激素的量（mg）2、培养基的灭菌-----高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）2 / 53、无菌苗的获得4、烟草叶片愈伤组织的诱导和不定芽的分化步骤于超净台中彻底冲洗外植体；70%酒精消毒3min；无菌水冲洗3遍，每遍3mini；将烟2的小1-1.5cm草叶片残留的水分用灭过菌的滤纸吸干；白瓷板上用消毒的解剖刀分割为块；接入相应的MS培养基上，每瓶接种4-5块。
3、培养与观察将培养瓶由超净台中转移到光照培养箱，给予适合的条件：26~28℃，光照1000lux~2000lux 培养；观察：取三个时间观察，分别是2~3天；13天；23天。
可从愈伤组织的诱导情况，生长情况观察，还可借助倒置显微镜观察体细胞胚的发育阶段。
例如：①MS+2,4D 沿切口已长出大量白色、疏松呈颗粒状的胚性愈伤组织。
取愈0.5伤组织块置实体显微镜下观察，可发现愈伤组织内含有大量处于不同发育阶段的体细胞胚，如球形胚、心型胚、鱼雷型胚、早子叶胚等。
②MS+6-BA+NAA 愈伤组织为黄绿色，其上已分化出许多小苗，具有两片小子0.50.1叶，类似于典型的种子苗。
显微切片观察证明，这些小苗来源于愈伤组织中的单个胚性细胞，是通过体细胞胚发生途径形成的。
③MS+6-BA+NAA 愈伤组织颜色较绿，质地较为致密，已分化出许多从生芽，形0.50.5态特征与2中的明显不同，这是通过器官发生途径。
数据统计：烟草叶片愈伤组织诱导情况编号每瓶接种数愈伤组织诱导率愈伤组织状态染菌率六实验结果与分析1、将观察结果加以描述和统计；对出现诱导失败和污染的情况要加以认真分析，找到原因。
2、绘图或照片七．思考题1、外植体脱分化形成愈伤组织的过程中，哪些激素起作用？2、如果时间允许，请设计下游诱导愈伤组织分化和再生植株的实验。
实验三愈伤组织的诱导一、实验目的利用植物的快速无性繁殖技术诱导愈伤组织。
二、实验原理利用附加2,4-D 2mg/L的MS培养基上诱导愈伤组织。
三、实验材料烟草叶片四、实验步骤1、培养基的配制、消毒及各种器皿的消毒灭菌。
3 / 52、接种室灭菌：打开紫外灯30min。
3、外植体的选取：取生长良好的烟草幼嫩叶片进行诱导。
4、操作台的消毒：进入接种室前关房间紫光灯，进入后关超净工作台上的紫光灯，用70%的酒精擦洗超净工作台3-4遍，将双手也用乙醇消毒。
然后在无菌条件下将外植体接种到培养基表面。
5、实验后将工作台面清理干净，各种仪器工具洗净归位。
五、实验结果由烟草叶片成功诱导出的愈伤组织实验结果：烟草的愈伤组织形成、发育良好，没有染菌，所配培养基适合烟草形成愈伤组织。
随着愈伤组织的生长，褐色区域也越明显，但对愈伤组织没有什么影响。
愈伤组织的主体呈黄绿色但出现许多绿色的生长端点，这些端点经诱导可形成根或芽。
分数________ 教师___________ 时间__________实验四芽的诱导一、实验目的：了解植物快速无性繁殖技术。
选择适当的培养基诱导不定芽的产生二、实验原理配制MS培养基并加入10ml6-BA，2.5mlNAA，作为诱导芽的培养基，用由4 / 5烟草叶片诱导成功的愈伤组织诱导产生芽。
三、实验步骤1、实验前的准备：各种器具消毒、灭菌，培养基的配制及消毒，实验材料的选取。
2、接种室的消毒：接种前一天晚上用过氧乙酸熏蒸灭菌，第二天接种前20分钟打开紫光灯。
3、外植体的消毒：使用无菌苗。
4、进入接种室前关房间紫光灯，进入后关超净工作台上的紫光灯，用70%的酒精擦洗超净工作台3-4遍，将双手也用乙醇消毒。
然后在无菌条件下将愈伤组织生长较好的部位切割下来接种到培养基表面，注意切口面向下。
5、将接种好的培养基置于培养室培养，定期观察记录结果。
6、实验后将工作台面清理干净，各种仪器工具洗净归位。
四、实验结果由愈伤组织诱导生芽成功后的照片实验结果：接种后没有被细菌及霉菌污染生长状况良好，发出新芽并有明显的生长。
由图片可以看出，培养基上方芽的生长不是很旺盛，而培养基下方的芽且生长的很旺盛，这是因为在接种幼嫩愈伤组织切块时，由于切块太小难以很好的区分出切面，导致切面没有向下所致。
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