2,4- D和6-BA对烟草组织培养的影响
2,4-D和6-BA对菊芋愈伤组织诱导的影响
蔬菜 ， 腌制成酱 菜或制 成洋 姜脯则 更具 独特 风 味 ， 是制 作绿色食品的上乘原料 。其 中菊糖含量 极高 ， 菊糖水解
后 的果糖 ， 于医药及制作 果糖 、 用 糕点等 ， 还是制造 淀粉
量极高 。其 生产成 本低 ， 品用途 广 ， 有很高 的经 济 产 具 价值 、 药用价 值 和生 态 价 值 。菊 芋 可食 部 分一 般 为 块
ｐｐｒ ａ ｅ ．Ｔｈ ｅ ｕｔ ｈ ｗｅ ｈ ｔｔ ｅｓ ｅ ｓｃ ｌ ｃｅ ｒ ｍ ｈ ｒ ｉ ｄｒ ｃｌ ｒ ｓ ｆｃｅ ｔ ０ ａｃ ｈ ｌ ０ ｓ ｃｐ ｕ ｅ ｒ ｓ ｌ ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｈ ｅ ｄ ｏｌ ｔ ｄ ｆｏ ｔ ｅ ｆｕｔ ｉｅ ｔ ｗｅ ｅｄ ｉ ｅ ｔ ｄ ｗｉ ７ ｌｏ ｏ ｅ ｌ ｓ ｓ ｅ ｙ ｉ ｎ ｈ １
收稿 日期 ：ｏ７ ８ ｌ ２ ｏ —０ 一Ｏ
［］ 牛维和 ， ８ 徐玉冰． 刘继红． 大花君子兰无性快速繁殖［］大众花卉 ， Ｊ．
１ ８ （ ）：９ ９ ７２ ２．
［Ｏ １］李淑华， 袁增玉． 陈力． 君子兰组织培养在生植株 的研究 ［］ Ｊ．黑龙江
农 业科 学 ．９８４ ：９４． １８ （）３ －１ ＇
ＡｂｔａｔＴｈ ｅｄ ｆ ｉｉ ｎｍ ｇ ｉ Ｖ Ｙｏ ｉｎ ’ ‘ ｈ ｎ ｉ， Ｈｅ ｈ ｎ ’ｗｅｅｕ ｅ ｕｔ ｒ ｉ ｉ ｓｒｃ ： ｅｓｅ ｓｏ ｖａｍｉｉ Ｒｅ ｅ ＣＳ‘ ｕＪａ ｇ ，Ｓ ｅ ｇＬ ’ ‘ ａ ｇ Ｃｌ Ｓ ｒ ｓｄｔ ｃ ｌ ｅｉ ｖｔ ｉ ｔ ｓ ｏ ｕ ｎ ｒ ｎｈ ｏ
摘 要： 菊芋是 一种十分具有开发 利用价值的菊科植物 ， 试验 以ＭＳ培养基为基本培养基 ， 附 加 不同种 类和浓度的植物生 长调节物质 ， 菊 芋的块 茎进 行愈 伤组织 的诱 导培 养研 究， 对 结果表
烟草组织培养实验方案
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
不同形态氮素及ABA和6BA对烟草生长_养分吸收及其在体内分配的影响
文章编号:1000-1573(2002)02-0021-04不同形态氮素及ABA 和6O BA 对烟草生长、养分吸收及其在体内分配的影响王国英1,刘东臣1,赵紫娟2,崔建宇2,李春俭2(1.河北农业大学资环学院,河北保定 071001; 2.中国农业大学植物营养系,北京 100094)摘要:研究表明,铵态氮抑制植物生长可能与植物体内源激素水平的变化有关。
为证实不同形态氮在植物体内的作用,通过结合使用植物激素脱落酸(AB A)及6O 苄基腺嘌呤(6O BA),研究了NH +4O N 和NO -3O N 对烟草生长、叶片蒸腾、养分吸收及在体内分配的影响。
与供应NO O 3O N 相比,NH +4O N 不仅抑制了植物生长、阳离子吸收,而且抑制了植物的蒸腾,表明NH +4O N 处理导致至少部分气孔关闭。
供应NO -3O N 条件下,用ABA 喷施叶片也能降低叶片蒸腾,但对烟株生长及养分吸收基本没有影响。
6O B A 不能明显缓解NH +4O N 对植物生长的抑制作用。
关 键 词:氮素形态;ABA;6-BA;烟草中图分类号:S 14311;S 572文献标识码:AEffects of different nitrogen forms and application of abscisic acidand 6-benzylaminopurine on growth ,nutrient uptakes andtheir d istribution in tobacco plantsWAN G Guo -ying 1,LIU Dong -chen 1,ZHAO Zi -juan 2,CUI Jian -yu 2,LI Chun -jian2(1.College of Resource and Environment,Agricul tural Uni versity Heibei,Baoding 071001,China;2.Departmen t of Plan t Nutrition,China Agricultural University,Beijing 100094,China)Abstract :Some reports sho wed the inhibitory effect of a mmonium nitrogen decreased plant growth might be related to plant endogenous hormone level.Under different nitrogen forms and application of abscisic acid and 6-benzyla minopurine,the effect of plant growth,transpiration,nutrient uptake and distributionon tobacco were studied.C ompared with nitrate treatment,ammonium treatment not only decreased tobac -co growth and cation uptake but also reduced plant transpiration.This showed that stoma was partly closed under a mmonium treatment.Nitrate with AB A decreased plant transpiration,but didn p t apparently affect plant growth and nutrient uptake.6O B A didn p t obviously mitigate the inhibitory effec t caused by ammonium treatment.Key w ords :nitrogen forms;abscisic acid;6O benzyla minopurine;tobacco收稿日期:2001-12-26基金项目:国家973项目(G1999011707),国家自然基金项目(30070452)作者简介:王国英(1977-),女,河北省临西县人,在读硕士生,从事植物营养研究工作.氮是植物生长发育必需的大量元素。
生长调节剂2,4-D灌施对烤烟上部叶常规化学成分的影响
待烟株打顶后 ， ２４一Ｄ水溶液灌施烟株两 用 ， 次 ， 了减少对下部烟叶的影响 ， 为 将两次灌施的时间
分别定于打顶后的第 １ｄ ３ 与第 ２ ｄ ３ 。首先将 ２ ４ Ｄ ，一
扬磊， 董道 竹， 刘建峰 ， 通讯地址 同第 １ 作者
邹国林， 武汉大学生命科 学学院．３０２湖北武 汉 ４０７ ， 基金 项 目：湖南省烟草 专 卖局 科研项 目（２ｏ ） 常德 卷 螭厂科 （ ｏｏ ｔ 、
量应 ＞ ％ 、 ２ 氯含量应在 ０ ５ 一 ． ％之间¨ Ｊ但 ．％ ０ ８ ，
目前中国不少烟区烤烟上部 叶的烟碱含量过高 、 糖 碱 比值及钾含量偏低 ， 严重影响了烟叶燃烧时烟气 的质量 。一些烟区上部烟 中 Ｂ Ｆ等级初烤烟 的烟 ２ 碱含量 已高达 ５０ ． ％左右， 糖碱比值（ 总糖含量与总 烟碱 含 量 之 比）已 低 至 ５０左 右 ， 含 量 低 至 ． 钾
的常规化学成分 ， 协调的常规化学成分含量是决定
烤烟品质的最主要因素 ， 优质烤烟上部烟叶的烟碱 含量应 为３ ５ ．％左右 、 糖碱 比值应为 ８０左右、 ． 钾含
取烤烟烟叶烟碱含量偏高的湖南省慈利县高峰乡肥 力适中的早土作为试验地块 ， 通过检测该地块 当年
土壤 肥力 状 况 为： 机质 ２ ． ｇｋ 、 Ｈ ． 、 氮 有 ３７／ ｇ ｐ ６０ 全 １４ ｇｋ 、 磷 ０ ８ｇｋ 、 钾 ２．ｇｋ 、 ．６ ／ｇ 全 ． ２／ｇ 全 １２／ｇ 碱解 氮 １５２ ｇｋ 、 效磷 １．ｒ ／ｇ 速效钾 ２７ ２ ｓ ５ ．ｍ ／ｇ速 ０６ ｇｋ 、 ａ ０ ．ｍ ／ ｋ。采用 随机 区组 法 设 计各 试 验 小 区的分 布 ， 种 ｇ 每
处理类型均设 ３ 个重复小区； 区形状为正方形 ， 小 每
2_4_D和6_BA对菊芋愈伤组织诱导的影响
北方园艺2008(2):203～205・生物技术・2,42D和62BA对菊芋愈伤组织诱导的影响李成伟,姚晓惠,陈新兵(商丘师范学院生命科学系河南,商丘476000) 摘 要:菊芋是一种十分具有开发利用价值的菊科植物,试验以MS培养基为基本培养基,附加不同种类和浓度的植物生长调节物质,对菊芋的块茎进行愈伤组织的诱导培养研究,结果表明:浓度为0.05mg/L的62BA的诱导效果最差;62BA0.05mg/L和2,42D0.05mg/L组合有利于愈伤组织的诱导;浓度为0.05mg/L的2,42D最有利于愈伤组织的诱导。
关键词:菊芋;愈伤组织;诱导中图分类号:S632.903.6 文献标识码:A 文章编号:1001-0009(2008)02-0203-03 菊芋(Helianthus tuberosus Linn)属菊科,向日葵属,多年生草本植物。
菊芋原产于北美,经欧洲传入中国,在中国南北各地均有栽培,分布极广[1]。
菊芋适应性强,耐贫瘠、耐寒、耐旱,种植简易,一次播种多次收获,产量极高。
其生产成本低,产品用途广,具有很高的经济价值、药用价值和生态价值。
菊芋可食部分一般为块茎,呈纺锤型或不规则瘤型,皮有红色、黄色和白色,质地细致、脆嫩,味甜适口,还含有氨基酸、维生素等,可作第一作者简介:李成伟(19722),男,河南民权县人,留荷博士,系主任,副教授,主攻分子植物病原体互作和分子育种研究方向。
E2mail:lichengwei166@。
收稿日期:2007-08-01蔬菜,腌制成酱菜或制成洋姜脯则更具独特风味,是制作绿色食品的上乘原料。
其中菊糖含量极高,菊糖水解后的果糖,用于医药及制作果糖、糕点等,还是制造淀粉和酒精的工业原料。
利用现代生物技术进行深加工精制而成的菊芋粉、低聚果糖和超高果糖浆,是当今保健食品的全新多功能配料,具有增殖体内双岐杆菌和抗癌作用[2]。
另外,菊芋产茎叶量高,是优良的家畜饲料;由于其根系特别发达,又是很好的保持水土、防风固沙的植物;夏、秋季节植株顶部遍开盘状黄花,形如菊,并有美化宅舍作用[3]。
探究不同浓度的2,4-D对扦插枝条生根数的影响
探究不同浓度的2,4-D对扦插枝条生根数的影响zy（xx大学，xxx xx xxxxxx）摘要：在温室中培养用不同浓度的2,4-D处理的杨树枝条，根据枝条生根数目判断不同浓度的2,4-D的作用效果。
结果表明，在一定浓度范围内，2,4-D浓度越高促进生根的效果越好。
当浓度超过此范围时，2,4-D反而起到抑制生根的作用。
研究不同浓度生长素类似物对扦插枝条生根数的影响对实际生产具有重要的指导意义。
关键词：生长素类似物；2,4-D引言植物生长素的生理作用很广泛，能促进茎叶伸长、叶片扩大、侧根和不定根的形成、果实生长等，抑制侧枝生长、块根形成以及花果实、幼叶的脱落等。
实际生产中常见的生长素类似物有2,4-D，萘乙酸，吲哚乙酸等。
1 实验材料和方法1.1实验材料1.1.1 枝条的选取及处理选取一年生杨树的大小相仿长15cm的枝条10根，将其形态学上端削成平面，形态学上端削成斜面，且每个枝条保留4个芽。
1.1.2 不同浓度的2,4-D溶液的配制首先配制5mg/ml的2,4-D的母液，然后将其梯度稀释成0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0（mg/ml）的溶液，分别放入试剂瓶，及时贴上标签。
1.2 实验方法1.将选取枝条中的9枝的形态学下端3cm分别浸入到不同浓度的2,4-D溶液中一天，剩下的一枝浸在清水中做对比实验。
同时对不同浓度处理的枝条标记，按2,4-D浓度从低到高分别编号为A,B,C,D,E,F,G,H,I,J,。
2.将处理后的枝条分别浸在盛有等量清水的烧杯中，浸入深度为5cm，室温下培养四天。
培养过程中观察并记录各组分枝条生根数目。
2 实验结果与讨论2.1实验数据记录组分A B C D E生根数1119273846组分F G H I J生根数49453022132.2实验数据处理（绘制图表）3.小结实验表明，适宜浓度的生长素类似物促进扦插枝条生根，过高浓度抑制生根。
实验得出结论，2,4-D溶液浓度为1.0mg/ml左右时是促进扦插枝条生根的最适浓度。
红掌幼叶诱导组织培养技术研究
红掌幼叶诱导组织培养技术研究吕游1，乔永旭1*，成思涵1，周晓静1，周静1，张永平1*，郑萍2（1宿迁学院建筑工程学院，江苏宿迁223800；2江苏新境界农业发展有限公司，江苏宿迁223800）摘要：红掌深受市场青睐，但其组织培养繁殖技术未成体系。
本研究以红掌‘特伦萨’的嫩叶为外植体，MS 为基础培养基，探究添加6-BA 、2,4-D 和NAA 对愈伤组织诱导、愈伤组织增殖、丛生芽诱导和丛生芽生根的影响。
结果表明，愈伤组织诱导的最佳培养基是1/2MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L ；愈伤组织增殖的最佳培养基是1/2MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.2mg/L ；丛生芽诱导的最佳培养基是MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L ；丛生芽生根的最佳培养基是1/2MS+NAA 0.2mg/L ；生根后的幼苗，移栽成活率高达100%。
以期为红掌种苗扩繁提供参考。
关键词：红掌；愈伤组织；丛生芽诱导；丛生芽生根基金项目：江苏省苏北科技专项（SZ-SQ2021042）；宿迁市科技计划现代农业项目（L202208）；宿迁学院学科建设项目（2021ZDJS04）；宿迁学院人才引进科研启动基金项目（校2022XQT004）。
第一作者：吕游（2022-），女，在读本科生，专业方向：园林。
通信作者：乔永旭（1978-），男，博士，教授，研究方向：园林园艺植物资源开发与利用。
张永平（1978-），女，博士，教授，研究方向：园林园艺植物逆境生理生化。
加蔗糖30g/L ，琼脂5.5g/L ，pH 值5.8；培养条件：温度25±1℃，光照周期12h/d ，光照强度2000Lx ，进行愈伤组织的诱导。
每个处理接种100个外植体，重复3次，培养30d 后，统计愈伤组织的诱导率，愈伤组织诱导率（%）=（诱导愈伤组织的叶块数/总叶块数）×100。
1.2.3愈伤组织的增殖。
《植物生命活动的调节》练习
《植物生命活动的调节》练习一、选择题1．下列关于生物实验的叙述正确的是（）A．施旺、施莱登运用不完全归纳法得出一切动植物都由细胞发育而来B．果酒发酵过程中，每隔12h左右打开瓶盖，释放酵母菌发酵产生的CO2C．拜尔的实验在黑暗中进行是为了排除光照对胚芽鞘尖端合成生长素的影响D．分别用含有35S和32P的两种培养基培养细菌，再用上述细菌分别培养病毒，检测子代病毒的放射性可区分是DNA病毒还是RNA病毒2．研究人员以野生型水稻和突变型水稻（乙烯受体缺失）等作为材料，探究乙烯对水稻根系生长的影响，结果如下表所示。
下列叙述正确的是（）注：+越多表示相关指标的量越大A．第④组中的水稻只能通过转基因技术获得B．第②组与第③组对比说明乙烯对根系生长有促进作用C．第③组与第④组对比说明NAA对根系生长有促进作用D．实验结果说明乙烯可能影响生长素的合成，进而调控根系的生长3．为研究土壤中重金属砷抑制拟南芥生长的原因，研究者检测了高浓度砷酸盐处理后拟南芥根的部分指标。
据图分析，下列推测错误的是（）A．砷处理6h，根中细胞分裂素的含量会减少B．砷处理抑制根的生长可能与生长素含量过高有关C．增强LOG2蛋白活性可能缓解砷对根的毒害作用D．抑制根生长后，植物因吸收水和无机盐的能力下降而影响生长4．如图表示培养烟草叶肉细胞原生质体进行遗传改良的过程，据图分析错误的是（）A．可用红墨水染色的方法检测原生质体有无活性B．①过程需在一定浓度的甘露醇溶液中用纤维素酶和果胶酶处理C．④过程要求生长素与细胞分裂素比例合适D．上述过程中可发生染色体变异、基因突变和基因重组5．将某种植物长势相同的幼苗分为三组，甲组经低温处理一段时间，乙组常温下培养，丙组常温下培养并用赤霉素处理。
一段时间甲组和丙组植物的侧芽分化出较多花枝，而乙组植物基本没有花枝产生。
相关资料表明，植物感受低温变化的主要部位是顶芽。
下列相关叙述错误的是（）A．处理三组幼苗的光照强度、光照时间、供水供肥量等条件需相同B．为验证感受低温的部位是顶芽，可增设丁组：摘除顶芽后低温处理C．实验结果表明，顶芽产生了赤霉素促进侧芽生长分化形成花枝D．为进一步说明赤霉素对花枝形成的影响，可增设一组使用赤霉素抑制剂6．乙烯（分子式为C2H4）是高等植物各器官都能产生的一种植物激素，研究者探究乙烯对植物生命活动进行调节的生理基础，发现了鳄梨果实成熟时乙烯调控纤维素酶的合成（如图）。
培养基中附加_6-BA_长期继代培养对蝴蝶兰类原球茎活力及生理生化指标的影响
热带作物学报2021, 42(2): 428 435Chinese Journal of Tropical Crops培养基中附加6-BA长期继代培养对蝴蝶兰类原球茎活力及生理生化指标的影响刘福平，陈淳，程小兵，郑明琼福建省亚热带植物研究所/福建省亚热带植物生理生化重点实验室/厦门市农林新优种苗繁育工程技术研究中心，福建厦门361006摘要：为了解培养基中附加6-BA长期继代培养对蝴蝶兰类原球茎（PLB）状态的影响，以只添加3 mg/L的6-BA和不添加植物生长调节剂（对照）培养基分别继代培养PLB 24个月，培养过程中观测PLB活力指标，分析相关氧化、抗氧化和DNA生化指标。
结果表明，第8个月2组PLB活力指标没有显著差异，第16个月6-BA组PLB分化率显著升高，第24个月增值倍数和分化率分别显著降低和极显著降低，且PLB的玻璃化率较高；6-BA组PLB氧化胁迫水平在第8、第16个月都较对照低，第24个月较高，培养期间•OH相对含量和POD活性与氧化胁迫水平分别相向和反向消长；6-BA组PLB的DNA甲基化程度始终较对照低，增色效应到第24个月才降低。
较强的氧化胁迫，•OH相对含量、H2O2和MDA含量提高，POD和CAT活性降低，以及DNA甲基化程度降低，与6-BA诱导PLB玻璃化有关。
综上分析，含6-BA培养基长期继代培养蝴蝶兰类原球茎，在培养中期可减缓类原球茎衰老，培养后期则加剧了衰老退化，所以在蝴蝶兰类原球茎的继代培养中，应适时调整细胞分裂素用量和控制继代次数。
关键词：蝴蝶兰类原球茎；长期继代；6-BA；活力；生理生化中图分类号：S682.31 文献标识码：AEffect of 6-BA in Media on Indexes of Vitality, Physiology and Bio-chemistry of Phalaenopsis hybrida PLB During Long-term Subcul-tureLIU Fuping, CHEN Chun, CHENG Xiaobing, ZHENG MingqiongFujian Institute of Subtropical Botany / Fujian Key Laboratory of Physiology and Biochemistry for Subtropical Plant / Xiamen Engineering Research Center for New-superior Seeding Breeding in Agriculture and Forestry, Xiamen, Fujian 361006, ChinaAbstract: To understand the effects of 6-BA in media on the protocorm like body (PLB) of Phalaenopsis hybrida through long-term subculture, PLB was subcultured respectively on the media supplemented with only 6-BA (3 mg/L) and that without plant growth regulator (control) for 24 months. Some indexes of vitality, oxidation, antioxidant and DNA biochemistry of PLB were observed and analyzed during the subculture. The results showed that there was no sig-nificant difference in the PLB vitality indexes between the two groups at the 8th month. The differentiation rate of PLB in 6-BA group increased significantly at the 16th month. At the 24th month proliferation multiple and differentiation rate of PLB in 6-BA group decreased significantly and extremely significantly,respectively, meantime the PLB had a higher hyperhydricity rate. The oxidative stress level of PLB in 6-BA group reduced than that in control group at the 8th and 16th months, but increased at the 24th month. Throughout this subculture, changes of relative content of •OH showed the similar trend with the oxidative stress level, and that of POD activity did conversely. The degree of DNA methyla-tion in 6-BA group remained below that in the control, also the DNA hyperchromic effect was lower only at the 24 months. In addition to this, PLB hyperhydricity induced by 6-BA was connected with the factors including stronger oxidative收稿日期 2020-01-06；修回日期2020-03-08基金项目福建省自然科学基金项目（No. 2012J01095）；厦门市科技计划项目（No. 3502Z20194524）。
烟草组织培养实验方案
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
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2,4- D和6-BA对烟草组织培养的影响刘璐华南师范大学生命科学学院 08生物科学一班 20082501055
摘要：以烟草为实验材料，在不同配方的培养基（①MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L
②MS + 2,4-D0.5mg/L ③MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4-D0.5mg/L）中进行组织培养，
观察其愈伤组织的形成及分化。
通过实验，我们得出，6-BA与2,4- D配合使用，
可以更有效地诱导愈伤组织的形成。
单独使用2,4- D可促进愈伤组织根的分化，而
6-BA则可以有效地诱导愈伤组织芽的分化，且6-BA浓度为2.0mg/L时的效果比浓
度为0.5 mg/L时要好。
关键词：烟草组织培养2,4- D 6-BA
烟草(Nicotiana tabacum L.) ，属茄科烟草属，是植物组织培养的模式植物。
生长调节物质是植物组织培养中不可缺少的一类物质，虽然用量极少，但它们对外植体愈伤组织诱导起着重要的调节作用，其中以生长素类和细胞分裂素最为常用。
常用的生长素类有2,4- D、NAA、IAA、IBA，而细胞分裂素类主要有KT、6-BA、ZT、2-iP、4-PU和TDZ。
本研究以烟草叶片为材料，结合本小组和其他两组的实验结果，探讨2,4-D对愈伤组织形成与分化的作用，以及它和不同浓度6-BA共同使用的效果。
1 材料与方法
1.1材料
烟草（Nicotiana tabacum L.）
1.2方法
1.2.1配制MS培养基母液和植物生长调节物质母液。
[1]
1.2.2配制培养基和灭菌。
[1]培养基的配方为①MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L（我们第2实验小组所做）②MS + 2,4-D0.5mg/L（由第1实验小组所做）③MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4-D0.5mg/L（由第7实验小组所做）
1.2.3外植体（烟草叶片）的消毒与接种。
[1]观察记录各组的愈伤组织生长情况以及污染情况。
1.2.4愈伤组织的继代培养。
将愈伤组织转入配方为MS + 6-BA1.0mg/L + NAA0.5mg/L的培养基上进行继代培养，观察记录生长情况。
2 结果分析
2.1愈伤组织的形成
培养开始的3天内，外植体在形态上并无明显变化，只是其体积比接种时稍微大了一些。
5天后，外植体从切口处开始膨大并出现黄色小颗粒，形成愈伤组织，外植体隆起且边缘有卷曲现象。
而污染方面，我们第2组一共接种16瓶培养基，有5瓶出现了霉菌污染，污染率为31.25% 。
对比三个实验组的愈伤组织，可以发现，我们第2实验小组的愈伤组织生长情况与第7
实验小组的差不多，而第1实验小组则较差一些。
（见图1 ，图2）
图1 愈伤组织的生长情况（培养基配方为MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L）
图2 愈伤组织的生长情况（培养基配方为MS + 2,4- D0.5mg/L）
2.2愈伤组织的分化
我们组进行继代培养的愈伤组织在继代培养1周后愈伤组织变紧，有芽形成，但在培养的3周内没有形成根（见图3）。
而第1组的愈伤组织形成了根，但未形成芽（见图4）；第7组的情况与我们组类似，但出芽率比我们组要高（见图5）。
图3 愈伤组织的分化（培养基配方为MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L）
图4 愈伤组织的分化（培养基配方为MS + 2,4- D0.5mg/L）
图5 愈伤组织的分化（培养基配方为MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4- D0.5mg/L）
3 讨论
通过实验，我们可以得出，6-BA与2,4- D配合使用，可以更有效地诱导愈伤组织的形成。
单独使用2,4- D可促进愈伤组织根的分化，而6-BA则可以有效地诱导愈伤组织芽的分化，且6-BA浓度为2.0mg/L时的效果比浓度为0.5 mg/L时要好。
生长调节物质是培养基中不可缺少的，虽然用量极少，但对外植体愈伤组织诱导起着重要的调节作用，其中以生长素类和细胞分裂素最为常用。
2,4- D（2,4-二氯苯氧乙酸）属于生长素类物质，其主要作用是诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根。
6-BA （6-苄基腺嘌呤）属于细胞分裂素类物质，它可以促进细胞分裂，诱导芽分化，促进侧芽萌发生长，抑制器官衰老，延缓叶片老化，还能显著改变生长调节物的作用。
[2] 2,4- D虽然提高了愈伤组织诱导率，但是可能由于较高浓度的2,4- D对种胚具有一定的毒害作用，因此会抑制植物的形态发生。
[3]而附加低浓度的6-BA是不能有效诱导愈伤组织的分化，[4]加入过高浓度的6-BA则会增进多酚氧化酶活性的作用，从而在培养基内产生并积累了酚、醌类深褐色色素物质，这类物质常因抑制愈伤组织的生长而导致毒害，严重时愈伤组织完全褐化而死亡。
[5]
当然，愈伤组织的形成和分化，不仅与激素的绝对含量，细胞分裂素和生长素的比例有关，而且还和培养温度，光照强度等有关。
如我们进行培养时，温度都较低，这对于愈伤组织的形成以及根茎的分化都是有影响的。
4 参考文献
【1】潘瑞炽.植物细胞工程.广州：广东高等教育出版社，2008:152-159.
【2】吴丽芳,陆伟东,丁伟,张鸭关.不同激素配比对红掌叶片愈伤组织诱导的影响[J].贵州农业科学,2010,38(8)：17-18.
【3】杜雪玲,张振霞,刘萍,杨中艺,符义坤.2,4-D和6-BA对多年生黑麦草愈伤组织诱导影响的研究[J].草原与草坪,2005,(03)：49-51.
【4】张同庆,姚根怀,吴中心.激素对烟草愈伤组织分化影响的研究[J].烟草科技, 1992,(06)：33-36.
【5】王荔,杨艳琼,杨德,李本逊.不同激素浓度及培养基对烟草愈伤组织分化的影响[J].
云南农业大学学报,1999,14(04):372-375.。