流式检测细胞凋亡几种方法的比较

合集下载

细胞凋亡的几种常见检测方法

细胞凋亡的几种常见检测方法

细胞凋亡的几种常见检测方法细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。

细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种用流式细胞仪进行测定的方法。

一、AnnexinV/PI法在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)迁移至细胞膜外测。

磷脂结合蛋白V(AnnexinV)是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,它与PS具有高度的结合力。

因此,AnnexinV可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。

碘化丙啶(propidineiodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。

因此将Annexin-V与PI 匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

方法: 1、悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ulBindingBuffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ulBindingBuffer,立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过1h),同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。

2、贴壁培养的细胞染色:先用0.25%的胰酶消化,洗涤、染色和分析同悬浮细胞。

注意事项:1、整个操作动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞。

2、操作时注意避光,反应完毕后尽快在一小时内检测。

二、Hoechst33342/ PI法:单纯的PI染色能够观察DNA直方图上凋亡细胞的亚G1峰,但只能代表G0/G1期发生凋亡,无法观察S期和G2期发生的细胞凋亡。

而且,细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行区分。

Hoechst 33342可以穿透细胞膜,进入正常细胞和凋亡细胞,与DNA结合,能在紫外线下显示蓝色荧光,而且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。

检测细胞凋亡的三种流式方法

检测细胞凋亡的三种流式方法

检测细胞凋亡的三种流式方法细胞凋亡(apoptosis)是细胞自主性死亡的过程,是正常细胞发育和组织调控的重要途径。

为了研究细胞凋亡的机制和调控,科学家们发展出了许多方法来检测和定量细胞凋亡的发生。

其中流式细胞术(flow cytometry)是最常用的方法之一,根据不同的细胞特征和所需信息,可以有多种方法用于检测细胞凋亡。

下面将介绍三种常用的流式细胞术方法。

1. 荧光标记的Annexin V/PI双染法:Annexin V是一种细胞外结合蛋白,具有高度特异性结合细胞凋亡的特点。

当细胞凋亡发生时,磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞内翻转至细胞外,而Annexin V能够结合在PS上。

Propidium Iodide(PI)能够穿过损伤的细胞膜,结合到细胞核内的DNA分子上。

通过将Annexin V标记为绿色荧光染料,将PI标记为红色荧光染料,通过流式细胞术定量测量荧光信号的强度,可以区分出未凋亡细胞(Annexin V和PI双阴性),早期凋亡细胞(Annexin V阳性,PI阴性),晚期凋亡和坏死细胞(Annexin V和PI双阳性)等不同状态的细胞。

2.荧光标记的DNA碎片染色法:3. 荧光标记的Caspase活性检测法:Caspases是细胞凋亡过程中的关键酶,它们在给定的信号下被激活并参与调节细胞凋亡的执行阶段。

通过使用荧光标记的Caspase底物,如FLICA系列(Fluorochrome Inhibitor of Caspases)、CaspGLOW系列(Caspase-Glo Kits),可以测量细胞中Caspase的活性。

这些底物在被Caspase酶剪切后会释放出荧光信号,通过流式细胞技术可以测量荧光信号的强度。

由于Caspase活性与细胞凋亡过程密切相关,因此可以利用这些荧光标记底物来定量测量细胞凋亡的发生。

总结起来,流式细胞术是一种非常有效的方法用于检测细胞凋亡的发生。

Annexin V/PI双染法可以定量测量不同状态的细胞,DNA碎片染色法可以测量细胞凋亡的程度,荧光标记的Caspase活性检测法可以测量细胞中Caspase的活性。

细胞凋亡的几种检测方法

细胞凋亡的几种检测方法

细胞凋亡的几种检测方法Company number:【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】细胞凋亡的几种检测方法1、形态学观察方法(1)HE(苏木精—伊红染色法)染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。

(2)丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。

凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧,可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。

(3)台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。

如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。

此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。

(4)透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

2、 DNA凝胶电泳细胞发生凋亡或坏死,其细胞DNA均发生断裂,细胞内小分子量DNA片断增加,高分子DNA减少,胞质内出现DNA片断。

但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间,出现180-200bpDNA片断,而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。

正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状(LADDER)条带;坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带3、酶联免疫吸附法(ELISA)核小体测定凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。

核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成,可由ELISA法检测。

检测步骤1、将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体;2、在微定量板上吸附组蛋白体’3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’4、加酶的底物,测光吸收制。

用途该法敏感性高,可检测5*100/ml个凋亡细胞。

流式细胞仪检测细胞凋亡

流式细胞仪检测细胞凋亡

流式细胞仪检测细胞凋亡:PI单染色法基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。

这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变最具特征性,主要包括以下几个方面:1. 细胞核的改变:由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。

研究表明,用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色,其DNA可染性降低。

许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。

2. 光散射特性:凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。

在流式细胞仪上,前散射光与细胞的大小有关,而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用,与细胞内的颗粒多少有关。

在细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,故前散射光降低,这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。

此外细胞凋亡时由于染色体降解,核破裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞侧散射光常增加。

细胞坏死时,由于细胞肿胀,其前散射光增大;侧散射光在细胞坏死时也增大,因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。

但需要注意的是,根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。

因此在某些淋巴细胞凋亡中,用光散射特性检测凋亡的可靠性较好,而在肿瘤细胞凋亡中,其可靠性就较差。

根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来,用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。

也可用于活细胞的分类。

试剂与仪器PBS溶液;PI染液:将PI溶于PBS(pH7.4)中,终浓度为100ug/ml。

用棕色瓶4℃避光保存。

70%乙醇400目筛网流式细胞仪实验步骤1. 收集细胞{数目约(1~ 5)×106个/mL},500 ~ 1000 r/min离心5min,弃去培养液。

2. 3ml PBS洗涤1次。

3. 离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小时。

流式细胞仪常用的几种检测方法

流式细胞仪常用的几种检测方法

流式细胞仪常用的几种检测方法1.细胞计数和生存率检测:流式细胞仪可以通过测定细胞的大小、形状和胞内染色物来实现细胞计数和生存率的检测。

通过自动聚焦和自动获取图像的功能,可以对大量的细胞进行计数和分析,并得出生存率数据。

2.表面标记检测:流式细胞仪可以利用荧光染料或荧光标记抗体对细胞表面的蛋白质、糖类或其他生物分子进行检测。

这种检测方法主要用于检测细胞表面标记的数量和分布情况,例如测定细胞表面特定抗原的表达水平。

3.细胞周期分析:流式细胞仪可以通过染色剂或荧光标记抗体对细胞进行染色,然后分析细胞在不同细胞周期阶段的比例。

这种检测方法可以用于研究细胞的增殖能力、细胞周期调控机制以及细胞周期与疾病发展的关系。

4.细胞凋亡检测:流式细胞仪可以利用染色剂或荧光标记抗体对细胞凋亡的标志物进行检测。

凋亡是细胞死亡的一种形式,通过测定凋亡细胞的数量和凋亡标志物的表达水平,可以研究细胞凋亡的调控机制以及细胞凋亡与疾病的关系。

5.细胞功能检测:流式细胞仪可以通过检测细胞内Ca2+浓度、ROS (活性氧物种)水平、蛋白质磷酸化等细胞功能指标来研究细胞的信号转导和功能活性。

例如,利用荧光染料可以测定细胞内钙离子的浓度变化,以研究细胞响应外界刺激的机制。

此外,流式细胞仪还可以进行细胞分选、多色细胞分析和细胞细胞间相互作用的研究。

细胞分选功能可以根据细胞标记物的表达水平将细胞分离出来,用于研究特定功能细胞的特性。

多色细胞分析可以用于同时检测多种标记物的表达水平,以揭示不同细胞类型的分子特征。

细胞间相互作用的研究可以通过检测细胞间的共聚或共表达标记物来研究细胞间的相互作用和相互影响。

总的来说,流式细胞仪是一种功能强大的实验室设备,常用于细胞生物学和疾病研究。

通过不同的检测方法,可以在细胞水平上研究细胞的数量、表面标记、周期、凋亡、功能以及细胞间相互作用等方面的特征。

细胞凋亡检测方法

细胞凋亡检测方法

细胞凋亡检测方法细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式,它在维持机体内稳态和发育过程中起着关键作用。

因此,对细胞凋亡的检测方法研究具有重要意义。

在本文中,我们将介绍几种常用的细胞凋亡检测方法,以及它们的优缺点和适用范围。

1. 形态学观察法。

形态学观察法是最早用于检测细胞凋亡的方法之一。

通过光学显微镜观察细胞形态的变化,如细胞体积缩小、胞质浓缩、核染色质凝聚和核小体形成等,来判断细胞是否发生凋亡。

这种方法简单直观,但不适用于高通量检测和定量分析。

2. DNA断裂检测法。

DNA断裂是细胞凋亡的一个显著特征,因此可以通过检测DNA 的断裂来判断细胞是否发生凋亡。

常用的DNA断裂检测方法包括凝胶电泳、TUNEL法和DNA断裂酶切法。

这些方法可以对凋亡细胞进行定量分析,但需要特殊仪器和试剂,操作较为复杂。

3. 蛋白质检测法。

细胞凋亡过程中,一些特定的蛋白质会发生变化,如Bcl-2家族蛋白、caspase家族蛋白等。

因此,可以通过检测这些蛋白质的表达水平或活性来判断细胞是否发生凋亡。

常用的蛋白质检测方法包括Western blot、免疫荧光染色和流式细胞术。

这些方法对于定量分析和高通量检测具有优势,但需要特异性抗体和专门仪器。

4. 细胞色素C释放检测法。

在细胞凋亡过程中,线粒体膜通透性增加,导致线粒体内膜空间的细胞色素C释放到细胞质中。

因此,可以通过检测细胞色素C的释放来判断细胞是否发生凋亡。

常用的方法包括免疫荧光染色和细胞色素C活性检测。

这些方法对于研究凋亡的机制和药物筛选具有重要意义。

综上所述,不同的细胞凋亡检测方法各有优缺点,研究者可以根据具体的实验目的和条件选择合适的方法。

随着生物技术的发展,新的细胞凋亡检测方法也在不断涌现,相信在不久的将来,会有更多更简便、灵敏的方法问世,为细胞凋亡研究提供更多的选择和可能性。

流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较

流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较

以往分析细胞凋亡 只是关心细胞是死是活 , 而现在更加 关注细胞到底是怎么死的 , 因为哪条通路受到了影响, 究竟哪
个 阶 段发 生 了 凋亡 , 该 如何 去 阻 止 它 。 亡是 一 个相 当复 杂 应 凋
更多不 同的方法来验证细胞 的死亡方式 。 流式细胞仪( l y m tF M) 一种在功能水平上对 Fo ct e,C 是 w o 单细胞 或其它生 物粒子 进行定 量分析 和分选 的检测 手段 ,
a o t i c l B t mb e i op o g e n l i w lb oe be t e C n l so : ho g mp r ge pr a m t d p po s e . u c i dwt m rh l yt a s i em r o jc v . o c i n T ru hc ai m ic e o , s 1 io n f h o h a ys l i u o n il h
wefn r r cs to fu igt o Cyo tyt x m iet p ptssi hef u e d mo ep e iemeh dso sn Flw tmer oe a n a o o i nt utr . i he he
【 e od 】 l y m t ;p poi; N netP op ai lei ; i co di e ba e o ni ; a im o K y rs Fo C t e y A ot sD A c t ;hsht y sr e Mt hn r l m rn t t l C cu i w w o r s o n d n c am pe a l n
【 关键词 】 流式细胞仪 ; 细胞凋亡 ; N D A含量 ; 磷脂酰丝氨酸 ; 电位 ; 膜 钙离子 【 中国图书分类法分类号 】39 R 2. 2 【 文献标识码 】 A 【 收稿 日 】 0—5 2 期 2 90—6 0

应用流式细胞仪检测细胞凋亡的4种方法的比较

应用流式细胞仪检测细胞凋亡的4种方法的比较

应用流式细胞仪检测细胞凋亡的4种方法的比较作者:范宁娟项萍段敏来源:《安徽农业科学》2014年第32期摘要[目的]比较4种测定细胞凋亡方法的优缺点。

[方法]应用流式细胞仪,分别采用PI单染法、Annexin VFITC/ PI 复染法、罗丹明123染色法及Fluo3染色法测定细胞凋亡。

[结果]每种分析方法均有自己优势和不足,在检测过程中应进行多参数分析。

[结论]该研究可为后续研究提供试验方法支持。

关键词流式细胞仪;细胞凋亡;检测方法中图分类号 S1088;G306.0 ;文献标识码 A ;文章编号 0517-6611(2014)32-11240-03Comparison of Four Methods for Apoptosis Assay by Flow CytometryFAN Ningjuan1, XIANG Ping2*, DUAN Min1(1.College of Life Sciences, Northwest A&F University,Yangling, Shaanxi 712100; 2. College of Plant Protection, Northwest A&F University, Yangling, Shaanxi 712100)Abstract [Objective]The research aimed compare the advantages and disadvantages of four methods for apoptosis assay. [Method] Flow cytometry was used to examine cell apoptosis which labeled with PI, Annexin VFITC/PI, Rhodamine 123 and Fluo3 respectively. [Result] Each menthod had its merits and drawbacks, and multiparameter analysis should be considered in the inspection process. [Conclusion]It could provide experimental support for sequential studies.Key words ;Flow cytometry; Apoptosis; Detection method1972年,Kerr等[1]首次提出细胞凋亡(Apoptosis, APO)的概念,宣告对细胞凋亡探索的真正开始。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

例证:
化疗后患者骨髓中的非凋亡细胞,主要是单核和巨噬细胞中可发现大量的凋亡小体,且 TUNEL法检测时强阳性。 Bedner E., Li X., et al. 1999. Cytometry 29:191-196
喜树碱(Campothecin)(2uM)诱导Jurkat 细胞4小时,收集细胞并用 CaspSCREEN Caspase Screening Kit(产品编号:K200-100)染 色,流式分析。

活化Caspase的检测
2. Caspase底物 检测方法:
收集细胞并重悬于D2R Incubation Buffer(孵育液)中
非典型性凋亡 操作不当 TUNEL实验时TdT酶因保存不当而失活;染色时出现错误。
解决方法:
设立阳性质控 设立阴性质控 自己制备质控细胞或由公司提供(如TUNEL法试剂盒内包含了阳性和阴性质控细胞)

检测时面临的问题
2. 凋亡假阳性:
产生原因:
PS的外翻使得凋亡细胞和凋亡小体很容易被邻近的细胞所吸附并被吞噬 吞噬细胞 并非仅为专职的吞噬细胞(如单核和粒细胞),成纤维细胞或上皮细胞也具吞噬作用。 尤其是实体瘤,常可见在凋亡细胞周围的肿瘤和非肿瘤细胞中有含有凋亡小体的吞噬体。 邻近细胞吞噬凋亡细胞后的残留物中即包含了变化的细胞膜、断裂DNA等凋亡特征物。 即使很轻微的处理,如胰酶消化、机械振荡、细胞刮取等,均会造成PS的外翻。
生产商 Biovision Biovision


Caspase事件
多色流式分析试剂典范

活化Caspase的检测
1. 荧光标记的Caspase抑制性底物 荧光标记的Caspase抑制性底物
膜通透性高;不可逆结合
若凋亡发生在G2, M或S期晚期,DNA含量可能会等同于G0期或S期早期,导致检 测失败; 现有DNA分析软件(Modfit/MultiCycle)的缺陷。

TUNEL法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)
检测原理:
TdT + dUTP/BrdUTP
荧光标记的dUTP /BrdUTP抗体

TUNEL法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)
检测方法:
固定:多聚甲醛(交联型)
洗细胞 固定细胞/组织
TUNEL/PI双染:
区分凋亡和非凋亡细胞 同时分析细胞周期 Apo-BrdU Kit TdT/BrdU 标记细胞 洗细胞 Anti-BrdU-FITC 染细胞 PI/Rnase处理 洗细胞 洗细胞 PI/Rnase处理 流式分析 流式分析 Apo-DIRECT Kit TdT/FITC-dUTP 标记细胞

活化Caspase的检测
1. 荧光标记的Caspase抑制性底物 检测方法:
诱导细胞凋亡
检测特点:
简单; 灵敏
加入荧光标记的抑制性底物 (如FITC-VAD-FMK等) 37oC孵育0.5-1小时 离心、洗涤2次
快速(0.5-1小时)
重悬细胞、流式分析
FITC:FL1;Rhodamine:FL2
FITC(Rhodamine)-VAD-FMK(通用) FITC(Rhodamine)-VDVAD-FMK(Caspase-2) FITC(Rhodamine)-DEVD-FMK(Caspase-3) FITC(Rhodamine)-IETD-FMK(Caspase-8) FITC(Rhodamine)-LEHD-FMK(Caspase-9)


线粒体事件
多色流式分析试剂典范

线粒体膜电位(△Ψm)的崩溃
发生在凋亡的早期 可能与细胞色素c和AIF的释放相关, 在存在活化Caspase的细胞中持续 一段时间后恢复正常

线粒体膜电位(△Ψm)的崩溃
细胞凋亡时活化Caspase-3的检测。
Jurkat 细胞无诱导(A)或用喜树碱诱导6h后,使用CaspGLOWTM FITC Caspase3 Staining Kit(产品编号:K183-100)检测活化的Caspase-3。
检测原理:
荧光标记的Caspase抑制性底物被凋亡细胞 摄取并结合,而正常细胞不能结合该底物。 因此洗涤后,凋亡细胞可检测到荧光,正常 细胞则不能。
洗细胞

TUNEL法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)
注意事项:
成纤维细胞、上皮细胞凋亡时并不发生核小体间DNA的断裂(DNA仅断裂为50300kb的大片段即终止),TUNEL法的灵敏度无法检测出
产品名称 ApoBrdU DNA Fragmentation Assay Kit ApoDirect DNA Fragmentation Assay Kit


流式检测细胞凋亡几种方法的比较
2005 年 10月 合肥
多色流式 Caspase事件 细胞核事件 检测中面临的问题
多色流式分析试剂典范
活化Caspase的检测
2. Caspase底物 D2R [(aspartyl)2-rhodamine 110,二门冬氨酰-罗丹明110] –Caspase通用底物
膜通透性高 D2R为非荧光物质 D2R被活化的Caspase剪切后,释放出Rhodamine110,发出绿色荧光
CaspSCREEN 凋亡检测试剂盒对凋亡的分析。
注意事项:
重悬于孵育缓冲液中
最近研究发现,线粒体膜电位的崩 溃在有些细胞中并不是细胞色素c和 AIF释放的必需条件。
流式分析
FL1:凋亡细胞;FL2:正常细胞
产品名称 MitoCaptureTM Apoptosis Detection Kit
产品编号 K250-25 K250-100
规 格 25 tests 100 tests


凋亡简介
多色流式分析试剂典范

凋亡与坏死

凋亡的途径
外源性途径
内源性途径

凋亡启动
细 胞 内
凋亡早期
凋亡中期
脱水致细胞皱缩
凋亡晚期
Ca2+ 动 员 ★ Caspase
喜树碱(CPT)诱导HL-60细胞凋亡, 3小时 后用JC-1检测线粒体膜电位的改变。可见, 凋亡细胞红色荧光降低。

线粒体膜电位(△Ψm)的崩溃
检测方法:
收集细胞于MitoCapture溶液(含JC-1)中 37oC孵育15-20分钟 离心、去上清
检测特点:
简便; 快速
染料—JC-1(5,5’ 6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide)
亲脂性阳离子荧光染料 正常细胞—线粒体内多聚体---红色荧光(Ex:488nm, Em:580/590nm) 凋亡细胞—细胞质内单 体---绿色荧光(Ex:488nm, Em:510/527nm)
膜内----磷脂酰丝氨酸(PS) 膜外----磷脂酰胆碱、鞘磷脂
凋亡细胞(Apoptotic Cell):
膜内----磷脂酰丝氨酸(PS) 膜外----磷脂酰胆碱、鞘磷脂、PS

细胞膜事件—Annexin V
检测方法:
独立的核 膜破损严重的细胞 晚期凋亡细胞
坏死细胞
收集细胞并重悬于Binding Buffer(结合液)中

活化Caspase的检测
1. 荧光标记的Caspase抑制性底物 注意事项:
荧光标记的Caspase抑制性底物的特异性不够高,在凋亡细胞中可能也会与Caspase 以外的蛋白结合。适用于区分凋亡和坏死的细胞。
产品名称 CaspGLOWTM Green(Red) Multi-Caspase Staning Kit CaspGLOWTM Green(Red) Caspase-2 Staning Kit CaspGLOWTM Green(Red) Caspase-3 Staning Kit CaspGLOWTM Green(Red) Caspase-8 Staning Kit CaspGLOWTM Green(Red) Caspase-9 Staning Kit
生产商 Biovision Biovision


细胞核事件
多色流式分析试剂典范

亚二倍体峰(凋亡峰)
染料:PI(碘化丙啶)
凋亡细胞比例; 细胞周期分布; 凋亡发生的时相

亚二倍体峰(凋亡峰)
规格 25 tests/100tests 25 tests/100tests 25 tests/100tests 25 tests/100tests 25 tests/100tests
生产商 Biovision Biovision Biovision Biovision Biovision

注意事项:
BrdUTP的掺入率显著高于dUTP,因此检测灵敏度高;而且经济。

TUNEL法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)
凋亡细胞
凋亡细胞
用树碱(CPT)诱导HL-60细胞凋亡,0、120和150分钟时用TUNEL(BrdUTP)/PI双染法检测DNA断裂,同时分析细胞周期。可见凋亡随着诱导时 间的增加而增多,且可知凋亡发生的时相。
检测特点:
简单 高度敏感 快速(20分钟) 特异性高
加DTT和D2R 37oC 孵育10-20分钟 流式细胞仪分析(FL1通道)
Ex/Em=488/530nm
产品名称 CaspSCREENTM Caspase Screening Kit
产品编号 K200-25 K200-100
规 格 25 tests 100 tests
注意事项:
固定:乙醇,不能用多聚甲醛。联科公司即将引进小片段DNA高效抽提试剂盒。
相关文档
最新文档