(完整)常见细胞凋亡检测的方法与注意事项
细胞凋亡实验详细步骤及说明
细胞凋亡实验详细步骤及说明
细胞凋亡是细胞在正常发育或应激条件下程序性死亡的过程。
为了深入了解细胞凋亡的机制和影响因素，以下是细胞凋亡实验的详细步骤及说明：
步骤一：培养细胞
1. 准备培养皿并涂覆培养基，确保培养基的成分适合所使用的细胞类型。
2. 从培养细胞的主要来源（如细胞培养库）中获取细胞。
3. 将细胞转移到培养皿中并在适当的温度和湿度下孵育。
步骤二：处理实验组
1. 将培养的细胞分为实验组和对照组。
实验组是要进行细胞凋亡诱导的组，而对照组则用于对比分析。
2. 选择适当的方法诱导细胞凋亡，例如化学诱导剂（如某种药物）或物理刺激（如辐射）。
3. 根据实验需要，在指定的时间间隔内观察细胞凋亡的现象和变化。
步骤三：检测细胞凋亡
1. 使用合适的细胞凋亡检测方法，如细胞染色和流式细胞术。
这些方法可用于分析各种细胞凋亡标志物的表达。
2. 准备相应的染色试剂或抗体，并按照说明溶解或稀释。
3. 按照实验需求，将细胞标本与染色试剂或抗体共孵育，并进行相应的分析和读数。
步骤四：数据分析与结果
1. 对实验和对照组的数据进行统计学分析，如均值和标准差计算。
2. 进一步分析和解释实验结果，评估细胞凋亡发生的程度和影响因素。
3. 根据实验结果撰写实验报告，包括方法、结果和结论，并进行讨论和对比分析。
以上是细胞凋亡实验的详细步骤及说明。
通过进行这些实验，
我们可以更好地理解细胞凋亡的机制以及可能对其产生影响的因素。
请根据具体实验的要求和细胞类型的特点，调整实验步骤和方法，
并确保实验过程中的安全性和可重复性。
细胞凋亡检测技术的使用注意事项
细胞凋亡检测技术的使用注意事项细胞凋亡（Apoptosis）是一种正常的基因调控程序性细胞死亡过程。
它在生物体发育、组织修复以及免疫系统调节中发挥着重要作用。
因此，准确检测和分析细胞凋亡对于科学研究和临床诊断具有重要意义。
细胞凋亡检测技术的使用要求细致和准确，以下是一些使用注意事项。
1. 样本处理和细胞抗原表达的影响：在进行细胞凋亡检测时，样本的处理和细胞抗原表达水平会直接影响结果的准确性。
确保样本处理过程中的细胞收集和处理操作严谨，以避免细胞损伤或凋亡反应的异常。
此外，细胞表面的抗原表达水平在不同的细胞类型和状态下可能会有很大的差异，因此，在选择检测方法时应对不同的细胞类型和处理条件进行优化。
2. 正确选择适当的检测方法：细胞凋亡的检测方法多种多样，包括细胞色素c释放、DNA碎片化、磷脂外翻等。
在选择合适的检测方法时，应根据实验需求和被测细胞类型的特点进行合理的选择。
不同的方法有不同的优缺点，例如，某些方法可能适用于细胞培养液中的凋亡细胞检测，而另一些方法则适用于体外分离的凋亡细胞。
所以，根据实际情况和实验目的选择最适合的方法是非常重要的。
3. 标本处理的严谨性：细胞凋亡的检测过程要求标本处理过程非常严谨，尤其是对于实验中的组织或细胞培养样本。
任何可能影响结果的因素（如变性剂、酶处理、酸碱度等）应避免或最小化。
此外，应避免样本受到过高温度的影响，以免造成凋亡过程的不正常启动。
4. 控制实验条件的一致性：为了确保结果的稳定和可靠，实验的条件应保持一致。
包括培养基的成分和浓度、细胞的培养时间以及细胞密度等因素都应在不同的处理组中保持一致。
此外，应严格控制实验室温度和湿度等环境条件，以确保实验的可重复性和结果的准确性。
5. 合理设置负对照和阳性对照：细胞凋亡检测中，合理设置适当的对照组是确保结果准确性的关键。
负对照组是指未经处理或未经暴露于凋亡诱导剂的样本组，用于检测基线的细胞死亡情况。
阳性对照组是指使用已知凋亡诱导剂处理的样本组，用于验证技术的敏感性和有效性。
常用的细胞凋亡检测方法
常用的细胞凋亡检测方法细胞凋亡指的是细胞主动性死亡的一种形式，是维持机体平衡的重要过程。
它在正常发育、组织恢复和免疫应答中发挥重要作用，同时也与多种疾病的发生和发展密切相关。
为了研究细胞凋亡的机制及其在各种生理和病理条件下的作用，科学家们开发了许多细胞凋亡检测方法。
目前常用的细胞凋亡检测方法主要包括细胞形态观察、DNA断裂检测、蛋白质检测和铁片抗体法等。
细胞形态观察是最早也是最直观的细胞凋亡检测方法之一、在光镜下观察细胞的形态变化可以发现凋亡细胞的一些特征，如胞浆浓缩、胞核碎裂、染色质凝集等。
通过显微镜观察，可以初步判断细胞是否发生了凋亡。
然而，这种方法只能提供形态上的信息，缺乏对细胞凋亡机制的进一步了解。
DNA断裂是细胞凋亡的重要特征之一，因此DNA断裂检测是常用的细胞凋亡检测方法之一、常用的DNA断裂检测方法包括DNA激发染料染色、末端标记法、半定量和定量的凝胶电泳等。
DNA激发染料如荧光素类染料和荧光素类染料可以与DNA结合，通过流式细胞仪分析这些染料的荧光强度可以判断细胞是否发生了凋亡。
末端标记法是利用内源性末端连接酶的活性，在凋亡细胞中将荧光或放射性标记的核苷酸链接到DNA断裂的末端。
通过测量标记的核苷酸的数量可以定量测定凋亡细胞的比例。
凝胶电泳方法则是将DNA在电场中运行，根据DNA片段的大小和形态来判断是否发生了凋亡。
蛋白质检测是细胞凋亡研究的重要手段。
由于细胞凋亡过程中，一系列蛋白质表达水平和活性的改变，因此通过检测这些蛋白质的变化可以确定细胞是否发生了凋亡。
常用的蛋白质检测方法包括免疫印迹、荧光染色和蛋白质芯片等技术。
免疫印迹是通过特异性抗体与目标蛋白质结合，然后通过染色基质的检测来确定目标蛋白质的表达水平。
荧光染色则通过特异性抗体与荧光标记的二抗结合，利用显微镜观察荧光信号的强度来确定目标蛋白质的表达水平。
蛋白质芯片则是将许多特定蛋白质的抗体固定在芯片上，通过样品与芯片上的蛋白质结合来检测目标蛋白质的表达水平。
细胞凋亡的几种检测方法
细胞凋亡的几种检测方法Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】细胞凋亡的几种检测方法1、形态学观察方法（1）HE（苏木精—伊红染色法）染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
（2）丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
（3）台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。
如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。
此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
（4）透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
2、 DNA凝胶电泳细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。
但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。
正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER)条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带3、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。
核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。
检测步骤1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；2、在微定量板上吸附组蛋白体’3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’4、加酶的底物，测光吸收制。
用途该法敏感性高，可检测5*100/ml个凋亡细胞。
细胞凋亡的六种检查方法
细胞凋亡的六种检查方法一、引言细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，它在生物体的正常发育和疾病的发生中都起到了重要作用。
因此，对于细胞凋亡的检测方法也成为了科学家们关注的焦点之一。
本文将介绍六种常见的细胞凋亡检测方法。
二、TUNEL法TUNEL法是一种常见的检测DNA断裂和凋亡细胞数量的方法。
它利用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)标记DNA断裂末端，并通过荧光或酶标记来检测。
操作步骤如下：1. 取出样品，并将其固定在载玻片上；2. 用缓冲液进行处理，使得DNA断裂末端暴露出来；3. 加入TdT和dUTP标记物，使得dUTP与DNA断裂末端连接；4. 洗涤样品，并加入抗dUTP抗体标记物；5. 洗涤样品，并观察荧光或颜色变化。
三、Annexin V染色法Annexin V染色法可以同时检测早期和晚期凋亡细胞。
它利用细胞表面磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)的变化，通过Annexin V结合检测细胞凋亡。
操作步骤如下：1. 取出样品，并将其固定在载玻片上；2. 加入Annexin V标记物，使得其与PIP2结合；3. 加入PI染色剂，使得细胞核染色；4. 观察荧光或颜色变化。
四、Caspase活性检测法Caspase活性检测法可以检测细胞内Caspase的活性水平，从而判断凋亡的程度。
操作步骤如下：1. 取出样品，并将其固定在载玻片上；2. 加入Caspase底物和缓冲液，使得Caspase底物被水解；3. 观察荧光或颜色变化。
五、DNA Ladder分析法DNA Ladder分析法可以检测DNA的断裂情况，从而判断凋亡的程度。
操作步骤如下：1. 取出样品，并提取其中的DNA；2. 用琼脂糖凝胶电泳分离DNA，并观察条带形态。
六、电子显微镜观察法电子显微镜观察法可以直接观察细胞的形态和结构变化，从而判断凋亡的程度。
操作步骤如下：1. 取出样品，并进行适当处理；2. 用电子显微镜观察细胞形态和结构变化。
七、总结以上六种方法是常见的细胞凋亡检测方法，每种方法都有其特点和优缺点。
细胞凋亡的几种检测方法
细胞凋亡的几种检测方法本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March细胞凋亡的几种检测方法1、形态学观察方法（1）HE（苏木精—伊红染色法）染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
（2）丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
（3）台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。
如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。
此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
（4）透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
2、 DNA凝胶电泳细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。
但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。
正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER)条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带3、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。
核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。
检测步骤1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；2、在微定量板上吸附组蛋白体’3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’4、加酶的底物，测光吸收制。
细胞凋亡的检测方法
细胞凋亡的检测方法细胞凋亡是一种重要的细胞生理现象，它在生物发育、组织维持和疾病发展中起着重要的作用。
因此，准确、快速、高效地检测细胞凋亡的发生和程度对于深入理解相关生物学问题至关重要。
目前，已经发展了多种方法来检测细胞凋亡，下面将对其中几种常用的方法进行介绍。
一、形态学方法形态学方法是最早也是最常用的细胞凋亡检测方法之一、通过观察细胞形态和结构的变化来判断细胞是否发生凋亡。
常用的形态学检测方法包括：1.光镜观察：借助光学显微镜观察细胞的形态，发现凋亡细胞的典型特点，如细胞体积缩小、细胞内形成凋亡小体等。
2.电镜观察：通过电子显微镜观察细胞的超微结构，可以观察到凋亡细胞的特征，如凋亡小体形成、核染色质浓缩等。
二、DNA片段化检测方法DNA片段化是细胞凋亡的一个重要特征，因此检测DNA片段化的程度可以作为细胞凋亡的指标之一、目前常用的DNA片段化检测方法包括：1.凝胶电泳：通过DNA凝胶电泳的方式，通过凝胶上DNA片段的迁移速度和大小，可以判断细胞是否发生凋亡。
凋亡细胞的DNA片段通常呈现“梯度”形态，即多条较短的DNA片段。
2. Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labeling (TUNEL)：TUNEL法是一种常用的细胞凋亡DNA片段化检测方法。
通过将荧光或酶标记的dUTP引入DNA断裂的末端，然后标记dUTP与断裂末端发生联结，从而实现对凋亡细胞的识别。
三、蛋白质检测方法细胞凋亡相关蛋白质在细胞凋亡过程中发生变化，因此可以通过检测蛋白质表达的变化来判断细胞是否发生凋亡。
1. 蛋白质免疫印迹法（Western blot）：通过将细胞提取物进行电泳分离后，使用特异性的抗体与目标蛋白质结合，然后进行蛋白质的检测和定量，从而判断细胞凋亡的发生。
2.免疫组化：通过使用特异性的抗体与目标蛋白质结合，然后利用荧光染料或酶标记的二抗进行检测，可以观察细胞中凋亡相关蛋白质的定位和表达水平变化。
常见细胞凋亡检测的方法与注意事项
大家常把细胞凋亡和细胞坏死混淆，其实两者是不同的细胞死亡形式，大家可以在死亡细胞的形态、生化和分子指标上将二者区分开来，细胞凋亡检测的方法不少，这里就总结下几种常用的检测方法。
细胞凋亡检测更多详情，点击查看不可不知的细胞检测方法——MTT
一、细胞凋亡的形态学检测
根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
参考文献Brown,D.G., Sun, X.M., and Cohen, G.M.(1993) Dexamethasone-induced apoptosis involves cleavage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation. J. Biol.Chem. 268, 3037-3039
线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
2贴壁培养的细胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。
3爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。
结果：
注意事项
1.整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。
2.操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测。
三、线粒体膜势能的检测
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常见细胞凋亡检测的方法与注意事项大家常把细胞凋亡和细胞坏死混淆,其实两者是不同的细胞死亡形式，大家可以在死亡细胞的形态、生化和分子指标上将二者区分开来，细胞凋亡检测的方法不少，这里就总结下几种常用的检测方法.细胞凋亡检测更多详情，点击查看不可不知的细胞检测方法——MTT一、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
1 光学显微镜和倒置显微镜（1) 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。
贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落.(2）染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。
2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。
常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342），HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。
三种染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。
紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。
Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。
DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色。
储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用终浓度一般为0.5 ～1mg/ml。
结果评判：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样(creased)，部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体(图1）。
3 透射电子显微镜观察结果评判：凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。
凋亡Ⅰ期（pro—apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations)的空泡结构(图2）；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。
图2二、磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法）磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine， PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中（图3)。
Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合.将Annexin-V 进行荧光素(FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（propidine iodide， PI）是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来.图3方法1 悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0。
5～1×106）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml）10ul，室温避光30min，再加入PI（50ug/ml)5ul，避光反应5min后,加入400ul Binding Buffer，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过1h），同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。
2 贴壁培养的细胞染色：先用0。
25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。
3 爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。
结果：注意事项1. 整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。
2. 操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测。
三、线粒体膜势能的检测线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃,则细胞凋亡不可逆转。
线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide［DiOC6（3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC—1］、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM）等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
方法：将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123（1mM)或终浓度为DiOC6（25nM），JC—1（1mM),TMRM(100nM)，37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。
注意事项1。
始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。
2。
与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白,他们将与部分染料结合,降低染料的浓度，引起假去极化。
常见细胞凋亡检测的方法与注意事项（二）一、DNA片断化检测细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂，形成50~300kbp长的DNA大片段, 或180~200bp整数倍的寡核苷酸片段，在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNA ladder)。
细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA，进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色，在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder。
如果细胞量很少，还可在分离提纯DNA后,用32P—ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）使DNA标记，然后进行电泳和放射自显影，观察凋亡细胞中DNA ladder的形成。
1。
大分子染色体DNA片段的测定细胞凋亡的早期，染色体断裂成为50～300kbp长的DNA大片段。
所有超过一定分子量大小的双链DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度相同。
线性DNA的双螺旋半径超过凝胶半径时，即达到分辨力的极限。
此时凝胶不再按分子量的大小来筛分DNA,DNA像通过弯管一样，以其一端指向电场一极而通过凝胶，这种迁移模式称之为”爬行"。
因此，细胞凋亡早期产生的50~300kbp 长的DNA大片段不能用普通的琼脂糖凝胶电泳来分离。
通常采用脉冲电泳技术可圆满地解决这一问题。
这个方法是在凝胶上外加正交的交变脉冲电场。
每当电场方向改变后，大的DNA分子便滞流在爬行管中，直至新的电场轴向重新定向后,才能继续向前移动。
DNA分子量越大，这种重排所需要的时间就越长。
当DNA分子变换方向的时间小于电脉冲周期时，DNA就可以按其分子量大小分开。
参考文献 Brown，D。
G。
, Sun， X.M。
， and Cohen， G。
M。
(1993） Dexamethasone—induced apoptosis involves cleavage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation。
J。
Biol.Chem。
268， 3037—30392. DNA Ladder 测定方法:收获细胞（1X107）沉淀?细胞裂解液？13000rpm＆prime；5min, 收集上清?1％SDS和RnaseA（5mg/ml）56°C，2h?蛋白酶K(2.5mg/ml）37°C，2h?1/10体积3M醋酸钠和2.5倍体积的冷无水乙醇沉淀DNA，4°C过夜？14000rpm＆prime;15min？最后将沉淀溶解在TE buffer中，加DNA Loading Buffer？1。
2％琼脂糖凝胶电泳，EB染色并照相。
结果：参考文献 Herrmannm M， Lorenz HM, Voll R et al。
A Rapid and simple method for the isolation of apoptotic DNA fragments. Nucleic Acid Res。
1994； 22:5506—55073. 凋亡细胞DNA含量的流式细胞计分析方法：收集细胞,70%冷乙醇(in PBS）4°C固定过夜，PBS洗涤，1000rpm＆prime；10min RNase A(0.5mg/ml）37°C消化30min PI(50mg/ml)染色，室温避光15min,FACScan分析DNA 亚二倍体的形成及细胞周期的变化。
结果：4。
ApoAlertTM LM-PCR Ladder Assay (CLONTECH)优点:敏感度高，适合于检测少量样本，小部分凋亡细胞。
如临床活组织检测。
二、TUNEL法细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3&＃39；-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3＆＃39;-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal —deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL).由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3&＃39；—OH形成，很少能够被染色。
TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
常见细胞凋亡检测的方法与注意事项(三)一、Caspase—3活性的检测Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。