微生物无菌操作技术
微生物检验的基本操作之无菌操作
一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。
包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。
严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；（2）无菌室的消毒和防污染•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时），特殊情况下可增加熏蒸频次。
（3）无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
微生物实验室无菌操作技术手册
微生物实验室无菌操作技术手册1. 引言本手册旨在介绍一种常见的微生物实验室中使用的无菌操作技术，以确保实验结果的可靠性和正确性。
正确的无菌操作可以防止微生物污染，保护实验人员的安全，并促进实验的顺利进行。
2. 无菌操作基础无菌操作是指在无菌条件下进行实验操作，避免微生物的污染和传播。
下面是一些无菌操作的基本原则：- 实验器材和培养基应经过严格的消毒和灭菌处理。
- 实验操作需要在洁净的操作台上进行，操作台上的工具和材料要经过消毒处理。
- 实验人员需要穿戴合适的个人防护装备，如实验服、手套、面罩等。
3. 无菌操作步骤3.1 准备工作- 检查实验室中的消毒设备是否正常运作。
- 检查实验器材和培养基的灭菌情况。
- 穿戴个人防护装备。
3.2 操作台准备- 在操作台上放置消毒过的工具和材料。
- 操作台表面用消毒液擦拭，保持干燥。
3.3 实验器材处理- 使用灭菌钳夹取所需的实验器材，在火焰中烧毁细菌和病毒。
- 使用经过灭菌处理的培养基。
3.4 实验操作- 取出所需的实验器材，避免直接接触无菌物品的非无菌表面。
- 操作时尽量避免产生细菌和病毒的飞溅和浮尘。
- 操作完成后，将实验器材进行消毒处理。
4. 操作注意事项- 所有实验操作都需在无菌条件下进行，尽量避免外界微生物的污染。
- 实验人员要对无菌操作的原则和步骤有清楚的了解，并遵循相应的规定和程序。
- 实验室要定期进行环境监测，确保无菌操作条件的可靠性。
5. 总结无菌操作技术是微生物实验室中非常重要的技术之一。
通过正确的无菌操作，可以保证实验结果的准确性和可重复性，并提高实验的成功率。
实验人员需要掌握无菌操作的基本原则和步骤，并严格遵守相关的操作规范和要求。
微生物学实验室中的无菌技术操作指南
微生物学实验室中的无菌技术操作指南无菌技术是微生物学实验室中必不可少的操作技术，能够有效地杜绝外源性微生物的污染，确保实验结果的可靠性和准确性。
本文将介绍微生物学实验室中常用的无菌技术操作指南，包括实验室环境的无菌处理、实验器材的无菌处理和施行操作的无菌技巧。
实验室环境的无菌处理非常重要，它涉及到实验室区域的清洁和消毒。
首先，实验室应保持干净整洁，减少灰尘和杂物的积累。
定期进行彻底的清洁工作，包括桌面、操作台面、柜子里的放置区域等。
其次，实验室应使用有效的消毒剂对实验台面、地板、洗手间和耗材储存区进行消毒处理。
消毒剂的选择应根据实验室需要，例如0.1%次氯酸钠溶液、70%乙醇等。
最后，实验室员工应定期进行个人卫生和手部消毒，并佩戴洁净的实验室衣物和手套。
在实验室中，实验器材的无菌处理至关重要。
首先，所有的器材和耗材应进行必要的消毒。
这包括玻璃制品、培养皿、试管、移液器等。
如需高温消毒，可以将器材置于121℃的高压蒸气灭菌器中，保持20-30分钟。
其次，在进行实验前，应将所需的器材和耗材准备齐全，并妥善保存。
保持器材和耗材在实验操作过程中的洁净。
最后，使用无菌技术进行操作时，应注意消毒操作的严密性，避免菌的重新污染。
使用无菌条或化学指示剂，检测器材和器皿的无菌状况，并遵守实验室的消毒规程。
在实验操作过程中，无菌操作技巧的掌握至关重要。
首先，实施手部无菌操作。
在开始操作前，用洁净的水和肥皂彻底洗手，然后使用无菌擦洗剂彻底清洗手部，再用酒精或其他消毒剂消毒手部。
戴上无菌手套，保证手部无菌状态。
其次，实施操作台面的无菌操作。
在操作前，用消毒剂擦拭台面，然后放置洁净的无菌垫纸或消毒纸。
在进行技术操作时，尽量避免手部直接接触器皿或介质，可使用移液器、酒精灯等工具进行操作。
最后，保持操作过程的环境干净整洁，减少气溶胶的产生，避免筛选鉴定菌株时的污染。
除了上述的无菌技巧之外，实验室还需要制定相关标准操作规程，并培训实验人员，使其严格遵守无菌操作的要求。
微生物实验室无菌操作技术要求
微生物实验室无菌操作技术要求无菌操作是在微生物实验室中进行微生物培养和实验时必须遵守的一项重要技术要求。
无菌操作的目的是在避免外源性污染的同时，确保培养物或实验结果的准确性和可靠性。
以下是微生物实验室无菌操作技术的要求：1. 实验器材和物品的处理- 所有实验器材和物品必须事先经过高温高压灭菌或其他有效的消毒措施，以确保其无菌状态。
- 实验器材和物品在使用前应进行有效的密封包装，以防止在运输和储存过程中的细菌污染。
- 使用过的实验器材和物品应进行正确的处理和消毒，以防止细菌或病原体的扩散和传播。
- 定期检查实验器材和物品的无菌状态，必要时进行再次消毒或更换。
2. 实验操作区域的准备与维护- 实验操作区域应定期清洁和消毒，以确保其无菌状态。
- 实验操作区域内应禁止非实验人员入内，并设置明显的警示标识。
- 确保实验操作区域的通风良好，并保持恒定的温度和湿度。
- 实验台面、操作仪器和座椅等表面应定期消毒，以杀灭潜在的细菌和病原体。
3. 实验人员的个人卫生要求- 实验人员应穿戴干净、无菌的实验服，并正确佩戴手套、口罩和防护眼镜等个人防护装备。
- 实验人员在进行无菌操作前应充分洗手，并使用有效的消毒剂进行手部消毒。
- 实验人员应定期接受相关培训，了解无菌操作的要求和注意事项，并时刻保持警惕。
4. 实验操作的注意事项- 在进行无菌操作时，应尽量减少空气中的颗粒物，避免引起微生物污染。
- 实验操作过程中应避免直接触碰培养物和实验器材，以防止细菌的传播和扩散。
- 所有操作均应在实验室的电子线束消毒器或火焰灭菌器下进行，以确保操作区域的无菌状态。
- 实验操作结束后，应及时清理实验操作区域，并进行必要的消毒措施，以预防下次操作时的污染。
以上是微生物实验室无菌操作技术要求的主要内容。
在实验室工作中，严格遵守无菌操作的要求，能够确保实验结果的可靠性和重复性，同时保护实验人员的健康和安全。
微生物实验室无菌操作技术规范
微生物实验室无菌操作技术规范目的：规范无菌操作流程，减少及避免染菌现象出现。
使用范围：无菌室及洁净区的操作。
无菌操作技术原则：1.环境要清洁，每次无菌操作结束后都需要对环境进行清理、清洗，避免操作前进行清扫。
2.做好个人卫生，进入无菌室前需修剪指甲、洗手，穿好无菌服，帽子需遮住所有头发，口罩遮住口鼻。
3.在无菌操作时，不可讲话、打喷嚏，对怀疑染菌的无菌物品不可使用。
内容：1.1 准备：工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲，备齐用物（如接种针、接种环、酒精灯、斜面、平皿、摇瓶、75%酒精棉、无菌水等），核对无菌用品、接种菌种的种类、型号。
1.2 所有实验使用的物品都需要进行消毒、灭杀，在进入洁净区前需要经传递窗进行紫外表面消毒30分钟以上。
1.3 开始实验前需要打开超净台的紫外灯，消毒半个小时以上。
超净台避免放入过多的物品，一般只放入当次实验所有的物品。
所使用的试剂和耗材都需事先进行灭菌，灭菌日期超过4天的需重新消毒。
1.4 进入洁净区前关闭紫外灯，并打开风机，等待半个小时以上，使臭氧尽量排放干净。
1.5 除去手腕等部位的饰品，穿好无菌服，戴好头套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏头发、不暴漏口鼻、不暴漏躯干皮肤和衣物。
1.6 双手要进行清洗、消毒。
1.7 要经风淋室风淋30秒后再进入洁净室。
1.8 在局部百级区域操作要戴一次性无菌手套。
1.9 实验操作过程中应尽量减少进入洁净区的人员（不超过4人/间），并尽量减少人员走动。
1.10 所有要放入超净工作台的物品都需经过消毒液喷洒擦拭消毒。
1.11 无菌物品若取离超净台则视为已污染，不得放回再用。
无菌液体在取离超净台前必须密封其开口。
密封的无菌液体在放入超净台后，对其开口前须对开口在酒精灯火焰上烧烤。
1.12 在拆开任何一次性无菌使用耗材的包装时都要在超净台内完成，并须同时保证与细菌直接接触的使用端/面不得与超净台内的任何物品发生触碰。
1.13 工作台面上的用品要放置有序、布局合理，一般说酒精灯（当工作不需要时也可不用）在中间，右手使用的物品在右侧，左手使用的物品在左侧。
微生物的无菌操作及接种技术
实验用品
实验用品如培养基、试剂 、玻璃器皿等应经过严格 灭菌处理，确保无菌状态 。
无菌操作原则与规范
操作前准备
实验人员应穿戴整洁的工作服，戴好口罩和帽子，修剪指 甲并洗净双手。同时，检查实验用品是否齐全、无菌状态 是否良好。
操作后处理
实验结束后，及时清理实验台面，将废弃物放入指定容器 内。对实验用品进行清洗和灭菌处理，确保下次实验的无 菌环境。
生长曲线测定
通过测定微生物的生长曲线， 了解其生长速度、延滞期、对 数生长期、稳定期等生长特点 。
代谢产物检测
检测微生物代谢产生的特定物 质，如酶、酸、气体等，以判
断其生长情况和代谢活性。
05
无菌操作在科研实验 中应用举例
遗传学实验：基因转化和表达分析
基因转化
在遗传学研究中，无菌操作是基因转化的关键步骤之一。通过无菌操作，可以将 外源基因导入到受体细胞中，实现基因的转移和整合。
环境微生物学研究
无菌操作在环境微生物学研究中也非常重要。通过无菌操作，可以研究环境微生物的生长、代谢和相互作用等方 面，揭示微生物在环境中的生态功能和水平，确保实验准确性
严格遵守无菌操作规范
在进行微生物实验时，必须严格遵守无菌操作规范，包括 穿戴实验服、戴口罩和手套、使用无菌器材等，以避免实 验过程中的污染。
注意事项
接种针需灼烧灭菌，避免污染；划线时力度要均匀，避免划 破培养基。
液体培养基接种法
操作步骤
在无菌条件下，用接种环沾取少量菌 液，在液体培养基中轻轻搅动，使菌 液均匀分布在培养基中。
注意事项
接种环需灼烧灭菌，避免污染；搅动 时要轻柔，避免产生气泡。
其他特殊无菌操作方法
穿刺接种法
用接种针沾取少量菌液，穿刺到半固体培养基内部，适用于厌氧菌 等需要特殊环境的微生物培养。
微生物实验室无菌操作技术规程
微生物实验室无菌操作技术规程1. 引言本技术规程旨在确保微生物实验室内的无菌操作达到最佳实践标准，以避免实验室中的污染和交叉感染。
该规程适用于在微生物实验室中进行的所有无菌操作和实验。
2. 环境控制- 实验室应具备良好的通风系统，以保持空气流通并降低细菌和病原体的传播风险。
- 实验室应定期消毒，并保持整洁有序，以减少污染源。
3. 个人防护- 操作人员应穿戴合适的防护服和手套，确保自己不会成为污染源。
- 所有操作人员在操作前应先洗手，并使用洗手液等适当的消毒剂对手部进行处理。
4. 设备和材料消毒- 所有使用的设备和材料，如培养皿、试管和移液器等，应事先经过高温高压灭菌或其他适当的消毒方法处理，确保无菌状态。
- 操作人员在接触这些设备和材料之前，应先用消毒液对其表面进行消毒处理。
5. 无菌操作技术- 在进行无菌操作前，操作人员应先准备好需要使用的设备和培养基等物品，并将其摆放在消毒的工作台上。
- 操作人员在进行无菌操作时，应注意避免呼吸、说话或向培养皿喷嚏，以减少纤维颗粒和细菌的传播。
- 打开培养皿或试管时，应尽量使其与外界环境接触的时间减至最短，并保持操作的迅速和稳定。
6. 实验室清洁与废物处理- 实验室应定期进行清洁和消毒，包括工作台、设备和地面等。
- 无菌操作过程中产生的废物和污染物应根据相关规定进行正确的处理和处置。
7. 培训与质量控制- 操作人员应接受相关的无菌操作培训，并定期参加相关知识的更新和复。
- 实验室应建立质量控制机制，包括对实验过程、设备和材料进行监测和评估，以确保无菌操作的质量和准确性。
8. 紧急情况处理- 如果发生无菌操作失误或实验室意外，操作人员应立即报告，并采取适当的应急措施，以减少事故对实验室环境和人员的影响。
以上为微生物实验室无菌操作技术规程的主要内容，希望能帮助您建立和维护一个高质量的无菌操作实验室。
如有需要，可以根据实际情况进行调整和补充。
微生物的无菌操作及接种技术
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
பைடு நூலகம்
垂直流超净工作台
垂直流超净工作台 水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
※ 斜面接种
（4）拔管塞： 用右手的无 名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
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⑥接种
在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培 养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。有时也可用接种 针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同 菌种的生长特点。
⑦塞管塞 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将试管塞旋上。 ⑧将接种环灼烧灭菌。
桶内消毒； ⑧操作时禁止再培养物上方移动手臂；
（2）接种 1、接种的一般流程 接种工具灭菌 防止污染标本
接种工具冷却
沾取标本
接种
接种工具灭菌 防止污染环境
2、到平板
3、斜面接种技术 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面 培养基上的接种方法。
用于好气性微生物的接种。
具体操作： ①贴标签：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓 名等，贴在距试管口约2到3厘米处，也可使用记号笔标记。 ②点燃酒精灯。 ③接种： 1）手持试管 将菌种管和待接斜面的两支试管用大姆指和其他四指握在左手中，使中 指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。
②旋松管塞 先用右手松动试管塞，以便接种时拔出 ③接种环灼烧灭菌 右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌，然 后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌， 重复此操作，再灼烧一次 ④拔管塞 用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种试管和待接试管的试管塞 ，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫) ⑤取菌 待接种环冷却后，轻沾取少量菌体或胞子，然 后将接种环移出菌种试管，注意不要使接种环 碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。
微生物实验无菌操作
微生物接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物 体内的过程。微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作 技能。
无菌技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其 干扰的一系列操作方法和有关措施。无菌操作是微生物接种技术的关键。
无菌操作主要目的： （1）保证实验操作中不被环境中微生物污染； （2）防止微生物在操作中污染环境或感染操作人员。
灭菌原理： 将待灭菌的物体放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内 。把锅内的水加热煮沸，并把其中原有的冷空气彻底驱 尽后将锅密闭。再继续加热就会使锅内的蒸汽压逐渐上 升，从而温度也随之上升到100℃以上。为达到良好的 灭菌效果，一般要求温度应达到121℃（压力为0.1MPa） 时间维持15到30分钟。也可以采用在较低的温度（115℃ ，压力为0.075MPa）下维持35分钟的方法。
斜面接种示意图
4、液体接种 具体操作： 与斜面接种基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上试管塞再轻轻摇匀。 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
5、划线接种 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌、 活菌计数。 方法： ①分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ②连续划线法：适用于含菌量较少的标本
超净工作台（clean bench）与生物安全柜（Biosafety Cabinet）不同 。超净工作台只能保护在工作台内操作的试剂等不受污染，并不保护工 作人员，而生物安全柜是负压系统，能有效保护工作人员。
2、无菌室的操作规则
①将所有的实验器材和用品一次性全部放入无菌室（如同时放入培养基 则需用牛皮纸遮盖）。应尽量避免在操作过程中进出无菌室或传递物品 。操作前先打开紫外灯照射半个小时，关闭紫外灯后，在开始工作。
⑥高压灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，高压灭菌锅内
冷空气排除不干净，将达不到灭菌所需的温度。
二、无菌操作
（1）接种前的准备工作 1、仪器 ①超净工作台 超净工作台是能将工作区已被污染的空气 通过专门的过滤通道人为地控制排放，为 实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外 部环境提供某些程度的保护以防污染，是一种安全的微生物专用洁净 工作台。 原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，通过风机将空气 吸入预过滤器，经由静压箱进入高效过滤器过滤，将过滤后的空气 以垂直或水平气流的状态送出，洁净空气(进滤空气)按 设定的方向流动而形成的。使操作区域达到 所需的洁净度。
②生物安全柜
生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性 的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其 避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的 。
生物安全柜使用规程
①操作前应将本次操作所需的全部物品移入安全柜，避免双臂频繁穿过 气幕破坏气流；并且在移入前用70%酒精擦拭表面消毒，以去除污染。
②进入缓冲间后，应换好工作服、鞋、帽、戴上口罩，将手用消毒液清 洗后，在进入工作间。
③操作时，严格按照无菌操作法进行操作，废物应丢入废物桶内。
④工作后应将台面收拾干净，取出培养物品及废物桶，用消毒液清洁， 再打开紫外灯照射半个小时。
3、无菌操作要求 ①在操作中不应有大幅度或快速的动作； ②使用玻璃器皿应轻取轻放； ③在火焰上方操作； ④接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； ⑤在接种培养物时，协作应轻、准； ⑥不能用嘴直接吸吹吸管； ⑦带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒
超净工作台的使用及注意事项 ①使用前30到60分钟用75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面 ，打开紫外灯照射30min； ②使用前10分钟将风机启动，调整风量，工作时关闭杀菌灯； ③使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布 檫拭； ④请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物，禁止存放无关的物品，以 保持工作区的洁净气流不受干扰； ⑤禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免作明显干扰气流的动 作； ⑥禁止在预过滤器进风口部位放置物品，以免挡住进风口造成进风 量减少，降低净化能力； ⑦使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭送风机，重 新开启紫外灯照射15min，最后关闭电源；
微生物接种流程
一、实验材料的准备工作 （1）培养基的配制和相关器具的准备 （2）灭菌和消毒 二、无菌操作 （1）接种前的准备工作 （2）接种
一、实验材料的准备工作
（1）培养基的配制和相关器具的准备 1、培养基的配置 2、接种工具的准备： 常用的接种工具有接种环、接种针和涂布棒。其中最常用的接种工具或 移植工具是接种环。
②打开风机5～10分钟，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作。 将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止1分钟，使柜内气流稳定后再进行操 作。
③安全柜内不放与本次实验无关的物品。柜内物品摆放应做到清洁区、 半污染区与污染区基本分开，操作过程中物品取用方便，且三区之间无 交叉。物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，以免干扰气流正常流 动。
注意事项：
①堆放灭菌物品时，严禁堵塞安全阀和放气阀的出气孔，必须留出空位
保证其空气畅通，否则安全阀和放气阀因出气堵塞不能工作，造成事故 。
②灭菌液体时，应将液体灌装在硬制的耐热玻璃瓶中，以不超过3/4体积 为好，瓶口选用棉花纱塞，切勿使用未打孔的橡胶或软木塞。
③灭菌液体结束时，不准立即释放蒸汽，必须待压力表指针回零位方可 放余汽。 ④对不同类型、不同灭菌物要求的物品，切勿放在一起灭菌，以免造成 损失。 ⑤灭菌终了时，若压力表指针已回复零位，而盖不易开启时，则可将放 气阀摘子置于放气方汽。使外界空气进入灭菌器内，真空消除后，盖即 可开启。
④操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。为防可能溅 出的液滴，可在台面上铺一用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖 住安全柜格栅。
⑤柜内操作期间，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量产生
气流，干扰柜内气流稳定；且明火可能损坏HEPA滤器。
⑥工作时尽量减少身后人员走动以及开关房门，以防止安全柜内气流不 稳定。
5）取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种 6）穿刺：将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基中，并且要 将接种针穿刺到接近试管底部，然后沿着接种线拔出 7）塞上试管塞 8）接种针灼烧灭菌
⑦在实验操作时，不可打开玻璃视窗，应保证操作者脸部在工作窗口之 上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。
⑧柜内使用的物品应在消毒后再取出，以防止将病原微生物带出而污染 环境。
⑨工作完全后，关闭玻璃窗，保持风机继续运转10～15分钟，同时打开 紫外灯，照射30分钟。
⑩安全柜应定期进行清洁消毒，柜内台面污染物可在工作完成且紫外灯 消毒后用2%的84消毒液擦拭。柜体外表面则应每天用1%的84消毒液擦拭 。
3、其他器具的准备
（2）灭菌和消毒
消毒：用较温和的物理或化学方法杀死物体上绝大多数微生物的措施， 实际上是部分灭菌。例如，酒精擦拭。
灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外所有微生物永远丧失其生长 繁殖能力的措施。
干热灭菌
湿热灭菌
灭 菌
过滤除菌
紫外线杀菌
化学药剂杀菌
其中高压蒸汽灭菌是微生物学研究和教学中应用最广泛、效果最好的湿种 穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到 固体或半固体的深层培养基中的接种方法。 用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种。 只适宜于细菌和酵母的接种培养 具体操作： ①贴标签 ②点燃酒精灯 ③接种 1）手持试管 2）旋松试管塞 3）接种针灼烧灭菌，接着把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也 灼烧灭菌 4）拔出试管塞