细胞生物化学实验课件Exp 5-Clinical Biochemistry-zhangjingfa
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《生物化学大实验》课件
了解酶催化反应的原理和酶的结构和功能，以及 如何通过酶的特定测量鉴定酶活性。
分子生物学基本概念
深入探究DNA和RNA的功能及其在遗传学中的 应用，以及基因转录和翻译的分子机制。
蛋白质的结构和功能
探究蛋白质的三级结构，以及它们在细胞代谢过 程中所扮演的角色和功能。
样本制备
1
样本收集
收集到分离它们所需要细胞结构。
2 个人在实验中的收获
分享个人在实验中收获的方面，包括技能和知识的提高以及更广泛的收获。
3 对未来实验的展望
展望未来实验中可能遇到的挑战，提供有效的解决方案。
生物化学大实验
欢迎来到《生物化学大实验》PPT课件。本课程将介绍生物化学和分子生物 学的概念，酶的作用及机制，以及蛋白质的结构和功能。我们还将深入了解 实验过程并分享实验的结果和分析。
知识点介绍
生物化学基本概念
了解生物大分子，如蛋白质、核酸等的组成和结 构，以及它们在生命活动过程中的作用。
酶的作用及机制
细胞破碎液制备
2
将细胞破碎并加入含有缓冲液的溶液中。
3
离心和裂解
使用高速离心机离心裂。
利用生物化学技术从混合物中纯化蛋白 质。
蛋白质检测
Lowry方法
利用此化学方法可测定样品中蛋 白的含量。
Bradford方法
此方法是结合了蛋白质与染料结 合的测量方法。
BCA法
BCA法是利用氢氧化物还原双烷 基四氯化钴为蓝色络合物，来测 定蛋白质的含量。
酶活性测定
酶促反应原理
明白酶对催化反应的影响以及如何准确测定酶的含量。
酶活性的测定方法
学习测量酶活性的几种标准方法，并了解如何选择最佳方法。
酶的特定测量
分子生物学基本概念
深入探究DNA和RNA的功能及其在遗传学中的 应用，以及基因转录和翻译的分子机制。
蛋白质的结构和功能
探究蛋白质的三级结构，以及它们在细胞代谢过 程中所扮演的角色和功能。
样本制备
1
样本收集
收集到分离它们所需要细胞结构。
2 个人在实验中的收获
分享个人在实验中收获的方面，包括技能和知识的提高以及更广泛的收获。
3 对未来实验的展望
展望未来实验中可能遇到的挑战，提供有效的解决方案。
生物化学大实验
欢迎来到《生物化学大实验》PPT课件。本课程将介绍生物化学和分子生物 学的概念，酶的作用及机制，以及蛋白质的结构和功能。我们还将深入了解 实验过程并分享实验的结果和分析。
知识点介绍
生物化学基本概念
了解生物大分子，如蛋白质、核酸等的组成和结 构，以及它们在生命活动过程中的作用。
酶的作用及机制
细胞破碎液制备
2
将细胞破碎并加入含有缓冲液的溶液中。
3
离心和裂解
使用高速离心机离心裂。
利用生物化学技术从混合物中纯化蛋白 质。
蛋白质检测
Lowry方法
利用此化学方法可测定样品中蛋 白的含量。
Bradford方法
此方法是结合了蛋白质与染料结 合的测量方法。
BCA法
BCA法是利用氢氧化物还原双烷 基四氯化钴为蓝色络合物，来测 定蛋白质的含量。
酶活性测定
酶促反应原理
明白酶对催化反应的影响以及如何准确测定酶的含量。
酶活性的测定方法
学习测量酶活性的几种标准方法，并了解如何选择最佳方法。
酶的特定测量
【课件】医学生物化学实验课程PPT
常用于测定核酸和蛋白质的浓 度，酶反应的动力学研究等。
步骤
准备标准曲线、设置光程、选 择波长、测量吸光度和计算样 品浓度。
凝胶电泳
SDS-PAGE凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳
通过凝胶电泳分离和分析蛋白质。
用于分离和分析核酸，如DNA和 RNA。
非变性凝胶电泳
用于分离和分析蛋白质的三维空 间结构。
西方博洛法
戴好实验手套、口罩和实验服，避免有害物质接触。
3 合理使用实验室设备
学习如何使用化学品和设备，遵守正确的使用方法。
4 注意实验室卫生
保持实验台清洁，妥善处理废弃物和化学品。
酶活性测量
实验原理
通过测量酶催化反应速率来评 估酶活性。
实验步骤
包括制备反应混合物、控制反 应条件和测定反应速率。
数据分析
通过绘制酶活性曲线和计算酶 活性单位来解释实验结果。
医学生物化学实验课程 PPT
探索医学生物化学实验课程，从实验室中的安全措施、基本技术和设备开始， 到酶活性测量、蛋白质层析纯化、蛋白质浓度测定、分光光度法、凝胶电泳 以及PCR等。拓展知识边界，发现医学化学的奥秘。
实验室安全
1 仔细阅读实验手册
熟悉实验步骤和安全规定，确保操作正确。
2 穿戴个人防护装备
蛋白质层析纯化
1
树脂选择
选择合适的层析树脂来分离和纯化目标
制备样品和柱子
2
蛋白质。
预处理样品，并准备层析柱和缓冲溶液。
3
样品加载
将样品加载到层析柱中，充分与树脂互
洗脱和回收
4
作用。
使用洗脱缓冲液洗脱目标蛋白质，并收 集纯化的样品。
蛋白质浓度测定
1 布鲁克法
《生物化学实验》PPT课件
掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术， 尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加 科研工作打下坚实的基础。
编辑ppt
24
3 实验记录与实验报告
3.1 实验记录 实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。 实验中应及时准确地记录(专用纸，事先在记录纸上
设计好各种记录格式和表格）所观察到的现象和测量 的数据。 实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为 “0.050”，而不能记成“0.05”。每个结果都要尽 可能重复观测二次以上，即使观测的数据相同或偏差 很大，也都应如实记录，不得涂改。 实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、 编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、试 剂的浓度等。
编辑ppt
25
3 实验记录与实验报告
3.2 实验报告
实验报告的格式应为：
⑴ 实验目的；
⑵ 实验原理；
⑶ 仪器、材料和试剂；
⑷ 实验步骤；
⑸ 结果讨论（含数理据处）；
⑹ 注意事项;
(7) 思考题
注意：实验结果的讨论要充分，尽可能多查阅一些有 关的文献和教科书，充分运用己学过的知识和生物化 学原理，进行深入的探讨，勇于提出自己独到的分析 和见解，并欢迎对实验提出改进意见。
编辑ppt
35
（2）离子交换层析
原理：将能与周围介质进行离子交换的不稳定离子固 定于惰性基质上，从而分离介质中的组分。
常用的惰性基质：人工合成树脂（单体：苯乙烯、交 联剂：二乙烯苯）
阳离子交换剂：磺酸甲基、羧甲基、磷酸基 阴离子交换剂：二乙基胺乙基、三乙基胺乙基 可交换离子：阳离子：Na+、H+
编辑ppt
21
7、实验六 酵母RNA的提取和鉴定 (4学时) 8、实验七 血糖含量的测定 （4学时） 9、实验八 脂肪酸的β-氧化 （5学时） 10、实验报告讲解及考核 （2学时）编辑ppt22绪论1 实验目的
编辑ppt
24
3 实验记录与实验报告
3.1 实验记录 实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。 实验中应及时准确地记录(专用纸，事先在记录纸上
设计好各种记录格式和表格）所观察到的现象和测量 的数据。 实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为 “0.050”，而不能记成“0.05”。每个结果都要尽 可能重复观测二次以上，即使观测的数据相同或偏差 很大，也都应如实记录，不得涂改。 实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、 编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、试 剂的浓度等。
编辑ppt
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3 实验记录与实验报告
3.2 实验报告
实验报告的格式应为：
⑴ 实验目的；
⑵ 实验原理；
⑶ 仪器、材料和试剂；
⑷ 实验步骤；
⑸ 结果讨论（含数理据处）；
⑹ 注意事项;
(7) 思考题
注意：实验结果的讨论要充分，尽可能多查阅一些有 关的文献和教科书，充分运用己学过的知识和生物化 学原理，进行深入的探讨，勇于提出自己独到的分析 和见解，并欢迎对实验提出改进意见。
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（2）离子交换层析
原理：将能与周围介质进行离子交换的不稳定离子固 定于惰性基质上，从而分离介质中的组分。
常用的惰性基质：人工合成树脂（单体：苯乙烯、交 联剂：二乙烯苯）
阳离子交换剂：磺酸甲基、羧甲基、磷酸基 阴离子交换剂：二乙基胺乙基、三乙基胺乙基 可交换离子：阳离子：Na+、H+
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21
7、实验六 酵母RNA的提取和鉴定 (4学时) 8、实验七 血糖含量的测定 （4学时） 9、实验八 脂肪酸的β-氧化 （5学时） 10、实验报告讲解及考核 （2学时）编辑ppt22绪论1 实验目的
《生物化学实验》PPT课件
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24
四.几种常见电泳的比较
类型
优点
缺点
纸电泳
设备操作简单
分辨率差，电渗现 象
醋酸纤维薄膜电 设备操作简单，样品
泳
用量少
分辨率差
琼脂糖凝胶电泳 快速，分辨率高
电渗现象严重
聚丙烯酰胺凝胶 电泳
可调节凝胶孔径，样 品用量少分辨率高，
无电渗现象
高浓度凝胶难剥离
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25
五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理
A.凝胶层的不连续性
浓缩胶T=2.8％ C=20%；分离胶T=7％ C=2.5%
B.缓冲液成分的不连续性：
凝胶缓冲液Tris-HCl,含Cl－，电极缓冲液Tris-Gly,Gly
－
C.pH的不连续性：
浓缩胶pH6.7,分离胶pH8.9，电极缓冲液pH8.3
D.电位梯度的不连续性
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30
五. 盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 （2）盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应
样品的浓缩效应
电荷效应
分子筛效应
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31
A. 样品的浓缩效应
缓冲液成分及pH的不连续性 浓缩胶pH6.7 缓冲液 浓缩胶Tris-HCl, 电极缓冲液Tris-Gly
解离度 ：Cl> 蛋> Gly mcl cl>m蛋 蛋>m Gly Gly 凝胶中Cl－为快离子， Gly－为慢离子，
蛋白质从“－”极向“＋”极移 动，从浓缩胶进入分离胶，速 度变慢，堆积浓缩。
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缓冲 液
浓缩胶 分离胶
40
B.电荷效应
蛋白质样品进入分离胶后 pH增大(pH 8.9)，Gly－解离度增 大，不存在快、慢离子之分， 蛋白质样品在均一电场强度和 pH条件下泳动。
《医学生物化学实验教学课件》
氨基酸与肽的分离与鉴定实验
1
离心列管分离样品
使用离心列管从生物样品中分离出氨
薄层层析法鉴定氨基酸
2
基酸和肽。
讲解薄层层析法如何鉴定单一氨基酸。
3
氨基酸序列分析
利用比色法、高效液相色谱和质谱等 技术鉴定氨基酸序列。
糖代谢实验——酶学测定葡萄糖含量
建立标准曲线
演示如何利用葡萄糖溶液 建立标准曲线。
测定实验组织样品
详细介绍如何利用酶学方 法测定组织中的葡萄糖含 量。
数据处理
演示如何使用图表依据标 准曲线计算实验组织样品 的葡萄糖含量。
酶促反应实验——测定酶速率
酶促反应实验
讲解如何利用不同浓度的酶测 定其有效分子数、活性和相对 速率。
图像识别处理
利用Python编程语言和人工智 能技术，分析实验结果和清晰 图像。
医学生物化学实验教学课 件
本课程将介绍医用生物化学实验的基本概念、常见的实验技术及器材，并详 细讲解每项实验的步骤和注意事项。
实验器材与操作流程
精密仪器
讲解实验中所使用的精密仪器 和其操作方法。
实验器材
介绍实验中常见的器材及其使 用。
笔记技巧
给出笔记时需要注意的几个技 巧，帮助学生高效记录实验过 程。
免疫学实验——蛋白质印迹法测定蛋白质 的表达
1
制备SDS-PAGE胶及渍液
演示如何制备SDS-PAGE胶及渍液。
电泳采样及印迹法膜制备
2
详细讲解如何进行电泳采样以及如何
制备和激发印迹法膜。介绍如何进行探针标记、杂交检测以 及如何成像和定量分析实验结果。
蛋白质结构分析实验——SDS-PAGE
分析实验结果
解释实验数据的数值含义，让 学生深入理解酶的活性变化规 律。
【医学课件】生物化学(Biochemistry)
【医学课件】生物化学(biochemistry)xx年xx月xx日CATALOGUE目录•生物化学简介•生物化学的基本概念•生物化学反应及代谢途径•生物氧化与能量代谢•遗传信息的传递与表达调控01生物化学简介生物化学是研究生物体中化学过程以及生物体与外界环境之间相互作用的科学。
基本定义生物化学主要分为分子生物学、蛋白质科学、糖类科学、脂质科学和核酸科学等多个分支。
学科分类生物化学的定义与分类早期生物化学从19世纪中期开始，研究者开始研究生物体内的化学过程，如糖类的分解、氨基酸的代谢等。
生物化学的发展历程20世纪发展20世纪初，生物化学开始快速发展，出现了许多重要的发现和理论，如DNA的双螺旋结构、基因的表达调控等。
当前生物化学现代生物化学已经渗透到生命科学的各个领域，如医学、农业、工业和环境科学等，为人类认识生命和改造生命提供了重要的理论基础和实践手段。
1生物化学与医学的关系23医学与生物化学密切相关。
生物化学为医学提供了理论基础和研究方法，是医学专业学生必须掌握的一门学科。
疾病的发生和发展往往与生物化学过程中的某些物质代谢异常有关，如糖尿病、高血脂等。
生物化学的研究成果在医学诊断和治疗中也得到了广泛应用，如生化检验、药物研发等。
02生物化学的基本概念糖类多糖：多糖是由多个单糖分子通过聚合形成的，如淀粉、纤维素等。
二糖：二糖是由两个单糖分子通过脱水缩合形成的，如蔗糖、乳糖等。
单糖：单糖是构成多糖的基本单位，包括葡萄糖、果糖、核糖等。
总结词：糖类是生物体内重要的能量来源和物质构成，主要有单糖、二糖和多糖。
详细描述总结词：脂质是生物体内一类重要的分子，包括脂肪、类固醇、磷脂等。
详细描述脂肪：脂肪是细胞内重要的储能物质，由甘油和脂肪酸构成，具有保护和保温作用。
类固醇：类固醇是一类重要的生物活性物质，如胆固醇、性激素等。
磷脂：磷脂是细胞膜的主要成分之一，由甘油、脂肪酸和磷酸基团构成。
脂质总结词：氨基酸是蛋白质的基本构成单位，蛋白质是一类复杂的有机高分子化合物。
《细胞生物学实验》PPT课件
35
备注
36
实验四 叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的：
1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器 分离的一般原理和方法；
2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟 悉荧光显微镜的使用方法。
37
二、 实验原理
组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是 分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降 速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以 及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一 时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依 次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中 的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部， 分批收集即可获得各种亚细胞组分。
53
实验内容与实施过程
4、植物原生质体的分离和培养（ 课内完成，180min） ①取充分展开的嫩叶，用自来水冲洗干净； ②将叶片在0.1%升汞溶液中浸泡灭菌10min，然后用无 菌蒸馏水漂洗5次； ③用镊子撕去叶的下表皮，然后将叶放有酶液的培养 皿或带盖三角瓶，每10ml酶液放2g叶片；
49
②原生质体分离纯化或融合后，在适当的 培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞 壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团， 长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其 中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体 培养中最基础也是最关键的环节。
50
三、实验仪器
台式离心机、 高压灭菌锅、 倒置显微镜、 超净工作台
26
③詹纳斯绿B：詹纳斯绿B能专一的对线粒 体进行活体染色。线粒体中细胞色素氧 化酶使染料保持氧化状态，即有色状态， 呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被 还原，成为无色状态
27
三、实验仪器
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、 双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
备注
36
实验四 叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的：
1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器 分离的一般原理和方法；
2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟 悉荧光显微镜的使用方法。
37
二、 实验原理
组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是 分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降 速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以 及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一 时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依 次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中 的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部， 分批收集即可获得各种亚细胞组分。
53
实验内容与实施过程
4、植物原生质体的分离和培养（ 课内完成，180min） ①取充分展开的嫩叶，用自来水冲洗干净； ②将叶片在0.1%升汞溶液中浸泡灭菌10min，然后用无 菌蒸馏水漂洗5次； ③用镊子撕去叶的下表皮，然后将叶放有酶液的培养 皿或带盖三角瓶，每10ml酶液放2g叶片；
49
②原生质体分离纯化或融合后，在适当的 培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞 壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团， 长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其 中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体 培养中最基础也是最关键的环节。
50
三、实验仪器
台式离心机、 高压灭菌锅、 倒置显微镜、 超净工作台
26
③詹纳斯绿B：詹纳斯绿B能专一的对线粒 体进行活体染色。线粒体中细胞色素氧 化酶使染料保持氧化状态，即有色状态， 呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被 还原，成为无色状态
27
三、实验仪器
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、 双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
临床生物化学检验实验课件
实验室评估指标体系建立
评估指标的选择
根据实验室工作特点和质量控制要求，选择具有代表性的指标，如实验结果的准确性、精 密度、可比性等。
评估方法的确定
采用定量和定性相结合的方法，对各项指标进行客观、公正的评价。例如，通过计算标准 差、变异系数等统计量来评价实验结果的精密度；通过比对实验、方法学评价等手段来评 价实验结果的准确性。
排除检测误差、个体差异等因素， 确认结果是否真实异常。
分析异常原因
结合患者临床表现、病史等信息， 分析异常结果的可能原因。
进一步检查建议
根据异常结果及其可能原因，提 出进一步检查以明确诊断的建议。
临床案例讨论
案例选择
选择具有代表性的临床案例，涉及不同疾病类型、不同生化指标异 常等。
案例讨论
分析案例中的异常生化指标，讨论其可能原因、诊断意义及治疗方 案。
实验室安全是实验工作的重要保障， 必须严格遵守实验室安全规定，注意 防火、防爆、防毒、防辐射等安全事 项。
实验过程中应穿戴实验服和防护用品， 避免直接接触有毒有害物质，注意个 人卫生和实验废弃物的处理。
实验前应认真检查实验仪器和试剂是 否完好，熟悉实验操作流程和注意事 项，确保实验过程的安全和顺利进行。
05 实验结果解读与临床应用
正常参考范围及意义
正常参考范围的确定
基于大量健康人群的检测数据，采用统计学方法确定。
正常参考范围的意义
为临床诊断和治疗提供依据，帮助医生判断患者生化指标是否正常。
注意事项
不同实验室、不同检测方法可能有不同的正常参考范围，需结合具 体情况进行解读。
异常结果分析思路
确认异常结果
根据实验需求选择合适的 样本类型，如血液、尿液、 组织液等。
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H2O＋ Quinoeimine dye
Blood sugar conc.
Spectrophotometry
505nm
【Principles】
Blood lipid
2.1 Blood lipid: lipid in blood.
Blood lipids are mainly cholesterol, triglyceride, phospholipid, cholesterol ester and free fatty acid.
1.5 Ways of determining blood sugar
Chemical methods
Blood glucose meter:
Enzyme method: GOD-POD
Widely used in clinical examination due to its high specificity.
Normal blood If high Hyperglycemia glucose
Diabetic diagnostic criteria
Adult (empty stomach) Blood sugar ≥ 7.0mmol/L
Adult (after meal)
Blood sugar ≥ 11.1mmol/L
•Different lipoproteins have different migration rate in electric
field, as follows:
CM pre-
♁
CM
✓ chylomicron (CM) ✓ low density lipoprotein (LDL) ✓ very low density lipoprotein (VLDL) ✓ high density lipoprotein (HDL)
① Insulin binds to its receptor (1), ② which starts many protein activation cascades (2). ③ These include translocation of Glut-4 transporter to the plasma
membrane and influx of glucose (3), ④ glycogen synthesis (4), ⑤ glycolysis (5) ⑥ triglyceride (6).
Effect of adrenaline on glucose metabolism
① Epinephrine (adrenaline) is released from nerve endings and the adrenals, and acts directly on the liver to promote sugar production (via glycogenolysis).
细胞生物化学实验课件Exp 5-Clinical Biochemistry-zhangjingfa
Overview
• Objective • Principle • Procedure • Results and analysis • Notes • Thought questions
【Objectives】
2.2 Lipoprotein
➢ Blood lipids are mostly transported in a form of lipoprotein.
➢ Classificantion of Lipoprotein:
•Lipoproteins are divided into 4 kinds according to their density, size, electric charge, electrphoresis behavior and immunity.
Blood sugar assay
---GOD-POD (Glucose oxidase peroxidase)
glucose oxidase
（GOD）
Glucose＋O2＋H2O
gluconate＋H2O2
4-amino-antipyrine(4-APP) ＋ phenol ＋H2O2
peroxidase （POD）
Epinephrine: also known as adrenaline, adrenalin
/wiki/Blood_sugar_regulation
Effect of insulin on glucose uptake and metabolism
Blood sugar level 3.896.11mmol/L
Oxidization
Glycogen Synthesis
Lipid metabolism Amino acid metabolism
1.3 Hormones that influence on blood glucose levle
【Principles】
1.1 Blood sugar: glucose in blood. Normal range: 3.89—6.11mmol/L
1.2 Source and outlet of blood sugar
Sugar from food
Glycogen resolution
GБайду номын сангаасuconeogenesis
② Epinephrine also promotes the breakdown and release of fat nutrients that travel to the liver where they are converted into sugar and ketones.
1.4 Test indexes in clinic
（1）To understand the principle of determination of blood sugar and lipid;
（2） To understand the effect of hormone on blood sugar and the clinical significance of blood lipid.