芽孢杆菌属

食物中毒
含菌量达105/g以上 呕吐型——耐热肠毒素 腹泻型——不耐热肠毒素
全眼球炎（外伤后） 心内膜炎、败血症和脑膜炎
36

夏、秋季多见 食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮 料等，大多为加热烹调过的熟食 在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起 的食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官 性状正常，应引起注意
4%高锰酸钾 15min、 0.5%过氧乙酸 10min --对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、 氯酶素均敏感
13
临床意义
炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可 通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等， 并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎
14
致病物质
--细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 --抗吞噬 --有利于细菌在黏膜表面的定植
56
所致疾病：白喉--急性呼吸道传染病

传染源：患者及带菌者 传播途径：飞沫或污染 临床表现

细菌------上呼吸道粘膜， 生长繁殖，产生毒素 细菌与毒素共同作用引起局部炎症：

炎性渗出，坏死，纤维蛋白 →→假膜→→窒息
精，产酸不产气
•能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂
酶（+） • 多次传代后生化特性常可改变
34
•抵抗力：
耐热，肉汤中细菌需100℃20min才能杀死，
食物中毒菌株的游离芽胞耐受100℃30min、
干热120℃60min才能杀死
对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉
素、磺胺、呋喃类耐药
35
临床意义
39Biblioteka 检验程序呕吐物、残留食物等
活菌计数
接种 普通琼脂平板、 BAP 、卵黄平板 37℃18-24h
纯培养
直接涂片染色镜检
动物试验（肠 毒素测定）
生化反应
血清凝集（分型）
报告结果
40
•检验方法：
•直接镜检 •分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板 •鉴定与分型： 根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测
50
•液体培养基：
生长较好，但菌型不同其生长特点也不相同
51
•生化反应：

分解葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、果糖产酸 不产气，不分解乳糖、甘露糖，一般不分 解蔗糖，吲哚 （-）、硝酸盐还原（+）、 触酶（+）、氧化酶（-）、明胶液化（-） 尿素（-） 重型能分解淀粉、糖原、糊精，迟缓分解 蔗糖

52
•抵抗力：
11
抵抗力：
--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃ 3h才能杀灭 --在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致 病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数 十年 --生物武器
12
--芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化
剂较敏感，常用以下方法杀菌：
1：2500碘 10min、
3%H2O2 1h、
54

作用机制：
A亚单位可使细胞延伸 因子-2（EF-2）灭活， 影响蛋白质的合成 作用特点： 毒性作用大，1分子能 杀一个细胞 作用于多种细胞，心肌、 神经细胞均有毒素受体 肿瘤细胞对此毒素敏感



55
（二）索状因子
细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线 粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化
（三）K抗原
无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边
缘呈卷发状
5


BAP：12～15h不溶血，18～24h轻微溶血 其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速
炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落
6
肉汤—絮状沉淀生长 明胶—37℃18～24h表面液化成漏斗状，由于 细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。 NaHCO3BAP： --有毒株—5%CO2、37℃24～48h、产生荚膜 呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点) --无毒株—粗糙型菌落
小鼠、家兔或豚鼠皮下接种
27
•植物凝集素试验：
•Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断
28
Plaque
29
二、 蜡样芽胞杆菌 (Bacillus cereus, B. cereus )
30
微生物特性

形态与染色：
- G+大杆菌 -生长6h后即形成圆形芽胞、位于 菌体中心或次末端、不突出菌体 -菌体两端平截，多数呈链状排列 -引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、无荚膜
44
G+杆菌、一端或两端膨大成棒状 染色不均匀，两端浓染或有异染颗粒 无鞭毛、无芽胞 排列不规则，呈栅栏状 白喉棒状杆菌——致病菌 类白喉棒状杆菌——条件致病菌
45
白喉棒状杆菌 C.diphtheriae
46
一、生物学特性

形态与染色: G +细长微弯的杆菌 一端或两端膨大呈棒状 白喉棒状杆菌异染颗粒 常排列呈V、L、X等文字形 异染颗粒——形态上的鉴别特征 无荚膜、无芽胞、无鞭毛
荚膜染色
G染色
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖 涂片G染色、 荚膜染色
初步报告
初步报告
23
涂片染色： --G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告 --荚膜荧光抗体染色 核酸检测：核酸杂交 分离培养： --BAP、戊烷脒多粘菌素B平板 --2%兔血清肉汤增菌→分离培养

24
鉴定试验：
形态和菌落特征 生化试验:表11-1 串珠试验: --接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤 中，37℃ 6h，大而均匀成串的圆球状菌体 --与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 --类炭疽无此现象
第二十二章 芽胞杆菌属
芽胞杆菌属（Bacillus）200多个种，致病的的5个种 炭疽芽胞杆菌（B.anthracis） 蜡样芽胞杆菌（B.cereus） 蕈状芽胞杆菌（B.mycoides） 巨大芽胞杆菌（B.megaterium） 苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）
1
一、炭疽芽胞杆菌 （Bacillus anthracis，B.anthraci )
48
•
•BAP：
•菌落灰白色、光滑型、 直径1～2mm、有狭窄 β溶血环（轻型） •多次传代后菌体变为球 型 BAP中菌落
49
•亚碲酸钾BAP：选择鉴别培养基
•黑色菌落——鉴别依据
•不同菌型还原能力不同，呈现黑色或灰黑色
菌落
•根据菌落特征及生化反应特点可将本菌分为： 重型、中间型、轻型
白喉棒状杆菌 在亚碲酸钾BAP中菌落



对干燥、寒冷和日光抵抗力较其他无 芽胞细菌强，在干燥的假膜中可生存3 个月 对湿热和消毒剂敏感，5%石炭酸、1： 1000升汞1min，100℃1min、60℃10min 均可灭菌 对青霉素、红霉素等敏感，对磺胺不 敏感
53
二、临床意义
致病物质
(一)白喉外毒素



毒力强，130ng/kg可使人死亡 抗原性强 编码外毒素的tox基因——β-棒状杆菌噬 菌体
9
•荚膜多肽抗原：
--与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细
菌生长和扩散
--荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义
•芽胞抗原：
有免疫原性和血清学诊断价值
10

炭疽毒素：
--保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿 因子（EF）三个组分 --单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性 --具有抗吞噬和免疫原性

25
•青霉素抑制试验：
接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，
37℃24h
生长 受抑制不生长
•串珠和青霉素抑制联合试验：
青霉素纸片
抑菌环
兔血琼脂平板
26
• 噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 • NaHCO3毒力试验： 接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板， 10%CO2、37℃、24～48h 有毒株形成荚膜—黏液型菌落 无毒株不形成荚膜—粗糙型菌落 • 动物试验：
3
芽胞——椭圆形，小于菌体，位于菌体中央 多在有氧条件下形成，25～30℃，在培养基 中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中， 都易形成芽胞 在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸 体严禁解剖

4
培养特性：
•需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温
度30～35℃
•普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、

20
•无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基
•污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振
荡10～15min 、静置10min，取悬液65℃水浴30min或
85℃5min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养
•污染杂菌液体标本：离心 ，弃上清液后，加0.5%洗涤
剂振荡10～15min ，离心取沉淀物增菌和分离培养

7
生化反应：
分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖， 有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气 水解淀粉、还原硝酸盐 不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不 分解尿素 在牛乳中生长2～4天牛乳凝固→缓慢胨化 触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）

8
抗原构造：

菌体多糖抗原：
--与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍 能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热 沉淀反应）。 --特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型 肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。
炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可 通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等， 并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎
2
生物学性状