浮游植物取样测定规范
浮游植物定量
• 球形、园盘形、园锥形、带形等可按求体 积公式计算。 • 纤维形、多角形、新月形以及其他种种形 状可分割为几个部分计算。
• 由于在不同环境中生长的同一种藻类的细 胞体积差异很大，套用所谓的《标准生物 量表》提供的数值计算某一具体水体的生 物量有时会产生很大的误差。所以条件允 许应对优势种和亚优势种进行直接量算， 非优势种群查阅表格。
• 计数时优势种类尽可能鉴别到种，其余鉴 别到属。
• 计数中的浮游植物的数量, 最好用细胞数表 示。对不易用细胞数表示的种类可计算其 群体或丝状体数。
计数具体要求
• A、校正计数框容积， • B、定量用的盖玻片应以碱水或肥皂水洗净备用，用前可 浸于70％酒精中，用时取出以细绢拭干。 • C、滴取样品以后最好用液体石腊封好计数框四周，以防 计数过程中干燥。 • D、以目微尺测所用显微镜一定倍数下的视野直经。 • E、选好与计数框同样容积的吸管备用。 • F、定量时应将浓缩标本水样充分摇匀，快吸快滴。 • G、加上盖玻片后不应有气泡出现。 • H、计数后的定量样品应保存下来。
• （2）采水量及采样次数
卡盖式采水器
不锈钢采水器
有机玻璃采水器
• • • • •
采样次数可多可少， 有条件时可逐月采样一次， 一般情况可每季采样一次， 最低限度应在春季和夏末秋初各采样一次。 养殖池可随时进行采样。
• 每一采样点应采水1000毫升， • （1）系一般性调查，可将各层采水等量混 合，取1000毫升混合水样固定； • （2）分层采水，分别计数后取平均值。分 层采水可以了解每一采样点各层水中浮游 植物的数量和种类。 • 水样应立即加入15毫升碘液（即鲁哥氏液） 固定。
• 用内径为30毫米的橡皮乳胶管，接上 橡皮球，利用虹吸法将沉淀上层清液 缓慢吸出（切不可搅动底部，万一动 了应重新静置沉淀）。
浮游动植物采样方法
浮游动植物采样方法
一、浮游植物定量
用1L的塑料瓶，直接在采样点装满水，加10-15ml的鲁哥试剂，摇匀。
鲁哥试剂即将6g碘化钾溶于20ml水中，待其完全溶解后，将4g碘充分摇动，待其完全溶解后，定容至100ml，即配成鲁哥氏液。
二、浮游植物定性
定性样品用孔径约0.064 mm的25号浮游生物网在水面下约0.5 m处以适当的速度作“∞”字形来回拖动1～3 min，获得的浓缩样，放入50ml的白色方瓶中，添加适量的鲁哥氏液固定。
三、浮游动物定量
表层取水样10L（中层和底层取20L水样）过25号浮游生物网，获得的浓缩样，放入50ml的白色方瓶中，4%添加的福尔马林溶液。
福尔马林溶液即40%的甲醛与蒸馏水按照1：9的比例混合配制而成。
四、浮游动物定性
定性样品用孔径约0.064 mm的25号浮游生物网在水面下约0.5 m处以适当的速度作“∞”字形来回拖动1～3 min，获得的浓缩样，放入50ml的白色方瓶中，添加适量的鲁哥氏液固定。
浮游植物采集与定性定量分析
第3行
第5行 第8行
总的物种数=
实际看到的物
种数×10/3
3. 水滴法
镜检：根据1毫升的水相当于20滴水，用移液管 取1滴水样，转移至计数框，全部计数。
总数量的计算：假如1升浮游植物水样定容至30 毫升，那么总数量=30÷（1÷20）×计算所得个数
样品采集：首先进行水平面设点和垂直分层，然后 用1升
采水器采集1升水样，加鲁格氏液15毫升，转移 至沉降器沉 淀 24～48小时，通过虹吸法获得浓缩的定 量样品，定容至
50毫升
样品固定：添加3～5毫升甲醛溶液
2. 定性分析 采集：用 25 号浮游生物网在水面以下呈 “∞” 来
回拖行，将所采集水样保存于小方瓶（50毫升）
浮游植物采集与定性定量分析 2019.03.18
蓝藻门 裸藻门 淡 水 种 类 绿藻门 隐藻门 硅藻门 黄藻门
甲藻门 轮藻门
金藻门
采集
分析
确定采样点
记录水体理化 指标
确定采样层次
（福尔马林/碘液）
样品固定
定性样品采集
（25#,64 μm）
定量样品采集
（1L+10L）
（定性、定量）
室内分析
1. 定量分析
固定：添加3-5毫升甲醛溶液保存。
定量计数方法 视野法 行格法 水滴法
0.1ml计数框
移液枪取样0.1毫升 均匀分布于计数框 对部分视野进行镜检 计数该部分框的面积是400 mm2，而显微镜的视野面 积是固定值。 显微镜视野面积的计算：某型号显微镜的视场 数 为 20 ， 那 么 在 高 倍 镜 下 的 实 际 视 场 直 径 为 20/40=0.5mm ， 高 倍 镜 下 的 视 野 面 积 为 3.14*0.25*0.25≈0.2 mm2。
水质 浮游植物的测定
水质浮游植物的测定 0.1 ml计数框-显微镜计数法1 适用范围本标准规定了测定水中浮游植物的0.1 ml计数框-显微镜计数法。
本标准适用于地表水中浮游植物的密度测定。
样品浓缩50倍时，对角线方式计数方法检出限为9.2×103cells/L；行格方式计数方法检出限为3.0×103 cells/L；全片方式计数方法检出限为9.2×102 cells/L；随机视野方式计数的方法检出限与观察的视野数、显微镜视野面积有关，按附录A计算。
2 规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。
凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。
凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB/T 14581水质湖泊和水库采样技术指导HJ/T 91地表水和污水监测技术规范HJ 494水质采样技术指导3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1浮游植物 phytoplankton在水中营浮游生活的微小藻类植物，通常浮游植物就是浮游藻类，包括原核的蓝藻和其它各类真核藻类。
3.2显微镜计数视野 microscope counting field显微镜视野中限定一定面积的区域，用于定量计数浮游植物。
3.3检出限 detection limit单次计数过程中，发现的概率不低于99%时最低的浮游植物密度。
4 方法原理在显微镜下，利用0.1 ml计数框对样品中的浮游植物进行人工分类和计数，计算单位体积样品中各种类浮游植物的细胞数量。
5 试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。
5.1 碘（I2）。
5.2 碘化钾（KI）。
5.3 甲醛溶液：w(HCHO)＝37%～40%。
5.4 丙三醇（HOCH2CHOHCH2OH）。
5.5 鲁哥氏碘液：称取60 g碘化钾（5.2），溶于100 ml水中，再加入40 g碘（5.1），充分搅拌使其完全溶解，加水定容至1000 ml，转移至棕色磨口玻璃瓶，室温避光保存。
浮游生物样品采集与分析详解
近岸海域常见； 体长0.8mm左右； 头胸部近纺锤形；
后侧角钝圆。
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双毛纺锤水蚤 Acartia bifilosa
太平洋纺锤水蚤 Acartia pacifica
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体长1.2mm左右； 后侧角尖锐。
头部一对很大的 复眼； 第三对胸足 非常细长；
体长最大可达
7mm。
细足法虫戎 Themisto gracilipes
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节肢动物门 Arthropoda，磷虾类 Euphausiacea
指
状
足
腮
太平洋磷虾
Euphausia pacifica
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嵊山秀氏水母 Sugiura chengshanense
现在是34页\一共有65页\编辑于星期四
伞半球形，胶质薄
生殖腺位于辐管上，卵 形或线性
16-30条触手
触手间有平衡囊
半球美螅水母 Clytia hemisphaerica
[ 半球杯水母 Phialidium hemisphaericium ]
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桡足类的基本形态构造
北海区最重要的优势种之一； 桡足类模式种；
体长3mm左右； 后侧角短钝；
第5胸足内缘有齿。
后侧角
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中华哲水蚤 Calanus sinicus
体长0.8mm左右； 体型矮胖；
后侧角钝圆；
第5胸足短小。
现在是17页\一共有65页\编辑于星期四
浮游菌检测标准
浮游菌检测标准1 取样前准备工作1.1 依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制、灭菌标准操作程序》制备适量的营养琼脂培养基。
1.2 在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。
1.3 将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。
取出逐个检查，确认无菌落数后即可使用。
1.4 采样：将上述制备好的营养琼脂平皿交与QA人员取样。
2 仪器、设备和培养基2.1 所用的仪器、设备和培养基2.1.2 浮游菌采样器2.1.3 培养皿（φ90mm×15mm）2.1.4 培养基（营养琼脂培养基）2.1.5 恒温培养箱2.2 仪器、设备、培养基的要求2.2.1 浮游菌采样器2.2.1.1 浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。
2.2.1.2 应严格按仪器说明书的要求进行操作。
2.2.1.3 采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。
2.2.1.4 每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。
2.2.1.5 空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（L）。
2.2.1.6 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。
3 测试方法3.1 测试用仪器、培养皿表面必须严格消毒。
3.1.1 采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。
3.1.2 用消毒剂擦净培养皿的外表面。
3.1.3 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。
3.1.4 采样口及采样管使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。
3.1.5 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。
浮游植物采集与定性定量分析
0.1毫升样品的数量就是将实际看到的每个视野 物种数量乘以2000倍。
第3行
第5行 第8行
总的物种数=
实际看到的物
种数×10/3
3. 水滴法
镜检：根据1毫升的水相当于20滴水，用移液管 取1滴水样，转移至计数框，全部计数。
总数量的计算：假如1升浮游植物水样定容至30 毫升，那么总数量=30÷（1÷20）×计算所得个数
样品采集：首先进行水平面设点和垂直分层，然后 用1升
采水器采集1升水样，加鲁格氏液15毫升，转移 至沉降器沉 淀 24～48小时，通过虹吸法获得浓缩的定 量样品，定容至
50毫升
样品固定：添加3～5毫升甲醛溶液
2. 定性分析 采集：用 25 号浮游生物网在水面以下呈 “∞” 来
回拖行，将所采集水样保存于小方瓶（50毫升）
浮游植物采集与定性定量分析 2019.03.18
蓝藻门 裸藻门 淡 水 种 类 绿藻门 隐藻门 硅藻门 黄藻门
甲藻门 轮藻门
金录水体理化 指标
确定采样层次
（福尔马林/碘液）
样品固定
定性样品采集
（25#,64 μm）
定量样品采集
（1L+10L）
（定性、定量）
室内分析
1. 定量分析
固定：添加3-5毫升甲醛溶液保存。
定量计数方法 视野法 行格法 水滴法
0.1ml计数框
移液枪取样0.1毫升 均匀分布于计数框 对部分视野进行镜检 计数该部分视野的数量
换算整个计数框的数量
计数框的面积是400 mm2，而显微镜的视野面 积是固定值。 显微镜视野面积的计算：某型号显微镜的视场 数 为 20 ， 那 么 在 高 倍 镜 下 的 实 际 视 场 直 径 为 20/40=0.5mm ， 高 倍 镜 下 的 视 野 面 积 为 3.14*0.25*0.25≈0.2 mm2。
GB/T14518浮游植物的采集
GB/T14518浮游植物的采集
不同水体，不同种类的藻类在个体上有很大差异，仅仅用数量就很难评价。
这就要求，浮游植物的定量工作，必须以测算生物量为日标。
选择采样点的原则是，采样点在平面上的分布要有代表性。
根据调查的目的而定。
般要求湖心、库心、江心必须采样，有条件时采样点可适当多设一些，如大的湖湾、库湾、河流的上、中、下游水体的沿岸带、浅水区等也要设点采集。
凡水深不超过2米者，可于采样点水下0.5m处采水，
水深2~10米以内，应距底0.5米处另采一个样，
水深超过10米时。
应于中层增采一个水样。
1.池塘：样点可设在距岸边1m处。
水深小于2m时采一中
层水样。
若水深大于2m时，最好采上、中、下层水样。
亚表层：水下20cm左右。
中层：水体中间部分。
下层：离底20cm左右
2.水库及河流：样点可设在上、中、下游。
上游：设十个点（亚表层或中层）
中游：水在2-3米深时设一个点，采2个样（上中层和中下层)
下游：设2-3个样点。
中心点3个样（上、中、下层），
两测点各一个样（中层）。
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水体浮游植物分析规范
参考淡水生物资源调查技术规范DB43/T 432-2009
➢水层设置
水深小于3m时，只在中层采样，混合均匀水体，可以只采表层（0.5m）水样；水深3m～6m时，在表层、底层采样，其中表层水在离水面0.5m处，底层水在离泥面0.5m处；水深6m～10m时，在表层、中层、底层采样；水深大于10m时，在表层、5m、10m水深层采样，10m以下除特殊需要外一般不采样，对于深水湖泊，取样的水层可以将取样间隔加大，如0m,10m,20m,50m, 100m。
➢采样
定量样品在定性采样之前用采水器采集，每个采样点取水样1L，贫营养型水体应酌情增加采水量。
泥沙多时需先在容器内沉淀后再取样。
分层采样时，取各层水样等量混匀后取水样1L。
大型浮游植物定性样品用25号浮游生物网在表层缓慢拖曳采集，注意网口与水面垂直，网口上端不要露出水面。
➢固定
浮游植物样品立即用鲁哥氏液固定，用量为水样体积的1％～1.5％。
如样品需较长时间保存，则需加入37%～40％甲醛溶液，用量为水样体积的4％。
现行的一些规律性的方法为：取水样，500ml,加入5ml鲁格，虹吸到30-50ml,加入1ml甲醛。
➢水样的沉淀和浓缩
固定后的浮游植物水样摇匀倒入固定在架子上的1L沉淀器中，2h后将沉淀器轻轻旋转，使沉淀器壁上尽量少附着浮游植物，再静置24h。
充分沉淀后，用虹吸管慢慢吸去上清液。
虹吸时管口要始终低于水面，流速、流量不能太大，沉淀和虹吸过程不可摇动，如搅动了底部应重新沉淀。
吸至澄清液的1/3时，应逐渐减缓流速，至留下含沉淀物的水样20mL～25（或30～40）mL，放入30（或50）mL的定量样品瓶中。
用吸出的少量上清液冲洗沉淀器2次～3次，一并放入样品瓶中，定容到30（或50）mL。
如样品的水量超过30（或50）mL，可静置24 h后，或到计数前再吸去超过定容刻度的余水量。
浓缩后的水量多少要视浮游植物浓度大小而定，正常情况下可用透明度作参考,依透明度确定水样浓缩体积见表3，浓缩标准以每个视野里有十几个藻类为宜。
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2 ➢ 计数
● 计数框行格法
计数前需先核准浓缩沉淀后定量瓶中水样的实际体积，可加纯水使其成30mL 、50mL 、100mL 等整量。
然后将定量样品充分摇匀，迅速吸出0.1mL 置于0.1mL 计数框内（面积20mm ×20mm ）。
盖上盖玻片后，在高倍镜下选择3行～5行逐行计数，数量少时可全片计数。
1L 水样中的浮游植物个数（密度）可用下列公式计算：
01n 10
N V N =P N V ⋅⋅………………………………………………（1） 式中:
N ——1L 水样中浮游生物的数量，个/L ；
N 0——计数框总格数；
N 1——计数过的方格数；
V 1——1L 水样经浓缩后的体积，mL ；
V 0——计数框容积，mL ；
P n ——计数的浮游植物个数。
● 计数框整体计数法
对计数框内所有物种进行鉴定，然后进行计算。
➢ 结果整理
分析浮游植物物种组成，分类单元确定到属或以下，给出结果。