月季组织培
月季组织培养
目录摘要 (4)前言 (4)综述 (5)1．外植体 (5)1.1取材部位1.2取材时间1.3取材大小2. 消毒 (8)3. 接种方式 (8)4.培养基 (9)4.1基本培养基4.2激素4.2.1不同激素对诱导愈伤组织的影响4.2.2不同激素对继代培养的影响4.2.3不同激素对生根培养的影响4.3糖浓度的影响4.4无机盐4.5琼脂5.培养基的配置 (13)6.培养条件 (14)7．防褐化 (14)技术路线与实验设计 (15)参考文献 (17)摘要：为了进行月季组织培养实验，我们查阅了相关文献，从多个方面了解影响月季组织培养的因素，如外植体的取材部位、时间、大小、消毒、接种方式、不同阶段激素的配比、培养基成分、培养条件等，以期在实验中调控月季组培的环境，确保实验顺利进行。
基于我们想探究激素对组织培养中细胞的脱分化和再分化的作用这一想法，我们的设计了以ＮＡＡ浓度、６ＢＡ浓度、外植体部位为影响因素的正交实验（L9（3４）），并考察NAA与6BA的交互作用。
同时，我们还以接种方式作为单因素考察其对愈伤组织诱导的影响。
关键词：组织培养、影响因素、正交前言在阅读了植物组织培养的相关文献资料后，我们设计了此次组织培养实验方案，考察细胞分裂素浓度、生长素浓度、接种方式、取材部位因素对愈伤组织的形成有何影响，期望寻找出诱导月季愈伤组织的最佳条件；同时探究由愈伤组织诱导出芽及生根所需的最佳浓度配比。
并在月季组织培养过程中，掌握外植体消毒方面要注意的事项，整个培养过程中培养条件的选取与控制，实验过程中出现的现象的观察记录以及分析，在这个过程中不断加强理论与实践的联系，深化对理论知识的理解。
对于外植体选择，我们采用了以往研究者的做法，即选用带腋芽的枝条。
但是，我们的不同之处在于，我们还保留了一部分刚好能包裹住腋芽的叶柄。
这样做的目的是为了在消毒时避免芽受到太大损伤。
参考论文中防褐化多用抗氧化剂和其他抑制剂，减轻外植体在组培中的酶促褐变，我们根据生理生化原理，考虑到酶活性与温度有关、以及外植体内的酚类物质含量有关，因此需对外植体做如下处理：接种前先将外植体用低温水流冲洗24小时；选择晴朗天气采摘外植体。
有菌条件下月季组织培养技术
加热 （ 因加 热蒸 发加 入母液 后到分 装时煮 沸刚好 是定 容要 求
的 １１０ Ｌ 冷却 后就 是 １ ， ０ ， ｍ 故配 １ Ｌ Ｌ培养 基量 取 １ Ｌ自来
水 ） 称 取 白糖 ３ 、 脂 ４ｇ 加 入 电饭 煲 锅水 中 ， 全 部 溶 ， ０ｇ 琼 ， 待 解 ， 加 入 １ ０倍 ＭＳ母 液 （ 中 ： 量 元 素 Ａ １ 大 量 再 ０ 其 大 ０ｍＬ、
瓶 中 水 ， 倒 入 自来 水 冲洗 １ 。 出 并滤 干 瓶 中 自来水 ， 再 次 倒
诱 导萌 芽培 养基 ： ＋ Ａ ０５ １ ＃Ｌ Ｓ ０ ＭＳ Ｂ ．～ ． ｍ ＋ １６杀 菌剂 ０３ ０ ．
ｍＵＬ 增殖 培养 基 ： ＋ Ａ １ ２ｍｇ ＋ Ａ ．～ ． ／＋ １６ ： ＭＳ Ｂ ￣ ／ Ｎ Ａ０１０２ｍｇＬ Ｓ ０ Ｌ 杀 菌 剂 ０３ｍＬＬ： 根 培 养基 ： ／ ＋ Ａ ．￣ ． ｒｇＬ ． ， 生 １２ＭＳ Ｎ Ａ ０ １ ０２ａ ／ ＋ Ｉ Ａ １ ／ （ Ｎ Ａ ０５ｍｇＬ ＋ １ ６杀菌 剂 ０３Ｉ【 。 Ａ ． ｍｇＬ 或 Ａ ． ， ） Ｓ ０ ０ － ｎ儿
冲洗 至 无泡沫 为止 。
普 及 月季名 优 新 特 品种 将 起 到重 要 的作 用 。 月季 常 规 组 培
技 术 报 道很 多 ， 但在 有 菌 环境 条 件 下 的 月季 组织 培 养 技 术 未 见报 道 。 １ 培 养基 组成
倒去 自来 水 ， 茎段 转移 到 一个 经 Ｓ ０ 把 １５杀 菌液 处理 过 的瓶 中 ， 入 ７ ％酒 精 浸 泡 ８ １ ， 入 自来 水 ， 即倒 出 倒 ５ ～ ０Ｓ倒 立
中图分 类号 ￥ ８ ．２ ６ ５１ 文献 标识 码 Ｂ 文章编 号 １０ — ７ ９ ２ １ ０ — ２ ６ ０ ０ ７ ５ ３ （０ ２）８ ０ １— １
月季的植物组织培养
月季的植物组织培养一．实验目的1．掌握蔷薇科月季的组织培养技术2．熟悉、巩固无菌操作技术二．实验器皿及试剂1.仪器及用品：超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、电热炉酒精灯、镊子、解剖刀、解剖剪、烧杯、三角瓶、培养皿、滤纸、封口膜2.试剂：MS+6BA1+NAA1（诱导）培养基、MS+6BA2+NAA2（继代）培养基、70%酒精、3%次氯酸钠、无菌水3.材料：月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药。
三．实验步骤配制诱导培养基：MS+6BA1+NAA1，1升，灭菌后分装到35个培养1.皿中。
2.取材：将采集的月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药冲洗干净，按不同部位分装到3个500烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸没并轻摇10秒进行预消毒；倒出酒精，加入3%次氯酸钠浸没，轻摇11分钟；倒净次氯酸钠，用无菌水冲洗5遍以上，倒出无菌水。
3.将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm2大小、茎段长2—3cm每段至少有1 个侧芽、将花苞打开取花药，分别接种到带有培养基的平皿中并封口（每皿3—5个）。
4.标记好后，放入培养室中培养（2周左右）。
5.配制分化培养基：MS+6BA2+NAA2培养基，配制1升，灭菌后分装到35个100ml的三角瓶中。
6.挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。
在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中（每瓶最多）并封口。
7.标记好后，放入培养室培养。
继续观察愈伤组织的生长情况。
四．实验结果茎段出愈率=25根出愈/总接种40根*100%=63%叶片出愈率=5片出愈／总接种30片*100%=17%花药及萼片出愈率=1片出愈/总接种20片*100%=5%通过实验得出月季茎段的出愈率最高，其次是叶片及花药。
接种过程中有三个平皿出现污染现象。
五．问题分析及解决1.三个污染的外植体，两个是叶片内延至周围。
月季的组培实践
月季的组培实践1.1 实验材料月季。
1.2 材料处理月季枝条在自来水下冲洗干净, 用75%乙醇表面消毒30–40秒, 再用0.1%HgCl 2溶液灭菌2–6分钟, 无菌水冲洗3–5次。
在无菌条件下将叶片、叶柄和茎段剪成0.5 cm见方的小块或1 cm的小段, 并露出新鲜伤口。
培养瓶开口于酒精灯火焰处，接种于诱导愈伤组织培养基上2 培养基成分与培养条件2.1 培养基及培养条件(1) 诱导愈伤组织和不定芽均以MS培养基为基础.培养基诱导愈伤组织的最佳培养基配比为1.0 mg·L–16-BA+3.0 mg·L–12,4-D(2) 诱导不定芽产生的植物生长调节剂配比1.0 mg²L–1 6-BA+0.1 mg·L–1NAA+0.02 mg·L–1TDZ(3) 1/4MS+0.1 mg·L–1NAA为生根培养基.(含30 g²L–1蔗糖和7.0 g²L–1琼脂, pH 5.8–6.2), 并于121°C高压蒸汽灭菌25分钟。
培养条件为(25±2)°C, 每天16小时光照, 光照强度为40 μmol²m–2²s–1。
2.2 愈伤组织诱导选取经处理的外植体接种于不同激素配比(表1)的MS培养基上进行愈伤组织诱导。
定期观察, 3–4周继代1次。
2.3 不定芽的诱导和增殖外植体在愈伤组织诱导培养基上培养30天后, 挑选长势良好的愈伤组织, 接种yu配比植物生长调节剂的培养基中进行不定芽诱导.2.4 生根诱导将长势良好的再生苗移植到生根培养基上诱导生根.2.5 移栽炼苗将再生根生长状况良好的微型月季幼苗取出, 用流水缓慢地将根部残留的培养基冲洗干净(注意不要伤及根部), 移栽至土壤中炼苗1–7天。
月季组培实验报告
月季快速繁殖实验报告月季简介月季花(学名: Rosa chinensis Jacq.)被称为花中皇后，又称“月月红”,是常绿、半常绿低矮灌木，四季开花. -般为红色. 或粉色、偶有白色和黄色.可作为观赏植物，也可作为药用植物，亦称月季。
有三个自然变种,现代月季花型多样,有单瓣和重瓣，还有高心卷边等优美花型;其色彩艳丽、丰富,不仅有红、粉黄、白等单色，还有混色、银边等品种;多数品种有芳香。
月季的品种繁多，世界上已有近万种，中国也有千种以上。
一、实验目的1.掌握月季快繁体系: ①母株的选择②外植体消毒与接种③诱导培养④生根培养⑤.驯化移栽的操作流程2.掌握无菌操作的植物组织培养方法;3.通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法;4. 了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理(一) 植物组织培养植物组织培养是把植物的器官，组织以至，单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成- -完整植株的过程。
植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。
这-过程称为"脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。
(二)植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一-样的植株。
(三)组织的分化外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
(四)培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近,似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
月季组培方案
月季的组培一、工作目标通过此项工作掌握植物组织培养的基本知识，并掌握月季的组培技术二、材料用具超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯三、工作过程1.培养基的配置初代培养基：MS+6-BA0.5~3.0mg/L+NAA0.01~1.0mg/L继代培养基：MS+BA0.5~2.0mg/L+NAA0.01~0.05mg/L生根培养基：1/2MS+IBA 0.2mg/L+活性炭2.培养过程（1）外植体的选择一般选取生长健壮的带腋芽的枝条是较适宜的外植体，选芽以茎段中芽为最好，采样成活率较高，枝条须保留一部分包裹住腋芽的叶柄，避免在消毒时芽受到太大损伤（2）外植体的消菌灭毒接种材料为当年抽生侧芽饱满的幼嫩茎段，自来水冲洗10-20min；75%或70%乙醇浸泡30s,0.1%升汞表面消毒3min,无菌水冲洗4-5次，将侧芽切下接种到MS培养基上，获得无菌苗备用。
取回枝条用自来水冲洗干净，无菌条件下用70%酒精表面消毒30-40s，再用0.1%Hgcl2溶液灭菌5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次（3）初代培养将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm大小、茎段长2~3cm，每段至少有一个侧芽、将花苞打开取花药，分别接种到带有培养基的培养皿中并封口（每皿3~5个），标记好后，放入培养室中培养2周左右（4）继代培养挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。
在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中（每瓶最多）并封口。
（5）生根培养苗高2~3cm,茎粗0.1cm左右，苗开始木质化，此时进行生根培养，把苗转移到生根培养基上。
观察它生长情况。
（6）驯化小苗接到生根培养基上后，14d可见基部分化出根点，20d则长出许多白根。
此时组培阶段结束，进入试管苗移栽成活阶段。
月季组织培养(1)
月季组织培养分组：12级生技2班3组指导老师：韩文军成员：成晨，江应龙，牟思斯，盛威摘要了解月季组织培养的研究概况，以及组织培养中遇到的相关问题的研究。
外植体的选择为月季枝条，灭菌用75%酒精和10%次氯酸钠，初代培养基为MS+BA 1mg/L，继代培养基为MS+BA1.5mg/L 十N A A 0.05m g/ L。
引言月季是中国十大名花之一，被誉为“花中皇后”，具有极高的观赏价值和商业价值①它是蔷薇科蔷薇属多年生落叶或常绿灌木②，被广泛运用于园林绿化，具有很高的观赏价值和经济价值。
目前月季的繁殖手段除了传统的扦插、嫁接、压条之外，还有月季的组织培养技术，相对前面几种方法来说，月季的组织培养技术能大幅地提高获得月季植株的速度和质量，正越来越被广泛地运用到实际生产中。
一方面，组织培养可有效地保持母株的优良性状；另一方面，它对植物品种改良和选育新品种也有重要意义③。
0实验流程外植体处理→初代培养→继代培养→生根培养→壮苗炼苗→移栽1外植体的选择和灭菌1.1外植体的选择月季组培外植体通常采用带芽茎段。
同一枝条上不同部位的腋芽诱导效果不同。
取枝条中部的腋芽效果最好，这可能与月季枝条不同部位的腋芽成熟程度及休眠状态不同等因素有关。
很多研究都证明枝条中部的腋芽萌发较顶部和基部时间早，且中部的腋芽长势好，增殖系数高，其次是基部，再次是顶部④-⑥。
另外，取材时也注意天气的选择，根据几次初代培养的结果来看，天气晴好时取材初代培养的成功率要比阴雨天要高，具体原因可能是阴雨天植物的外植体带菌比较多，杀菌不彻底从而使培养失败。
此外，外植体的休眠状态对芽的萌发也有影响，李青等⑦采用1 年生枝条的冬芽和当年生枝条的腋芽为外植体进行比较，发现越冬芽较嫩枝条的芽成活率高，且萌动所需时间较短，主要原因是芽内积累了丰富的营养物质，在适宜的条件下很快萌发生长；而春季嫩枝上的芽，由于刚刚形成且未经休眠，所以本身较弱，但越冬芽污染率高于嫩枝芽。
月季花的组织培养
漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，用无菌水涮洗数次 ，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求接种，从 芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。
•（5）培养 培养温度21℃最
好，最高不超过25℃，有昼夜温差， 光照10～12小时/天，光强800～
1200LX。
月季的植物组织培养
汇报：王照雷 素材：叶康康 制作：孙超、顾俊伟
主要内容
<一> 月季花
<二>月季花的组织培养
<三>问题分析与解决
月季
月季，被称为花中之王，又称“月月 红”，蔷薇科。常绿，半常绿低矮灌 木，四季开花﹐多红色﹐或粉色、偶 有白色﹐可作为观赏植物，可作为药 用植物，也称月季花。
二、实验原理
细胞的全能性：细胞具有全套遗传物质。能够发育
成完整植株的能力。
激素调控理论：当细胞分裂素和生长素的比值大时
，诱导芽的产生；当比值小时，诱导根的产生；一样时， 诱导愈伤组织的形成。
（3）清洗外植体 采回的枝条切去叶，再剥
去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗衣粉水仔细刷洗， 再用自来水冲洗，毛巾擦干后，放置在小木板上，用刀切 成2～3厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒过的培养 皿，放在超净工作台上。
（5）生根与移栽 月季嫩芽生长到一定长度时，就应切 割下来，转入生根培养基。切下的嫩芽长度以2～3厘米为 宜，让幼苗基部伤口愈合，已长出根原基，幼根尚未长出 ，即出瓶种植。这种方法不会损伤根系，移栽速度快，成 活率高。
（a）以MS培养基为基础，配方为MS+NAA0.5，此外加入 300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎， 经2周左右出现根原基，幼根尚未长出即出瓶种植。
月季组织培养培养基配方
月季组织培养培养基配方1. 介绍月季是一种常见的花卉植物，广泛应用于观赏园艺领域。
在月季繁殖和培养过程中，培养基配方起着至关重要的作用。
本文将深入探讨月季组织培养培养基配方的要点和方法。
2. 月季组织培养的意义月季组织培养是繁殖月季的一种重要方法。
通过无菌培养、组织再生和快速繁殖，可以大量繁殖优良品种，并用于育种和病毒检测等研究。
因此，合理的培养基配方对月季组织培养的成功至关重要。
3. 月季组织培养培养基的成分月季组织培养培养基的成分包括植物激素、糖类、无机盐和其他添加剂。
3.1 植物激素植物激素在月季组织培养中起到调节生长和分化的作用。
常用的激素包括生长素、细胞分裂素和愈伤组织激素。
它们的浓度和比例对培养基的效果有着重要影响。
3.2 糖类糖类是提供能量和碳源的重要成分。
常用的糖类包括蔗糖、葡萄糖和半乳糖。
不同的月季品种和培养阶段对糖类的需求不同，需要根据具体情况进行调整。
3.3 无机盐无机盐是提供植物所需微量元素的重要来源。
常用的无机盐包括氮、磷、钾等。
它们的浓度和比例需要根据培养阶段的需求进行合理调整。
3.4 其他添加剂除了植物激素、糖类和无机盐外，还可以添加一些其他的添加剂来增强培养基的效果，例如维生素、抗生素、染料等。
这些添加剂的使用需要根据具体实验目的和需求来决定。
4. 月季组织培养培养基配方的优化方法优化月季组织培养培养基配方可以提高培养成功率和培养体系的稳定性。
4.1 脱菌方法月季组织培养需要在无菌条件下进行，因此脱菌方法是非常重要的。
常用的脱菌方法包括酒精消毒、高压蒸汽灭菌和紫外线照射等。
不同的方法有各自的特点和适用范围，需要根据实际情况选择合适的脱菌方法。
4.2 成分优化成分优化是指根据具体需求对培养基的成分进行调整和优化。
通过改变植物激素、糖类和无机盐的浓度和比例，可以提高培养基的适用性和培养效果。
4.3 pH值调节月季对培养基的pH值敏感，过高或过低的pH值都会影响生长和分化。
月季植物组织培养
月季植物组织培养月季介绍月季为常绿有刺灌木，或呈蔓状与攀援状。
常绿或落叶灌木，直立，茎为棕色有一点绿，具有钩刺或无刺，但也有几乎无刺的。
小枝绿色，叶为墨绿色，多数羽状复叶，宽卵形或卵状长圆形，长 2.5-6厘米，先端渐尖，具尖齿，叶缘有锯齿，两面无毛，光滑；托叶与叶柄合生，全缘或具腺齿，顶端分离为耳状。
花朵常簇生，稀单生，花色甚多，色泽各异，径4-5厘米，多为重瓣也有单瓣者；萼片尾状长尖，边缘有羽状裂片；花柱分离，伸出萼筒口外，与雄蕊等长；每子房1胚珠。
果卵球形或梨形，长1-2厘米，萼片脱落。
花期4--10月。
大多数是完全花，或者是两性花。
有花中皇后的美称。
现为天津市的市花，还是中国十大名花.实验原理植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
实验材料及用具实验材料：月季实验试剂：MS母液70％酒精氯化汞0.1 mol/L NaOH与0.1 mol/L HCl IAA 2,4-D实验器具：广口瓶棕色瓶锥形瓶剪刀镊子酒精灯紫外灯实验步骤：培养基的配制1 称取6.5g～12g琼脂，先用蒸馏水置1000ml搪瓷杯浸泡2小时后充分洗去杂质。
弃去浸液用无离子水再洗1～2次，并加入500ml无离子水在电炉上溶化。
边搅拌边溶化，直至完全溶化备用。
2 另取蔗糖30g于上述溶液中搅拌完全溶解备用。
3 另按MS培养基用量量取无机大量微量元素及有机成分的母液于一烧杯中，并完全倒入②液中搅拌溶解混匀备用。
4 按目的要求用取样器加入各种激素并搅拌混匀，加稀碱或稀释酸调pH值应比目的要求的pH值稍高0.1～0.2。
定溶1000ml。
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月季组织培养技术作者：龙华班级：林学10级1班学号：20101832 指导老师：钟宇摘要：月季为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。
月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求。
关键词：月季；组培；赤霉素引言随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。
以月季为试材进行组培试验,综述了月季组织培养、快繁的研究技术及进展，并对月季组培的最优条件进行了总结。
本研究探索出的月季组培快速繁殖技术，在试管苗单芽诱导丛生苗、利用代用品培养降低组培成本、试管苗管外扦插生根、试管苗微型化长途运输等方面，较前人有所改进。
1 月季组织培养的研究进展月季是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。
别名长春花、月月红、斗雪红、瘦客等，蔷薇科蔷薇属植物，其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小。
其花型大，美丽，幽雅，高贵。
在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一[1]。
月季的花色可编制成完美的连续色谱。
月季是重要的花卉，世界的销售额多年来稳居各类花)卉的第一或第二。
月季的一大优点是分布极广，适应性良好，栽培容易。
月季是四季常青花卉，花期长，花色多，芳香馥郁，由于其特殊的情感内涵和商品价值[2]，被广泛应用于园林、庭院装饰，并可制成月季盆景，作切花、花篮、花束等。
此外，月季花可提取香料，根、叶、花均可人药，具有活血消肿、消炎解毒等功效。
当前，月季育种是花卉育种中最活跃的领域之一。
月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求[3]。
随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。
同时，月季组培和遗传转化系统的建立也是体细胞克隆变异育种和基因工程育种的重要前期工作[4]。
月季原产我国，早在汉代就有历史记载。
2 0 0年前，月季植入西方和各国的蔷薇结缘，繁育出成千上万新月季品种，现代月季( 分为茶香月季 HT、聚花月季 F、壮花月季 Gr|、攀缘月季 CI、微型月季 Mi n、以及中国月季 Ch等 9大系。
) 也随之推广到除热带和寒带外的世界各地。
目前世界各地广为栽培的月季，是以中国月季为主要亲本，经以长期杂交育种而选育成功的。
月季在观赏植物中的地位是很高的，全世界各国人民都普遍喜爱月季，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。
月季的用途很广( 如用藤本月季布置长廊、拱门；树状月季装饰主干道等)。
国外月季花卉工厂化育苗开展较早，在某些国家和地区已成为获得巨额外汇的支柱产业。
我们国家的组织培养技术与国外相比差距不大，但是产业化起步较晚。
在加快科学技术转化为生产力的今天，植物组培技术广泛应用于月季花卉的繁殖育种．必将取得巨大的经济效益、社会效益和生态效益。
月季生长繁殖速度较慢，应用组织培养技术可大大缩短它的增殖周期，快速繁殖优良品种。
在短期内繁殖出数以万计的苗木，这些苗木的遗传特性和表型特性与母株完全相同，完全保持了母株的优良特性。
月季花组培繁殖可以周年生产，不受季节限制，并且耐贮藏不易烂苗，可脱离培养基长途运输，实现了苗木运输“微型化”。
2 月季组织培养技术2.1 外殖体的选择、消毒及接种外殖体一般选取生长健壮的当年生枝条的饱满而未萌发的侧芽。
取回枝条用自来水冲洗干净，无菌条件下用7 0 ％酒精表面消毒3 0 ～ 4 0 S，再用0.1 ％H g C 1 溶液灭菌5 ～1 0min，最后用无菌水冲洗3 ～ 5 次。
芽的快速繁殖与供试材料的基因型有关，同时还与外殖体的取材部位有关，来源于枝条中部的侧芽的繁殖速率最快[5]。
李青等分别选取一年生枝条的冬芽和当年生枝条的腋芽作为外殖体，相同条件下培养发现越冬芽的成活率较高，且从接种到萌动时间较短，生长快，在后代繁殖中植株健壮。
于冰沁在外殖体的接种中采用了垂直接种，斜向上4 5 度接种，水平接种和反转接种4种方式，发现垂直接种和斜向上 45 度接种是最佳的接种方式，腋芽再生芽数多，且生长健壮，这可能与植物的生长极性有关。
诱导培养基以MS为基本培养基，附加适量的细胞分裂素 6一苄氨基嘌呤( 6- BA) 和生长素萘乙 D 6 7 B 0 2) 酸 (NAA) 。
NAA增加至 0.1 m g/ L时， 6 一 BA浓度的高与低已对增殖系数不产生明显影响。
最适的侧芽诱导培养基为 MS + 6一BA 0.5～3.0mg/L+NAA 0.0l ～ 1.0 mg/L [6-9]，且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用。
2.2 继代培养将诱导培养基上已经萌发的嫩芽转入附加 6一B A 、NAA等激素的MS培养基中，进行增殖继代。
K T， I A A等激素作用效果较差，协同作用不明显[6]。
低浓度的6 一BA有利于不定芽的增殖，浓度过高则抑制不定芽增殖，适量 NAA有利于芽和叶生长[7]，但浓度过高诱导产生大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长[8]。
在 NAA浓度相同而B A浓度不同的培养基中，随B A浓度的升高，芽苗的增殖系数也相应提高。
在 B A浓度相同而 NAA浓度不同的培养基中，随NAA浓度升高，小芽生长速度加快，继代所需时问对增殖系数也有一定的影响[9]。
此外，增殖系数还与品种有关。
从增殖倍数、叶片数、再生芽长势等综合因子来看， MS + B A 0.5 ～ 2.0 mg/L + NAA 0.O1 ～ 0.05 mg/L是最适的不定芽增殖培养基( 表 1 ) 。
表 1增殖培养基(MS)中不同激素对芽的影响(mg/L)激素组成增殖苗生长情况NAA 0.01 + B A 0.5 增殖系数较高，健壮NAA 0.l + B A 1.0 增殖系数较高，健壮NAA 0.01 + B A 2.0 增殖系数较高，健壮NAA 0.05 + B A 1.0 增殖系数较高，健壮NAA 0.05 + B A 2.0 增殖系数较高，健壮NAA 0.05 + B A 3.0 增殖系数高，苗发黄，细弱NAA 0.1 + B A( 0.5 ， 1.0 ， 2.0，3.0) 增殖系数低，苗细弱，玻璃化NAA 0.2 + B A( 1.0 ， 2.0 ) 芽基部长有愈伤组织2.3 生根培养无菌芽苗在继代培养基中只诱导地上部分生长。
待培养一段时间后，转入生根培养基中，诱导生根。
多数试验采用的培养基为 1/2 MS [6-9]( 大量元素减半)。
Skirvin等”在用“ Frever yours ”月季做生根试验时发现，采用 1/4 MS培养基，不加生长素即可以促进生根。
在无菌苗的生根诱导过程中，生长素的种类和浓度起决定性作用。
李青等[6]分浓度NAA、IBA、IAA对藤本月季进行生根培养，发现 3 种生长素的生根效果不同,且浓度的影响较大。
李海燕等[8]发现低浓度的生长素有利于根的形成，适当浓度的IBA、NAA对生根率有显著影响，浓度过高会抑制根的形成，NAA浓度为0.50mg/L时效果最佳( 表2 ) 。
生根阶段加人活性炭( AC) 后，有助于提高生根率和生根质量[11]。
李青等[6]利用 1/2 MS + I BA 0.2 mg/L+ 活性炭诱导生根，生根率最高为9 0 ％，且随着活性炭百分比的加大，生根率逐渐下降。
活性炭的加入能显著促进生根量和根的长势，但仅含活性碳的培养基只见较少发根，且根细弱，说明植物激素对于生根是必不可少的[9]Hyndm an等”用改良烟火月季品种进行研究发现，MS 培养基中盐浓度过高，特别是氮素含量过高会导致生根不适应，所以需减少无机盐用量。
(表2)表2生根培养基( 1/2 MS)组成对生根的影响( mg/L)激素组成生根情况NAA 0.1 生根多，健壮NAA 0.1 + 活性炭 O.3 生根多，生根快NAA 0.5 生根较多，健壮IBA 0.1 生根率低IBA 0.2 生根完全，生根快IBA 0.5 生根数多，生根快2.4 驯化与移栽小苗接到生根培养基上后，14d可见基部分化出根点，20d则长出许多白根。
此时组培阶段结束，进入试管苗移栽成活阶段。
所有试管苗移栽前都应先将生根苗移至室温进行移栽前的锻炼。
锻炼时问与移栽成活率有关，练苗7d以上，成活率达到95％[6]。
影响移栽成活率的主要因素有3个：湿度、温度以及基质种类和带菌量[15-16]。
考虑到这3个因素，移栽时应保持90 ％以上湿度，18～25℃的环境温度，基质用0.2 ％的高锰酸钾或其他灭菌剂进行消毒灭菌[15]。
而基质的选择上，以蛭石和珍珠岩的栽培效果较好。
移栽成活后喷极稀的营养液，使小苗得到营养补充。
l0～15即长出新叶，且根系快速生长，可适时进行大田移栽。
3 影响月季增殖的因素3.1 BA用量及侧芽在茎段上的位置对侧芽发育的影响用“和平”品种月季的枝条，均等分为6段，取每段的一个侧芽培养在无激素的MS基本培养基上，23天后可见接近枝条最顶端和紧挨着枝条基部的芽发育最慢，而枝条中部的芽发育比较快。
在不同浓度BA的MS培养基上，BA含量为0.03～0.3毫克/升的培养基，促进“皇冠”“彩云”侧芽的发育，如果BA超过O.3mg/L，则延迟芽的发育，但对于茎段中部的芽影响较小。
3.2 摘心对茎增殖的影响在继代培养的接种操作时，切去嫩芽的顶芽后，再转接到新的培养基上，对嫩芽增殖有很大的促进作用。
3.3 赤霉素的影响试用了赤霉素，其浓度为0.1、0.3、1、3、10、30和100毫克/升，试验发现所有浓度都抑制茎增殖，随着其浓度增高，茎增殖数下降，赤霉素浓度增加，还出现细长的嫩茎和发育不全的叶子，畸型植株等。
3.4 嫩芽长度对形成多芽苗的影响茎尖在1～10毫米长短时，对形成多芽苗最有效，不但百分率高，而且每个茎段的侧枝数也比较多，切割过短或过长都对茎的增殖不利，芽苗形成较少。
切割过长会表现出叶子衰老等不利的现象，最适宜的茎尖长度为6～10毫米。
3.5 每次继代培养所需时间对嫩茎增殖的影响在MS+BA3+IAA0.3的培养基上，“红双喜”月季的培养时间为28天，继代一次较好，超过28天，茎的数目已不再增加。
3.6 MS配方和无机盐浓度试验证明，全量的MS无机盐对茎增殖效果最好。
4 影响月季生根和移栽成活率的因素4.1 不同生长素种类和浓度对月季生根和移栽成活率的影响以“彩云”为材料，用NAA、IAA两种不同浓度的生长素做生根试验，发现用NAA诱导生根和提高移栽成活率效果最好，浓度为100ppm为宜，发现以IAA诱导生根和提高移栽成活率效果并不理想，其浓度只能在1mg/L以下，超过时对生根的促进作用已不显著，反而大幅度降低移栽成活率。