菌落总数检验操作规程
菌落总数检测操作规程
微生物检测操作规范1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面生产线微生物控制及验证计划。
本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面产品菌落总数、大肠菌群检测。
2 规范性引用标准GB 4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》。
GB/T 4789.3-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。
GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。
4 设备和材料恒温培养箱：36℃±1℃。
恒温水浴箱：46℃±1℃。
天平：感量为0.1g。
无菌吸管：1ml（具有0.01ml刻度）、10ml（具有0.1ml刻度）。
无菌培养皿：直径90mm。
无菌锥形瓶：容量500ml；或225ml塑料稀释瓶（带内垫，可高温灭菌）。
灭菌试管：16mm×160mm；或10ml-20ml无菌管。
显微镜：10×-100×4 培养基和试剂平板计数琼脂培养基：GB 4789.2-2016 附录A.1。
无菌生理盐水：GB 4789.2-2016 附录A.3。
乳糖胆盐发酵管：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
伊红美蓝琼脂平板：按GB/T 4789.3-2003中4.25规定。
乳糖发酵管：按GB/T 4789.3-2003中2.2规定。
EC肉汤：按GB/T 4789.28-2003中4.11规定。
格兰仕染色液：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
5菌落总数检验程序实验前准备移液管、三角瓶、试管包扎、灭菌移液管：洗净烘干后在吸管粗头顶端约0.5cm处，塞上一小段棉花，后用4-5cm宽的报纸或牛皮纸将其以下图所示包扎好。
三角瓶包扎图例将包扎后的器具放入灭菌锅，121℃ 15min灭菌。
a.样品处理面饼样品经粉碎机粉碎后，称取25g粉碎样加入装有225ml无菌生理盐水的稀释瓶内，充分振摇，做成1:10的均匀稀释液。
菌落总数测试片安全操作及保养规程
菌落总数测试片安全操作及保养规程前言菌落总数测试片是在食品、饮料、制药等行业中广泛应用的一种实验室用品，用于检测样品中的微生物数量。
正确的操作和保养，不仅能够保证测试数据的准确性，还能延长设备的使用寿命。
本文档旨在为使用菌落总数测试片的实验室人员提供安全操作及保养规程，以便正确且有效地使用该设备。
安全操作规程1.检测前准备工作在进行菌落总数测试前，需要进行一些准备工作。
•首先，检查试剂盒是否完整、完好。
•其次，需要对实验室进行清洁，确保试样不会受到外来污染。
•最后，检查检测设备是否工作正常。
2.操作步骤具体的菌落总数测试操作步骤如下：1.将手持菌落计瓶插入加热设备中，加热到80℃左右（不要超过90℃）。
2.准备好待测样品，并使用消毒液将样品平台擦拭消毒。
待样品平台干燥后，打开试剂盒，取出测试片。
3.拿起测试片，用过滤棉球沾取少量样品，涂在测试片的圆形区域上，记得不要涂满，要注意对称，以避免对测试结果的影响。
4.将测试片放入一个透明的塑料袋里，将原袋弯角45°折叠，收紧口部，放置在加热设备中，加热时间为30min ± 1min。
5.取出加热设备中的透明袋，打开袋口，拿起测试片，将其反转在富营养液培养皿中，培养时间为48小时± 4小时。
6.在培养后的菌落数量区域，数清菌落数量，并将结果记录在实验记录簿上。
3. 注意事项在使用菌落总数测试片过程中，还需要注意以下事项：1.尽量避免使用过期的试剂盒和菌落计瓶。
2.操作过程中需要佩戴手套和口罩。
3.遵循操作规程，严禁进行任何私自操作或修改设备设置。
4.由专人负责使用和保养设备，不得擅自借用或转移使用。
5.每次操作后，要及时清洗设备以保证设备的清洁度和准确性。
保养规程菌落总数测试片是一种高精度、高灵敏度的实验室设备，因此需要进行专业的保养和维修。
1.日常保养日常保养是延长菌落总数测试片使用寿命和保证测试结果准确性不可缺少的一部分。
菌落总数的检验程序的流程
菌落总数的检验程序的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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菌落总数操作手册
菌落总数操作手册
一、概述
菌落总数是指在一定条件下生长的细菌菌落数，用于评估食品或环境的卫生质量。
本操作手册将详细介绍如何进行菌落总数检测，以确保实验结果的准确性和可靠性。
二、实验材料
1. 培养基：平板计数琼脂（PCA）
2. 试剂：无菌生理盐水
3. 器具：无菌棉签、无菌培养皿、无菌移液管（1mL）、天平、pH计、恒温培养箱、计时器、灭菌锅
三、实验步骤
1. 样品采集：使用无菌棉签采集适量样品，并放入无菌容器中。
对于液体样品，直接使用无菌移液管取样；对于固体或半固体样品，需将样品研磨或搅拌均匀后取样。
2. 样品稀释：将采集的样品进行稀释，使细菌能更好地在培养基上生长。
根据样品性质和预计菌落数，选择适当的稀释倍数。
一般采用10倍稀释法。
3. 制备平板：将PCA培养基加热融化后，冷却至45℃左右，倒入无菌培养皿中，每皿约15mL。
4. 接种样品：将稀释后的样品取1mL加入已制备好的平板中，用无菌玻璃棒均匀涂布在培养基上。
5. 培养：将培养皿倒置放入恒温培养箱中，在37℃下培养24-48小时。
6. 计数：计数平板上的菌落数，并记录结果。
根据实验要求，计算出样品中的菌落总数。
7. 结果报告：根据实验数据，撰写实验报告并向上级汇报检测结果。
四、注意事项
1. 实验前应保证所有器具和试剂的无菌状态，避免交叉污染。
2. 实验过程中要保持清洁卫生，避免人为误差。
菌落总数的测定方法
菌落总数的测定
配药品平板计数琼脂培养基，配0.85%生理盐水，将配好的培养基、生理盐水、培养皿、吸管、吸球，都用报纸包起来，放入灭菌锅中灭菌121℃15分钟，灭菌的同时，开紫外线照射灯20分钟，然后关闭操作之前先点燃酒精灯，用酒精棉擦手3遍，擦超净工作台3遍，最后用酒精棉过一下火，擦超净工作台一遍后，弃去棉球，然后从灭菌锅中取出物品，放在超净工作台中，开始操作，开始在超净工作台中吸取25ml样品，置盛有225ml灭菌生理盐水中，充分混匀，制成1:10的样品匀液，
用1ml无菌吸管吸取1:10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注入盛有9ml 生理盐水的无菌试管中制成1:100的样品匀液。
再用1ml无菌吸管吸取1:100的样品匀液1ml沿管壁缓慢注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中制成1:1000的样品匀液。
每个稀释度1:10,1:100,1:1000都取1ml试样放入无菌培养皿然后逐个加入培养基，以铺满培养皿铺匀为止，然后摇匀，每个稀释度做两个平皿，同时做空白，空白只加琼脂，待琼脂凝固后，翻转平板，培养皿放入电热恒温培养箱36℃，培养48h±2h
检验人员：。
菌落总数检验操作规程
菌落总数检验操作规程一、实验室准备工作1.准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠埃希氏菌选择性培养基等。
注意培养基的成分和质量。
2.准备培养基平板：测量合适的培养基量并加入培养皿中，使用无菌技术将培养基均匀倒入培养皿，标明编号和日期。
二、样品处理1.准备样品：如食品样品，需要将样品称重并加入适当的生理盐水中，用搅拌器或均质仪进行均匀悬浮。
2.稀释样品：根据实验需要，对样品进行系列稀释。
取适量的悬浮样品，依次加入尺量瓶中的生理盐水，振摇均匀。
三、接种培养1.无菌操作：在无菌工作台内进行操作，穿戴好无菌手套，将培养皿放入工作台上，注意防止污染。
2.接种样品：使用无菌移液器，取适量的稀释样品均匀滴入培养皿上。
3.均匀涂布：使用无菌匀涂棒，将样品在培养皿上均匀涂抹，注意避免混入外来微生物。
四、培养条件1.始菌箱：将接种后的培养皿置于始菌箱中，设定适当的温度和湿度（如37℃，24小时）。
2.孵化箱：将始菌箱中的培养皿转移到恒温培养箱中适当孵育时间，保持适宜温度及湿度。
五、菌落计数1.观察菌落：取出培养好的菌落总数平板，放在均匀光源下观察菌落的形态、颜色、大小等特征，标记异常菌落。
2.计数菌落：使用计数器或显微镜对菌落进行计数，记录结果，并用公式计算菌落总数。
每个菌落总数平板至少计数两遍，计算平均值。
六、数据分析与结果判定1.数据分析：对不同样品的检测结果进行归类整理，统计菌落总数的分布情况。
2.结果判定：根据相应的标准或规定，比较样品的检测结果与标准要求，判定样品是否合格。
七、清洗和消毒1.清洗：将培养皿彻底清洗干净，清除残留的培养基和菌落。
2.消毒：将使用过的器材进行高温高压消毒或化学消毒，确保无菌环境。
以上就是菌落总数检验操作规程的简要示例，实验过程中需严格遵守无菌操作规范，并根据具体实验要求进行相应的调整。
在实验过程中，及时记录实验数据，注意安全操作。
实验完成后，对结果进行统计分析和归档保存。
菌落总数检验步骤
菌落总数检验步骤第一法平板菌落计数法6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，5 000r/min~10 000r/min 均质1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min ，制成1：10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 ：10 的样品匀液。
6.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1：10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。
6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用一次1 mL 无菌吸管或吸头。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）, 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。
同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。
6.1.6 及时将15 mL~20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2 培养6.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48h±2h 。
水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h.6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL ) ，凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。
(完整版)菌落总数检测操作规程(国标word版)摘要
山西梁汾醋业有限公司文件类别及编号： LF-GC—01 版次共页第页菌落总数测定的标准操作规程1。
目的规范山西老陈醋菌落总数测定的操作规程,保证山西老陈醋产品的质量。
2。
适用范围酿造食醋和配制食醋菌落总数的测定。
3. 仪器设备恒温培养箱，冰箱,恒温水浴箱，天平（0.1g）,均质器,振荡器；无菌吸管1ml(0。
01刻度）、10ml（0.1ml刻度）或微量移液器及吸头；无菌锥型瓶，250ml/500ml;无菌培养皿：直径90mm；PH计或精密PH试纸；放大镜或菌落计数器4.培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基,成分：胰蛋白胨 5.0g酵母浸膏 2。
5g葡萄糖 1。
0g琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml PH7.0±0.2制法：将上述加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH 。
分装试管或锥型瓶，121℃高压灭菌15min 。
4.2磷酸盐缓冲液 成分:磷酸二氢钾(KH 2PO 4） 34。
0g 蒸馏水 500ml PH 7.2 制法：贮存液:称取34。
0g 磷酸二氢钾溶于500ml 蒸馏水中，用大约175ml 的1mol/L 氢氧化钠溶液调节PH,蒸馏水稀释至1000ml 存于冰箱.稀释液：取贮存液1。
25ml,用蒸馏水稀释至1000ml ，分装于适宜容器中，121摄氏度高压灭菌15分钟。
4.3无菌生理盐水 成分：氯化钠 8。
5g 蒸馏水 1000ml制法：8.5克氯化钠溶于100ml 蒸馏水中121摄氏度高压灭菌15分钟。
5 检验程序6操作步骤6。
1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品:称取25 g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1min~2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min，制成1：10的样品匀液。
6。
1。
2液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀,制成1：10的样品匀液。
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A.1
月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤
A.1.1
成分
胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g
氯化钠5.0 g
乳糖5.0 g
磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g
磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g
月桂基硫酸钠0.1 g
蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法
将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。
分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。
121 ℃高压灭菌15 min 。
菌落总数检验操作规程
一、目的
建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。
二、适用范围
适用于菌落总数的检验操作。
三、职责
1.检验人员
严格按检验操作规程进行检验。
2.QC主管
监督检查执行情况。
四、程序
1.范围
本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定
2.术语和定义
菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3. 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4天平：感量为0.1 g。
3.5均质器。
3.6振荡器。
3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.11放大镜或和菌落计数器。
4.培养基和试剂
4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2
4.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。
5.检验程序
菌落总数的检验程序见图1。
图1 菌落总数的检验程序
6.操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液
6.1.3用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支
无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2培养
6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1 ℃培养48 h±2 h。
水产品30℃±1 ℃培养72 h±3 h。
6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL），凝固后翻转平板，按 6.2.1 条件进行培养。
6.3 菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数
7.结果与报告
7.1菌落总数的计算方法
7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算：
N=∑C (n1+0.1n2)d
式中：
N——样品中菌落数；
C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数
d——稀释因子（第一稀释度）.
7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计
7.2菌落总数的报告
7.2.1菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
7.2.2菌落数大于或等于100 CFU 时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
7.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
7.2.5称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。
8.编制依据：GB 47892-2010 食品微生物学检验菌落总数的测定
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
A.1平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基
A.1.1 成分
胰蛋白胨 5.0 g
酵母浸膏 2.5 g
葡萄糖 1.0 g
琼脂15.0 g
蒸馏水1000 mL
pH 7.0±0.2
A.1.2制法
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15 min。
A.2磷酸盐缓冲液
A.2.1成分
磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0 g
蒸馏水500 mL pH 7.2
A.2.2 制法
贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min。
A.3无菌生理盐水
A.3.1 成分
氯化钠8.5 g
蒸馏水 1 000 mL
A.3.2
称取8.5ｇ氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
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