细菌营养缺陷型的诱变和筛选
营养缺陷型菌株的筛选方法
3、限量营养法：如果试验的目的仅是检出营养缺陷型菌株，则其该法是将富集培养后的 细胞接种到含有0.01%蛋白胨的基本培养基上，培养后，野生型细胞迅速地长成大菌落， 在平皿底部作好颜色标记，而生长缓慢的小菌落可能是缺陷型，此称限量培养。如果试 验的目的是要定向筛选某种特定的缺陷型，则可在基本培养基中加入某种单一的氨基酸 、维生素或碱基等物质，称为补充培养。
缺陷型菌株和基本培养基混合制成平板，把5组或6组生长因子直接加于同一琼脂平板上，或用滤纸 片沾取后覆于琼脂平板上，培养后，观察哪一组或哪两组区产生混浊生长圈，即可确定该菌株缺陷 的生长因子。如果要测定数十或上百个缺陷型菌株时，则可改成一个平皿中加入一种生长因子，制 成平板，在翻转平皿底部，几十个方格子，把每株缺陷型按编号移接到琼脂平板格子中。培养后， 根据混浊圈出现情况，则可确定哪些缺陷型菌株是缺这种生长因子的。
2、淘汰野生型
3、检出营养缺陷型 4、鉴别缺陷种类，确定生长谱
二、淘汰野生菌株
在诱变后的存活菌体中营养缺陷型菌株的数量很少，一般仅占存活菌体的百分之几或千 分之几，而野生型细胞却大量存在，因而要采取一些措施，尽量淘汰野生型细胞，使缺 陷型菌株得以富集，以利于检出。
分离、筛选、鉴定色氨酸营养缺陷型菌株
分离、筛选、鉴定色氨酸营养缺陷型菌株一、实验目的1、了解应用物理、化学因素对细菌进行诱变的方法2、初步掌握诱变产生营养缺陷型菌株的筛选与鉴定的方法技术，体会相应的科学理念。
二、实验原理1、诱变及诱变剂说明1.1利用化学、物理等诱变手段是微生物育种工作的常用手段主要有DNA碱基化学性质改变引起置换、插入移码、大片段畸变、碱基二聚体形成等，最终引起宜春啊信息复制之中的改变1.2本次试验利用紫外线进行诱变处理（主要是形成嘧啶二聚体，引起后续DNA复制错误，达到诱变的目的）1.3诱变后需要暗培养（防止光复活作用）1.4紫外线剂的控制---紫外灯的功率、照射距离、照射时间（需要前期试验确定，杀菌率在70%左右）2、营养缺陷型的培养生长情况营养缺陷型在完全培养基上生长良好，而在基本培养基上则不生长，未发生突变的野生型在两种培养基上都能生长（此为筛选的理论依据）三、实验材料菌种：大肠杆菌实验培养基：肉汤液体培养基（CM）；肉汤固体培养基（CMA）；2倍肉汤液体培养基（CM）；基本液体培养基（MM）；基本固体培养基（MM）；含色氨酸的基本培养基实验试剂：生理盐水，青霉素钠实验器材：10ML带盖离心管、10ml吸管、90mm培养皿、试管四、实验步骤1、菌种培养收集洗涤大肠杆菌接种于肉汤液体培养基，37℃静止培养18~24h无菌取10ml培养液放入无菌15ml离心管中，3500r/min 10min，弃上清液，留下菌体沉淀在上述沉淀中加入5ml无菌生理盐水，悬浮沉淀，备用2、诱变剂处理吸取上述洗涤悬液3ml，放至60mm培养皿中，摇晃成薄层。
将上述培养皿放在40w紫外灯下，距离30cm（处理前先开紫外灯稳定30min），灭菌1min，然后开盖处理5min。
照射完毕后，先盖上皿盖，再关紫外灯吸取3ml2倍肉汤培养液到上述处理后的培养皿中。
置于37℃恒温培养箱内，避光培养12h以上（此时是诱变后DNA复制形成纯合子过程）注意：紫外线防护，不要长时间暴露在其下3、淘汰野生型，浓缩缺陷型—基本培养基抗生素法：青霉素适用于细菌，制霉菌素适用于真菌菌丝过滤法：适用于丝状生长的真菌和放线菌4、鉴定色氨酸营养缺陷型持续观察，前后对照标记，在基本培养基上不生长，但是能在加了色氨酸的基本培养基上生长的便是色氨酸营养缺陷型菌株。
[详细讲解]细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定实验报告
![[详细讲解]细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定实验报告](https://img.taocdn.com/s3/m/96df62ccb04e852458fb770bf78a6529647d3574.png)
工业微生物育种实验细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定关于菌株的几个概念：野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。
营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。
原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上和野生型相同关于培养基：基本培养基（minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，用[－]来表示。
完全培养基（complete medium，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
用[＋]来表示。
补充培养基（supplemental medium，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。
摘要：本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发大肠杆菌突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，获得100#大肠杆菌菌株，最后经生长谱法鉴定出该菌株为脯氨酸缺陷型。
关键词：大肠杆菌紫外线营养缺陷型青霉素逐个测定法生长谱法一、实验目的1、了解营养缺陷型突变株选育的原理。
2、学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。
二、实验原理筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。
本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。
三、实验器材离心机，紫外线照射箱，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；三角烧瓶，试管，离心管，移液管，培养皿，接种针四、实验材料(一)菌种E.coli(二)培养基、1LB培养液：酵母膏，0.5g；蛋白胨，1g；NaCl，0.5g；水，100ml，pH7.2 121℃灭菌15min22×LB培养液：其它不变，水，50ml。
3基本培养基：葡萄糖0.5 g，(NH4)2SO4 0.1 g，柠檬酸钠0.1 g，MgSO4·7H2O0.02 g，K2HPO4 0.4 g，KH2PO4 0.6 g，重蒸水100 mL，pH 7.2，110℃灭菌20 min。
营养缺陷型突变体的筛选及其应用
营养缺陷型菌株的筛选过程
• 营养缺陷型菌株的筛选一般要经过诱变、淘汰野 生型菌株、检出缺陷型和确定生长谱四个环节。
• １诱变剂处理
• 诱变剂处理时与其它诱变处理基本相同。在诱变 处理后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般很 低，通常只有百分之几至千分之几，采用抗菌素 法或菌丝过滤法，可以淘汰为数众多的野生型菌 株，从而达到浓缩营养缺陷型的目的。
3营养缺陷型的检出方法夹层培养法夹层培养法限量补充培养法限量补充培养法影印接种法影印接种法逐个检出法逐个检出法1影印法影印法是将诱变处理后的细胞涂布在完全培养基表面上经培养后长出菌落然后用一小块直径比平皿稍小的圆柱形木块复盖于灭过菌的丝绒布上作为接种工具将长出菌落的平皿倒转过来在丝绒上轻轻按一下转接到另一基本培养基平板上经培养后比较这两个平皿长出的菌落
• 具体方法：影印法、点种法、夹层法 、 限量补充培养法 • 夹层培养法 • 限量补充培养法 • 影印接种法 • 逐个检出法
１）影印法
• 影印法是将诱变处理后的细胞涂布在完全 培养基表面上，经培养后长出菌落，然后 用一小块直径比平皿稍小的圆柱形木块复 盖于灭过菌的丝绒布上作为接种工具，将 长出菌落的平皿倒转过来，在丝绒上轻轻 按一下，转接到另一基本培养基平板上， 经培养后，比较这两个平皿长出的菌落。 如果发现前一平扳上某一部位长有菌落， 而在后一培养基上的相应部位却没有，就 说明这是一个营养缺陷型菌落。
２）夹层培养法
• 夹层培养法是先在培养皿上倒一层基本培 养基，冷凝后加上一层含菌液的基本培养 基，凝固后再浇上一薄层的基本培养基。 经培养后，在皿底对首先出现的菌落做标 记，然后再倒上一薄层完全培养基(或补充 培养基)，再培养，这时再出现的新菌落， 多数即为营养缺陷型。此法缺点是，结果 有时不明确，而且将缺陷型菌落从夹层中 挑出并不很容易。
实验5-营养缺陷型菌株筛选及鉴定
实验五、营养缺陷型菌株筛选及鉴定1、实验名称营养缺陷型菌株筛选及鉴定2、实验操作人3、实验过程简述3.1 营养缺陷型菌株诱变3.1.1培养基的配制配置两种类型的培养基，营养丰富培养基（YPD）和基本培养基（SC），其中营养丰富的培养基在诱变的过程中用来培养菌株，在基本培养基中选择性的加入氨基酸来进行筛选，分别标记为：SC5 (SC+His+Trp+Leu+Lys+Ura)；SC5-Lys (SC+His+Trp+Leu+Ura) SC5-Leu (SC+His+Trp+Lys+Ura)；SC5-Trp (SC+His+Leu+Lys+Ura)；SC5-His (SC+Trp+Leu+Lys+Ura)；SC5-Ura(SC+His+Trp+Leu+Lys)。
3.1.2稀释涂布在超净台，取0.1 ml菌悬液转接到0.9 ml无菌水中，混匀后，取0.1 ml 稀释液转接到0. 9 ml无菌水中，混匀后，继续进行10倍的梯度稀释，稀释到10-6；取0.1 ml稀释度分别为10-4、10-5、10-6的菌悬液，加入到YPD固体平板上，用涂布棒涂布均匀，每个稀释度涂5块平板；3.1.3紫外诱变每个稀释度各取一块平板，培养皿底部标记好组号-稀释度-紫外处理时间，将平板适当垫高，防止诱变不充分，用紫外照射分别诱变处理0、30、45、60、120秒，黑布包好，置于30℃培养箱培养48h；记录各平板上的菌落数，计算不同处理的细胞致死率。
致死率（%）=1-（特定时间点平板上菌落数X稀释倍数）/（0时平板上菌落数X 稀释倍数）X100%3.2 营养缺陷型菌株初筛3.2.1选取单菌落小组内部四人分别标号为A/B/C/D（本人标号为A）,本次实验选用了两种敏感性不同的菌株，选取两种菌株内生长较好的平板，每个平板每人取3个单菌落（每人2菌×3个单菌落），用记号笔圈出标记为A1/A2/…A6防止重复挑取；取1.5ml离心管装入1ml无菌水，用接种环从YPD平板上挑取单菌落，转接到无菌水中，摇匀，室温静置2h；3.2.2点板在准备好的YPD、SC培养基平板底部做标记（培养基名称-组号）,将小组成员点菌位置画好格子；分别取一接种环菌悬液对应点于SC和YPD培养基平板上（每人1行，做好标记）；将培养皿倒置于30℃培养箱中，培养48h，注意无论涂板、还是点板，一定等菌液被培养基吸收后，再挪动或倒置；记录各单菌落在不同培养基上生长情况（生长记“+”，不生长记“-”），并拍照；根据生长情况，判断本实验各菌株是否为营养缺陷型菌株。
营养缺陷型菌株的筛选步骤和方法
营养缺陷型菌株的筛选步骤和方法
嘿，你知道营养缺陷型菌株是啥不？这玩意儿在科研和生产中可有着大用处呢！那怎么筛选营养缺陷型菌株呢？首先，咱得有个出发菌株，就像要找宝藏得先有个起点一样。
然后通过诱变处理，这就好比给菌株来个大变身，让它可能产生新的特性。
接着进行淘汰野生型，把那些不需要的家伙踢出去。
再进行检出缺陷型，这就像在一堆沙子里找金子，得仔细着呢！注意啊，整个过程中可不能马虎，每一步都得精准操作。
要是弄错了，那可就白忙活啦！
说到安全性，只要操作规范，那基本没啥问题。
稳定性嘛，筛选出来的菌株如果保存得当，那还是挺稳定的。
就像你把宝贝放在一个安全的地方，它就不会轻易丢啦！
那营养缺陷型菌株有啥应用场景呢？在生物制药、食品工业等领域都能大显身手。
它的优势可不少呢！比如可以用来研究代谢途径，就像侦探破案一样，通过它能找到生命的奥秘。
还可以作为遗传标记，帮助我们更好地了解生物的遗传特性。
举个实际案例吧！有个实验室在研究某种抗生素的生产，通过筛选营养缺陷型菌株，大大提高了抗生素的产量。
哇塞，这效果简直太棒了！
所以啊，营养缺陷型菌株的筛选真的很重要。
咱可得好好利用这个强大的工具，为科研和生产做出更大的贡献。
食品营养与检测《突变与育种 诱变育种——营养缺陷型突变株的筛选》
突变与育种
诱变育种——营养缺陷型突变株的筛选
营养缺陷型的筛选方法：
第一步，诱变剂处理；
第二步，淘汰野生型，常用的有抗生素法、菌丝过滤法；
第三步，检出缺陷菌，有夹层培养法、限量补充培养法、检出法和影印接种法；
夹层培养法：先在培养皿底部倒一薄层不含菌的基本培养基，待凝，添加一层混有经诱变剂处理菌液的基本培养基，其上再浇一薄层不含菌的基本培养基，遂成“三明治”状。
经培养后，对首次出现的菌落用记号笔一一标在皿底。
然后，再向皿内倒上一薄层第四层培养基——完全培养基。
再经培养后，会长出形态较小的新菌落，它们多数都是营养缺陷型突变株。
限量补充法：把诱变处理后的细胞接种在含有微量（< 0.01%）蛋白胨的基本培养基平板上，野生型细胞就迅速长成较大的菌落，而营养缺陷型则因营养受限制故生长缓慢，只形成微小菌落。
逐个检出法：把经诱变处理的细胞群涂布在完全培养基的琼脂平板上，待长成单个菌落后，用接种针或灭过菌的牙签把这些单个菌落逐个整齐地分别接种到基本培养基平板和另一完全培养基平板上，使两个平板上的菌落位置严格对应。
经培养后，如果在完全培养基平板的某一部位上长出菌落，而在基本培养基的相应位置上却不长，说明此乃营养缺陷型。
影印平板法：将诱变剂处理后的细胞群涂布在一完全培养基平板上，经培养长出许多菌落。
用特殊工具——“印章”把此平板上的全部菌落转印到另一基本培养基平板上。
经培养
后，比较前后两个平板上长出的菌落。
如果发现在前一培养基平板上的某一部位长有菌落，而在后一平板上的相应部位却呈空白，说明这就是一个营养缺陷型突变株。
营养缺陷型突变株的筛选
营养缺陷型突变株的筛选一、与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体①营养缺陷型：原菌株由于发生基因突变,致使合成途径中某一步骤发生缺陷，失了合成某种代谢产物的能力，必须在培养基中外源补加该物质才能生长，这类突变菌株，叫营养缺陷型突变株，简称营养缺陷型。
②野生型：变异前的原始菌株。
③原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产性的菌株，其营养要求在表型上与野生型相同，表示方法亦同野生型。
二、与筛选营养缺陷型有关的三类培养基①基本培养基：能满足某一菌种的野生型或原养型菌株营养要求的最低成分的合成培养基。
②补充培养基：在基本培养基中有针对性地补加某一种或几种营养成分，以满足相应的营养缺陷型菌株生长需要(其他营养缺陷型仍不能生长)的培养基。
③完全培养基：可满足该菌种各种营养缺陷型菌株营养需要的天然或半合成培养基。
三、筛选营养缺陷型菌株的一般步骤和方法①诱变：变常用紫外线诱变形成大量营养缺陷型菌株。
②淘汰野生型a)抗生素法某些抗生素能杀死生长繁殖着的微生物，而对处于休止状态的微生物无杀伤作用。
如青霉素能抑制细菌细胞壁肽聚糖的生物合成。
b)菌丝过滤法适用于放线菌、霉菌等丝状微生物。
在基本培养基中野生型孢子能萌发长成菌丝体，而营养缺陷型孢子则不生长。
将经诱变处理的孢子接种于液态基本培养基中，振荡培养10h-12h, 使原养型萌发(以肉眼刚能看见菌丝为度)，然后以滤纸、棉花或玻璃过滤漏斗过滤，菌丝被滤除,未萌发的缺陷型孢子能顺利通过,从而达到富集营养缺陷型的目的。
③检出缺陷型的常用方法a)逐个测定法(点种法)：把经诱变处理并淘汰野生型后的菌液在完全培养基上涂布分离,将培养后长出的每一个菌落分别点种在基本培养基和另一个完全培养基上,凡在基本培养基上不能生长而在完全培养基的相应位置上能生长的菌落，表明其为营养缺陷型。
b)夹层培养法：经诱变处理后的菌液，稀释后与基本培养基混匀并倾入平板中，待凝固后，再加上一层不含菌的基本培养基。
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微生物大实验细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选摘要用某些物理因素或是化学因素，使基因发生突变，丧失合成某一物质的能力，因而它们在基本培养基上不能生长，必须补充某些物质才能生长，这样从野生菌经诱变筛选到的菌株，称为营养缺陷型。
紫外线可以诱导细菌发生突变，产生营养缺陷型菌株。
筛选营养缺陷型菌株必须经过如下几个步骤：诱变处理、营养缺陷型的检出、划线复证、生长谱鉴定、缺陷型菌株纯化。
又因处理的细菌所得到的突变菌仍然是很少的部分，因此必须采用有效的筛选方法，才能分离到突变型。
关键词紫外诱变营养缺陷型营养缺陷型的检出划线复证生长谱鉴定引言营养缺陷型：需要在基本培养基中补加某种营养成分（如氨基酸、维生素、核苷酸等）才能生长的微生物突变体，通过基因突变产生。
微生物细胞本身能吸收周围环境中的简单营养物，经过自身代谢合成生长所需的各类营养物质。
如果发生基因突变，则细胞失去合成与这些基因有关营养物质的能力，只有在培养基中补加这类营养物质后，突变细胞才能生长，故又名营养缺陷型突变体。
此类突变体在理论研究和生产实践中都有重要意义，是研究代谢途径和遗传规律必不可少的标记菌种，亦可直接用于生产氨基酸、核苷酸等代谢产物。
为了获得营养缺陷型菌株，需从诱变处理后的菌液中认真筛选，以便检出突变体，常用的方法有：影印接种法、夹层培养法和青霉素浓缩法等。
影印接种法：将待测的浓缩菌悬液涂在完全培养基平板上，待其长好后作为母平板。
用一小块灭菌的丝绒固定在直径较平板略小的圆柱形木块上，作为接种工具。
用它在母平板上轻轻印一下，再在基本培养基平板上印一下，经培养后，影印平板上长出的菌落与母平板上的菌落位置对应，比较二个平板上菌落的生长状况，即可从相应位置的母平板上选出待测的营养缺陷型菌株。
夹层培养法：先在培养皿中倒一层不含菌的基本培养基，待冷凝后，加一层含菌的基本培养基，冷凝后，再加一层不含菌的基本培养基，经培养出现菌落后，在培养皿底的相应位置做上标记，然后再加一层完全培养基。
再经培养后出现的菌落，多数是只能在完全培养基上生长的营养缺陷型。
青霉素浓缩法：利用青霉素特异性的杀死野生型细胞，保留营养缺陷型细胞的方法。
青霉素能抑制细菌细胞壁的合成，所以只能杀死生长繁殖中的细菌，而不能杀死停止繁殖的细菌。
在基本培养基中添加青霉素，野生型细菌能够生长繁殖，会被杀死，而营养缺陷型不被杀死，得以浓缩。
本实验采取的筛选方法就是青霉素浓缩法。
诱变育种是人为地采用物理、化学的因素，诱导有机体产生遗传变异，并经过人工选择、鉴定、培育新品种的方法。
诱变育种的目标是改变或增加一个满意品种的某一特性，而在其他方面保持不变。
诱变育种具有以下特点：1）提高突变率，扩大变异谱；2）适于进行个别性状的改良；3）育种程序简单，年限短；4）变异的方向和性质不定。
在诱发突变中，有两类诱变剂被使用：物理的和化学的。
物理诱变中应用较多的是辐射诱变，即用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外辐射等物理因素诱发变异。
近年来又开发了一些新的物理诱变手段，如激光辐射诱变、离子注入诱变、空间诱变等。
化学诱变剂在染色体中通过直接的化学作用发挥它们的功能，主要有①烷化剂，如甲基磺酸乙酯(EMS)、、亚硝基乙基脲烷(NEU)、硫酸二乙酯(DES)等，它们含有一个或多个活跃的烷基，能转移到电子密度较高的分子中去，置换其他分子中的氢原子而使碱基改变；②核酸碱基类似物，如5-溴尿嘧啶(BU)、5-溴去氧尿核苷(BudR)等，为一类与DNA碱基相类似的化合物，渗入DNA后，可使DNA复制发生配对上的错误；③抗生素，如重氮丝氨酸、丝裂毒素C等，具有破坏DNA和核酸的能力，从而可造成染色体断裂。
本实验使用的是紫外线诱变，紫外线诱变处理的有效波长为200-300 nm，最适波长为254nm(此为核酸的最高吸收峰)。
DNA和RNA的嘌呤和嘧啶吸收紫外光后，DNA分子易形成嘧啶二聚体，即两个相邻的嘧啶共价连接，二聚体出现会减弱双键间氢键的作用，并引起双链结构扭曲变形，阻碍碱基间的正常配对，从而有可能引起突变或死亡。
另外二聚体的形成，会妨碍双链的解开，因而影响DNA的复制和转录。
总之紫外辐射可以引起碱基转换、颠换、移码突变或缺失，即是所谓的诱变。
需要注意的是诱变要在暗箱中进行，为了防止DNA 的光修复作用。
经过诱变处理的菌株，还需要进行营养缺陷型的检出、划线复证、生长谱鉴定、缺陷型菌株纯化等步骤才能获得想要的营养缺陷型菌株。
本实验使用紫外线来诱发突变，并采用青霉素法淘汰野生型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。
材料与方法1、材料（1）实验菌种 E.coil K12 SF+（2）培养基LB液体培养基：酵母粉0.5克，蛋白胨1.0克，NaCl 1.0克，蒸馏水100毫升，pH7.2LB固体培养基：LB液体培养基100毫升，琼脂粉2.0克2×LB液体培养基：酵母粉1.0克，蛋白胨2.0克，NaCl 2.0克，蒸馏水100毫升，pH 7.2基本液体培养基Vogel 50×（即浓缩50倍）：MgSO4•7H2O 10克，柠檬酸100克，NaNH4HPO4•4H2O 175克，K2HPO4•2H2O 599.88克（K2HPO4•3H2O 656.319克）蒸馏水600ml。
Vogel 50×2毫升，葡萄糖2克，蒸馏水98毫升，琼脂2克，pH 7.0 基本固体培养基基本液体培养基100毫升，琼脂2克，pH7.0，无N基本液体培养基K2HPO4 O.7克（或K2HPO4•3H2O 0.92克），KH2PO4 0.3克，柠檬酸钠•3H2O 0.5克，MgSO4•7H2O 0.01克，葡萄糖2克，蒸馏水100毫升，pH 7.0 2N基本液体培养基K2HPO4 0.7克（或K2HPO4•3H2O 0.92克），KH2PO4 0.3克，柠檬酸钠•3H2O 0.5克，MgSO4•7H2O 0.01克，（NH4）2SO4 0.2克，葡萄糖2克，蒸馏水100毫升，pH 7.0（3）试剂和仪器试剂生理盐水，混合氨基酸，混合维生素仪器试管、试管架、锥形瓶（500ml、100ml）、酒精灯、接种环、涂布棒、移液枪、1ml枪尖、200μl枪尖、牙签、培养皿、5ml离心管、离心机、超净台、恒温摇床、恒温培养箱2、方法（1）紫外诱变接种E.coil K12 SF+于5ml LB液体培养基中，37℃培养过夜→6000rpm，5min，离心收集菌体→生理盐水洗涤二次→用4ml生理盐水悬浮→将7cm的培养皿放到超净台中，紫外照射1min→取3ml菌悬液加入培养皿中并轻摇使菌液平铺开，不加盖，放到试管加上，紫外照射2min→迅速加入3ml 2×LB液体培养基并混匀，盖上皿盖→用黑布将培养皿包好，放到37℃的恒温培养箱中培养12h以上（2）营养缺陷型的检出和划线复证6000rpm，5min，离心收集诱变后的菌体→生理盐水洗涤二次→用4ml生理盐水悬浮→取0.1ml菌悬液至5ml的无N培养基中，37℃恒温摇床中培养12h→按1:1加入5ml 2N基本培养基和终浓度为20μg/ml的Amp，37℃恒温摇床培养→从培养12h、16h、24h的菌液中，分别取0.1ml到二个培养皿中→向二个培养皿中分别倒入冷却至45-50℃的基本及完全培养基，混匀平放→凝固后放入37℃的恒温培养箱中培养→36-48h后，选出完全培养基上菌落数远大于基本培养基的那一组→用灭菌牙签挑取完全培养基上长出的菌落200个分别点种于基本及完全培养基上，先基本后完全→点种完后，置于37℃的恒温培养箱中培养→选取在基本培养基上不生长，完全培养基上生长的菌落，在基本培养基上划线→37℃恒温培养，24h后观察是否生长，不生长则是营养缺陷型（3）生长谱鉴定将营养缺陷型的菌落接种到5ml LB液体培养基中，37℃培养14-16h→6000rpm，5min，离心收集菌体→生理盐水洗涤二次→用4ml生理盐水悬浮→取菌悬液1ml于培养皿中，加入冷却至45-50℃的基本培养基，混匀平放，待凝，共二皿→将皿底分成9格，分别用接种环)→37℃培养24h，依次放入混合氨基酸或混合维生素少许，并留一个空白对照(加一滴MgSO4观察生长情况，据此判断是哪种营养缺陷型实验结果及分析1、营养缺陷型的检出和划线复证在12h，16h，和24h的基本和完全培养基上都有菌落长出，并且完全培养基上的菌落数都明显多于基本培养基，其中差距最大的为培养16h的。
挑取16h的完全培养基上的单菌落以先基本后完全的方式进行点种，获得4个在完全培养基上生长而在基本培养基上不生长的菌落。
对这4个可能的营养缺陷型进行划线复证，结果是在基本培养基上均有生长，表明之前的点种检出营养缺陷型操作产生了假阳性反应。
推测可能是菌体在基本培养基上生长缓慢，而且点种接种量小，培养时间短，所以形成的菌落很小，加之点种时牙签可能划破了平板表面，从而影响观察并造成误差。
从这一步的实验结果来看，诱变失败，没有获得预期的营养缺陷型细菌。
接下来的实验使用其它组的复证为营养缺陷型的菌落。
2、营养缺陷型生长谱鉴定营养缺陷型生长谱鉴定的结果是混合氨基酸组和混合维生素组均没有菌落长出，而对照组有菌落长出（故此处不再列出各混合氨基酸组和混合维生素组的具体成分）。
基于这个结果，现分析如下：（1）使用的突变株确实为营养缺陷型，否则可以在基本培养基上生长；（2）该突变株可能为二种或多种氨基酸营养缺陷型，并且与所使用的混合氨基酸成分组合不匹配；（3）对照组不应有菌落长出，而产生菌落的原因可能为MgSO没有灭菌4或是使用过程中被杂菌污染。
实验中一些注意事项1、紫外诱变需要避光，以防光修复作用；2、诱变后加2倍LB培养基培养，可以消除表型延迟；3、无N和2N培养基的使用，是为了浓缩营养缺陷型；4、点种时要先基本后完全，并注意不要划破培养基表面；5、复证是必须的，不可轻视，点种容易出现假阳性反应；6、营养缺陷型鉴定时要使用倾注平板，不能采用涂布的方式；7、生长谱鉴定时，点的氨基酸量不能太多，防止扩散混杂。
实验总结和个人体会本次试验前半部分进行的比较顺利，但是未能获得营养缺陷型菌株，使用的其他组的营养缺陷型菌株进行营养缺陷型生长谱鉴定也未能获得预期结果。
虽然实验不是很成功，但是学到的知识却是一点也不少。
本实验的每一个步骤都值得去深思，考虑它的前因后果；每一个步骤都不是孤立的，都是围绕着更好的获得营养缺陷型展开。
实验之前对于一些操作的认识都流于表面或仅限于理论层面，并没有深思为什么要这么做，这么做有什么好处，对于原理方面的解读是一知半解。
通过这次试验虽然没有都弄明白，但也学到了很多，可以更好的把学到的微生物知识和实际的工作结合起来，而不是相互孤立的来看。