细胞生物学实验讲义 2018

细胞生物学实验讲义

实验一不同细胞形态观察、大小测量，结构比较

一、实验目的

利用光学显微系统对生命的基本组成单位——细胞进行观察，了解不同细胞的形态、结构和大小区别。

二、实验原理

细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构入手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。

三、实验内容和步骤

A、血涂片的制作

1．取末梢血1 滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的载玻片作为推片，放在血滴前面慢慢后移，接触血滴后稍停。血液即沿推片散开，将推片与载玻片保持30～45°角，向前平稳均匀推动推片，载片上便留下一层薄血膜。血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血细胞变形。

2．操作

①将干燥血片用甲醇固定3-5分钟。

②将固定的血片置于被pH6.4 -6.8磷酸盐缓冲液稀释10-20倍的Giemsa染液中，浸染10-30分钟（标本较少可用滴染法）。

③取出用水冲洗，待干后镜检。

注意：

①取血滴不宜过多，以免涂片过厚，影响观察。

②要使涂片厚薄均匀、拿片角度和速度都要适中，用力要均匀。涂片时，血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快则血膜愈厚，反之血膜愈薄。

③涂片一般在后半部为好，白细胞在边缘和尾端较多。

B、洋葱表皮临时制片的制作

1.准备：擦净载玻片和盖玻片

2.制片

1)把载玻片平放在实验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴清水

2)用刀片在洋葱鳞片叶内侧表皮上，划出2-5平方毫米的小方格，然后用镊

子撕下方格内的表皮放在载玻片的水滴中。

3)用镊子将表皮展平。

4)用镊子夹起盖玻片，使它的一侧先接触载玻片上的水滴，慢慢放平。3.染色

1)用滴管在盖玻片的一侧滴适量稀释的碘酒。

2)用吸水纸在盖玻片的另一侧吸染液。

4.观察

C、人的口腔上皮细胞临时制片的制作

1.准备：擦净载玻片和盖玻片

2.制片

1)把载玻片平放在实验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水。

2)用凉开水漱口，取消毒牙签在口腔侧壁上轻刮几下，将刮下的碎屑在载

玻片的液滴中涂抹均匀。

3)用镊子夹起盖玻片，使它的一侧先接触载玻片上的液滴，慢慢放平。

3.染色

a)用滴管在盖玻片的一侧滴适量碘液。

b)用吸水纸在盖玻片的另一侧吸碘液。

4.观察

四、实验准备

1.器材：普通光学显微镜，牙签、酒精棉球、载玻片。

2.材料：洋葱表皮，口腔上皮，血涂片，永久制片。

3.试剂：碘液，Giemsa染液，生理盐水，甲醇，香柏油。

五、作业

描绘你所观察到的各种细胞的结构及大小（以比例尺表示）。

1、血液涂片（必做）。

2、永久制片，洋葱表皮，人口腔上皮选做其一。

实验二植物细胞微丝束的观察

一、实验目的

掌握考马斯亮蓝R250染植物细胞内微丝束的方法。了解在微丝束细胞内的分布特点。

二、实验原理

真核细胞胞质中错综复杂的纤维网络称为细胞质骨架，按纤维直径、组成成分和组装结构的不同分为微丝、微管和中间纤维。微丝是肌动蛋白亚单位组成的螺旋状纤维，在细胞中它们又与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构，如应力纤维（又称微丝束）。本实验利用考马斯亮蓝R250染色法来观察植物细胞中由微丝组成的微丝束。考马斯亮蓝R250是一种蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，并非特异地显示微丝，但由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定，如微管；还有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是由微丝平行排列组成的微丝束。

三、实验内容和步骤

1.取洋葱鳞茎内表皮（大小约1cm2），置于盛有0.2mol/L的磷酸盐缓冲液

（pH6.8）的培养皿中。

2.吸去缓冲液，用1% Triton X-100处理20-30min。室温和37度均可。

3.除去Triton X-100，用M-缓冲液充分漂洗3次，每次10min。

4.3%戊二醛固定液中固定（0.5-1h）。

5.在磷酸缓冲液中洗三次，每次10min。吸去残液。

6.0.2%考马斯亮蓝R250染色15-20min。

7.小心地用水漂洗数次，将样品置于载玻片上，盖好盖玻片，在显微镜下

观察。

四、实验准备

1.材料：洋葱鳞茎

2.试剂：

1)M-缓冲液：咪唑50mmol/l, KCL 50mmol/l, MgCL20.5 mmol/l, EGTA

1mmol/l, EDTA 0.1mmol/l, 巯基乙醇1mmol/l, 甘油 4 mmol/l, 用

1mol/l HCL调pH7.2。

2)磷酸缓冲液

3)1% Triton X-100/ M-缓冲液配制

4)0.2% 考马斯亮蓝R250 染液：0.2g考马斯亮蓝R250溶于甲醇46.5ml,

冰醋酸7ml, 蒸馏水46.5ml。

5)3% 戊二醛

3.器材：显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，培养皿，滤纸，剪刀，废液缸，

滴瓶

五、注意事项

1.撕取洋葱鳞茎内表皮不可带颈肉，样本要展开铺平；

2.去垢处理要掌握好时间；

3.染色时间需掌握好，必要时可分别不同时间染色；

4.观察时选择平展染色适中的部位观察。

六、作业

描绘你所观察到的植物细胞中微丝平行排列组成的微丝束的图像。

实验三细胞无丝分裂、有丝分裂和减数分裂的形态观察

一、实验目的

通过标本制备和观察了解生物体细胞的无丝分裂、有丝分裂形态特征及生殖细胞的减数分裂过程。

二、实验原理

1.动物细胞无丝分裂的观察——蛙血涂片

无丝分裂不仅是原核生物增殖的方式，而且雷马克(Remak)于1841年最早在鸡胚血细胞中也发现此现象，因为此过程没有出现纺锤丝和染色体的变化，故称无丝分裂(Amitosis)。其后无丝分裂又在各种动植物中陆续发现，尤其在分裂旺盛的细胞中更多见，但遗传物质是如何分配的还有待进一步研究。

蛙红细胞体积较大、数多，而且有核，是观察无丝分裂的较好材料。

2.蝗虫精子发生过程减数分裂的镜下观察

减数分裂(Meiosis)是配子发生过程中的一种特殊有丝分裂，即染色体复制一次，而细胞连续分裂两次，结果使染色体数目减半的过程。减数分裂过程中体现了遗传三定律，所以说减数分裂在稳定种的遗传性状和繁殖中均起着重要作用。

蝗虫精巢取材方便，标本制备方法简单，染色体数目较少，例如，蝗虫初级精母细胞染色体数2n=22+X，经过减数分裂形成四个精细胞，每个精细胞的染色体数为n=11+X或n=11(注：蝗虫的性别决定与人类不同，雌性有两条X染色体、