14 实验十四 头孢氨苄胶囊含量测定--完整版
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量摘要：在医学领域当中，孢氨苄胶囊属于一种半合成的抗生素，在临床治疗过程中具有突出的疗效，由于其具有良好的稳定性，而且内部不含有过多的毒性成分，在治疗过程中，病人也不会有副作用产生，因此得到了广泛的应用，该药品蛋白结合率较低，可以稳定葡萄球菌产生的青霉素酶，同时可以忍受革兰氏阳性菌产生的内酰胺酶。
以往经常使用碘量法测量药品的成分，但该方法操作繁琐，而且费时费力，检验过程中容易受到外在因素的影响，因此在药品检测过程中很少使用这种方法，而是使用高效液相色谱法。
关键词：高效液相色谱法；头孢氨苄胶囊；药品检测复方头孢氨苄胶囊主要有头孢氨苄和甲氧苄啶两种成分组成，由于该药品是通过化学加工过的方式制成，因此传统方法在检验的过程中会受到外在因素的影响。
头孢氨苄和甲氧苄啶共同使用可以起到断细菌在生长繁殖的作用而且可具有良好的抗菌作用，其抗菌性能要远远优于头孢氨苄。
为了能够了解该药品内部组成结构以及详细成分，本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，这种检测方法不仅操作便捷，检测结果的准确性能够得到保证，而且可以对其进行重复检测。
1仪器与试药1.1仪器由于该药品属于化学产物，仅仅依靠人力无法分辨其内部成分，因此必须使用相关的检测仪器才能够保证检测结果的准确性，常用的检测仪器有DIONEX P680AISO型高效液相色谱仪、UVD17OU型HPLC检测器、XS 225A分析天平。
除了检测仪器之外，还需要用到一些试剂以及药品，例如色谱纯，分析过程中用到的甲醇以及双蒸水，为了保证检测结果具有说服力，因此需要选取某些药物作为对照品，最后需要头孢氨苄胶囊，以上所述的药品以及检测器械其规格和质量必须与有关机构指定的标准相符合。
2方法与结果2.1色谱条件与系统适应性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂水-甲醇-3.85%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500；2.2对照品储备液的制备根据检测要求，选取适量的头孢氨苄对照液，记录其重量放置于专门的容器当中，向其中加入流动液体，达到稀释对照液的目的，摇匀，将稀释过后的对照液储存起来。
高效液相色谱法测定头孢氨苄的含量
赵远征 钱小平 李珠华
（ 大连市药品检验所 １６２） １０１
头孢氨苄即先锋 号， 其含量测定现多采用剩余 碘量法［］ 该法的测定结果受多种因素的影响［ １ ， ， ２ ３ ］如
水解时 间、 温度 ｐ 、 Ｈ 放置时 间、 碘量 等）实验条件须 ，
１０ｍ ０ ０ ｌ）
（ 样品和试药 内标物： 二） 咖啡因； 对照品： 头孢 氨苄， 中国药品生物制品检定所， 批号 ８ ００ ６ ８３样
品： 检的进 口样品 ， 送 经试验 ， 证明样品溶 液在室温下
严格控制。本文采用反相高效液相色谱法， 以咖啡因
为 内标 ， 用峰面积 比值 对头孢氨苄进 行定量测定 ， 结 果令人满意。
２ 小时内稳定； ４ 乙腈、 乙酸钠、 乙酸均为 Ａ Ｒ重蒸馏
水。
实验部分
（ 仪器和色谱条件 Ｌ －Ａ高效 液相色谱仪 ， 一） Ｃ４ Ｓ Ｄ ２ Ｓ紫外检 测器 ，－２ Ｘ 数据 处理机 （ Ｐ －Ａ ＣＲ Ａ 日本 岛
１ ６０ １ ２１
Ｃ ｐａｅｉ ｗ ｓ ｔ ｍｉｅ ｂ ｈｇ ｐｒｏｍ ｎｅ ｅｈ ｌ ｎ ａ ｄ ｅ ｎｄ ｘ ｅｒ ｙ ｉ ｈ ｆｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｕｄ ｒｍ ｔ ｒ ｈ ｕｉｇ ａａｙｉ ｌ ｕ （０ ｉ ｉ ｃ ｏ ａｏ ａ ｙ ｎ ａ ｎｌｔａ ｃｌｍｎ ｑ ｈ ｇｐ ｓ ｎ ｃ ｏ ３
蕃茄红素（ｆ ．４ 、 罗 卜 Ｒ＝０６ Ｒ＝０４ 胡 素 ｆ ．６及几乎停
准确称取 １０ｇ ．０蕃茄酱样品和事先研细的５ 无 ｇ 水硫酸钠及０５ 无水碳酸钠混和， ．ｇ 在研钵中研磨均
匀 ， 加入 ５ ｌ 然后 ｍ 石油醚 ６ ９ ０ ０ ， 研磨数分钟后 ，
留在原点的其它色素分开， 并以双波长薄层扫描测定
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量头孢氨苄(cefalexin)为半合成抗生素，口服吸收良好，体内稳定，毒副作用较小，蛋白结合率低，对葡萄球菌产生的青霉素酶稳定；对革兰氏阳性菌产生的β-内酰胺酶有一定耐受性［1］，在临床上广为使用。
其含量测定中国药典(1995年版)采用碘量法［2］。
但此法操作繁琐，费工费时，影响因素多；还有采用高效液相色谱法的报道［3］，但内标物保留时间过长。
本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，方法简便、准确，重复性好，灵敏度高。
获得了较为满意的结果。
1 仪器与试药日立L-6200A高效液相色谱仪，L-4200H检测器，D-2500数据处理器。
头孢氨苄对照品(含量91.7%)、乙酰苯胺(内标物)、α-苯甘氨酸、7-氨基去乙酰胺基头孢烷酸(7-ADCA)，由中国药品生物制品检定所提供。
2 色谱条件色谱柱：YWG C18(250 mm×4.6 mm,10 μm)，流动相：0.015 mol。
L-1醋酸盐缓冲液(称取无水醋酸钠1.23 g，加水至1 000 mL，用醋酸调pH为4.0)-乙腈-甲醇(60∶6∶34)，检测波长：254 nm，流速：1.0 mL。
min-1。
3 线性范围精密称取头孢氨苄对照品约60 mg，置25 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10 mL置50 mL量瓶中，稀释成约为450 μg。
mL-1的溶液作为对照品溶液。
另精密称取乙酰苯胺适量，置25 mL量瓶中，加水溶解并稀释成约为550 μg。
mL-1的溶液，作为内标溶液。
精密量取对照品溶液0.1，0.5，0.75，1.0，1.5，3.0 mL，分别加入内标溶液2 mL，以流动相稀释至25 mL使内标最终浓度为44 μg。
mL-1［3］，摇匀，取20 μL 进样，色谱图见图1-A。
试验表明头孢氨苄浓度在18～535 μg。
mL-1范围内与对照品峰面积和内标物峰面积比呈良好的线性关系，回归方程为：A=0.015 81+0.009 83C r=0.999 9图1 对照品(A)与样品(B)高效液相色谱图1.头孢氨苄(3.98 min)2.乙酰苯胺(8.56 min)4 重复性和稳定性试验用样品进行6次试验测得平均含量为99.8%，RSD为1.7%。
HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量
HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量
HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量
周静安
【期刊名称】《中国现代应用药学》
【年(卷),期】1999(016)005
【摘要】目的:介绍一种用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的方法.方法:以Shim-Pack CLC-ODS(150mm×6m,10μm)为色谱柱,甲醇-水(70:30)为流动相,检测波长262nm,外标法定量.结果:头孢氨苄浓度线性范围为100～900μg/ml,相关系数r=0.9999,方法回收率为99.9%,RSD为0.72%.结论:方法简便快速,结果准确可靠,可作为头孢氨苄制剂的质量控制方法.
【总页数】2页(47-48)
【关键词】头孢氨苄;高效液相色谱法
【作者】周静安
【作者单位】衢州,324002,浙江衢州市药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R92
【相关文献】
1.HPLC法测定头孢羟氨苄甲氧苄啶胶囊中头孢羟氨苄和甲氧苄啶含量的方法改进 [J], 张帆
2.HPLC测定复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和TMP的含量[J], 高钢; 徐华; 周建国; 张宏佩
3.HPLC测定复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄及甲氧苄氨嘧啶的含量[J], 周嘉
4.HPLC测定复方头孢羟氨苄胶囊中的头孢羟氨苄和甲氧苄啶含量[J], 关日晴;。
高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证
高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证目的：确证用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄含量的方法有效性和准确性。
方法：以Diamonsil CLC-ODS（150mm x 6mm，10 lm）为色谱柱，水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液- 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相，检测波长为254 nm，外标法定量。
结果：头孢氨苄浓度线性范围为0.02～0.20mg / ml，相关系数r= 0.9991，方法重复性试验RSD为1.42%。
结论：该方法可简单高效地完成，结果准确性好、稳定可靠，确证高效液相色谱依然为头孢氨苄制剂的质量控制中有效可靠的方法。
标签：头孢氨苄高效液相色谱法头孢氨芐（Cefalexin，又译先锋霉素Ⅳ、头孢力新等）是一种半合成的第一代口服头孢霉素类类抗生素药物，化学名（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，化学式C16H17N3O4S，在临床上广为使用。
其含量测定在旧版的中国药典（1995年版）采用碘量法○1。
但此法不仅操作步骤繁多，费工费时，干扰因素多；然后人们发明采用高效液相色谱法内标法测定的方法，但内标物保留时间过长，依然存在问题。
最后人们又发现采用高效液相色谱法，用外标法测定其含量，方法操作简单方便、数据准确可靠，灵敏度较高，重复性好，最终获得了较为满意的结果○2。
现在本文对这个方法进行确证，以确定该方法的有效性和准确性。
1.仪器与试药分析天平（precisa instrument ltd switzer land xs 225a precisa ），高效液相色谱柱（diamonsic C18 250 * 46mm），检测器（UVD 170v），泵（P680 HPLC pump），头孢氨苄胶囊（广州白云山制药总厂批号：2110102）2. 色谱条件用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂：水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液- 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500。
头孢氨苄胶囊质量标准
24个月。
8批准文号
国药准字H50020402
细菌数
cfu/g
≤1000
≤900
霉菌数和酵母菌数
≤100
≤90
大肠埃希菌数
不得检出
不得检出
含量测定
%
90.0～110.0
92.0～108.0
3取样、检验方法
按《成品取样操作程序》进行取样。
按《头孢氨苄胶囊检验操作规程》进行检验。
4类别
β-内酰胺类抗生素，头孢菌素类。
5规格
0.125g。
6贮藏
遮光，密封，在凉暗处保存。
重庆科瑞制药有限责任公司GMP文件
文件名称
头孢氨苄胶囊质量标准
文件编号：JB0003(06)002(01)02
共2页
制定人
审核人
批准人
制定日期
年月日
审核日期
年月日
批准日期
年月日
颁发部门质量部颁发数量 Nhomakorabea5份
生效日期
年月日
分发部门
及数量
质量部1份、生产安全技术部1份、中心化验室2份、口服头孢类固体制剂车间1份。
头孢氨苄胶囊质量标准
1标准依据
《中国药典》2010年版二部
2质量指标（见表1）
表1质量指标
标准项目
单位
法定标准
内控标准
鉴别
—
在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
有关物质
7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸
%
≤1.0
≤0.8
药物分析实验：实验六 HPLC测定头孢氨苄胶囊的含量
一、实验目的
• 学习高效液相色谱分析的原理 • 学习外标法测定组分含量的方法 • 了解高效液相色谱仪的结构及正确使用方
法
二、实验原理
高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同 极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、 缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱， 经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内， 在柱内依据不同原理分离后，各成分先后 进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪 记录，从而达到分离分析的目的。
• 4．溶剂的变换必须注意溶剂的极性和互溶性。
• 5. 爱护实Βιβλιοθήκη 器材实验报告1、 按要求填好实验报告，下次实验课前班 长统一收上来。
2、实验课成绩主要包括课堂表现和实验报告 两大部分。
另取头孢氨苄对照品适量，同法定容，按外标 法以峰面积计算供试品C14H17N2O4S的含量。
五、注意事项
• 1．将配好的流动相接到流路中，开启泵起动开关，检测 是否漏液
• 2．流动相必须预先脱气，可用超声波、机械真空泵或水 力抽气泵脱气。
• 3．严格防止气泡进入系统，吸液软管必须充满流动相， 吸液管的过滤器始终浸在溶剂中，如变换溶剂，必须先停 泵，再将过滤器移到新的溶剂瓶内，然后才能开泵使用。
• 色谱仪：岛津高效液相色谱仪 • 色谱柱：ODS柱（4.6250mm，5m） • 柱温：室温 • 流动相：水-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%
醋酸溶液（742：240：15：3） • 检测波长:254nm。
四、含量测定
精密称取适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置 100ml量瓶中，加超纯水溶解，定容，摇匀，滤 纸过滤，取滤液10ml，置50ml量瓶中，用超纯水 定容。摇匀后用滤头过滤1-2ml溶液。取20µl注入 色谱仪，记录色谱图。
头孢氨苄胶囊的质量分析
谢 谢 / THANKS
制作人：吴爽
实训
四、注意事项
（三）滤膜应不大于 0.8 μm，并使用惰性材料制成的滤器，以 免吸附活性成分或干扰分析测定。 （四）采用对照品比较法测定供试品溶液的浓度时，需分别配制 供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为 供试品溶液中被测成分规定量的 100%±10％，所用溶剂也应完 全一致。
实训
三、实验内容
（一）检查 溶出度 经 45 分钟时，取溶液适量，立即用适当的微孔滤膜滤 过，自取样至滤过应在 30秒种内完成。精密量取续滤液适量 V1ml，用溶出介质 V2 ml 定量稀释制成每 1ml 中约含 25μg 的溶液，作为供试品溶液，照紫外-可见分光光度法（附录
ⅣA），在 262nm 的波长处测定吸光度 AX；另精密称取头孢
实训
三、实验内容
（一）检查
溶出度 则每粒胶囊的溶出量为（V×cX×V2／V1）g，6粒胶囊
中，每粒胶囊的溶出量按标示量计算（即溶出度），均不低于 规定的限度，即标示量的 80%，应符合规定。
溶出度 %
溶出量 标示量
100
%
实训
三、实验内容
（二）含量测定 照高效液相色谱法（附录Ⅴ D）测定。 1. 色谱条件与系统适用性试验 避光操作。照高效液相色谱法 (附录Ⅵ D)测定。 （1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂；以水-甲醇- 3.86％ 醋酸钠溶液- 4％醋酸溶液（742 : 240 : 15 : 3）为流动相；检测波长为 254nm；取供试品溶液适 量，在 80℃ 水浴中加热 60 分钟，冷却，取20μl注入液相色谱 仪，记录色谱图，头孢氨苄峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
氨苄对照品适量，加溶出介质溶解并定量稀释制成每 1ml 中
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实验十四 头孢氨苄胶囊的含量测定
一．实验目的：
1、掌握高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊含量的原理及操作技术
2、熟悉外标法计算药物含量的方法及结果判断
3、了解高效液相色谱法在药物定量分析中的应用 二．实验原理：
《中国药典》现行版采用外标法测定头孢氨苄胶囊的含量。
标示量（%）%100⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=
-
S
m A W
D V A C R X R
本品含头孢氨苄应为标示量的90.0%~110.0% 三．实验仪器和试剂 1. 仪器
高效液相色谱仪、分析天平、量瓶、滤纸、漏斗、移液管、10微升进样器、铁架台、 2. 试剂
色谱纯甲醇、醋酸、醋酸钠 四、实验内容
取本品10粒，精密称定，除去内容物后，精密称定胶囊壳的重量，计算平均装量。
取内容物混合均匀，精密称取适量（约相当于头孢氨苄0.1g ），置100ml 量瓶中，加流动相适量，充分振摇，使头孢氨苄溶解，再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml ，置50ml 量瓶中，再加流动相稀释至刻度，摇匀，取10微升注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密量取头孢氨苄对照品适量（约0.1g ），同法测定。
按外标法以峰面积计算供试品头孢氨苄标示量的百分含量。
五、结果与分析
六、注意事项
1. 流动相及试液均应脱气和过滤。
2. 对照品溶液与供试品溶液每份至少重复进样2次，有全部结果求得平均值，RSD一般不应大于1.5%。
七、思考题
1. 头孢菌素类抗生素除用高效液相色谱法测定含量外，还可用其他哪些方法？各方法有何优缺点。
2. 简述外标法定量的原理、方法及特点。