荧光免疫技术的应用
免疫荧光检测技术的应用研究
免疫荧光检测技术的应用研究免疫荧光检测技术（immunofluorescence assay，IFA）是生物学研究中常用的一种方法。
利用荧光探针标记抗体或抗原，用荧光显微镜观察标记物的分布和定位，从而确定分子在细胞或组织中的位置和数量。
IFA因其灵敏度高、特异性好等优势，被广泛应用于病毒、细菌、细胞结构等方面的研究。
本文将从四个方面介绍IFA的应用研究，分别是免疫荧光染色、细胞和组织成像、固相免疫荧光检测、IFA的发展趋势。
一、免疫荧光染色免疫荧光染色是IFA最常见的应用之一。
它可以用于检测细胞和组织中的抗原分布、定量抗原表达水平、细胞增殖和病理损伤等。
例如，病毒颗粒在感染过程中，会表达一些病毒特异性蛋白，免疫荧光染色可以用于检测这些蛋白在细胞中表达的位置和数量。
此外，免疫荧光染色还可以用于人类肿瘤标志物的检测，如果往人类肿瘤细胞中注入抗体标记可以推断肿瘤合成的蛋白，从而得出诊断结果。
二、细胞和组织成像IFA除了可以用于固定的细胞和组织外，它还可以用于定位和追踪特定分子和细胞的位置。
相对于常规显微镜，荧光显微镜的分辨率更高，可以显示像分子水平的高分辨率成像。
除此之外，化学标记的方式可以用取得的荧光颜色和荧光强度的区别来区分不同的分子。
这与发生在细胞内的许多生物过程有关，如细胞增殖、聚集和分化等。
三、固相免疫荧光检测固相免疫荧光检测包括拓扑免疫荧光检测和固相酶联免疫荧光检测。
拓扑免疫荧光检测主要是针对细胞膜上的抗原定向开发的一种方法，可以在体外检测膜蛋白的反映。
与此不同，固相酶联免疫荧光检测的应用范围更广，可以检测寄生虫、细菌、病毒等微生物向某单一特异性抗原结构分子特别的抗体。
固相免疫荧光检测具有高灵敏度、高特异性、简便快速等优点，是常用于临床诊断和疫苗检测的关键技术之一。
四、IFA的发展趋势随着生物学研究和临床诊断的需要，IFA技术正在不断地发展。
例如，近年来免疫荧光技术应用于动态跟踪细胞生理活动和长时间成像。
免疫荧光的原理和应用
免疫荧光的原理和应用原理免疫荧光是一种基于抗体与目标分子之间的特异性结合而进行的荧光标记技术。
其原理基于以下几个关键步骤：1.抗原结合：样品中的目标分子与特异性的抗体反应，形成抗原-抗体复合物。
2.二抗结合：将荧光标记的二抗加入体系中，该二抗能够与抗体特异结合。
3.荧光标记：荧光标记的二抗与抗原-抗体复合物结合，形成荧光标记的复合物。
4.检测：使用荧光显微镜或其他检测设备观察荧光信号。
免疫荧光技术的主要原理是通过荧光信号来定位和检测目标分子在细胞或组织中的位置和表达水平。
荧光标记的抗体可以与特定的抗原结合，产生荧光信号，从而实现对目标分子的定位和检测。
应用免疫荧光技术具有广泛的应用领域，以下列举了一些常见的应用：•细胞免疫荧光检测：通过标记荧光抗体，可实现对细胞中特定蛋白质的检测和定位。
这种技术可以用于研究细胞的生理功能和病理变化。
•肿瘤标记：免疫荧光技术可以用于肿瘤标记，通过标记荧光抗体，可实现对肿瘤标志物的检测。
这对于早期肿瘤的诊断和治疗具有重要意义。
•免疫组织化学：免疫荧光技术在组织学研究中应用广泛。
通过标记荧光抗体，可以检测组织中各种蛋白质的分布和表达水平，从而了解组织的结构和功能。
•流式细胞术：免疫荧光技术在流式细胞术中也有重要应用。
通过标记荧光抗体，可以定量、快速地检测细胞表面蛋白的表达水平，实现对细胞的分析和分类。
•实时荧光PCR：免疫荧光技术在实时荧光PCR中也得到了广泛应用。
通过标记荧光抗体，可以实时检测PCR扩增反应的结果，从而快速、精确地分析DNA的定量和变异。
优势免疫荧光技术相比传统的化学标记技术具有以下几个优势：•高特异性：免疫荧光技术基于抗体与目标分子之间的特异性结合，具有高度的特异性。
这使得免疫荧光技术在细胞和组织中的定位和检测方面具有明显的优势。
•高灵敏度：荧光信号可以被高度敏感的仪器检测到，使得免疫荧光技术具有较高的灵敏度。
这可以实现对目标分子的快速和准确的检测，甚至在低表达水平下也能够得到可靠的结果。
免疫荧光染色实验用途
免疫荧光染色实验用途
免疫荧光染色实验是一种常用于生物学研究中的技术手段。
该实验通过特定的抗体与样品中的特定分子结合，利用荧光标记物检测目标分子的分布、定位和相互关系等信息。
其主要用途包括：
1. 诊断疾病：免疫荧光染色可以用于检测许多疾病相关的分子，如癌细胞、病原菌、病毒等。
这种方法对于早期诊断和治疗疾病具有很大的帮助。
2. 研究细胞结构和功能：免疫荧光染色可以帮助科学家研究细
胞内各种结构和分子的功能和相互作用。
它可以用于寻找细胞功能的关键分子、了解细胞内化学反应和信号传递的机制等。
3. 分析蛋白质表达：免疫荧光染色可以用于确定样品中特定蛋
白质的表达水平。
这种方法可以帮助科学家了解蛋白质在细胞中的定位、丰度和功能等。
4. 研究生物学过程：免疫荧光染色可以用于研究许多生物学过程，如细胞周期、细胞凋亡、分化、生长和分裂等。
通过检测关键分子的分布和定位，科学家可以了解这些生物学过程的机制。
总之，免疫荧光染色实验是一种非常有用的技术手段，可以应用于各种生物学研究中。
它可以帮助科学家深入了解生物学过程的机制，同时也可以为疾病的诊断和治疗提供重要的帮助。
- 1 -。
临床检验中免疫荧光技术的应用
状腺 原氨酸（ Ｆ Ｔ Ｉ ） ， 游离 甲状腺素（ 丌 ） 和促 甲状腺激素（ Ｔ Ｓ Ｈ） 测定 ， 行精密度 、 灵敏度 、 准确 度 、 抗 干扰实验和准 确度 实验 ，
并 通 过 利 用 统 计 学 来 比较 这 ２种 方 法 的 结 果 。
１ － ３ 统计学处理 ：采用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ３ ． ０统计学软件 ，计数 资料用 表示 ， 做ｔ 检验及方差分析 ， 以Ｐ ＜ ０ ． ０ ５为差异有统计学 意
２ ． ３ 灵 敏度对 比 ： 利用 ２种方法分别 对空 白零标准做批 内的 ２ ０次测定 ， 通 过 比较 ２种方法 的检测低 限 ， 结果显示 时间分
其 中分别加 入 ５ ０ Ｕ ／ Ｌ的 人绒 毛膜促性腺激素 （ Ｈ Ｃ Ｇ） ， ２ ５ ０ ０ ０ ｕ ， Ｌ的卵泡刺激素 （ Ｆ Ｓ Ｈ）和 ｌ ０ ０ ０ Ｕ ／ Ｌ的黄体生成素 （ Ｌ Ｈ） ，
例 甲状腺功能减退症患者 ，作为 甲状 腺功能减退症组 ，年龄
ｌ ９ ～ ６ ９岁 ， 平 均（ ４ ８ ＋ ＿ １ ５ ） 岁。 另外选取 １ ０ ０名健康者 ， 作为健康
对 照组 ， 身 体无 其他 方 面疾 病 ， 年龄 １ ８ ５ ５岁 ， 平均（ ３ ９ ＋ ＿ ６ ）
岁。
【 ４ ］ 刘慧琴 ， 徐 爱明． 不合格血标本 １ ７ ５ ２ 份 的原因分析与对策． 解
荧光免疫分析技术在食品安全中的应用
荧光免疫分析技术在食品安全中的应用随着人们对食品安全的关注度越来越高，食品安全检测技术也逐渐被人们所重视。
荧光免疫分析技术是一种非常先进和精准的检测技术，其应用在食品安全领域能够有效地保障人们的饮食健康。
本文将从荧光免疫分析技术的基本原理、在食品安全中的应用及其优势和不足等方面进行探讨。
一、荧光免疫分析技术的基本原理荧光免疫分析技术是指利用特异性抗体与抗原结合的特性，使标记有荧光物质（如荧光素、硫化铟等）的抗体与抗原结合，从而通过荧光测定技术实现对抗原或抗体的高灵敏、高特异性检测的一种技术。
它主要是利用荧光激发与发射特性、异物的免疫原性与抗原识别能力，以及特异性抗体与抗原之间的结合性质相结合，通过对荧光剂的检测和显示，来定量分析某一特定抗原或抗体物质的技术。
在荧光免疫分析技术中，一般将检测物标记为荧光标记物，它可以是荧光素或其他不同的荧光标记物。
一旦与目标抗原或抗体结合，标记物则会生成一个特定的荧光信号。
在检测中，荧光光源会用荧光化学染料或者荧光素激发，然后通过滤光器选择性地分离目标物的荧光信号，最后通过检测仪器测量荧光强度，以此来确定目标物的存在与否及其浓度。
二、荧光免疫分析技术在食品安全中有很多的应用，如对食品中的农药残留、兽药残留、毒素、细菌等有害物质的快速检测。
这些有害物质的残留会对人类健康造成严重的危害，因此及时检测和控制这些有害物质是食品安全的一个重要内容。
1. 荧光免疫分析技术在农药残留检测方面的应用农药残留是指危害儿童健康的一类有害物质。
现行的农药残留检测方法有GC-MS和HPLC等，但是这些方法繁琐、费时，且需要高精密的仪器设备，因此价格较高。
荧光免疫分析技术在农药检测中的优势在于其高度的灵敏度和快速性。
荧光免疫分析技术可以检测多种不同农药的残留，同时又不需要对样品进行复杂的处理，因此是一种非常有效和经济的检测方法。
2. 荧光免疫分析技术在食品中毒素检测方面的应用毒素是指某些微生物代谢产物，它们存在于某些食物种类中，当人体食用该种食物中毒素过多时，会对人体健康造成很大的危害。
免疫荧光检测技术的原理及应用
免疫荧光检测技术的原理及应用原理介绍免疫荧光检测技术是一种基于免疫反应原理的检测方法。
其原理是通过将待检样品中的目标物与荧光标记的抗体结合，然后通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。
免疫荧光检测技术能够高度灵敏地检测目标物，并且具有多样性、高通量性和高特异性的特点。
应用领域免疫荧光检测技术在许多领域中得到了广泛的应用。
1. 生命科学研究在生命科学研究中，免疫荧光检测技术被广泛应用于蛋白质定位、分析和定量。
通过将荧光标记的抗体与目标蛋白结合，可以在细胞或组织中精确定位目标蛋白，进一步研究其功能和作用机制。
此外，免疫荧光检测技术还可以用于检测细胞的分化状态、凋亡过程等。
2. 医学诊断免疫荧光检测技术在医学诊断中扮演着重要角色。
通过利用荧光标记的抗体与病原微生物或异常细胞结合，可以准确检测出有关疾病的相关指标。
例如，在临床诊断中，免疫荧光检测技术可以用于检测乙型肝炎病毒、艾滋病病毒等病原体，以及癌症标志物等。
3. 农业与食品安全监测免疫荧光检测技术在农业和食品安全监测中具有重要应用。
通过将荧光标记的抗体与农作物病原体、有害微生物或食品中的污染物结合，可以快速、高效地检测出潜在的食品安全风险。
这项技术对于保护农业生产和食品安全具有重要意义。
4. 环境监测免疫荧光检测技术可以应用于环境监测，用于检测空气、水、土壤等环境中的有害物质。
通过将荧光标记的抗体与目标分子结合，可以实现对污染物的高灵敏度和高特异性的检测，为环境保护和污染治理提供有力支持。
免疫荧光检测技术的优势免疫荧光检测技术具有以下优势：•高灵敏度：荧光标记的抗体可以非常灵敏地检测到目标物，具有较低的检测限度。
•高特异性：与其他方法相比，免疫荧光检测技术具有较高的特异性，可以准确识别目标物。
•多样性：免疫荧光检测技术可以用于多种类型的目标物检测，包括蛋白质、细胞、病原体等。
•高通量性：免疫荧光检测技术可以通过自动化设备实现高通量的检测，提高工作效率。
免疫荧光染色实验用途
免疫荧光染色实验用途免疫荧光染色实验是一种常用于生物医学研究的技术手段。
它的基本原理是利用免疫学中的抗体-抗原反应以及荧光标记技术，研究细胞或组织中特定蛋白质的定位和表达情况。
这种技术有着广泛的用途，可以用于研究细胞分子结构、病原菌检测、药物筛选、诊断疾病等方面。
一、细胞分子结构研究在生物学研究中，分子结构是一个重要的研究领域。
生物细胞中包含了许多分子结构，其中一些分子结构的表达会随着生物体的各种不同状态而改变。
这种方法可以用来研究许多种细胞分子结构，如受体、酶、细胞骨架等，其位置和表达量的改变对研究某些生物过程非常重要。
例如，蛋白磷酸酶是一种重要的细胞信号转导酶，磷酸酶抑制剂可以抑制肿瘤细胞的生长。
通过免疫荧光染色实验，可以检测出细胞膜表面的特定受体结构，研究其表达量变化的过程。
二、病原菌检测在医学领域中，免疫荧光染色实验也有着广泛的运用。
它可以被用来检测因各种病原微生物引起的感染。
这种方法的核心是抗原和抗体之间的特异性结合，利用荧光物质观察是否有结合发生。
例如，在HIV病毒检测中，利用抗人类免疫缺陷病毒抗体和染色的梅花形固定化病毒蛋白裂解物实现对HIV病毒的检测。
三、药物筛选免疫荧光染色实验在药物研究中也有着广泛的运用。
例如，癌症治疗中常用的激动剂分为两类，一类是抗癌细胞毒性增强剂，另一类是增加病人免疫力的治疗药物。
通过免疫荧光染色实验可以筛选含有抗癌细胞毒性增强剂或增加病人免疫力的治疗药物的化合物。
也可以通过这种方法更准确地研究药物对特定蛋白质的作用机制，以此来优化和开发新药。
四、疾病诊断在医学诊断领域中，免疫荧光染色实验可以用于检测病毒性感染病变的诊断。
例如乙酰胆碱受体是一种在神经肌肉接头部位存在的特定蛋白质，当肌萎缩性侧索硬化症（ALS）患者失去这种结合抑制物后，T细胞就会针对这种蛋白的表达产生免疫反应。
利用免疫荧光染色技术，诊断帕金森病和霍奇金病等自身免疫疾病也是非常有效的。
总之，免疫荧光染色实验的可靠性和广泛适用性赋予了它在许多生物医学研究方面的重要地位。
免疫荧光技术的临床应用
免疫荧光技术的临床应用
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(三)皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）
免疫学检验
• ANA • ENA——抗Jo-1阳性
其它检验——肌酶谱
• 肌酸磷酸激酶（CPK）: MM-心肌和骨骼肌
免疫荧光技术的临床Байду номын сангаас用
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抗核抗体（ANA）
方法——间接免疫荧光法 结果判断:
①滴度〉1：100为阳性 ②常见核型——5种
不一样核型临床意义不一样
免疫荧光技术的临床应用
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ANA常见五种核型及临床意义
核膜型——与抗ds-DNA相关， 多见于SLE，尤其是有肾炎者
均质型——与AHA、抗DNA相关，引发LE形成 主要见于SLE、药品性狼疮
免疫荧光技术的临床应用
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免疫荧光技术的临床应用
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抗ds-DNA抗体
临床意义
①对SLE诊疗有较高特异性 ②滴度与SLE活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 ③与SLE肾损害相关
检测方法
①放免法（Farr)——敏感，有利于早期预测 检测高亲协力抗ds-DNA
②间接免疫荧光法(IF)——特异 ③ELISA——可检测低亲协力抗ds-DNA
斑点型——与抗ENA相关，应深入查特异性抗体 核仁型——多见于硬皮病 着丝点型——多见于CREST综合征
免疫荧光技术的临床应用
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均质型
与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA相关， 引发LE形成主要见于SLE、药品性狼疮
核膜型
与抗ds-DNA相关， 多见于SLE，尤其是有肾炎者
免疫荧光技术的临床应用
免疫荧光技术的临床应用
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间接免疫荧光法检测特点
免疫荧光技术的原理与应用
免疫荧光技术的原理与应用原理免疫荧光技术是一种基于抗原与抗体的特异性结合而产生荧光信号的检测方法。
其原理主要涉及以下几个步骤：1.样品处理：将待检测样品进行处理，通常包括细胞固定、切片等步骤，以确保样品的完整性和稳定性。
2.抗原与抗体结合：根据所需检测的目标，选择合适的抗原和抗体。
抗原是要检测的物质，而抗体是一种特异性识别和结合抗原的蛋白质。
通过孵育样品与适当稀释的荧光标记的抗体进行结合，形成抗原-抗体复合物。
3.清洗：为了去除非特异性结合和杂质，需要进行严格的洗涤步骤。
通常使用缓冲液进行多次洗涤，以确保结果的准确性和可靠性。
4.荧光检测：通过激发荧光标记的抗体，可以获得荧光信号。
荧光信号的强度和位置可以被显微镜或流式细胞术等技术进行观察和分析。
免疫荧光技术利用了抗原与抗体间的高度特异性结合，结合了免疫学和荧光技术的优势，广泛应用于生物学、医学和生命科学研究领域。
应用免疫荧光技术在医学和生命科学研究中的应用非常广泛，主要体现在以下几个方面：1.免疫组织化学：通过荧光标记的抗体，可以对组织切片中的目标蛋白进行检测定位。
这可以帮助研究人员了解蛋白在组织中的表达和定位，为疾病的诊断和治疗提供重要信息。
2.免疫细胞分析：通过荧光标记的抗体，可以对细胞表面或细胞内的蛋白进行定量和定位分析。
这在研究细胞生物学和免疫学过程中具有重要意义，如研究细胞信号转导、细胞凋亡等方面。
3.病原体检测：免疫荧光技术可以用于检测和鉴定病原体，如病毒、细菌等。
通过选择特异性的抗体标记以及合适的样品处理方法，可以实现对病原体的准确检测和鉴定。
4.分子生物学研究：免疫荧光技术可以用于检测和定位蛋白相互作用、蛋白的表达量和定位以及分子修饰等。
这对于研究蛋白的功能和调控机制具有重要意义。
总之，免疫荧光技术是一种灵敏、特异且广泛应用的生物分析方法。
通过荧光信号的检测和分析，研究人员可以了解生物分子的定位、表达和相互作用，为疾病诊断和治疗提供重要的实验依据。
免疫荧光染色技术及应用
免疫荧光染色技术及应用人类在面对各种疾病时，免疫荧光染色技术是一项十分重要的检测手段。
该技术利用荧光染料与抗体结合，并显示在微管中，从而帮助研究人员快速高效地检测出特定蛋白质及其存在的位置。
本文将介绍这一技术的基本原理、使用方法及其在生物医学领域中的应用。
一、免疫荧光染色技术基本原理免疫荧光染色技术（Immunofluorescence staining technique）是利用抗体特异性与组织靶分子相结合，再用荧光染料标记，进而检测特定蛋白质的位置。
该技术的基本原理是先用特异性的一抗（一种PECAM-1抗体）结合靶蛋白，再用荧光标记的二抗特异性结合第一抗体，从而形成荧光染色物，进一步观察其荧光信号的分布位置，同时判定靶分子的种类和分子量大小。
二、免疫荧光染色技术的使用方法首先，准备抗原或刺激物的样本，在荧光显微镜下将样品观察，选择合适的荧光标记，分别标记标本中要检测的特定蛋白质和待测试的抗体。
通过荧光显微镜观察这两种荧光染色物表现的方式和位置，如果两者在同一位置，则说明这种蛋白质与该抗体正好配对，是检测对象。
荧光显微镜的不断升级和发展，使得直接观察荧光成像成为一种非常高效且准确的技术。
三、免疫荧光染色技术在生物医学领域中的应用免疫荧光染色技术在生物医学领域中有广泛应用，其中包括诊断、治疗和预防疾病方面。
1.免疫组织化学分析免疫组织化学分析是免疫荧光染色技术的一种应用方式，它可以通过检测已知层面上蛋白质是否存在来帮助诊断疾病。
例如，LE会知道，如果一人有强直性脑脊髓炎，其免疫系统经常锁定GAD65（钩状攻角度分布并通过卷积峰在从35°到70°的较宽范围内）这种抗体。
该技术可以帮助诊断出很多常见疾病，如糖尿病、强直性脑脊髓炎、乳腺癌、白血病等。
2.病毒学方面的应用另外，在病毒学领域，免疫荧光染色技术也有着广泛的应用。
例如，利用该技术可以定量测定患者身上病毒负荷、病毒流行病学的强度、病毒分布情况，还可以分析病毒种群，为研究病毒的散布做出贡献。
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荧光显微镜
荧光显微镜的装置
一、光源
现在用高压汞灯作光源
二、滤色系统 （激发滤板和压制滤板） 德国产品（Schott）BG12 、中国产品QB24 、有 的滤板也可以透光分界滤长命名，如K530 、滤板 完全以数字命名，如美国Corning厂的NO：5-58 三、反光镜 反光镜的反光层一般是镀铝的 四、聚光镜 （明视野聚光器 、暗视野聚光器和相 差荧光聚光器）
测定：药物、维生素和激素等
三、荧光酶免疫测定
碱性磷酸酶标记抗体或抗原，固相载体包被抗原或 抗 体 ， 酶 分 解 4-MUP ， 脱 磷 酸 根 基 团 形 成 4-MU ， 360nm激发光照射，发出450nm荧光。
酶和荧光底物
标记酶 碱性磷酸酶 β-半乳糖苷酶
底物 4-MUP 4-MUG
均相荧光免疫测定： 荧光偏振免疫测定
荧光免疫技术的优缺点
优点：特异性强、敏感性高、速度快
缺点：存在非特异性染色，结果判定 的客观性不足，技术程序也较复杂
荧光产物 4-MU 4-MU
激发光(nm) 荧光(nm) 相应信号 360 360 450 450 10 10
辣根过氧化物酶
HPA
二聚体
317
414
0.03
方法类型
双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法
测定：抗病毒抗体、细菌和毒素抗原、 激素、肿瘤标志物等
非均相荧光免疫测定： 时间分辨荧光免疫测定 荧光酶免疫测定
荧光显微镜技术的应用 荧光免疫测定的应用
荧光免疫技术基本原理
采用荧光素标记抗体与组织或细胞抗原 反应，经过洗涤分离后，荧光显微镜下观察 呈特异性荧光的抗原抗体复合物及其存在部 位，借此对组织细胞抗原进行定性和定位检 测或对自身抗体进行定性和滴度测定，又称 荧光抗体技术。
荧光显微镜原理
利用一定波长的激发光对样品进行激 发，产生一定波长的荧光，对样品结构或 其组分进行定性、定位、定量观察检测。
（一）载玻片 载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间 （二）盖玻片 盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁 （三）标本 组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在 标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。 （四）封裱剂 封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度 在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去 （五）镜油 一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油， 最好使用特制的无荧光镜油
1、时间分辨
自发荧光寿命短:1ns～10ns 镧系元素寿命长:10μs～1000μs 短寿命荧光完全衰变后再测定镧系元素特异荧光
2、stokes位移(斯托克斯 )
激发光谱和发射光谱的波长差 镧系元素Stokes位移大(273nm)，激发光谱和 发射光谱不重叠
3、发射光谱和激发光谱
发射光谱带较窄：613nm±10nm，干扰少 激发光谱带较宽：300nm～350nm，灵敏度高
·
数据记录及处理
荧光显微镜和普通显微镜的区别
1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜 投射于样品上；
2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普 通显微镜； 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除 可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线， 用以保护人目。
荧光显微镜技术的应用
1、病原体检测
快速检测病原体，也可检测患者血清中特 异性抗体水平
5、特殊应用：流式细胞分析
将游离细胞作荧光抗体特异染色后，在特 殊设计的仪器中通过喷嘴逐个流出，经单色激 光照射发出的荧光信号由荧光检测计检测，并 自动处理各种数据。
荧光免疫测定的应用
一、时间分辨荧光免疫测定
利用具有双功能基团结构的螯合剂， 将镧系元素（铕(Eu3+)、钐(Sm3+)、铽 (Tb3+)、钕(Nd3+)、镝(Dy3+)）标记到抗 体（或抗原）上，经免疫反应形成复合物， 由于镧系元素能发出荧光，故分离除去未 结合的成分后，利用时间分辨荧光仪即可 测定荧光强度，从而推测待测物含量。
五、物镜
各种物镜均可应用，但最好用消色差的物镜 六、目镜 在荧光显微镜中多用低倍目镜，如5×和6.3× 七、落射光装置
透射荧光显微镜光路
落射荧光显微镜光路
荧光显微镜的操作
1、安装紫外防护罩。 2、打开高压汞灯的电源控制箱开关。 3、插入挡光板，中断光路。 4、预热5—10分钟。 5、将载有样品的载玻片放到载物台上。 6、选择接物镜(按照先低倍，后高倍顺序)。 7、旋转分光镜组件转盘，选择所需要的分光镜组件 8、使用阻断滤片(目前多数阻断滤片内置于荧光显微镜) 9、通过粗、细螺旋调整焦距。 10、打开与显微镜连接的计算机，点击数码成像系统 软件，采集数码图像。
国产高压汞灯GCQ-200型性能良好，可以代 替HBO-200等型的进口灯泡，平均寿命在 200h以上，价格也比较低。
注意事项
•必须安装紫外防护罩
•打开汞灯后不可立即关闭
•汞灯熄灭后待完全冷却才能重新启动
•工作环境温度不宜太高，必须有良好的散热条件 •汞灯的使用寿命达到300小时，需更换新灯泡
荧光显微镜标本制作要求
2、自身抗体检测
抗核抗体 (均质型)
抗核抗体 (斑点型)
抗核抗体 (核膜型)
用于检测学种种抗核抗体、抗平滑肌抗体、 抗线粒体抗体等自身抗体
3、免疫病理检测
肿瘤 （人肝癌细胞）
检测组织中免疫球蛋白、补体、抗原抗体复合 物以及肿瘤组织中肿瘤相关抗原的坚定
4、细胞表面抗原和受体检测
荧光免疫技术可用于淋巴细胞表面CD抗原、 抗原受体、补体受体、Fc受体等的检测以及淋 巴细胞及其亚群的鉴定和计数。
4、荧光标记物的相对比活性
比活性：单位时间每个标记分子被探测的信号量
荧光激发光源1000次/S激发，比活性提高
5、信号增强
标记方法
双抗体夹心法 固相抗体竞争法 固相抗原竞争法
测定：蛋白质、激素、药物、肿瘤 标记物、 病原体抗原/抗体等
二、荧光偏振免疫测定 利用荧光素经单一波长的偏振光照 射后吸收光能，释放出相应的偏振荧光， 荧光偏振程度与荧光分子大小成正比的 关系而建立的免疫分析技术。