磷酸二氢钾流动相图
高效液相色谱
高效液相色谱仪（HPLC）开机先打开电脑，然后从左往右开。
在waters600上按底下横排第二个键（Direct）→set：35（柱子温度）测B组、叶酸冲机器甲醇流动相二次水A B C D100（过一下）抽水流速（0.10）100（过一下）抽水（流速0.10）3070各至少40分钟流量为0.5、1.0一点一点往上调703010030703070做样结束后调流速为1.53070冲仪器。
自动进样器：打开开关按纽，按第三个键（PURGE PAGE），再按第一键（AUTO PAGE）冲洗针头。
过一会等所有按纽跳到第一个键（START PUGRE）显深色后，按最后一个键，回到主菜单，关机。
（这是每次做盐类产品做完后在关主机之前冲洗针头）（注：在测完D3后应该在第二天早上要冲洗针头）打开开关按纽，按第三个键（PURGE PAGE），再按第一键（AUTO PAGE）冲洗针头。
过一会等所有按纽跳到第一个键（START PUGRE）显深色后，按最后一个键，再按最后第二个键YES。
然后再最后一个键，回到主菜单。
打印的报告中的PDA的结果表中看：纯度1角度＜纯度1阈值说明不受杂质影响（较好）计算标样含量：标样质量*标品浓度*掩盖系数*1000000/50（容量瓶定容体积）/进样品稀释倍数（掩盖系数VB1*0.787VB6*0.823）计算样品含量：样品面积/标品面积*标品含量*100/样品质量（ug/ml）建立方法：计算好标样含量后先选中标品浓度最低的然后按住ctrl键再选中其它浓度和第一个样品右击鼠标选择处理→选使用…..输入要建立的方法名（如VB3、VB6等）确定。
在通道中双击样品（第一个）点击峰形再右击鼠标选中提取色谱再右击选中提取光谱输入波长回车。
选中工具栏中处理方法向导按步骤做下去至完成，选择处理方法象二本书样子的图标选适用性输入1，选文件中的保存处理方法，再选方法组图标象一本书样子的输入方法（如VB3），选文件中的保存处理方法→直至保存。
液相色谱-原子荧光光谱法（LC-AFS）法测定大米中的无机砷
16001400120010008006004002000.0 2.0 4.0 5.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0时间/min图1 标准流动相As(Ⅲ)、As(Ⅴ)标准系列色谱图Dec. 2021 CHINA FOOD SAFETY时间/min0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.02000180016001400120010008006004002000图2 混合流动相As(Ⅲ）、As(Ⅴ)标准系列色谱图流动相分析As(Ⅲ)、As(Ⅴ)系列标准溶液，线性试验结果见表1。
由表1可知，在5.0～100 µg/L ，线性方程的相关系数良好，均大于0.999。
表1 线性试验结果（单位：µg/L）线性浓度范围线性方程相关系数5.0～100Y =214.4X -26.3565.0～100Y =171.48X -156.05在重复性条件下，使用混合流动相分析不同浓As （Ⅴ）标准溶液，结果见表2。
由Ⅲ)和As(Ⅴ)测定结果的绝对差值与算术平均值的比值均不超过5%，精密度结果 重复性条件下获得的测定结果的绝对差值与算术 平均值的比值（n =3）重复性10 µg/L 50 µg/L 2.3 2.81.32.6在大米样品中添加不同浓度水平的无机砷标准 3 结论按照《食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定》（GB 5009.11—2014）第行大米无机砷前处理，使用十二水合磷酸氢二钠（Na 2HPO 4·12H 2O ）和磷酸二氢钾磷酸二氢钾混合流动相进行测定，操作简便，在较短时间内分离出三价砷和五价砷，并能较好地测定大米中的无机砷含量，适合大米中无机砷的日常检测。
参考文献[1]SMITH A H, HOPENHA YNRICH C, BA al.Cancer risks from arsenic in drinking-water[J].Environ Health Persp,1992,97:259-267.[2]云洪霄,张磊,李筱薇,等.大米中无机砷测定方法的研究[J].卫生研究,2010,39(3):316-320.。
缓冲盐pH选择
一、磷酸二氢钾：无色结晶或白色颗粒状粉末。
在空气中稳定，在400℃时失去水，变成偏磷酸盐。
溶于约4.5份水，不溶于乙醇。
pH4.4～4.7。
相对密度2.34。
熔点252.6℃。
pKa=4.4—4.7（磷酸二氢钠的pKa=4.5）无色结晶或白色结晶性粉末。
无气味。
热至100℃失去全部结晶水，灼热变成偏磷酸钠。
易溶于水，几乎不溶于乙醇，其水溶液呈酸性。
0.1mol/L 水溶液在25℃时的pH为 4.5。
相对密度 1.915。
熔点60℃。
二、什么时候需要缓冲溶液？反相液相色谱分析中，流动相的PH值一般在2.5－7之间，当被分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2.5－7之外时，就需要缓冲液。
在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的Pka在1－11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。
如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。
如何选择缓冲液PH值在选择缓冲液PH值之前，高于或低于被分析物的Pka两个PH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，但缓冲盐的pH值应在它本身PKa的上下1个pH值内，如超出此范围，缓冲作用将大大减弱。
从HH公式：PH＝Pka＋log（[A-]/[A]）得知，溶液PH值高于或低于Pka 2个单位，化合物中99％以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。
如果选择不到合适的，样品的pKa与流动相的pH非常接近，那么流动相pH微小的变化，都会引起样品保留时间较大的变动。
缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为PH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。
PH＝3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，一般是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。
水产品新鲜度化学指标的检测—K值的测定
K值与挥发性盐基氮的区别
• 因为动物一旦生命活动停止，因为核酸是合成蛋白质的密码，核酸比 蛋白质分解得早，所以ATP的降解早于蛋白质的降解。
• ATP的降解作用就开始，伴随着次黄嘌呤等降解产物的生成。此时蛋白 质还没有开始分解。当ATP的降解产物次黄嘌呤和黄嘌呤浓度很高时， 挥发性盐基氮还很低。
3.流动相配制
流动相：0.02:mol/L磷酸二氢钾溶液 +0.02mol/L磷酸氢二钾溶液=1+1(V/V),用磷酸调 节pH至6.0。
其中：
• 0.02 mol/ L.磷酸二氢钾溶液:准确称取2.722 g 磷酸二氢钾,用水溶解并加水定容至1000 mL。
• 0. 02 mol/L磷酸氢二钾溶液:准确称取4. 566g 磷酸氢钾，用水溶解并加水定容至1 000 ml。
2. K值按下式计算，单位为百分率
式中: MATP——样品中腺苷三磷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MADP——样品中腺苷二磷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MAMP——样品中腺苷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MIMP——样品中肌苷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MHxR——样品中次黄嘌呤核苷的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MHx——样品中次黄嘌呤的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)；
• （4）1mol/L氢氧化钠溶液:称取氮氧化钠40g.用 水溶解并加水稀释至1000mI。
2.标准品配制
• （1）标准储备液:准确称取腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、 腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核苷各10mg(精确至 0.01mg)，用水定容于10mL棕色容量瓶中，此溶液浓度 为1.00mg/mL；准确称取次黄嘌呤5mg(精确至0.01mg)， 用水定容于10mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为0. 500 mg/mL。各标准储备液置于4C冰箱中冷藏保存，保存 期不超过一周。
流动相的离子强度对RP(1).
流动相的离子强度对RP(1)在反相高效液相色谱(RPHPLC)过程中，流动相的离子强度可显著影响可解离的化合物如抗生素的色谱峰形，原因在于流动相的离子强度较低时，色谱填料的固定相易于过载，使离子化的化合物的色谱峰形呈典型的过载特征――峰形接近直角三角形。
随着进样量的增加，色谱区带中高浓度的前半部的保留时间减少，但色谱区带均在同一时刻结束，色谱峰的拖尾因子及峰宽均显著增加，同时被测物与有关物质间的分离也随之变差。
选择合适的缓冲盐并适当地增加流动相的离子强度即可显著改善抗生素的色谱峰形，色谱峰的拖尾因子及峰宽均随之降低，同时被测物与有关物质间也更加易于分离。
关键词： RPHPLC；抗生素；色谱峰形；流动相；离子强度Influence of the ionic strength of mobile phase on peak shape of antibiotics in RPHPLCABSTRACT The ionic strength of mobile phase can significantly affect the peak shape of ionogenic compounds such as antibiotics in reversedphase high performance liquid chromatography (RPHPLC). The influence may be attributed to overloading of ionogenic analytes in lower ionic strength mobile phase. In such phase, peak becomes increasingly rightangled triangle in shape with increasing sample load together with increasing peak width and tailing. The retention time of the highconcentration front decreases with increasing sample load, while the end of the peak tail has a constant retention time, equal to the symmetrical analytical peak. Due to considerably worse peak shapes, poorer resolution between the main component and its related substances might be observed. With the optimal buffer and the increase of ionic strength, significant improvement in peak shape of antibiotics could be achieved and consequently a decrease in the tailing factor, an increase in the apparent column efficiency as well as an efficient resolution were obtained.KEY WORDS RPHPLC; Antibiotics; Peak shape; Mobile phase; Ionic strength据统计，约80%的药物含有碱性官能团，故碱性化合物的反相高效液相色谱(RPHPLC)行为在色谱学界始终是一个引人注目的研究课题，而具有不同pKa值的碱性药物的RPHPLC分离在药学界的重性正日益被关注［1］。
化妆品32种禁限用染成分的检测方法和编制说明
化妆品32种禁限用染成分的检测方法和编制说明化妆品 32 种禁限用染料成分的检测方法和编制说明附件 2: 化妆品中 32种禁限用染料成分的检测方法 1 范围本方法规定了测定染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分(见附录 A)的高效液相色谱法。
本方法适用于染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分的含量测定。
本方法无法区分所涉及染料成分的游离态、硫酸盐和盐酸盐，化妆品中各种形态同时存在时，应换算成一种形态，以总量表示。
2 原理用无水乙醇水11 的混合溶液提取染发类化妆品中的 32 中禁限用染料成分，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱定性，峰面积定量。
本方法中 32 种禁限用染料成分的检出限、定量下限及取 0.5g 样品时的检出浓度及最低定量浓度见表 1。
表 1 32 种禁限用染料成分的检出限、检出浓度、定量下限、最低定量浓度 - 1 - - 2 - 3 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
3.1 无水乙醇。
3.2 甲醇，色谱纯。
3.3 乙腈，色谱纯。
3.4 亚硫酸氢钠。
3.5 磷酸溶液(19):吸取磷酸(ρ201.69g/mL)10mL，加水 90mL。
3.6 磷酸盐混合溶液:称取十二水合磷酸氢二钠 1.8g、磷酸二氢钾 2.8g 和庚烷磺酸钠(C7H15SO3Na)1.0g，用水稀释至 1L，混匀，配制成含庚烷磺酸钠(1g/L)的磷酸盐缓冲液，加入磷酸溶液(3.5)，调节 pH 至 6.0 左右，0.45m 微孔滤膜过滤。
3.7 染料类化合物标准储备溶液(ρ(染料成分)10g/L):称取染料对照品约 100mg(精确至 0.1mg)于 10mL 容量瓶中，以 2g/L 亚硫酸氢钠水溶液无水乙醇(3.1)11的混合溶液定容至 10mL，配成约 10g/L 的单标溶液。
以下几种物质在上述溶剂中的溶解性较差，分别采取如下措施:甲苯-25-二胺硫酸盐和 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 2 种物质直接用2g/L 亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容;甲苯-34-二胺直接用无水乙醇(3.1)定容;2-硝基-p-苯二胺和 4-硝基-o-苯二胺需将称样量减至 25mg，再用无水乙醇(3.1)定容，配成约2.5g/L 的单标溶液。
化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法2023年
附件7化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法Determination of L-Ascorbic acid2-phosphate magnesium ester and other ten components incosmetics1范围本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、苯乙基间苯二酚、4-丁基间苯二酚、4-甲氧基水杨酸钾、阿魏酸、烟酰胺、曲酸、3-邻-乙基抗坏血酸、鞣花酸、凝血酸（氨甲环酸）11种成分的含量。
本方法第一部分适用于化妆品水剂类、乳液类、凝胶类、贴面面膜类、膏霜类和粉底类化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、苯乙基间苯二酚、4-丁基间苯二酚、4-甲氧基水杨酸钾、阿魏酸、烟酰胺、曲酸、3-邻-乙基抗坏血酸、鞣花酸含量的测定。
本方法第二部分适用于水剂类、乳液类、凝胶类、贴面面膜类、膏霜类化妆品中凝血酸（氨甲环酸）含量的测定。
第一部分化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等10种原料的检测2方法提要样品经甲醇水溶液（或添加少量二氯甲烷促溶解）超声提取后，采用高效液相色谱系统分离，二极管阵列检测器（DAD）检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。
本方法10种原料的检出限、定量下限及取样量为0.5g时检出浓度和最低定量浓度见表1。
表110种原料的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度序号成分检出限（ng）定量下限（ng）检出浓度（μg/g）最低定量浓度（μg/g）1抗坏血酸磷酸酯镁0.4 1.30.8 2.6 2抗坏血酸葡糖苷 1.0 3.1 2.0 6.2 3苯乙基间苯二酚 4.68.79.217.4 44-丁基间苯二酚 2.7 4.9 5.49.8 54-甲氧基水杨酸钾0.4 1.00.8 2.0 6阿魏酸0.5 1.2 1.0 2.4 7烟酰胺 1.0 3.3 2.0 6.6 8曲酸 1.1 2.1 2.2 4.2 93-邻-乙基抗坏血酸 1.4 2.7 2.8 5.4 10鞣花酸 2.7 6.1 5.412.23试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量
ＨＰＬＣ法测定盐酸二甲双胍片的含量目的：用HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量。
方法：采用Diamond C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液含0.015 mol/L高氯酸（pH3.0）；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：218 nm，以峰面积计算。
结果：在0.1~0.3 mg/ml范围内盐酸二甲双胍片的峰面积和浓度呈良好的线性关系，r=0.999 4。
结论：本法简便、快捷、灵敏，可作为盐酸二甲双胍片质量控制的有效方法。
[Abstract]Objective:To establish an HPLC method for the content determination of Metformin Hydrochloride Tables. Methods:Analytical column was Diamond C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，the mobile phase consisted of 0.01 mol/L postassium dihydrogen phosphate and 0.015 mol/L perchloric acid, the flow rate was 1.0 ml/min,UV detection was set at 218 nm and the peak area was calculated.Results:The linear range of metformin hydrochloride was 0.1~0.3 mg/ml,r=0.999 4.Conclusion:The method is simple，rapid and accurate.It can be used for the quality control of Metformin Hydrochloride Tablets.[Key words]HPLC;Metformin hydrochloride;Content determination盐酸二甲双胍是一种双胍类口服降糖药，用于非胰岛素依赖型糖尿病的治疗。