纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式
新试验一-芦丁的提取、分离与鉴定
实验一 芦丁的提取、精制与鉴定一、实验目的与要求l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，苷元和糖部分的鉴定方法。
R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素芦丁溶解度：冷水1：8000 热水1：200冷乙醇1：300 热乙醇1：30难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。
槲皮素溶解度：冷乙醇1：650 热乙醇1：60可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。
二、实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和精制；芸香苷属于苷类化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李糖。
芦丁和槲皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。
三、实验内容（一）提取分离和纯化l 、芦丁的提取：2、精制（重结晶）：3、芦丁的水解：OO OHOH OROH HO流程图如下：槐米（20g ）研碎，于500ml 烧杯中，加350，250ml 水煮沸15min,10min棉花过滤150ml ，1%H 2SO 4直火加热水解30min放置 1-1.5h ，抽滤精品芦丁（水浴浓缩至2ml ）(二)鉴定l 、化学检识取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml 使溶解(1)盐酸—镁粉反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加浓盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。
(2)Molish 反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml 摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml ，静置，观察二层溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。
(3)FeCL 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。
(4) AlCl 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。
芦丁的提取分离和鉴定
定性反应鉴别见附录。
（一）芦丁的酸水解
称取精品芦丁2g
置500ml烧瓶中
加2%的H2SO4200ml
加热回流1小时
放冷，静置，抽滤
酸性滤液沉淀
中和冷水洗两次，干燥
用95%乙醇25 ml最后称重，计算收率。
浓缩
黄色细针状结晶
浓缩液（槲皮素）
（供糖的鉴定）
补充知识:
关于苷（gān）和甙(dài):苷类（glycosides，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。目前国际上通用“苷”如“皂苷”，而过去习惯使用的中文名称“甙”目前已不再使用如“皂甙”现统称“皂苷”。
展开剂：正丁酵-醋酸-水（BAW）（4：1：5）上层，悬挂并利用上层展开剂纸色谱分离。
显色剂：苯胺以及邻苯二甲酸混合试液，喷后105℃烘10分钟。显棕红色斑点。
注意事项:纸层析展开时可事先用铅笔在裁剪好的层析纸上画出展开起点(即点样的位置)和预制终点(即展开完毕后展开液的前沿)，这样方便进行测量计算比移值。另外由于糖液一般无色，因此点样位置也可事先用铅笔点出标记，注意如果糖液浓度过低（实验时应尽量将糖液蒸发浓缩至3毫升以内）则应多次点样以达到浓集的目的，否则展开后的点不够明显。点样时也需要注意点样液斑不易扩散太大，应控制液斑直径在3 mm以内，同时各点样点之间应尽量保持距离不可过于靠近，否则展开后可能得到较大的样班，而且不同样斑之间可能重合相互干扰而不易测量比移值。下图给出正确的纸层析法标示。
综合化学实验:芦丁的提取分离和鉴定
芦丁简介:
芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
芦丁槲皮素鉴定实验报告
一、实验目的1. 了解芦丁和槲皮素的理化性质。
2. 掌握芦丁和槲皮素的提取、分离与鉴定方法。
3. 熟悉光谱分析在有机化合物结构鉴定中的应用。
二、实验原理芦丁和槲皮素均为黄酮类化合物，具有多种生物活性。
芦丁是槐米中的一种主要活性成分，槲皮素则广泛存在于多种植物中。
本实验通过碱酸法提取芦丁和槲皮素，并利用光谱分析（紫外-可见光谱、红外光谱、核磁共振波谱）对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、芦丁标准品、槲皮素标准品、无水乙醇、浓盐酸、镁粉、10%萘酚溶液、浓硫酸、聚酰胺薄层板、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
2. 实验仪器：电子天平、恒温加热器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
四、实验步骤1. 芦丁和槲皮素的提取（1）将槐米粉末用无水乙醇回流提取，过滤，收集滤液。
（2）将滤液浓缩至一定体积，用热水溶解，冷却后用盐酸调节pH值至2～3。
（3）静置沉淀，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至近干。
（4）用少量无水乙醇溶解残渣，定容至一定体积，得到芦丁和槲皮素的提取液。
2. 芦丁和槲皮素的鉴定（1）紫外-可见光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用紫外-可见分光光度计测定其在200～400nm范围内的吸收光谱，与标准品进行比较。
（2）红外光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用红外光谱仪测定其红外光谱，与标准品进行比较。
（3）核磁共振波谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用核磁共振波谱仪测定其核磁共振波谱，与标准品进行比较。
3. 芦丁和槲皮素的分离（1）薄层色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，点样于聚酰胺薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（5:4:1）为展开剂进行薄层色谱分析，与标准品进行比较。
（2）高效液相色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，经适当处理后，用高效液相色谱仪测定其含量，与标准品进行比较。
五、实验结果与分析1. 紫外-可见光谱分析芦丁和槲皮素的紫外-可见光谱与标准品的吸收光谱基本一致，表明提取液中含有芦丁和槲皮素。
柱层析分离芦丁与槲皮素
三．实验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 聚酰胺5g 加水50ml 5g， 50ml， 1. 装柱 聚酰胺5g，加水50ml，搅 倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 注意保持液面1cm高度。） 1cm高度 注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g， 溶解 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 50%的乙醇冲洗 3. 洗脱 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 待两层析带之间的距离约1cm 1cm后 再用90% 90%的 待两层析带之间的距离约1cm后，再用90%的 乙醇冲洗。 乙醇冲洗。
二、实验原理
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 展开剂的极性较小（ 比例>50% >50%） 丁酮： 60： 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20： 洗脱先后顺序: 20：20; 洗脱先后顺序: • 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。 用正相色谱理论来解释。
三．实验操作步骤
• 4. 收集 用试管收集，每试管接收30 ml。 用试管收集，每试管接收30 ml。 • 5. 检测 分离结果用TLC检测。 分离结果用TLC检测。 TLC检测
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作 • 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1 配制展开剂，甲醇：丙酮： • 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂 将展开剂倒入展开缸中， 的高度4mm左右。 4mm左右 的高度4mm左右。 • 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； 画基线，基线距底边1.0 1.5cm； 1.0～ • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、 点样（点样顺序：试样1 试样2 芦丁、 槲皮素) 点样一般为圆点， 槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素
实验部分
（一）实验目的要求
1.制备芦丁，供药用。
2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
3.掌握黄酮苷水解制备黄酮苷元的方法。
4.熟悉重结晶技巧。
5.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
（二）实验的基本原理
样 品：自制芦丁、槲皮素（用甲醇溶解，浓度约1mg/ml）
对照品：芦丁、槲皮素对照品的甲醇溶液。
展开剂：三氯甲烷-甲醇-甲酸（7∶2.5∶0.5）
显 色：a.先在可见光下观察，然后在紫外光下观察（365nm紫外灯下观察）
b.喷三氯化铝试剂前后观察颜色变化（365nm紫外灯下观察）
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
(3)PH过低（酸性太强）会使芦丁形成洋盐而收率降低。
⑷ 称量芦丁或槲皮素时，先将带滤纸的漏斗称重，再将盛样品的带滤纸的漏斗称重，差重即为样的重量。
4.薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁和槲皮素
(四)实验药材仪器与试剂
1.实验药材槐米20g。
2.仪器：500ml烧杯，1000ml烧杯，250ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、减压过滤装置，布氏漏斗，层析缸等。
3.试剂：硼砂、氧化钙、HCI、H2SO4、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸等。
一、概述
植物来源：槐米系豆科植物槐树（sophora japonicaL.）的花蕾（槐米），芦丁含量高达12%~20%。荞麦中含量也较高。含芦丁成分的植物高达70种以上。
功效：芦丁经药理实验证明具有调节毛细血管渗透作用，具有维生素P样作用。在临床上用作毛细血管止血药，常作为高血压病的辅助用药。芦丁为槐米中主要有效成分。
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。
味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。
临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
[目的要求]1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2．掌握槲皮素的制备原理及操作。
3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理]芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
[实验内容]一、芦丁的提取分离及精制方法⑴500ml 饱和石灰水，加热，并维持pH8～9滤液 药渣10分钟，维持pH8～9pH 至4 ～5沉淀低温（80℃）干燥，称重。
芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定
解，用浓盐酸酸化至pH 2 ~ 3，用乙醚萃取三次，合并乙
醚液，回收乙醚，供薄层层析点伴用。 五、槲皮素降解产物的薄层色谱
硅胶-CMC-Na薄层 对照品：原儿茶酸（Protocatechuic acid）
间苯三酚（Phloroglucinol）。 展开剂：氯仿-丙酮-醋酸（8:2:0.5） 显色剂：三氧化铁试剂
六、紫外吸收光谱测定槲皮素
（一）原理
利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解 质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断该 化合物羟基的位置
（二）试剂
无水甲醇 甲醇钠溶液 氢氧化钠溶液 三氯化铝溶液 醋酸钠 硼酸饱和液
（三）ห้องสมุดไป่ตู้定方法
1．黄酮羟基位置的测定：
精密称取黄酮样品（槲皮素）约1.2mg，用无水甲醇溶解，再稀释至 100ml
钟。显棕色或红色斑点。
三、槲皮素五甲醚的制备
取槲皮素结晶4000mg，置于150ml的三颈瓶中，加50ml无水丙酮， 装上电动搅拌器，冷凝管及温度计，加热回流搅拌，每间隔一适当时 间加入无水碳酸钾0.2克和硫酸二甲酯0.2ml，大约在1.5小时左右加完 4克无水碳酸二甲酯，继续加热回流搅拌直至溶液黄色完全消退为止， 约需4~5小时，停止加热，取下烧瓶，反应液经过滤，沉淀用热丙酮洗
（1）黄酮光谱：取样品溶液约3ml，在200~500nm波段内进行扫描。 （2）氢氧化钠光谱：取样品溶液约3ml，加入氢氧化钠溶液2~3滴立即测
定。放置5分钟后，再测定。 （3）甲醇钠光谱：取样品溶液约3ml，加入甲醇钠溶液5~7滴后，立即进
行测定，放置5分钟后，测定。 （4）三氯化铝光谱：在盛有约3ml样品溶液的石英杯中，加入三氯化铝
芦丁提取分离和鉴定
综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定芦丁简介:芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。
目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。
尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophora japonica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。
槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。
有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。
而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycosides，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。
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纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式综合化学实验:
芦丁的提取分离和鉴定
芦丁简介:
芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。
目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。
尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophora
japonica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinoe，一种由葡萄糖glucoe与鼠李糖rhamnoe组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174，178℃，无结晶水时188，190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:
关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycoide，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。
目
前国际上通用“苷”如“皂苷”，而过去习惯使用的中文名称“甙”目前已不再使用如“皂甙”现统称“皂苷”。
一、目的要求：
1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检测等手段在苷类结构鉴定上的作用。
3、通过UV、IR、HNMR和MS图谱解析，了解光谱方法黄酮类化合物结构鉴定中的作用。
二、已知重要成分性质：
1、芦丁（rutin）：分子式C27H30O16·3H2O，为浅黄色针状结晶物，mp174～178℃（含三分子水）；100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，115～117℃软化，214～215 ℃发泡分解。
难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、二硫化碳、苯等，易溶于吡啶，甲酰胺特别是碱液。
通常常用的溶剂下其溶解情况为：较难溶于冷水（1：8000～10000），冷乙醇（1：650）；可溶于热水（1：180～200）以及冷甲醇（1：100）；较易溶于热乙醇（1：60）和热甲醇（1：10）。
2、槲皮素（quercetin）为芦丁的苷元其分子式为：
C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
一般在碱水中溶解显黄色。
3、皂苷（aponin）一般为白色粉末，mp 210℃～220℃。
易溶于吡啶。
能溶于甲醇（1：200），可酸水解得下列两种苷元及糖。
糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
（1）白桦酯醇（betulin）无色针晶，mp215～220℃，能溶于醋酸，
丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；难溶于石油醚和水。
（2）槐花二醇（ophoradiol）无色针晶，mp219，224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。
（1）
（2）
芦丁属于黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，因此可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热
乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被
稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色
谱及紫外光谱等可进行黄酮及糖的鉴定。
芦丁酸性条件下水解的过程见下
反应方程式：
+鼠李糖+葡萄糖
三、提取分离和纯化
注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用，实验证明，提取时加入硼砂，产品质量要好些。
注2：加石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米
中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但pH不能过高和长时间
煮沸，因为会导致芦丁的降解。
注3：pH过低会使芦丁形成锌盐而降低收率。
四、芦丁的鉴定
定性反应鉴别见附录。
（一）芦丁的酸水解
称取精品芦丁2g
置500ml烧瓶中
加2%的H2SO4 200ml
加热回流1小时
放冷，静置，抽滤
酸性滤液
沉淀
中和
冷水洗两次，干燥
用95%乙醇25 ml重结晶
中性滤液
，结晶时可加入冷水20 ml，
最后称重，计算收率。
浓缩
黄色细针状结晶
浓缩液
（槲皮素）
（供糖的鉴定）
（二）糖的鉴定（纸色谱法）
纸层析鉴定：采用中速层析滤纸（裁剪尺寸：520 cm）取水解母液20 ml，于水浴上加热，同时于搅拌下加BaCO3细粉中和至中性，过滤去多余BaCO3后，滤液浓缩至2，3 ml，得样品液供纸色谱点样用。
标准对照品：以葡萄糖和鼠李糖标准品作对照（1％葡萄糖标准品醇溶液及1％鼠李糖标准品醇溶液）。
展开剂：正丁酵-醋酸-水（BAW）（4：1：5）上层，悬挂并利用上层展开剂纸色谱分离。
显色剂：苯胺以及邻苯二甲酸混合试液，喷后105℃烘10分钟。
显棕红色斑点。
注意事项: 纸层析展开时可事先用铅笔在裁剪好的层析纸上画出展开起点(即点样的位置)和预制终点(即展开完毕后展开液的前沿)，这样方便
进行测量计算比移值。
另外由于糖液一般无色，因此点样位置也可事先用
铅笔点出标记，注意如果糖液浓度过低（实验时应尽量将糖液蒸发浓缩至
3毫升以内）则应多次点样以达到浓集的目的，否则展开后的点不够明显。
点样时也需要注意点样液斑不易扩散太大，应控制液斑直径在 3 mm以内，同时各点样点之间应尽量保持距离不可过于靠近，否则展开后可能得到较
大的样班，而且不同样斑之间可能重合相互干扰而不易测量比移值。
下图
给出正确的纸层析法标示。
（三）芦丁和槲皮素的薄层层析鉴定
吸附剂：硅胶G（400目）以0。
4%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）水液
作为粘合剂制薄层层析板，板片自然阴干后于烘箱中100℃活化1小时。
展开剂：（1）CHCl3-MeOH-HCOOH（15：5：1）
（2）CHCl3-丁酮-HCOOH（5：3：1）
显色剂：1%的FeC13和1%的K3[Fe（CN）6]水溶液，使用时等体积混和。
注意：薄层层析点样注意事项依照纸层析
五、实验说明及注意事项
1．用石灰水调节芦丁提取溶液的pH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。
但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮结构在强碱性条件下易
被破坏。
2．调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低（pH2以下）会使芦
丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条
件下被破坏，导致收率下降。
3．注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。
六、思考题
1．苷类结构检识的一般程序？
2．苷类水解的催化方法？
3．怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上？
4．怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？
5．UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
附录：芦丁的定性检测
1．芦丁的定性反应
取芦丁适量，加乙醇使溶解，分成三份供下述试验用：
(1)盐酸镁粉试验：取样品液适量，加2滴浓HCl、再酌加少许镁粉，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色。
(2)锆-枸试验：取样品液适量，然后加2％ZrOCl2的甲醇溶液，注意
观察颜色变化，再加入2％枸椽酸的甲醇溶液，并详细记录颜色变化。
(3)α-萘酚-浓硫酸反应：取样品液适量，加等体积的l0％α-萘酚
乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色。
2．芦丁的UV
(1)鉴定试剂的配制
①甲醇钠溶液：取0。
25g金属钠，切碎，小心加入色谱甲醇10 ml 中，此液置于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。
②三氯化铝溶液：取1g无水三氯化铝，小心加入色谱甲醇20 ml中，放置24小时后全部溶解即得。
③醋酸钠：用无水粉末醋酸钠。
④⑤硼酸饱和溶液：取无水硼酸，加入适量色谱甲醇、制成饱和溶液。
（上述贮备液可放置六个月）
（2）芦丁溶液的配制
精密称取芦丁纯品0。
5g，用甲醇适量溶解至50 ml容量瓶中，用甲
醇稀释至刻度。
（3）光谱的测定
①甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至200～500 nm内进行扫描，重
复一次，观察紫外光谱。