二维图谱处理方法(topspin简版)(活动za)
分析解读高效液相色谱二维图谱
分析解读高效液相色谱二维图谱色谱图其实简单地讲是一个横坐标是时间纵坐标是电信号的二维图谱。
高效液相色谱法，你可以简单地想象，固定相是一个多空海绵状的柱形结构，样品在孔洞中进进出出。
因为各个物质的吸附能力不同，所以才会在色谱图中拉开距离。
高效液相色谱谱图实验相关的参数：1、保留时间：也就是可以定性的数据参数如果使用同样的色谱柱，同样的流动相，分析同样的样品，那么这个样品的保留时间，应该是固定的。
不同保留时间的色谱峰，应该表现出的是不同的物质。
如果你跑的是反相色谱，那么色谱峰越靠后，它对应物质的极性也就越小。
2、峰面积：也就是可以定量的数据参数一旦分离，这些成分就被转换成电离状态。
MS使用质荷比作为鉴别组分的特征因子，因此下一步涉及在此基础上分离组分。
质荷比对特定分子比HPLC中的保留时间更特异，这就是为什么使用MS。
质量电荷差异分析仪，就像HPLC中的分离技术一样，可以有所不同，包括四极杆、飞行时间和离子阱等分析仪。
然后由检测器对出现的离子进行计数。
产生的MS光谱显示了质荷比与峰值强度的关系。
色谱图显示组分作为保留时间和质荷比与质量相对丰度的函数，这意味着全LC-MS的总输出是一个具有两个水平轴的图表。
图表的焦点可以根据研究人员的目标而改变。
峰值检测在滤波之后进行，其中峰值表示成分或成分的断裂。
峰可以根据它们覆盖的高度或面积来选择。
通过将存在的峰与已知的峰进行匹配，可以通过眼睛识别某些峰模式。
这可以帮助确定存在什么分子，或者分子中存在多少原子。
分析物的色谱图不变，因此它通常可用作分子类型的指纹。
这通常通过观察保留时间和质荷比的峰值在哪里来实现。
目前，色谱图的大多数分析都是通过计算完成的。
这意味着软件会将生成的色谱图与已知的色谱图进行比较，以识别成分，或者将其存储为新发现的色谱图。
在色谱图中可以读出来的参数，在同一个色谱条件下，同一个物质的浓度和峰面积是成正比的。
也就是说，如果你配制1.0mg/ml的X 物质，进样后峰面积是10000，那么，你配制0.5mg/ml的X物质，进样后峰面积差不多就是50003、波长:这个是可以顺利进行试验的前提条件同一样品，同一方法，同一色谱柱，在不同波长的峰面积是不同的。
Topspin结构分析工具中文版手册
3
3.3 文件操作 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …………………16 3.4 结构绘制 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …………………17 3.5 选择/移动/转动 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …………..20 3.6 编辑 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ………….22 3.7 缩放 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………….22 3.8 额外特点 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …………………..22 3.9 色彩设置 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………23
二维核磁谱解析方法
二维核磁共振二维傅立叶变换核磁共振（2D-FT-NMR）是八十年代发展起来的核磁共振新技术。
二维谱是将NMR提供的信息，如化学位移和偶合常数，氢化学位移和碳化学位移等在二维平面上展开绘制成的图谱。
二维谱可分为同核化学位移相关谱和异核化学位移相关谱前者如1H-1H COSY谱，13C-13C COSY谱，后者则为各种13C-1H COSY谱等。
一、1H-1H COSY谱氢-氢相关谱（1H-1H COSY谱）是二维谱中最常用的。
在氢-氢相关谱上的横轴和纵轴均设定成为氢的化学位移，两个坐标轴上则画有通常的一维谱。
（1）对角峰与相关峰下面是乙酸乙酯的1H-1H COSY谱•在相关谱中，位于对角线的峰叫做对角峰如图中信号3•因相邻两原子间或有远程偶合关系的原子间的偶合而引起的，出现在对角线两侧对称的位置上的峰叫做相关峰。
如图中a和a’（2）偶合关系的确定偶合关系的确定有四种方式：▪A方式：从信号2向下引一条垂线和相关峰a相遇，再从a向左划一水平线和信号1相遇，则可确定信号1和2之间存在着偶合关系。
▪B方式：先从信号2向下划一垂线和a相遇，再从a向右划一水平线至对角峰[1]，再由[1]向上引一垂线至信号1，即可确定偶合关系。
▪C方式：按照与B方式相反方向进行。
▪D方式：从1H-1H COSY谱的高磁场侧解析时，除C方式外，也常常采用D 方式。
即从1向下引一条垂线，通过对角峰[1]至a’，再从a’向左划一条水平线，即和1的偶合对象（2）的对角峰[2]相遇，从[2]向上划一垂线至信号2即可确定。
应用1H-1H COSY谱解析化合物的结构就是基于分子中相互偶合的氢之间在谱中会出现相关峰，出现相关峰的质子之间可以是间隔3个键的邻偶，也可以是间隔4个键以上的远程偶合，特别是偶合常数较小的远程偶合，在一维氢谱中有时很难观察到，因而成为1H-1H COSY谱的一个优势。
N H HO O COOH12345678H8H7H5H3在该化合物的二维1H-1H COSY谱中，H-7和H-8的相关峰最强，H-5和H-7的相关峰强度次之，H-5和H-8的相关峰最弱，这也说明两个质子之间的偶合常数越大，相关峰越强，两个原子之间的偶合常数越小，相关峰越弱，这也是1H-1H COSY谱的普通规律。
全二维气相色谱
同时总的分析时间最短。1DGC柱温智 能最佳化是围绕最难分离物质对及其交叉 点的预测展开。全二维气相色谱需综合考 虑两维的分离能力。组分(zǔfèn)的总分离效能 指标包括第一维的总分效能指标和第二维 的总分离效能指标。
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程序(chéngxù)升温速率对GCGC分离影
响
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程序(chéngxù)升温对GC×GC分离速率的影响
全二维气相色谱
汇报(huìbào)人：long未来加油
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1.发展 历程 (fāzhǎn) 2.方法原理 3.方法特点 4.全二维气相色谱的调制器 5.影响因素及条件的选择 6.最新进展及应用
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1.发展 历程 (fāzhǎn)
全二维气相色谱技术(jìshù)发展历史
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2.方法原理 全二维气相色谱是把分离机理不同且互相独
Second-dimension chromatograms Stacked side by side
3.方法 特点 (fāngfǎ) （1）分辨率高、峰容量大。在一个正交的
GC×GC系统中，峰容量为其组成(zǔ 的两根柱子 chénɡ) 各自峰容量的乘积，分辨率为两根柱子各自分 辨率平方加和的平方根。可以说，GC×GC是目
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1D chromatogram At first column outlet
Modulation
Raw 2D chromatogram At second column outlet
transformation
Visualization
2D colour plot
全二维气相色谱谱图
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离的影响。但在给定的柱系统条件下，在实际样品分析中最常用的优化因素是柱 温。
核磁共振波谱-二维谱(研)归纳.ppt
演示课件
4.4.2 二维核磁共振谱的分类
15
（1）J分解谱 (J resolved spectroscopy)把化学位 移和自旋偶合的作用分辨开来，包括异 核和同核J谱。
（2）化学位移相关谱 (chemical shift correlation spectroscopy)是二维谱 的核心，通常所指的二维谱就是化学位移相关谱。
二维核磁共振谱
(2D-NMR)
化工与环境学院
2
目录
4.4.1 二维核磁共振谱基础知识 4.4.2 二维核磁共振谱的分类 4.4.3 常见二维核磁共振谱的原理及解析 4.4.4 核磁共振谱的综合解析
演示课件
NMR
射频脉 冲
一
预备期
维
实 验 过 程
检测期 （t2）
S (t2)
傅立叶 变换
S (2)
演示课件
发展期（演化期）(t1) Evolution period
混合期 Mixing period
在t1开始时由一个脉冲或几个脉冲使体系激发，此 时间系控制磁化强度运动，并根据各种不同的化 学环境的不同进动频率对它们的横向磁化矢量作 出标识。
通过相干或极化的传递，建立检测条件。
检测期(t2) Detection period
17
H（1）（δ5.85）有四个点，反 映了其分别与H（2）和H（3）耦 合，从图中可直接读出耦合常数 分别为J1,2=2Hz和J1,3=10Hz。同样 H（4）（δ4.20）与H（5） （δ1.70）耦合，有三个点， J4,5=6.5Hz；H（5）则分别与H(4) 和H（6）耦合，有9个点（其中有 两个部分重合），J4,5=6.5Hz， J5,6=8.0Hz。
topspin一维和二维实验高级版
一维和二维核磁实验进阶操作指南高级实验用户向导002版2007年7月20日完成初稿翻译向俊锋中国科学院化学研究所本手册的信息可能没有通知就发生变化。
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该手册为Peter Ziegler编写©美国麻省州Billerica BRUKER BIOSPIN公司 2006年5月16日P/N: B4722DWG-Nr.: 002内容内容 ............................... .............. .............. .. (3)第一章介绍 (6)1.1 概况 (6)1.2 免责声明 (6)1.3 警告和注意 (6)1.4 联系额外技术支持 ......................... . (6)第二章二维反相实验 (7)2.1 二维编辑HSQC .................................................................. (7)样品: (7)实验准备 (7)HSQC实验设置 (10)采样 ..................................................................... .. (11)处理 ..................................................................... .. (11)2.2 二维HMBC实验 ........................................................ (12)样品: (12)实验准备 (13)HMBC实验设置 (13)采样 (14)处理 (14)2.3 增加F1投影到HSQC等高线画图 ............ . (15)创建外部投影图谱 (16)创建画图模板 (17)第三章扩散实验 (21)3.1 介绍 ....................................................................... (21)样品: (21)实验准备 (21)参数设置 (22)采样 (24)处理 (26)计算扩散系数 (27)第四章多重谱线分析 ............................................................... .334.1 多重谱线指认 ........................................................ (33)样品: (33)实验准备 (33)采样 (34)处理 (34)多重谱线指认 (37)第五章 19F实验 (45)5.1 观测19F的硬件要求 ................................. .. (45)探头 .......................................................................... . (45)额外硬件 ....................................................... .. (45)300和400MHz系统 ...................................... (45)500MHz和更高频率谱仪 ................................................ .. (46)早期的AV系统 ................................................. .. (46)5.2 一维19F实验 ......................................................... (47)样品: ................................................................. .. (47)观测19F, 无去偶 ........................................... . (47)探索性图谱 ............................................. . (47)优化扫描范围 ................................... (49)基线校正 ................................................ . (49)观测19F，对1H去偶 ................................... (51)观测1H, 对19F不去偶 ..................................... .. (52)观测1H, 对19F进行WALTZ去偶 .............. .. (53)观测1H，对19F进行Garp去偶 (54)5.3 二维19F实验 (56)样品: ................................................................. .. (56)二维异核1H/19F位移相关 .................... (56)一维19F参比实验 ............................... . (56)一维1H参比实验 ............................. . (57)设置二维HETCOR实验 (58)第六章一维选择性 NOESY (61)6.1 介绍 ....................................................................... (61)参考图谱 ...................................................... (61)选择性激发区域设置(例子 1) ............... (63)共振模式 ........................................................ . (63)设置采样参数 ............................ (64)运行实验 ................................................. (64)选择性激发区域设置(例子2) ............... .. (65)偏离共振 ........................................................ . (65)设置采样参数 ............................ (66)运行实验 ................................................. (67)选择性激发区域设置(例子 3) ............... (68)积分区域文件 ............................................. . (68)计算选择性脉冲宽度核功率水平 .... .. (69)设置采样参数 ............................ (72)运行实验 ................................................. (72)同图输出参考和选择性NOESY图谱 (73)第七章一维选择性TOCSY (75)7.1 介绍 ....................................................................... (75)参考图谱 ...................................................... .. (75)选择性激发区域设置 .................................. (77)偏离共振 ........................................................ (77)计算选择性脉冲宽度和功率水平 .... .. (78)设置采样参数 ............................ (81)运行实验 (81)同图输出参考和TOCSY图谱......... .. (82)第八章利用成形13C脉冲一维 DEPT实验 (85)8.1 介绍 ....................................................................... (85)实验设置 (85)计算成形脉冲功率水平 (86)设置采样参数 (88)运行实验 (88)第九章利用成形13C脉冲二维HSQC实验 .................. ....... . (91)9.1 介绍 (91)参考图谱 (91)设定范围 (93)利用F1轴180度绝热反转成形13C脉冲运行二维HSQC实验 (93)采样 (95)处理 (95)第十章二维选择性HMBC实验 ......................................... .. (97)10.1 介绍 ....................................................................... . (97)参考图谱 (97)设定范围 (99)运行二维HMBC实验 (99)采样 (00)处理 (01)优化羰基区域参数 (02)设置选择性脉冲 (09)设置采样参数 (07)运行实验 (07)第一章 前言1.1一般介绍本手册为运行TopSpin的A V ANCE系统而写，因此对于某些实验，可以用做设置过程的指南。
NMR数据处理流程(BrukerX
NMR数据处理流程(BrukerXNMR图谱处理流程1H-NMR1．傅立叶变换efpL(topspin可以不用调，直接打开就行) 2．调相位1）自动调相位apk(apks)L, 自动基线校正absL 2）手动调相位单击Phase键左键拖动PH0调最大峰PH1 调距最大峰远的其它峰调好单击return键, 对话框中单击save return键如未调好单击cancel键再absL3. 单击calibrate键定标δ 1Hδ 13C 39.5水峰（约）3.30 1.56 2.8 4.8 5含TMS,定TMS为0DMSO-d6 2.50 CDCl3输出文件时要在下面的框中手动输入“plot”，后面的步骤点击“CLOSE”即可7.26单峰77.0（三重峰，强度相似）29.8 49.0 123.5 135.5 149.83.30 7.21 7.57 8.71Acetone 2.05 MeOD Pyr-d5D2O 4.80 srL,定sr为14. 单击integrate键积分左键点出，中键积分选中某一峰，点calibrate定Area为1（注意：此时不要选择溶剂的峰来定）单击return键, 对话框中单击save return键5．tL 输入名称（settiL）6. cyL看打印谱线高度，viewL7．调整图谱以显示各个峰化学位移值点utilities,再点MI，升高/压低谱线，单击return键6．7．两步骤交替进行8．单击dp1定画图区间，viewL （最后记录下其SR值）在1H-NMR和13C-NMR中，都有可能出现2个相同信号重叠的情况，此时该重叠峰的峰强度与其他相比，会显得很强！如：两个-CH3 信号重叠的时候，在1H-NMR中，其峰面积显示有6个H；而在13C-NMR中，两个C信号重叠，峰高增加约1倍。
另外，在13C-NMR中，一般峰高的高低顺序是：-CH3（伯C）＞CCH2（仲C）＞CCH（叔C）＞C（季C）杂质峰一般来讲，应该其峰面积或峰高会相对低很多，若有时候无法确定其是否是杂质信号，可先暂时不考虑（先做好记录），一边解谱一边结合实际情况！应该可以根据HSQC和HSBC来加以确证其是否为杂质峰!13C-NMR1．efpL,apk(apks)L,absL 2．单击calibrate键定标3．tL 输入名称4．cyL看谱线高度，viewL5．点utilities,再点MI，升高/压低谱线，单击return键6．单击dp1定画图区间，viewL （最后记录下其SR值）DEPT-1351．efpL,apk(apks)L,absL2．可能出现相位相反的情况（可能是因为测试的时候的模式没有矫正过来）单击Phase键手动调相位3．将sr值保持与C谱一致4．tL 输入名称5．XWIN-PLOT1）选择一维图标，打开File中dept2文件2）单击data，选择E:/ 路径，先后Append C谱和DEPT谱，再单击Apply3）右键选Edit调谱宽区间，右键选1D/2D-Edit调谱线高度COSY (TOCSY)1．xfbL,abs1L,abs2L(cosy无需调节相位) 2．edpL,将F2和F1的sr值保持与H谱一致3．XWIN-PLOT1）选择二维图标，打开File中COSY文件2）单击data，选择E:/ 路径，先后Append COSY谱和H谱，再单击Apply 3）在Edit Text键入名称（下同）4）右键选Edit调谱宽区间，右键选1D/2D-Edit出对话框，调谱线高度和相关峰高度，调好后输入Positive Base值,Total Number of(16),Increment(1.3) HSQC (相敏谱)1．xfbL,abs1L,abs2L 2．单击Phase键调相位依次选三个相关峰，右键放大，选row中键对准中心，左键点入1/2/3，左键点亮为最大峰PH0 ，另两者为PH1调好单击return键, 对话框中单击save return键；如未调好单击cancel键调好后abs1L,abs2L 3．定标(在对应的C谱下找一个C（非季C），记下精确δ值，在QC谱上找到相关峰，在contours方式下单击calibrate，中键对准中心，输入精确δ值)4．edpL,将F2一维的sr值保持与H谱(101) 一致，F1一维的sr 值与C谱一致5. XWIN-PLOT1）选择二维图标，打开File中heter文件2）单击data，选择E:/ 路径，先后Append HSQC谱、H谱、C谱，再单击Apply 3）右键选Edit调谱宽区间，右键选1D/2D-Edit出对话框，调谱线高度和相关峰高度，调好后输入Positive Base值,Total Number of(16),Increment(1.3) （当输入后出现白板面的时候――也即相关点消失，表示此时为反相位，应该将输入的Positive Base值前面的负号去掉，这时就将相位转变过来了---意思也就是说在Positive Base值前面加了一个负号，负负得正）HMBC1．xfbL,abs1L,abs2L（BC谱不用调相位，因为工作站在测试时的模式是正相位的）2．edpL, 将F2和F1的sr值保持与HSQC谱一致3. XWIN-PLOT 1）选择二维图标，打开File中heter文件2）单击data，选择E:/ 路径，先后Append HMBC谱、H谱、C谱，再单击Apply 3）右键选Edit调谱宽区间，右键选1D/2D-Edit出对话框，调谱线高度和相关峰高度，调好后输入Positive Base值,Total Number of(16),Increment(1.3) （Positive Base值的调节同HSQC一样，有时候输入最小的数的绝对值，则相关点看的比较清晰，图谱比较好看！）ROESY (相敏谱)1．xfbL,abs1L,abs2L2．edpL,将F2和F1的sr值保持与H谱一致3．同HSQC谱的方法调相位不但调row方向，还要调col方向将对角峰调为负峰(也即在调相位的时候调) 4. XWIN-PLOT1）选择二维图标，打开File中cosy文件2）单击data，选择E:/ 路径，先后Append ROESY谱、H谱，再单击Apply 3）右键选Edit调谱宽区间，右键选1D/2D-Edit出对话框，调谱线高度和相关峰高度，调好后输入Positive Base值,Total Number of(16),Increment(1.3)（这样可以将负峰不在图谱中显示出来。
Topspin结构分析工具中文版手册
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
第一章 前言
1.1 一般介绍
本手册作为 TopSpin 多重谱线分析和化学结果画图的参考资料。一旦创建，化学 结构可以和多重谱线一起显示，连接的原子可以和多重谱线相关联。
1.2 约定
字体约定
mama – 命令行键入的命令，字体为 courier 粗斜体 Analysis － 点击的命令，为 times 粗斜体 FID－文件名字为 courier name－非文件名的其它名字为 times 斜体
2
内容
第一章 前言 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
1.1 内容简介. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ………………... . . . . . . . . …5 1.2 约定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………………5
第二章 多重谱线分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……...6
2.1 自动多重谱线分析. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………...6 2.2 如何设置多重谱线选项. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……….7 2.3 连接多重谱线到分子结构上. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………………..8 2.4 进一步定义多重谱线的方法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ………..9 2.5 如何断开多层次多重谱线 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………..12 2.6 如何选择多重谱线/层次 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ………12 2.7 如何指定多重谱线. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………..12 2.8 如何定义多重谱线标识 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …………..12 2.9 如何连接/断开多重谱线 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………...13 2.10 如何移动多重谱线或多重谱线线条. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …14 2.11 如何消除多重谱线定义. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …………….14 2.12 混合多重谱线功能 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……………….14 2.13 多重谱线分析的更多信息 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ………..15
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放大缩小：用 调节
六．图谱局部放大：在图谱区域，用鼠标直接选取欲放大的区域，即可。
依次如下：
七．图谱定标：若信号与一维通道信号不对应时，可对信号进行定标。
.点定标 ，进入下图界面
.鼠标所在位置，出现红色纵横线。
选定某一信号，出现定标提示框，输入欲调整的化学位移。
点“”
八．图谱打印
.在“”－“”－中，选择模板。
——二维同核模板，适用、
——二维异核模板，适用、
.在命令栏中，输入（适用交货图谱）
或直接打印 （推荐）
.在图谱区域鼠标右键单击，如下图：
.点“”
.在正负两栏中都输入（数值可变）。
输入（数值可变）。
点“”
点“”
四．设置轴通道（一维图谱）
.回到主界面 ，
在下拉菜单中选择“”，
.如下图，在轴中输入相应一维图（氢谱或碳谱）的文件路径：
点””，保存退出。
五．轴通道信号强度调整
在二维图谱界面，轴（氢谱或碳谱通道）处有一方框(红色圈内)。
二维图谱处理方法（简化版）
一．调取数据（方法与调取氢谱相同）
现以为例。
氢谱（第一个子文件）。
（第个子文件）。
如下图：打开图谱
二．基本处理命令
在命令栏中，依次输入命令：
（、轴同时傅立叶变换）
（自动校正轴）
（自动校正轴）
（轴对称处理）——该命令在处理、时不可用！
注意：版命令栏不区分大小写。
三．增强信号处理