实验一 细菌形态观察和染色实验
细菌的形态观察实验报告
一、实验目的1. 掌握显微镜油镜的使用方法。
2. 通过观察细菌的形态结构，了解细菌的基本特征。
3. 熟悉细菌的分类方法，为后续的细菌鉴定工作打下基础。
二、实验原理细菌是微生物的一种，具有个体微小、结构简单、繁殖迅速等特点。
细菌的形态结构主要包括细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等基本结构，以及鞭毛、荚膜、芽孢等特殊结构。
通过观察细菌的形态结构，可以初步判断其种类，为后续的细菌鉴定工作提供依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阳性杆菌、革兰氏阴性杆菌。
2. 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌操作台、无菌试管、酒精灯、火柴、镊子、滴管、染色液（结晶紫、碘液、番红）等。
四、实验步骤1. 细菌涂片制作（1）取无菌试管，加入适量的细菌培养液。
（2）用无菌镊子取少量细菌培养液，滴于载玻片上。
（3）用无菌盖玻片轻轻压在细菌培养液上，使细菌均匀分布。
（4）用酒精灯对载玻片进行轻微加热，使细菌固定。
2. 细菌染色（1）用滴管滴加适量的结晶紫染液于载玻片上的细菌涂片上。
（2）染色约1分钟，然后用滴管滴加适量的碘液。
（3）染色约1分钟，用蒸馏水冲洗载玻片上的染色液。
（4）用番红染液复染约1分钟，用蒸馏水冲洗载玻片上的染色液。
3. 细菌观察（1）将载玻片置于显微镜下，调整光圈和焦距，使视野清晰。
（2）观察革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阳性杆菌、革兰氏阴性杆菌的形态结构。
（3）记录观察结果，包括细菌的大小、形状、排列方式、染色特性等。
五、实验结果与分析1. 革兰氏阳性球菌：呈球形，直径约1～2微米，排列成单行、双行或链状。
染色后，菌体呈紫色。
2. 革兰氏阴性球菌：呈球形，直径约1～2微米，排列成单行、双行或链状。
染色后，菌体呈红色。
3. 革兰氏阳性杆菌：呈杆状，直径约0.5～1微米，长度约为2～5微米，排列成单行、双行或链状。
染色后，菌体呈紫色。
4. 革兰氏阴性杆菌：呈杆状，直径约0.5～1微米，长度约为2～5微米，排列成单行、双行或链状。
实验一细菌的形态结构观察
实验一细菌的形态结构观察引言：细菌属于原核生物，是一类非常小的微生物，其形态结构一直是微生物学领域的重要研究内容。
通过观察细菌的形态结构，可以了解其生物学特性，甚至为细菌的分类和鉴定提供辅助依据。
本实验旨在通过显微镜观察、绘制不同种类细菌的形态特征，并对其进行描述和分析。
材料和方法：1.细菌样本：从环境中采集的细菌样本，使用无菌技术制备细菌涂片；2.显微镜：高性能光学显微镜；3.其他实验工具：无菌培养皿、无菌移液器、无菌盖玻片、无菌镊子等。
实验步骤：1.细菌准备：在无菌实验台上，取一块无菌盖玻片，用无菌镊子取一小滴待观察的细菌悬浮液在盖玻片上；2.细菌涂片制备：将另一块无菌盖玻片，倾斜放在含细菌悬浮液的盖玻片上，使两个盖玻片接触并自然扩散，制备细菌涂片；3.固定细菌：将细菌涂片在微火上加热，使细菌固定在玻片上；4.染色：将固定的细菌涂片浸入甲醇中进行固定，并在甲醇中静置3-5分钟；5.除染：将固定染色的细菌涂片置于水龙头下轻轻冲洗，冲洗到水清澈；6.贴片：将染好的细菌涂片倒置在无菌盖玻片上，用手指轻轻压实；7.观察：将贴好的细菌涂片放在显微镜下，逐个观察细菌的形态结构；8.绘制：选取有代表性的细菌形态，在实验记录本中进行绘制和注释。
结果和讨论：通过以上实验步骤，我们观察到了不同细菌的形态结构，如以下几个典型细菌的形态特征描述。
1. 球菌（cocci）：球形或近球形的单细胞菌，如葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
形态特征：球形，直径约0.5-1微米，聚集在一起呈葡萄状、串珠状。
2. 杆菌（bacilli）：长形的单细胞菌，如大肠杆菌（Escherichia coli）。
形态特征：长棍状，直径约0.5-1微米，长度约2-6微米。
3. 弯曲菌（spirilla）：弯曲或螺旋形的细胞，如鲍曼不动杆菌（Vibrio cholerae）。
形态特征：螺旋形，直径约0.5-1微米，长度约2-6微米。
细菌的革兰氏染色和形态观察
可用伊红、酸性复红或刚果精红选等ppt课酸件性染料染色。
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二、实验原理---简单染色
• 染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀 死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其 对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定 两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形。
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二、实验原理---革兰氏染色
• 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染色 法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
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2. 革兰氏染色
2、干燥与固定：方法同（一）中2，3 步骤
3、染色：
结晶紫染色1-2分钟--水洗--碘液媒 染1-2分钟--水洗--酒精脱色15-20秒-水洗--番红复染色2-3分钟--水洗-干燥--镜检记录。
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染色结果
金黄色葡萄球菌精革选p兰pt课氏件 染色结果
实验一 细菌的革兰氏染色和 形态观察
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1
球菌
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杆菌
2
弧菌
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3
实验一 细菌的革兰氏染色和形态 观察
• 一、实验目的
• 1、掌握无菌操作技术和细菌抹片的制备方法 • 2、学习掌握单染色的操作技术 • 3、了解革兰氏染色机理，并掌握其操作技术 • 4、 熟悉显微镜的使用、学习并掌握油镜的原
• 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性 和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结 构和组成不同决定的。
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二、实验原理---革兰氏染色
细菌形态观察实验报告
一、实验目的1. 掌握显微镜油镜的使用方法。
2. 观察细菌的基本形态结构，如细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等。
3. 了解细菌的特殊结构，如鞭毛、荚膜、芽孢等。
4. 培养对细菌形态结构的识别能力。
二、实验原理细菌是单细胞微生物，具有多种形态结构。
通过显微镜观察，可以了解细菌的基本形态和特殊结构，为细菌的分类、鉴定和致病性研究提供依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细菌样本、革兰氏染色液、芽孢染色液、水浸片、盖玻片、载玻片等。
2. 仪器：光学显微镜、酒精灯、载物台、切片刀、镊子等。
四、实验步骤1. 观察细菌样本（1）将细菌样本滴在载玻片上，用盖玻片封口。
（2）在显微镜下观察细菌的基本形态结构，如细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等。
2. 革兰氏染色（1）将革兰氏染色液滴在细菌样本上，用酒精灯加热。
（2）观察染色后的细菌，判断其革兰氏分类。
3. 芽孢染色（1）将芽孢染色液滴在细菌样本上，用酒精灯加热。
（2）观察染色后的细菌，判断其芽孢存在与否。
4. 观察细菌特殊结构（1）观察细菌是否有鞭毛、荚膜等特殊结构。
（2）通过水浸片观察细菌的运动。
五、实验结果与分析1. 细菌样本的基本形态结构（1）观察到的细菌具有细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等基本结构。
（2）部分细菌具有鞭毛、荚膜等特殊结构。
2. 革兰氏染色结果（1）部分细菌呈现革兰氏阳性，细胞壁较厚，不易着色。
（2）部分细菌呈现革兰氏阴性，细胞壁较薄，易着色。
3. 芽孢染色结果（1）部分细菌存在芽孢，呈圆形或椭圆形。
（2）部分细菌无芽孢。
4. 细菌特殊结构观察结果（1）部分细菌具有鞭毛，呈螺旋状。
（2）部分细菌具有荚膜，呈透明状。
六、实验总结1. 通过本次实验，掌握了显微镜油镜的使用方法。
2. 观察了细菌的基本形态结构和特殊结构，了解了细菌的生物学特性。
3. 培养了对细菌形态结构的识别能力，为今后的学习和研究奠定了基础。
七、注意事项1. 使用显微镜时，注意调节光圈和焦距，确保观察清晰。
微生物学实验一、细菌的革兰染色、特殊形态观察、细菌分布
革兰阳性菌与阴性菌细胞壁的比较
细胞壁 质地 厚度 肽聚糖层数 肽聚糖含量 糖类含量 脂类含量 磷壁酸 外膜
G+菌 坚韧 20-80nm 15-50 50-80%（干重） 约45% 1-4%
+ —
G-菌 疏松 10-15nm 1-2 5-20%（干重） 15-20% 11-22%
实验结果
（1） 绘图：画出大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的细胞 形态图。如果染色结果不理想，请分析原因。 （2） 思考: 进行革兰氏染色的意义?
细菌的基本结构
一、细胞壁 二、细胞膜 三、细胞质 四、核质
细菌的特殊形态结构
• 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各 种极端环境。
• 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 • 鞭毛：运动，菌落形态。
实验一、细菌的革兰染色、特殊形态观察、细菌分布
实验目的
• 学习细菌的革兰氏染色原理和方法
• 了解细菌的特殊形态结构： 荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢
• 了解细菌在环境(空气、污水),人体(皮肤、 口咽腔)中的分布
革兰氏染色法基本原理
• 革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家 C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有 的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏 阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的 鉴别染色法。 G+ -紫色 G- - 红色
细菌荚膜的观察
主要成分是多糖、 多肽或蛋白质， 尤以多糖居多。
荚膜
细菌鞭毛的观察
菌毛
芽胞
肉毒梭菌
破伤风芽孢杆菌
了解细菌在环境中的分布 空 气: 每组一个琼脂培养皿 污 水: 每组一个琼脂培养皿
了解细菌在人体中的分布 皮 肤: 2人一个琼脂培养皿红 1min——水洗
微生物学实验报告
微生物学实验报告实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察第一部分：显微镜的使用一、目的要求1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。
2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。
3．了解各种显微镜的主要特征。
二、实验原理（一）光学显微镜的构造微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。
1、机械部分普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。
2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。
（二）放大倍数标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。
总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。
物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。
显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。
分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。
因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。
R=0.61λ/N.A式中：R-----分辨距离；λ------作用光的波长；N.A------数值口径。
一些介质的折射率介质折射率空气水玻璃香柏油1 13 55 1.56三、实验内容（一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。
（二）方法：细菌很小，须使用油镜方可观察到。
油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法：1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。
2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。
在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。
然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。
细菌的形态观察实验报告
细菌的形态观察实验报告细菌的形态观察实验报告一、实验目的1.学习并掌握细菌的基本形态和观察方法。
2.通过实验，提高自己的实验操作能力和显微镜使用技巧。
二、实验原理细菌是一种单细胞生物体，具有多种形态和类型。
根据细菌的形态和结构特征，可以将其分为球菌、杆菌和螺旋菌等。
本实验将通过显微镜观察不同类型细菌的形态和结构特点，以加深对细菌的了解。
三、实验步骤1.准备实验材料：显微镜、细菌样品（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、乳酸菌等）、细菌染色液、载玻片、盖玻片。
2.将细菌样品分别涂抹在载玻片上，用染色液进行染色。
3.用显微镜观察不同类型细菌的形态和结构特点，并记录观察结果。
4.清理实验器材，包括显微镜、载玻片、盖玻片等。
四、实验结果及分析1.实验结果（见下表）通过观察不同类型细菌的形态和结构特点，可以发现以下规律：（1）球菌：呈球形或近似球形，直径大小不一，无芽孢和鞭毛。
其中，葡萄球菌属的细菌菌落较大、隆起、边缘整齐，呈金黄色；链球菌属的细菌菌落较小、平坦、边缘不整齐，呈灰白色。
（2）杆菌：呈圆柱状或略扁，有长、短鞭毛。
其中，大肠杆菌的菌落较大、湿润、有光泽，边缘整齐；沙门氏菌的菌落较小、干燥、无光泽，边缘不整齐。
（3）螺旋菌：呈螺旋状或弯曲状，有鞭毛。
其中，幽门螺杆菌呈螺旋状，长可达6μm，有4-8根鞭毛。
此外，从实验结果还可以看出，不同类型细菌的形态和结构特点存在差异，这与其生物学特性和适应环境的能力密切相关。
例如，大肠杆菌是肠道中的主要菌群之一，其形态和结构特点使其能够在肠道中生存和繁殖；金黄色葡萄球菌是一种常见的化脓性球菌，其形态和结构特点使其具有较强的致病性；乳酸菌则是一类与人体健康密切相关的益生菌，其形态和结构特点使其能够在肠道中定植并发挥重要作用。
五、结论总结通过本次实验，我们观察了不同类型细菌的形态和结构特点，了解了细菌的基本形态和观察方法。
同时，实验过程中也锻炼了自己的实验操作能力和显微镜使用技巧。
细菌的形态结构观察和染色
油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。 当光线由反光镜通过玻片
与镜头之间的空气时，由 于空气与玻片的密度不同， 使光线受到曲折，发生散 射，降低了视野的照明度。 若中间的介质是一层油 （其折射率与玻片的相 近），则几乎不发生折射， 增加了视野的进光量，从 而使物象更加清晰。
.
基本原理
(一)简单染色法原理 (二)革兰氏染色法原理 (三)抗酸染色原理 (四)芽孢染色原理 (五)荚膜染色原理 (六)鞭毛染色原理
5. 用低倍物镜，旋转粗调和微调
作。
来进行对焦。
12. 观察完毕，下降载物台，取下载物台上
6. 调节双目镜筒间距和视度差。
的载玻片，将4×的目镜对准载物台，
7. 再适当调节照明度。
再用擦镜纸擦去镜头上的油，然后用擦
8. 8. 9.
使焦点正确地对准标本。 调节孔径光阑。 依次用低、中、高倍镜观察。
镜纸沾取少量乙醇/水擦去残留的油， 最后用擦镜纸擦去残留的乙醇/水。
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奥林帕斯生物显微镜的使用方法
1. 接通电源。 2. 打开主开关。
10. 油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后， 下降载物台，在标本中央滴一滴香柏油， 使油镜镜头浸入香柏油中，再细调至看
3. 转动光强调节钮，使亮度适中。 清物象为止。
4. 把标本固定在载物台上。
11. 换片：另换新片，必须从第9条开始操
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实 验 材 料Ⅰ
(一)菌种
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。
(二)染液
1.简单染色：草酸铵结晶紫染液。 2.革兰氏染色：草酸铵结晶紫染液、革氏碘液、 95％乙醇、蕃红染液。
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实验材料Ⅱ
(三)标本
细菌三型、四联球菌、荚膜、芽孢。
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四、操作步骤
涂片 涂成薄膜
现场演示
自然干燥
干燥
1-2min
Hale Waihona Puke 固定1min通过火焰2～3次
结晶紫初染
碘液媒染
2min
乙醇脱色
至流出的乙醇无紫色
番红复染
油镜镜检观察。
混合涂片涂色
按上述方法，在同一载玻片上， 以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡 萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。
注意：
五、实验报告
结果 列表简述3 株细菌的染 色观察结果。 画出各菌的 形状和革兰 氏染色颜色 反应。
金黄色葡萄球菌(G+)
变形杆菌(G-)
枯草芽孢杆菌(G+)
大肠杆菌(G-)
六、思考题
你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果
的正确性？其中最关键的环节是什么？ 现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的 粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。 你怎么运用大肠杆菌来证明结果的正确 性？ 热固定的目的是什么？
1 载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌 不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚； 2 热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破 坏细胞形态； 3 染色时，每一步骤后都要立即水洗； 4 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革 兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性 菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误 染成阴性菌，脱色时间一般20～30S。
原理
细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类 脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、 网状结构孔径缩小，透性降低，结 晶紫—碘的复合物仍保留在细胞内 细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高， 乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细 胞壁透性增大，结晶紫—碘的复合 物较易洗脱出来
三、器材
菌种 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物， 金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物， 枯草芽孢杆菌12～24h营养琼脂斜面培养物。 染色剂 革兰氏染色液。 仪器或者其他用具 显微镜，酒精灯，载 玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二 甲苯），擦镜纸，生理盐水等
实验一
细菌形态观察和染色实验
一、目的要求
学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操 作技术; 初步掌握革兰氏染色法; 巩固显微镜（油镜）的使用方法; 初步认识细菌的形态特征。
二、基本原理
革兰 氏染 色程 序 革兰 氏阳 性菌 (G+) 革兰 氏阴 性菌 (G-) 结 晶 紫 初 染 蓝 紫 色 蓝 紫 色 碘 液 媒 染 蓝 紫 色 蓝 紫 色 乙 醇 脱 色 蓝 紫 色 无 色 番 红 复 染 蓝 紫 色 红 色 最 终 结 果 蓝 紫 色 红 色