人类性染色质检查与观察
人类X-染色质的观察

实验材料与药品
材料:女性口腔颊部粘膜细胞( 材料:女性口腔颊部粘膜细胞(用牙 签刮取) 签刮取) 试剂:,1NHcl,2%硫堇 试剂: %
实验步骤
取材
牙签刮取口腔粘膜 细胞, 细胞,涂于洁净 的载玻片, 的载玻片,凉干 或烘干( ℃ 或烘干(40℃)
解离
加入1NHCl水解 加入 水解 10min(37-40℃) ℃
漂洗
流水淋洗、 流水淋洗、凉干
漂洗
染色
2%硫堇染色 % 15min(室温) (室温)
观察
流水淋洗、 流水淋洗、烘干 或自然干燥
作业
• 绘制粘膜细胞、指出X-小体 绘制粘膜细胞、指出 小体
人类X-染色质的观察 人类 染色质的观察
•
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验步骤 作业
•
•
•
•
实验目的
初步掌握观察和鉴别X-染色质的简 初步掌握观察和鉴别 染色质的简 易方法,识别其形态特征和所在部位。 易方法,识别其形态特征和所在部位。
•
实验原理
• 人类正常染色体组成: 人类正常染色体组成:男性为 22AA+XY;女性为 女性为22AA+XX性染色体。女 性染色体。 女性为 性染色体 性的两条X染色体,在间期有一条呈异固缩 性的两条 染色体, 染色体 形式,保持高度浓缩状态, 形式,保持高度浓缩状态,因此易于用适 当的染料加以显示, 当的染料加以显示,成为便于观察的性染 色质( 小体 小体, 氏小体)。 色质(X-小体,Barr氏小体)。 氏小体
人的X染色质的观察

作业:
绘出所观察到的Barr氏小体
Lyon假说
2、失活是随机的。 3、失活发生在胚胎发育的早期。例如:人类在胚胎发育
的16天X染色体一条发生失活。某一细胞的一条X染色
体一旦失活,这个细胞的所有后代细胞中的该X染色 体均处于失活。
4、杂和体雌性在伴性基因的作用上是嵌和体(mosaic)
----某些细胞中来自父方的X染色体上的基因表达,某 些细胞中来自母方的X染色体上的基因表达。
2.发根细胞的Barr氏小体显示方法。
用拔取女性带毛囊细胞的头发,将毛囊置于载 玻片上,加一滴95%乙醇:浓盐酸解离5分钟,吸 掉多余的解离液,用镊子将软化的毛囊剥下,加一 滴卡宝品红染色10分钟,而后盖上盖片,用拇指 压片,即可镜检。
X染色质的辨认:
低倍镜下检出典型的可数细胞,其标 准是①核质呈网状或细颗粒状分布;②核 膜清晰、核无缺损;③染色适度;④周围 无杂菌。选定后的细胞在高倍镜或油镜下 进一步检查,X染色质的形态一般表现为 一个结构致密的浓染小体,轮廓清楚,大 小约1u左右,常附着于核膜边缘或靠近内 侧,其形态有微凸形,三角形、卵形、短 棒形及双球形等。
实验八 人类X染色质的观察
和果蝇唾腺染色体观察
人类X染色质的制备与观察 果蝇唾腺染色体观察
X染色质的发现
早在1949年Barr等人发现在雌性猫的神经细胞 间期核中有一个染色很深的染色质小体,而雄 性猫中没有。 由于这种染色质小体与性别及其X染色体数目 有关,所以也称为性染色质小体(sex chromatin body),又名巴氏小体(Barr body) 是失活的异固缩状态的X染色质,并发现它属 延迟复制的染色体。X小体的数目在正常女性 中是性染色体数目减去一。经观察,X小体一 般1-1.5微米,呈三角形或卵圆形,出现频率 是13-39%(男性的频率为1-2%)。
人类性染色质标本的制备和观察

实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
(1)正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性,另 一条X染色体在遗传上是失活的,在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
(2)X染色体失活发生在胚胎早期。 (3)X染色体失活的随机性和恒定性。
实质:失活的X染色体 意义:X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
1、几对基本概念 染色质——染色体 常染色质——异染色质 常染色体——性染色体
实验一
内容步骤
实验一
(一)性染色质的定义及形成机制
1、几对基本概念
性染色质(sex chromatin):
在间期细胞核中性染色体的异染色质部分显示出 来的一种特殊结构,包括X染色质和Y染色质 。
内容步骤
(一)性染色质的定义及形成机制
隐性
紧貼脸颊 不能
无 拇指第一节向指背弯曲
较无名指短 无(单眼皮)
无 左手拇指在上
实验一
课后作业
1、绘制人类口腔黏膜上皮细胞(示X染色质) 2、自学理论书P114-115遗传平衡定律及遗传
平衡群体的判断,判定是否为平衡群体。
实验一
预习
实验二:人类染色体核型分析 (实验指导:P59;P62) 准备:非显带核型的照片染色体剪下
实验一
基因
tt Tt TT
实验一
(三)PTC尝味实验:
1、原理 人类味觉对苯硫脲(又称苯基硫代碳酰二胺,
PTC)的敏感性由一对等位基因(T、t)控制,属不 完全显性遗传。基因型不同的个体尝出含PTC溶液的 浓度有明显的差异。
6 7 10 11
①②③ ④
tt
人类性染色质标本的制备和观察

内容步骤
实验一
(二)X染色质标本的制备与观察
1、制作过程: 取材(漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本) → 涂片 → 染色(滴1~2滴染液) → 盖片(染色5-8min) → 压片(吸去多余染液) → 镜下观察
2、观察(高倍镜)
实验一
1、几对基本概念 2、X染色质形成机制——Lyon假说
实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
(1)正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性,另 一条X染色体在遗传上是失活的,在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
(2)X染色体失活发生在胚胎早期。 (3)X染色体失活的随机性和恒定性。
实质:失活的X染色体 意义:X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
(2)识别X染色质的标准:(高倍镜下) 位置:紧贴核膜内侧缘,轮廓清楚,唯一深染的小体 大小:直径为1-1.5um,即小于核直径的1/10 形态:一般为平凸形,三角形或为卵圆形
实验一
内容步骤
实验一
(二)X染色质标本的制备与观察
1、制作过程: 取材(漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本) → 涂片 → 染色(滴1~2滴染液) → 盖片(染色5-8min) → 压片(吸去多余染液) → 镜下观察
人类性染色质标本的制备、 分析和PTC尝味实验
实验一
目的与要求
1. 掌握:人类间期细胞核中性染色质的形成 机制。(重点,难点)
2.熟悉:X染色质标本的制作方法;熟悉人类 间期细胞核中性染色质的形态特征和分布。
3.了解: PTC尝味实验方法及这种单基因遗传 性状的遗传规律。
内容步骤
人类X染色质(巴氏小体)制备与观察

⼈类X染⾊质(巴⽒⼩体)制备与观察⼈类X染⾊质(巴⽒⼩体)的制备与观察摘要巴⽒⼩体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染⾊体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态,贴近于核膜边缘的染⾊⼩体,在遗传学、细胞观察⽅⾯有重要意义。
实验中作者取⼈⼝腔颊部上⽪细胞与发根⽑囊细胞进⾏硫瑾染⾊操作,通过显微观察对巴⽒⼩体进⾏识别与计数,描述巴⽒⼩体的形态,并统计其在不同性别⼈体细胞中的出现率。
引⾔在哺乳动物体细胞间期细胞核中,除⼀条X染⾊体外,其余的X染⾊体失活并呈异固缩状态,此即为巴⽒⼩体。
⼜称X⼩体、性染⾊质,直径约1µm,通常位于间期核膜边缘。
1949年,加拿⼤学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现⼀种染⾊很深的⼩体,⽽在雄性猫中则极少出现[1]。
通常⼈类男性细胞核中很少或没有巴⽒⼩体,⽽⼥性有1个,性染⾊体异常的患者如XXY、XXYY、XXX、XXXY等,巴⽒⼩体的数量=X染⾊体数量-1。
综合巴⽒⼩体与哺乳动物性染⾊体的剂量补偿效应,Lyon M.F 于1961年提出Lyon 假说,主要内容有:(1)正常的雌性哺乳动物两条X染⾊体只有⼀条在遗传上有活性,另外⼀条失活;(2)X染⾊体失活是随机的。
因此表达是随机的,结果在杂合⼦中会出现嵌合现象(mosaic)。
例外:有袋类失活的X染⾊体全部是⽗⽅的。
(3)失活发⽣在胚胎发育的早期,如⼈在受精后的16天(5000-6000个细胞时)。
⼀个细胞的⼀条染⾊体⼀旦失活,这个细胞的后代细胞中该染⾊体均失活。
Lyon假说虽然可以解释⼀些问题但不是全部,如⼈类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着⽣物学和医学的发展⼈们已经认识到单条X染⾊体失活现象是普遍存在的,但失活的染⾊体上存在失活区和⾮失活的。
如⼈类中位于X染⾊体上的基因,G6PD(葡萄糖-6磷酸脱氢酶)、AHF(抗溶⾎第Ⅷ因⼦)等是⾮失活的,⽽Xg⾎型基因是失活的。
性染色质:人体X-染色质观察

四、实验用具药品
1.仪器用具:显微镜、载玱片、盖玱片、剪刀、镊子、 酒精灯、牙签 2.药品试剂:改良品红、醋酸洋红、50%醋酸、蒸
馏水
8/20
性染色质:人体X-染色质观察
五、实验步骤:
1.口腔颊部粘膜细胞的观察 用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮粘膜细胞,在 原位刮取2-3次,分别涂抹在干净载片上,待稍干后, 滴加1-2滴1%醋酸洋红染液,常温下染色2-5分钟,勿 使干燥,压片后镜检。 要点:先漱口
五、实验步骤:X-染色质的辨认
低倍镜下检出典型的可数细胞: 标准:A、核质呈网状或细颗粒状分布;B、核膜清晰, 核无缺损;C、染色适度;D、周围无杂菌; 高倍镜下观察:1、核膜内侧边缘;2、核仁附近;3、 染色质中间游离部位。(正常女性口腔粘膜细胞中约 30-50%有一个Barr小体。在丌同实验室中计数的差 别较大,而在男性中则仅只偶尔可见丌典型者——这 是环境引起代谢的暂时现象,约2%以下)
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性染色质:人体X-染色质观察
二、实验原理:
X染色体失活假说:在正常的雌性哺乳动物的体细胞 中,一条X染色体在遗传上有活性,而另一条处于失 活状态。这种失活发生在胚胎发育的早期,失活是随 机的。
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性染色质:人体X-染色质观察
三、实验材料 :
上皮粘膜细胞、带有毛根的头发
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人类性染色质小体的制备和观察

箭头所示为巴氏小体(女性细胞[左]中存在,男性细胞[右]中没有)
六、注意事项
1.在实验中取材时应该注意安全; 2.如果用毛囊细胞进行试验,采样前应清 洗头发,因出油后拔漱口数次,用洁净牙签 从女性口腔两侧刮取粘膜,原位刮2~3次, 第1次舍去,第2,3次分别涂于干净载玻片 上。 固定:口腔粘膜细胞加入新配置的固定液 (95%乙醇:冰醋酸=3:1),固定30min (固定液勿干)以上,空气干燥。
3)染色、制片 滴加染液,室温10min(勿干); 在95%的酒精中分色1-3分钟; 在无水乙醇中继续分色两次,每次1分钟 用二甲苯透明两次,每次约3分钟; 加盖玻片,压片。
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构,是1条X染 色体呈异固缩状态所形成,各实验室所统计的观察率不尽 相同,从30%一50%不等,有些实验室中在男性的细胞 中发现X小体有2%的出现率,但小体结构不规范、典型。 巴氏小体常位于核膜内侧。直径为1μm左右,其形状有微 凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意 巴氏小体与细胞的比例。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体,而正常男性细 胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存 在。
2)固定 口腔粘膜细胞加入新配置的固定液(95% 乙醇:冰醋酸=3:1),固定30min以上,空 气干燥。
2)固定 毛囊细胞-拔取一根毛根比较大的毛发,在一张干 净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸,静置约5分钟, 待毛根稍软后,用镊子尖把外层毛囊的组织细胞 轻轻刮下,弃去毛干。将细胞用解剖针在载玻片 上均匀摊平,并在空气中晾干。 实验改进意见:拿起上述发根的梢部,将其上毛 囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的 目的。(若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下,可造 成细胞的堆积,同样会出现多层细胞的现象。1根 发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上,以达到 充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清 晰的单层涂布细胞,便于观察统计。)
人体X-性染色质的观察一

6、Barr小体大小、形态、位置:
X-染色质的形态表现为一结构致 密的浓染小体,轮廓清楚。
大小约1μ m左右。 常附着于核膜边缘或靠近内侧。
形状有微凸形(馒头形)、 三角形、卵形、短棒形(长方形)、 圆球形等。
7、鼓槌状突出物
在血液的多形核白细胞分裂形成过 程中,裂出形成有一细缝连结的鼓槌 状突出物( Barr小体)。
8、性别异常
正常女性口腔粘膜细胞中约有3050%的Barr小体。
男性中偶尔可见不典型者。大于3% 即性别异常。
Y小体:
用 荧 光 染 料 如 盐 酸 阿 的 平 、 QH 染色后,可在间期核中看到一个直 径约0.3微米的强荧光小体,即 Y小 体
或在中期核中看到Y染色体的长 臂发出强荧光。
三、实验步骤
一实验目的1通过实验初步掌握观察与鉴别x染色质的简易方法识别其形态特征及所在部位
实验四、人体X-性染色质的观察
一、实验目的 1、通过实验初步掌握观察与鉴别X-染
色质的简易方法,识别其形态特征及所在 部位。
2、为进一步研究人的染色体畸变与疾 病(性别异常)、鉴别胎儿性别(羊水细 胞涂片)提供参考条件。
1、核质呈网状细颗粒状分布; 2、核膜清晰,核膜无破损; 3、染色适度; 4、周围无杂菌。
四、作业
绘制口腔粘膜细胞图,示X-染色 质的形状和部位。
Hale Waihona Puke 二、实验原理1、性染色体:和性别决定有明显的
直接关系的染色体。
2、性染色质发现: 1949年Barr等发现,在雌猫的神经 细胞核内有一个凝缩的深染小体, 在雄性的细胞中没有。
3、X-性染色质形成:
进一步了解到,雌体细胞中的两 条X-染色体在间期时有一条处于凝集 而不活跃的状态(异固缩状态),形 成明显的染色中心,染色中心这就叫 X-性染色质、 又叫Barr小体。
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注意事项
用清水漱口,用牙签钝头刮口腔颊部黏膜 甲醇冰醋酸固定液要现用现配。 染色缸中固定液体积为2/3,用手拿出时 注意不要碰到液体。 注意固定和染色时间 注意在标本面做好标记 染液不要滴在实验台上
作业
两人一组作一张x染色质标本 绘两个间期核中X染色质图
最后一次试验课要交如下材料
人类性染色质检查与观察
实验目的
了解人类间期细胞核中X染色质和Y染色质 的检查方法及意义
实验原理
人类女性口腔粘膜细胞的核膜内缘常可发 现一个浓染小体,而正常男性则无。这一 浓染小体是一条X染色体失活异固缩形成 的,现在通称为X染色质或X小体。男性间 期细胞核中经特殊染色方法染色后在荧光 显微镜下可见一个0.3µm的强荧光小体, 为Y染色体长臂末端被荧光染料着色而成, 称为Y染色质。X染色质和Y染色质的检查 可作为性别测定的依据和性染色体数目异 常的一种辅助诊断方法。
仪器、材料
显微镜、染色缸、载玻片 试剂
实验步骤
X染色质制片与观察 1女性口腔粘膜细胞制片:清水漱口,用牙签的 钝头刮口腔颊部黏膜,将刮起的细胞均匀涂布在 干净的载玻片中间,不等晾干,立即将涂片放入 甲醇:冰醋酸=3:1的固定液中固定15分钟,晾 干,染色。 2染色:在涂片处加上数滴硫堇染液,染色5-10 分钟,用水冲洗,晾干,镜检。 3观察:用低倍镜观察紫蓝色的细胞核,看清楚 间期核的形态特征,找到X染色质。X染色质一般 紧贴在细胞核核膜内缘,大约1-1.5µm,染色深, 常呈三角形、馒头形、梭形或其他形态。
试验报告 性染色质标本 预习试验报告 实验考试
实验考试题
染色体标本制备时,低渗与固定有何意义? 试述核型分析时应注意哪些问题? 某男性口腔粘膜细胞检查X染色质和Y染色 质均为阳性,试分析其核型。