直链淀粉含量检测试剂盒说明书 微量法
稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法
稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法稻米是人们日常饮食中的主要粮食之一，其中淀粉含量是稻米质量的重要指标之一。
淀粉是稻米中主要的营养成分之一，占据着稻米的70-80%。
稻米的淀粉类物质主要由直链淀粉和支链淀粉两部分组成，其中直链淀粉对于粘稠性、透明度等特性有着很重要的作用。
因此，对稻米的直链淀粉含量的快速准确检测是非常必要和重要的。
近年来，针对稻米淀粉的高通量快速检测方法得到了很多研究，如色团分析法、紫外吸收法、气相色谱法等。
然而，这些方法都存在着使用成本高、检测时间长等缺点。
因此，开发一种简单、高效、快速的稻米直链淀粉含量检测方法显得尤为重要。
文献[1]提出了一种96微孔高通量快速测定稻米直链淀粉含量的方法。
该方法通过粉碎样品、溶解蛋白质、酶解淀粉、去除支链淀粉等步骤得到稻米的直链淀粉含量。
具体实验步骤如下：1.稻米样品的制备将稻米样品在冷水中浸泡12小时，去除表面的泥沙及杂质，然后将稻米样品放置在恒温恒湿条件下（30℃、85%RH）等到含水率达到12%左右。
将样品磨成粉末备用。
2.酶解淀粉将0.03g的淀粉酶和0.05g的细胞壁水解酶混合加入到含10mg/ml的氯化钠的100μL 稻米粉中，使其在55℃恒温振荡水浴中酶解4小时。
3.去除支链淀粉将样品加入到350μL的甲醇水溶液中，并在80℃下加热20分钟以去除支链淀粉。
4.准备直链淀粉底物将2.5g的淀粉加入到25mL的70%乙醇中，在70℃下振荡水浴30分钟后离心去除淀粉沉淀，剩余的上清液即为直链淀粉底物。
5.测定样品淀粉酶切产物将稻米样品酶解产物用GenePulser II电穿孔仪处理5次（1秒数据，50毫秒间隔），每次电压为800V）以将淀粉产物中的聚合物分解为短链淀粉分子。
6.测定反应体系中的直链淀粉将测定样品和直链淀粉底物加入到含有10毫摩尔的钠磷酸缓冲液和5毫摩尔的钙离子的反应体系中，振荡水浴1小时后加入3%的硝苯地平停止反应。
稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法
稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法摘要直链淀粉是稻米中的主要成分之一，对其含量进行快速准确测定对于粮食加工和生产具有重要意义。
本研究针对传统测定方法耗时长、操作复杂的问题，利用96孔微孔板结合酶联免疫吸附法（ELISA）建立了一种高通量、快速准确的稻米直链淀粉含量测定方法。
该方法利用96孔微孔板对样品进行处理，结合ELISA技术进行定量分析，具有较高的准确性和重复性。
本方法为稻米直链淀粉含量的快速测定提供了一种新的选择，适用于大批量样品的检测，具有良好的应用前景。
关键词：稻米；直链淀粉；96孔微孔板；酶联免疫吸附法；快速测定方法1. 介绍稻米是世界上最主要的粮食作物之一，其主要成分包括淀粉、蛋白质、脂肪等。
淀粉是稻米中的主要成分之一，直链淀粉是淀粉的主要形式之一，其含量直接影响着稻米的品质和加工性能。
对稻米直链淀粉含量进行快速准确测定具有重要意义，对于粮食加工和生产具有重要意义。
目前，常用的测定稻米直链淀粉含量的方法主要包括化学方法和物理方法。
化学方法包括光学方法、酶法和色谱法等，这些方法操作繁琐，耗时较长；物理方法则主要通过显微镜观察淀粉颗粒的形态和大小来估算含量，这种方法缺乏定量性能。
研发一种高通量、快速准确的稻米直链淀粉含量测定方法具有重要的研究意义和应用价值。
酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，具有快速、灵敏、特异性强的优点。
结合96孔微孔板可以进行高通量的样品处理，能够同时操作多个样品，具有很高的效率。
利用96孔微孔板结合ELISA技术进行稻米直链淀粉含量测定具有很大的潜力。
本研究旨在建立一种高通量、快速准确的稻米直链淀粉含量测定方法，为粮食加工和生产提供新的技术手段，具有重要的应用前景。
2. 实验方法2.1 样品的制备取稻米样品，去除杂质，磨碎成细粉。
2.2 酶联免疫吸附法（ELISA）将制备好的稻米细粉样品加入96孔微孔板中，加入适量的酶联免疫吸附试剂，进行孵育反应。
稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法
稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法稻米直链淀粉含量是衡量稻米品质的重要指标之一。
传统的测定方法通常采用化学方法，操作复杂、耗时耗力。
近年来，随着高通量技术的迅速发展，研究人员提出了一种96微孔高通量快速测定方法，可以更快、更准确地测定稻米直链淀粉含量。
该方法的关键步骤如下：1. 样品准备：将稻米样品磨成细粉，并通过筛网过滤，获得均匀的颗粒大小。
2. 酶解反应：将样品加入含有α-淀粉酶的酶解液中，进行酶解反应。
酶解反应可以将稻米中的淀粉分解成葡萄糖。
3. 试剂加入：将酶解反应后的样品转移到96孔板中，再加入含有葡萄糖酸氧化酶的试剂。
葡萄糖酸氧化酶可以将葡萄糖氧化成葡萄糖酸。
4. 反应发色：加入发色试剂，在发光底物的催化下，葡萄糖酸和发色试剂发生反应，产生可见光吸收或荧光。
5. 读取测量：使用96孔高通量读板仪读取每个孔的吸光度或荧光值，并根据标准曲线计算出样品中的直链淀粉含量。
与传统的测定方法相比，该方法具有以下优点：1. 96微孔高通量：使用96孔板进行测量，大大提高了测量效率。
2. 快速测定：整个测定过程只需要几个小时，操作简便、快速。
3. 准确性高：通过标准曲线计算出的直链淀粉含量更加准确。
4. 高通量：每次可以同时测量多个样品，适用于大规模稻米样品的测定。
该方法已经在实际应用中得到验证，并取得了良好的测定结果。
除了稻米直链淀粉含量的测定，该方法还可以应用于其他粮食或食品中直链淀粉含量的测定。
96微孔高通量快速测定方法为稻米直链淀粉含量的测定提供了一种快速、准确、高效的新途径，可以在食品品质控制和加工过程中起到重要作用。
该方法的应用也可以推动高通量技术在食品领域的发展和应用。
MM FS CNG 稻米直链淀粉含量的测定
MMFSCNG0181 稻米 直链淀粉 分光光度法MM_FS_CNG_0181稻米直链淀粉含量的测定1.适用范围本方法适用于稻米直链淀粉含量的测定。
4.原理概要将大米粉碎至细粉以破坏淀粉的晶形结构，使其易于完全分散及糊化，并对粉碎试样脱脂，脱脂后的试样在氢氧化钠溶液中分散，向一定量的试样分散液中加入碘试剂，在620nm处测定所形成的复合物的吸光度。
考虑到支链淀粉对试样中碘-直链淀粉复合物的影响，利用直链淀粉与支链淀粉的混合物制备校正曲线，从校正曲线上读取试样中直链淀粉含量。
3.主要试剂甲醇[85％(V/V)]、乙醇[95％(V/V)]。
氢氧化钠：1mol/L和0.09mol/L。
乙酸：1mol/L溶液。
碘试剂：称取2.000±0.005g碘化钾 ，加适量的水以形成饱和溶液，加入0.200±0.001g碘，碘溶解后将定量移至100mL容量瓶中定溶。
每天用前现配，避光保存。
马铃薯直链淀粉标准溶液(1mg/mL)：称取100±0.5mg脱脂及平衡后的直链淀粉于100mL烧杯中，加入1.0mL无水乙醇湿润样品，再加入9.0mL1mol/L氢氧化钠溶液于85℃水浴中分散10min，移入100mL容量瓶，用70mL水分数次洗涤烧杯，洗涤液一并移入容量瓶中定溶，剧烈摇匀。
1mL此标准分散液含1mg直链淀粉。
马铃薯直链淀粉标准品的制备见附录A。
支链淀粉标准溶液(1mg/mL)：称取100±0.5mg经除去蛋白质、脱脂及平衡后蜡质大米支链淀粉于100mL烧杯中，加入1.0mL无水乙醇湿润样品，再加入9.0mL 1mol/L 氢氧化钠溶液，于85℃水浴中分散，移入100mL容量瓶中，用70mL水分数次洗涤烧杯，洗涤液一并移入容量瓶中定溶，剧烈摇匀。
1mL此标准溶液含1mg支链淀粉。
蜡质大米支链淀粉标准品的制备见附录B。
4.仪器实验室用磨粉机：可将大米粉碎并通过80目筛。
筛（80目）、实验室用砻谷机、实验室用碾米机。
MEGAZYME直链淀粉试剂盒说明书
前言:谷类淀粉的许多特性决定其最终用途，这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。
这些特性包括糊化和凝胶化，溶解度，抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。
因此，淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。
最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势，电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。
然而，这些方法具有不确定性。
支链淀粉-碘复合物也可以形成，这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度，并且用比色法测量时，该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。
这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量，需要进行校正。
Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。
支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法，而且不存在不确定性问题。
在指定pH值，温度和离子强度的条件下，ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀，这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。
因此，ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分，但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。
此方法是Yun和Matheson改进的ConA方法。
分析之前用乙醇预处理去除脂质。
原理：淀粉样品通过加热完全地溶解在二甲基亚砜（DMSO）里。
用乙醇沉淀淀粉去除其中的脂质，回收沉淀的淀粉。
用醋酸/盐溶液溶解沉淀的样品，加入ConA，特异性沉淀支链淀粉，离心去除沉淀。
单位体积上清液中的直链淀粉用酶水解为D-葡萄糖，然后用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂进行测定。
另外一份单位体积醋酸/盐溶液中的总淀粉同样用酶水解为D-葡萄糖，然后加入葡萄糖氧化酶/过氧化物酶，用比色法测定。
根据ConA沉淀样品的上清液和与总淀粉样品中的GOPOD在510 nm处的吸光光度值之比判断直链淀粉在总淀粉中的含量。
该方法适用于所有的纯淀粉和谷物粉。
精确性样品如为纯淀粉，相对标准偏差为<5%。
直链淀粉含量试剂盒说明书
直链淀粉含量试剂盒说明书微・法IOO管/96样注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定澜定意义：直链淀粉是D-葡萄糖基以a-（1,4）糖件键连接的多糖链，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有.重要意义。
渊定原理：利用80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，直链淀粉与碘形成的络合物在620nm下有吸收峰。
需自备的仪器和用品：酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰、乙醛和蒸储水。
试剂的组成和配制：试剂一：液体IOom1X1瓶；4C保存；试剂二：乙醛IOom1X1瓶：（自备）试剂三：液体IOom1X1瓶；4℃保存；试剂四：液体2m1X1瓶：4℃保存；试剂五：液体300U1XI瓶；4℃保存；淀给提取：称取0.01~0.02g烘干样本（建议称取约0,01g）于研钵中研碎，加入Im1试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80C水浴提取30min,3000g,25匕离心5min,弃上清，留沉淀，加入Im1试剂二（乙酸）振荡5min,3000g,25°C离心5min,弃上清，留沉淀，加入Im1试剂三充分溶解，90C水浴IOmin,冷却后待测。
渊定步骤：1、分光光度计或衡标仪预热30min以上，调节波长至620nm,蒸储水调零。
测定管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μ1样本，14μ1试剂四，120μ1蒸储水，2μ1试剂五，44U1蒸储水，混匀，测定620nm处吸光值，记为A测定。
空白管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μ1试剂三，14μ1试剂四，120μ1蒸储水，2μ1试剂五，44μ1蒸储水，混匀，测定62Onm处吸光值，记为A空白。
直箧淀粉含■计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y=1755x+0.0062;X为标准品浓度（mg∕m1）,y为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算直链淀粉含量（mg∕mgprot）=[（A测定・A空白∙0.0062）XV1]÷1.755÷（V1×Cpr）=0.57×（A测定・A空白∙0.0062）÷Cpr2、按样本干重计算直链淀粉含量（mg∕g干重）=[（A测定-A空白∙0∙0062）XVI]÷1755÷（WXV1÷V2）=0.57×（A测定・A空白-0.0062）÷WVI：加入反应体系中样本体积，0.02m1；V2：加入提取液体积，1m1；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/m1；W：样本质量，gb.用96孔板测定的计算公式如下标准条件卜测定的回归方程为y=0.8775x+0.0062;X为标准品浓度（mg/m1）,y为吸光值。
直链淀粉含量实验报告
一、实验目的本实验旨在了解直链淀粉的提取原理，掌握直链淀粉含量的测定方法，并通过对不同样品中直链淀粉含量的测定，分析其含量差异，为食品工业中淀粉产品的开发提供理论依据。
二、实验原理直链淀粉是一种由葡萄糖单元以α-1,4-糖苷键连接而成的线性高分子化合物，不溶于水，但可溶于稀碘溶液。
本实验采用酸水解法提取直链淀粉，利用碘溶液与直链淀粉形成蓝色复合物的特性，通过比色法测定直链淀粉含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 玉米淀粉- 大米淀粉- 马铃薯淀粉- 花生淀粉- 水浴锅- 碘液- 721型分光光度计- 电子天平- 移液器- 试管- 离心机2. 实验试剂：- 碘液：称取0.5g碘，加入5mL碘化钾溶液，溶解后，用蒸馏水定容至100mL。
- 碘化钾溶液：称取10g碘化钾，加入100mL蒸馏水，溶解。
四、实验步骤1. 样品预处理：准确称取一定量的样品（玉米淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、花生淀粉），加入适量蒸馏水，搅拌均匀，煮沸5分钟，冷却后离心分离，取上清液待用。
2. 直链淀粉提取：将上清液加入一定量的稀硫酸，加热至沸腾，保持沸腾状态5分钟，冷却后用蒸馏水定容至一定体积。
3. 碘液显色：向定容后的溶液中加入一定量的碘液，混匀，室温放置5分钟。
4. 比色测定：将显色后的溶液在721型分光光度计上，以蒸馏水为参比，于620nm波长处测定吸光度。
5. 结果计算：根据标准曲线，计算样品中直链淀粉含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以标准直链淀粉溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品直链淀粉含量测定：根据标准曲线，计算不同样品中直链淀粉含量。
3. 结果分析：比较不同样品中直链淀粉含量差异，分析其影响因素。
六、实验结论1. 本实验采用酸水解法提取直链淀粉，通过比色法测定直链淀粉含量，方法简便、快速、准确。
2. 不同样品中直链淀粉含量存在差异，玉米淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、花生淀粉中直链淀粉含量分别为28.5%、25.2%、18.7%、22.3%。
直链淀粉纯度鉴定
（1）试样的制备：取风干的实验室待测样品充分混匀后，粉碎，装入样品瓶备用。
（2）选择直链、支链淀粉测定波长、参比波长：直链淀粉：取1mg/ml 直链淀粉标准液1ml，放入50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1 mol/L HCl溶液调至pH 3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。
静置20min，以蒸馏水为空白，用双光束分光光度计进行可见光全波段扫描或用普通比色法绘出直链淀粉吸收曲线（400-960nm光谱扫描）。
支链淀粉：取1mg/ml支链淀粉标准液1ml，放入50ml容量瓶中，以下操作同直链淀粉。
在同一坐标内获得支链淀粉可见光波段吸收曲线。
确定直链淀粉和支链淀粉的测定波长、参比波长λ2、λ1、λ4和λ3。
（3）样品直链淀粉、支链淀粉的测定：称取适量试样用乙醚脱脂，称取脱脂样品0.1g 左右（精确至1mg），置于50ml容量瓶中。
加0.5 mol/L KOH溶液10ml，在沸水浴中加热10min，取出，以蒸馏水定容至50ml，若有泡沫采用乙醇消除），静置。
吸取样品液2.5ml 两份（即样品测定液和空白液），均加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCI 溶液调至pH 3.5左右，样品中加入碘试剂0.5ml，空白液不加碘试剂，然后均定容至50ml。
静置20min，以样品空白液为对照，用1cm比色杯，分别测λ2、λ1、λ4 、λ3的吸收值Aλ1、Aλ2、Aλ3、Aλ4。
得到△A直=Aλ1 - Aλ2 ，△A支=Aλ4 - Aλ3。
分别查两类淀粉的双波
长标准曲线，即可计算出脱脂样品中直链淀粉和支链淀粉含量。
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直链淀粉含量检测试剂盒说明书微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4265
规格：100T/96S
产品简介：
直链淀粉是D-葡萄糖基以α-(1,4)糖苷键链接的多糖链，直链淀粉含量影响着食品的食用品质和外观品质，与食品安全息息相关。
直链淀粉和碘形成蓝色络合物，利用乙醇分开样品中的可溶性糖和淀粉，再用碘与其反应得到直链淀粉含量。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、乙醚、无水乙醇、EP管。
产品内容：
试剂一：液体110mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：乙醚100mL×1瓶，自备；
试剂三：液体55mL×1瓶，4℃保存；
O=9mL：91mL混匀，现用现配，4℃保存半年。
试剂四：将试剂三：H
2
试剂五：液体0.5mL×1支，4℃保存；
粉剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；
粉剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂六的配制：将粉剂一倒入粉剂二，用蒸馏水定容至10mL，4℃避光保存一个月。
标准品：10mg直链淀粉×1支，4℃避光保存。
临用前加入0.1mL无水乙醇和0.9mL试剂三，混匀后封口膜封口，沸水浴至溶解，即10mg/mL的直链淀粉。
吸取0.1mL加入0.9mL蒸馏水配制为1mg/mL的标准溶液待用。
操作步骤：
一、直链淀粉的提取：
称取0.005g烘干样本于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂二（乙醚）振荡5min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入5mL试剂四充分溶解，90℃水浴10min，冷却后3000g，25℃离心5min，取上清待测。
二、测定步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节双波长至550nm和485nm，蒸馏水调零。
2、将1mg/mL标准液用试剂四稀释为0.4mg/mL的标准溶液备用。
3、操作表：(在1.5mL离心管或96孔板中依次加入下列试剂)
测定管标准管空白管样品（µL）20--标准溶液（μL）-20-
蒸馏水（µL）--20
试剂五（µL）444
试剂六（µL）444
蒸馏水（µL）172172172
充分混匀，测定550nm和485nm处的吸光值，550nm下的测定管、标准管、空白管分别记为A测定、A标准和A空白，485nm下的分别记为A’测定、A’标准和A’空白，计算△A测定=（A测定-A空白）-（A’测定-A’空白），△A标准=（A标准-A空白）-（A’标准-A’空白）。
直链淀粉含量计算：
直链淀粉含量（mg/g样本）=△A测定÷（△A标准÷C标准）×V样总÷W=2×△A测定÷△A标准÷W。
C标准：标准溶液浓度，0.4mg/mL；V样总：加入试剂四体积，5mL；W：样本质量，g。
注意事项
1、反应后建议在20min内检测完成防止褪色。
2、若A测定大于1，建议样本上清用试剂四稀释后再进行测定；若A测定低于0.05时，可以提取
时减少试剂四体积进行测定。