DAPI和HoechstPI染料
分子生物学常用荧光核酸染料
由于只需简单温和的物理方法（光照）激发和检测，荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。
这里的荧光核酸染料主要指能特异结合核酸并改变发光特性的化合物，DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料吧。
除了染胶，荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂，它们能以非共价键的方式与DNA/RNA结合从而显示原位杂交中的细胞背景信息。
根据它们能否穿透细胞膜进入活细胞体内，还可分为两大类：通透性核酸染料和非通透性核酸染料。
生物通在此简单比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。
分子生物学常用荧光核酸染料荧光核酸染料在分子生物学最常见的应用无疑是电泳凝胶染色，以及定量PCR。
EBEB（溴化乙锭）本身在紫外下不发光，能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。
因其廉价且灵敏度高，一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。
EB的使用非常简单方便，电泳结束后染色可获得最佳效果，也可以在制胶时加入进行前染。
前染有利于节约时间，但是易出现条带变形拖尾等问题。
EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂，且具有潜在的诱变作用。
虽说以前的实验室里总会有个别做起实验来“精神可嘉，行为可怕”的家伙，一时找不到手套他们敢徒手拿EB胶，但大多数人对EB还是“敬而远之”的，没事谁都不愿靠近实验室里跑胶、看胶那一块地方。
偏偏对于搞分子生物学的人来说，跑胶就像吃饭一样平常，于是大家只能硬着头皮天天和EB打交道，盼望EB的替代品早点出现在实验室。
生物通在此简单回顾一下这几年纷纷登场的EB替代品。
SYBR系列染料说到EB的替代物，首先想到的是Invitrogen旗下Molecular Probes专利持有的SYBR系列。
自1993年SYBR核酸染料推出以来，就因其灵敏度和易用性而迅速大受欢迎，成为明星产品之一。
这一系列包括4种染料：SYBR Safe、SYBR Gold、SYBR Green I和SYBR Green II。
核内体定位荧光染料
核内体定位荧光染料
核内体定位荧光染料是一种用于标记和定位细胞核内体结构的荧光染料。
细胞核内体是细胞核内的特定区域或结构，常常与基因表达、DNA修复和转录调控等生物学过程密切相关。
常见的核内体定位荧光染料包括:
1. DAPI（4',6-二胺-2-苯基-indole）：DAPI是一种DNA结合荧光染料，可以顺利穿透细胞膜和核膜，与DNA结合形成蓝色荧光，用于标记和观察细胞核。
2. Hoechst染料：Hoechst染料系列是一类与核酸结合的荧光染料，可用于核内体的定位和染色。
常见的Hoechst染料包括Hoechst 33342和Hoechst 33258。
3. SYTOX染料：SYTOX染料是一类高亲和力DNA结合的荧光染料，可以用于细胞核内运动的核茎环和组蛋白复合物的观察。
4. Acridine Orange（AO）：AO是一种DNA/RNA双链荧光染料，可以用于核内体的定位和染色。
5. propidium iodide（PI）：PI是一种DNA结合荧光染料，用于细胞凋亡、细胞周期和细胞核破裂等核内体相关实验。
这些核内体定位荧光染料能够提供细胞核内体结构的明亮和清
晰的荧光信号，帮助研究人员观察和研究细胞核内体的形态和功能。
dapi染色方法
dapi染色方法
dapi染色方法是一种用于标记细胞核DNA的荧光染色方法。
该方法使用一种叫做4',6-二氨基-2-苯基吡啶-3,5-二唑（DAPI）的染料。
DAPI是一种紫色荧光染料，可以结合到双链DNA的AT区域上，形成荧光染色复合物。
利用DAPI染色，可以在细胞中清晰地观察到细胞核的位置、数量、形态和大小等特征。
DAPI染色方法广泛应用于细胞生物学、遗传学、病理学等领域。
通常，DAPI染色可以在固定和未固定的细胞样本中进行，也可以与其他染色方法结合使用，如抗体染色、荧光原位杂交等。
在实验室中，DAPI染色还可以作为评估细胞凋亡和细胞周期的重要工具。
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dapi染色原理
dapi染色原理DAPI染色原理。
DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole）是一种广泛用于细胞核染色的荧光染料，其原理是利用DAPI与DNA结合并发出蓝紫色荧光的特性。
DAPI染色广泛应用于细胞生物学、免疫组织化学、流式细胞术等领域，具有高灵敏度和特异性的特点。
下面我们将详细介绍DAPI染色的原理。
DAPI是一种蓝色荧光染料，其分子结构中含有两个氨基苯基吡啶环，这两个环可以与DNA中的腺嘌呤（A）结合，形成稳定的复合物。
在紫外光激发下，DAPI与DNA结合后会发出蓝紫色的荧光，因此可以用来染色细胞核。
在进行DAPI染色时，首先需要将细胞固定，然后用DAPI溶液浸泡细胞，DAPI会穿透细胞膜进入细胞内部并与DNA结合。
在荧光显微镜下观察，可以清晰地看到细胞核发出蓝紫色的荧光，从而可以观察到细胞核的形态和数量，以及DNA的分布情况。
DAPI染色的原理是基于其与DNA的特异性结合，因此在染色过程中需要注意一些因素。
首先，细胞固定的条件需要严格控制，固定不足会导致DNA释放，固定过度则会影响DAPI与DNA的结合。
其次，DAPI的浓度和染色时间也需要进行优化，以确保获得清晰的染色效果。
另外，DAPI染色需要在紫外光下观察，因此在操作时需要注意保护眼睛，避免紫外光的伤害。
除了在细胞生物学领域的应用外，DAPI染色还可以用于测序实验中。
在测序实验中，DAPI可以用来染色DNA，帮助研究人员观察DNA的纯度和浓度，为后续的实验提供重要信息。
总之，DAPI染色是一种简单、快速、灵敏的细胞核染色方法，其原理是利用DAPI与DNA的特异性结合并发出蓝紫色荧光。
在实际操作中，需要严格控制固定条件、DAPI浓度和染色时间，以确保获得清晰的染色效果。
DAPI染色在细胞生物学、免疫组织化学、流式细胞术等领域有着广泛的应用，为细胞和DNA研究提供了重要的技术支持。
dapi染色方法
dapi染色方法
DAPI染色方法是一种常用的细胞核染色方法，它可以用于检测DNA含量、核型分析、染色体计数和核型鉴定等方面。
DAPI染色方法的原理是利用DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole）这种荧光染料，它可以与DNA结合，使DNA发出蓝色荧光，从而实现对细胞核的染色。
DAPI染色方法的步骤如下：
1.将细胞固定在载玻片上，可以使用甲醛、乙醛、乙醇等固定剂进行固定。
2.用PBS（磷酸盐缓冲液）或者其他缓冲液进行洗涤，去除细胞表面的蛋白质和其他杂质。
3.将DAPI染料加入到载玻片上，使其与细胞核中的DNA结合。
4.在黑暗中孵育10-15分钟，使DAPI染料充分结合到DNA上。
5.用PBS或其他缓冲液进行洗涤，去除未结合的DAPI染料。
6.在显微镜下观察细胞核的荧光信号，可以使用荧光显微镜或者激光共聚焦显微镜进行观察。
DAPI染色方法的优点是可以快速、简单地染色，同时可以同时检测多个样本。
此外，DAPI染色方法还可以与其他荧光染料结合使用，
如FITC、TRITC等，从而实现多重染色，提高检测的准确性和灵敏度。
但是，DAPI染色方法也存在一些缺点，如DAPI染料对细胞有毒性，需要控制染色时间和浓度，避免对细胞造成伤害。
此外，DAPI染色方法只能检测DNA含量和核型分析等方面，不能检测其他细胞器和分子的信息。
DAPI染色方法是一种常用的细胞核染色方法，具有快速、简单、灵敏等优点，可以用于多种细胞学研究和临床检测中。
dapi和merge染色原理
dapi和merge染色原理Dapi和Merge染色是生物医学研究中常用的染色方法，它可以通过荧光显微镜观察细胞内的染色体、细胞核以及其他细胞器的分布情况，帮助研究员们更加深入地了解细胞的结构和功能。
本文将详细介绍Dapi和Merge染色的原理和步骤。
一、Dapi染色原理Dapi染料的名称是4’,6-diamidino-2-phenylindole，它是一种荧光染料，能够通过自然荧光发射出蓝色的光，进而染色观测细胞内的DNA、染色体和细胞核。
Dapi染色的步骤如下：1.将组织或细胞样品固定。
2.用PBS或其他缓冲液冲洗细胞，以去除污染物质和杂质。
3.将Dapi染料加入样品中，使其能够进入细胞并与DNA结合。
4.在荧光显微镜下观察样品，Dapi染料自发发射出蓝色光线，并通过荧光镜头捕捉到光的信号，从而观察样品内DNA的分布情况。
二、Merge染色原理Merge指的是多种染色剂混合使用的染色方法，简单来说就是将多种不同颜色的染料混合在一起，能够同时染色显示不同的细胞组分结构。
Merge染色的步骤如下：1.将细胞或组织样品固定。
2.用PBS或其他缓冲液清洗样品。
3.将多个生物染色剂混合而成的Merge染剂加入样品中。
4.在荧光显微镜下观察样品，各种染剂自发发射不同的荧光信号，观察样品内不同的组分结构和分布情况。
需要注意的是，Merge染色结果的可视性和检测灵敏度，一定程度上取决于样品的样质量和染色试剂的稳定性。
总结：Dapi和Merge染色是生物医学研究中常用的染色方法，直接观察生物样品内的各种结构和细胞器分布情况。
学会掌握这两种染色方法的原理和步骤，有助于研究员能够从不同角度更深入地研究细胞及其相关治疗方法，为生命科学领域的发展做出更大的贡献。
常见细胞核荧光染料
细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）Hoechest 33258 是膜透性的,因此在活细胞时候能轻松进入;DAPI是半透性的,有选择性的进入.因此Hoechest 33258 一般用来染活细胞,可以长驱直入;DAPI一般是染固定细胞.2、两者都可以用紫外看，参见以下的激发发射波长Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
Hoechst 33342/PI双染色法1．悬浮生长的细胞在培养状态下加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml；帖壁生长的细胞用含有0.02％EDTA的0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，用1ml全培养液重悬细胞，加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml，37℃孵育7～10min。
2．4℃500～1000r/min离心弃去染液。
3．加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。
??碘化丙啶染色???? 1．原理? 碘化丙啶(propidium iodide，PI)不能穿人完整的活细胞膜中，即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对PI拒染，而坏死细胞由于失去膜的完整性，PI可进入细胞内与DNA结合，根据此特点，使用PI染色可鉴别死细胞。
如果对活细胞染色必须在染色前进行固定，以增加细胞膜对染料的通透性。
???? 2．溶液配制? 使用0．01mol／LPBS(pH 7．4)配制终浓度为0．5mg／ml的PI工作液。
???? 3．染色程序??? (1)单层细胞培养标本经预冷70％乙醇固定1小时，4℃；??? (2)0．01mol／LPBS(pH 7．4)冲洗；??? (3)沥干后加入PI工作液，室温孵育15分钟；??? (4)冲洗后封片。
DAPI染色液(1mgml)
DAPI 染色液(1mg/ml)简介：DAPI 染色液(DAPI Staining Solution)是适用于常见细胞和组织细胞核染色的染色液。
DAPI ，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride ，也称DAPI dihydrochloride ，分子式为C 16H 15N 5 · 2HCl ，分子量为350.25，是可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，和双链DNA 结合后可以产生比DAPI 自身强20多倍的荧光，灵敏度高于EB 。
DAPI 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
DAPI 也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA 染色。
DAPI 的最大激发波长为，最大发射波长为，DAPI 和双链DNA 结合后，最大激发波长为，最大发射波长为。
Leagene DAPI 染色液是浓缩的储存液，稀释后使用，一般推荐工作浓度，用于固定细胞或组织的细胞核染色。
组成：自备材料：1、 荧光显微镜2、 蒸馏水3、 微量移液器4、 PBS 或生理盐水操作步骤(仅供参考)：1、根据实验具体要求，用无菌去离子水稀释到自己所需浓度，即为DAPI 染色工作液。
细胞核染色时，一般推荐工作浓度。
2、对于细胞或组织样品，固定后冲洗去除固定剂。
如需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行DAPI 染色，如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的DAPI 染色。
对于贴壁细胞或组织切片，加入少量DAPI 染色工作液，覆盖住样品即可。
对于悬浮细胞，加入DAPI 染色工作液，充分混匀。
3、室温放置。
4、轻轻吸除DAPI 染色工作液。
编号 名称 DA0004 Storage DAPI 染色液(1mg/ml) 1ml-20℃ 避光 使用说明书 1份5、用无菌的PBS或生理盐水清洗。
6、直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。
DAPI和Hoechst-PI染料
DAPIDAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测。
因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
DAPI介绍在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。
当DAPI与双股DNA 结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。
DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。
使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
中文名：4，6-联脒-2-苯基吲哚(?)英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride分子式：C16H15N5分子量：277.324CAS number：28718-90-3光谱性质：DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm与双链DNA结合时最大吸收/最大发射为358 nm/461 nm；与RNA结合时，最大发射移动到400 nm左右。
DAPI染色原理：DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
dapi和merge染色原理
dapi和merge染色原理
DAPI和Merge是两种常用的荧光染料，用于细胞核和染色体的染色。
这两种染料的原理不同，下面分别介绍。
DAPI染色原理：
DAPI是4',6-diamidino-2-phenylindole的缩写，是一种DNA 特异性染色剂。
当DAPI分子与DNA结合时，它们之间的π-π相互作用会使DAPI分子发生荧光。
因此，在荧光显微镜下观察，DAPI能够清晰地染色细胞核和染色体。
DAPI是一种蓝色的荧光染料，适用于DNA含量高的细胞，如细胞核和染色体。
同时，DAPI还能够诱导凋亡细胞产生的核染色体凝集体（apoptotic bodies）发出蓝色荧光，这使得它成为检测细胞凋亡的有效工具。
Merge染色原理：
Merge是一种双重染色技术，使用荧光染料DAPI和另外一种荧光染料（如Rhodamine或FITC）同时染色细胞核和细胞质。
Merge技术可以将DAPI染色的核和荧光染料染色的细胞质同时显示为不同的颜色，这样在显微镜下可以更清晰地观察细胞的形态和结构。
Merge技术的原理是，在DAPI染色完成后，使用另一种荧光染料进行细胞质染色。
这种荧光染料的波长不同于DAPI，因此在显微镜下，DAPI染色的细胞核呈现蓝色，而荧光染料染色的细胞质呈现绿色或红色。
Merge技术能够同时染色细胞核和细胞质，使得观察细胞形态和结构更加清晰，是细胞学和分子生物学研究中常用的技术之
一。
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D A P I
DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测。
因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
DAPI介绍
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。
当DAPI与双股DNA
结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。
DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。
使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
中文名：4，6-联脒-2-苯基吲哚()
英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride
分子式：C16H15N5
分子量：277.324
CAS number：28718-90-3
光谱性质：DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm
与双链DNA结合时最大吸收/最大发射为358 nm/461 nm；与RNA结合时，最大发射
移动到400 nm左右。
DAPI染色原理：
DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) 。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到细胞核的形态变化。
a、正常的烟草细胞核：核形完整，染色质均匀。
b、染色质固缩，向外周聚集，形成周边化。
c、染色质进一步固缩，形成很多颗粒物质。
d、细胞核破裂形成碎片，核解体。
染色步骤：
在细胞移植前，将DAPI 以一定的浓度加入培养基中，与细胞共同孵育过夜，用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI，再用酶消化后离心收集细胞，加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。
存储条件：-20℃避光保存
每次使用，用量较少，可反复冻融，无需分装
注意事项：
1、DAPI强烈致癌，操作时要戴上手套。
2、贮存液用70%酒精配制，浓度100 μg/ml，可用黑纸包住，长期冻存。
使用液按1:1000用PBS稀释，最终浓度100 ng/ml。
3、DAPI是非常优秀的DNA染料，固定过和没有固定过的活细胞均可用DAPI染色。
Hoechest 染色
三种染料都可在350nm左右的紫外光激发。
都在461nm处发出蓝靛色荧光。
未被结合的染料最大发射光在510到540nm之间。
可被氙-氩灯或水银-氩灯或紫外激光激发。
激发光和发射光之间的斯托克斯位移巨大，故可用于多染料多颜色荧光染色。
Hoechst染料的荧光强度随着溶液pH升高而增强。
Hoechst染料溶于水和有机溶剂，如二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。
浓度可高达10mg/mL.水溶液可在4 °C避光保存至少6个月。
长期储存于≤-20 °C
Hoechst与DNA双链中的小沟（minor groove）结合，更倾向与于富含A/T（腺嘌呤/胸腺嘧啶）的DNA链。
虽然说它能与所有的核酸结合，但是富含AT的双链DNA使荧光强度显着增强。
Hoechst可穿过细胞膜，可结合于活细胞或固定过的细胞。
因此可用于活细胞标记。
Hoechst是一种膜通透性的荧光染料，故正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核Hoechst染色的形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；而调亡细胞的细胞核由于浓集而呈亮蓝色，或核呈分叶，碎片状，边集。
常用Hoechst33258和Hoechst33342，前者渗透性不如后者好，多用于活细胞染色，而后者活细胞和死细胞均可。
Hoechst33342 能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA ,使之发出明亮的蓝色荧光。
凋亡的细胞核染色增强,荧光更为明亮,呈圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异,很易判别。
Hoechst 染色方法：
1. 贴壁细胞
A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入终浓度为10μg/ml的Hoechst染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍。
F. 将贴有细胞的盖玻片盖于载玻片上，尽量避免气泡。
切勿弄反。
G. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。
2. 悬浮细胞
A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50μl液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
D. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
E. 均匀滴加Hoechst染色液，染色5分钟。
用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
F. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍。
G. 盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
H. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。
3. 组织切片
A. 对于任何常见切片，处理至常规可以进行免疫染色时，或完成常规的免疫染色后，即可进行后续的Hoechst染色。
B. PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
可在六孔板中操作。
C. 加入Hoechst染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动。
D. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
E. 将切片置于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
F. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。
荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光。
在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
注意控制染色时间，染色时间过长容易出现假阳性。
PI单染
将处于对数生长期的细胞，经过不同浓度的药物处理不同时间后，离心（1000 rpm，5 min）收集贴壁和悬浮的所有细胞，PBS洗涤，再次离心（1000 rpm，5 min），每个离心管的细胞重悬于500μL 预冷的PBS中，缓慢注入3mL预冷无水乙醇进行固定，4℃下保存（可保存1～2周），待检。
细胞上机检测前低速离心除去乙醇，PBS洗涤2次，每个离心管分别加入500 μL PBS重悬细胞，然后加入10 μL 10mg/mL无DNase的Rnase A，37℃孵育30 min，转入冰浴，加入25 μL 10mg/mL PI，冰上避光染色30 min，300目筛绢过滤，于EPICS XL 型流式细胞仪中进行检测及分析数据。