乳及乳制品中亚硝酸盐含量的测定(精)

任务三：乳粉亚硝酸盐含量测定

移取:20 mL滤液于50 mL比色管中，加水至约30 mL。

在每个比色管中先加入3 mL显色液1，边加边混；再加入
2.5 mL显色液2。小心混合溶液，使其在室温下静置5
min，避免直射阳光。加入1mL显色液3，小心混合，使
其在室温下静置5 min，避免直射阳光。用水定容至刻度， 混匀。
乳及乳制品中 亚硝酸盐的测定
学习目标


知识目标： 1. 能解释测定亚硝酸含量原理，写出测定亚硝酸盐含量的 流程和注意事项。 技能目标： 1.会正确使用分光光度计； 2.能正确绘制标准曲线； 3.能准确报告检测结果，评价亚硝酸盐含量是否符合标准。 素质目标： 1.培养学生严谨、务实的学习精神； 2.培养学生开拓创新、团结协作的职业素质。

（5）吸光度的测定 将选择开关置于“A”，盖上试样室
盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节旋钮，使 数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色 皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架 拉手，使待测溶液进入光路，此时数字显示值即为该待 测溶液的吸光度值。读数后，打开试样室盖，切断光路。 重复上述测定操作1～2次，读取相应的吸光度值，取平

在15 min内用538 nm波长，以空白试验液体为对照测定 上述样品溶液的吸光度。
标准曲线的制作



分别移取0 mL、1mL、2mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、 8 mL和10 mL亚硝酸钠标准溶液于9个50 mL比色管中。在每 个比色管中加水，使其体积约为30 mL。 在每个比色管中先加入3 mL显色液1，边加边混；再加入2.5 mL显色液2。小心混合溶液，使其在室温下静置5 min，避 免直射阳光。加入1mL显色液3，小心混合，使其在室温下静 置5 min，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。在15 min内，用538 nm波长，以第一个溶液（不含亚硝酸钠）为 对照测定另外八个溶液的吸光度。 将测得的吸光度对亚硝酸盐质量浓度作图。亚硝酸根的质量 浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。亚硝酸根的质量浓度以 μg/100 mL表示。
分光光度计的使用



（1）预热仪器 将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪 器预热20分钟。 为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定 时应将试样室盖打开，使光路切断。 （2）选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要 的单色波长。 （3）调节T=0% 轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为 “00.0”（此时试样室是打开的）。 （4）调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂） 的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试 样室盖子轻轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示 正好为“100.0”。
亚硝酸盐含量计算



式中： X——样品中亚硝酸根含量，mg/kg； c——根据滤液的吸光度，从标准曲线上读取的NO2的浓度，μg/100mL； m——样品的质量，g； V——所取滤液的体积，mL。 样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐含量，按式计算： W（NaNO2）＝1.5×W（NO2） W（NO2）——样品中亚硝酸根的含量，mg/kg； W（NaNO2）——样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐的含量，mg/kg。 精密度 由同一分析人员在短时间间隔内测定的两个亚硝酸盐结果之间的差值， 不应超过1 mg/kg。
任务一：仪器设备及试剂的准备






试剂：测定用水应是不含亚硝酸盐的蒸馏水或去离子水。 盐酸-氨水缓冲溶液：pH 9.60～9.70。 硫酸锌溶液 亚铁氰化钾溶液 显色液1：体积比为450:550的盐酸。 显色液2：5 g/L的磺胺溶液。 显色液3：1g/L盐酸萘乙二胺溶液 亚硝酸钠标准溶液：相当于亚硝酸根的浓度为1.00μg /mL。 将亚硝酸钠在110℃～120℃的范围内干燥至恒重。冷却后称 取0.150 g，溶于1000 mL容量瓶中，用水定容。在使用的当 天配制该溶液。取10 mL上述溶液和20 mL缓冲溶液于1000 mL容量瓶中，用水定容。每1 mL该标准溶液中含1.00μg的 NO2。
检测依据
GB 5009.33-2010
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离子色谱法 分光光度法 乳及乳制品中亚硝酸盐与硝 酸盐的测定
Βιβλιοθήκη Baidu
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乳及乳制品中亚硝酸盐的测定
GB
5009.33-2010-第三法
测定原理

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在滤液中，加入磺胺和 N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光 度计在538 nm波长下测其吸光度。

将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比 较，就可计算出样品中的亚硝酸盐含量。
具体工作任务分解
任务1：仪器设备及试剂的准备
任务2：样品预处理 任务3：样品亚硝酸盐含量测定
任务4：结果记录并分析处理
任务5：填写检验报告单
任务一：仪器设备及试剂的准备
仪器 所有玻璃仪器都要用蒸馏水冲洗，以保证不带有亚硝酸盐。 天平：感量为0.1 mg和1 mg。 烧杯：100 mL。 锥形瓶：250 mL，500 mL。 比色管：50 mL。 移液管：1 mL、2 mL、5 mL和10 mL。 量筒：根据需要选取。 玻璃漏斗：直径约9 cm，短颈。 定性滤纸：直径约18 cm。 分光光度计：测定波长538 nm，使用1 cm～2 cm光程的比色 皿。
均值。

（6）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净， 并将比色皿座架用软纸擦净。
注意事项

（1）为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开， 使光路切断，以延长光电管的使用寿命。 （2）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而 不能碰比色皿的光学表面。 （3）比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不 能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细 而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。


任务二：样品预处理


一、样品的称取和溶解： 在100 mL烧杯中称取10 g样品，准确至0.001 g。用112 mL 50℃～55℃的水将样品洗入500 mL锥形瓶中，混匀。 二、脂肪和蛋白的去除： 按顺序加入24 mL硫酸锌溶液、24 mL亚铁氰化钾溶液和40 mL缓冲溶液，加入时要边加边摇，每加完一种溶液都要充 分摇匀。静置15 min～1 h。然后用滤纸过滤，滤液用250 mL锥形瓶收集。