化妆品微生物五项检测
化妆品微生物检验标准
化妆品微生物检验标准一、菌落总数菌落总数是指化妆品中可培养的微生物总数，包括细菌、霉菌和酵母菌等。
这些微生物可能来自原料、生产过程、包装材料、运输和贮存等环节。
菌落总数是评价化妆品卫生质量的重要指标之一，可以反映化妆品受污染的程度。
二、霉菌和酵母菌总数霉菌和酵母菌是常见的真菌，在化妆品中可能污染原料或生产过程中。
霉菌和酵母菌大量繁殖会导致产品变质，对皮肤产生不良影响。
因此，对霉菌和酵母菌总数的检测是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。
三、耐热大肠菌群耐热大肠菌群是指一群嗜热、不产气的革兰氏阴性杆菌，其中包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属等。
在大肠杆菌中，有一种不耐热的“大肠菌群”是食品污染的指示菌。
耐热大肠菌群可以反映肠道致病菌污染的可能性。
四、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌是一种常见的革兰氏阳性球菌，是一种常见的细菌性病菌。
耐热性较强，对食品和化妆品的污染具有一定危险性。
因此，对金黄色葡萄球菌的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。
五、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌是一种常见的革兰氏阴性杆菌，是一种条件致病菌，可引起皮肤感染和败血症等。
铜绿假单胞菌在化妆品中是一种常见的污染菌，对化妆品的卫生质量有一定影响。
因此，对铜绿假单胞菌的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。
六、细菌总数细菌总数是指化妆品中可培养的细菌总数，包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等。
这些细菌可能来自原料、生产过程、包装材料、运输和贮存等环节。
细菌总数可以反映化妆品受污染的程度。
七、粪大肠菌群粪大肠菌群是指一群能够产气的肠杆菌科细菌，主要分布于动物粪便和自然界中。
在化妆品中，粪大肠菌群的检出可能提示产品受到肠道致病菌的污染，具有潜在的危险性。
因此，对粪大肠菌群的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。
儿童化妆品的微生物指标要求
儿童化妆品的微生物指标要求随着社会的发展和人们生活水平的提高，儿童化妆品的需求量也逐渐增加。
然而，由于儿童的皮肤娇嫩敏感，对化妆品中的微生物更容易产生过敏反应。
因此，对儿童化妆品的微生物指标要求非常重要。
本文将介绍儿童化妆品微生物指标的要求，帮助大家了解儿童化妆品的安全性。
一、总菌落计数总菌落计数是评价儿童化妆品中微生物污染程度的重要指标之一。
对于儿童化妆品而言，总菌落计数应控制在一定范围内，通常不得超过1000个菌落形成单位（CFU）/克或毫升。
二、大肠菌群的检测大肠菌群是一类常见的肠道细菌，其检测是评价儿童化妆品是否可能受粪便污染的重要手段。
儿童化妆品中不得检出大肠菌群。
三、霉菌和酵母菌的检测霉菌和酵母菌是常见的化妆品污染菌种之一，其生长繁殖会导致儿童化妆品变质并产生异味。
儿童化妆品中霉菌和酵母菌的检测应符合国家相关标准，通常不得超过100个CFU/克或毫升。
四、致病菌的检测致病菌是儿童化妆品中绝对不能存在的微生物。
常见的致病菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等。
儿童化妆品中不得检出致病菌。
五、真菌毒素的检测真菌毒素是一种有毒的化合物，会对儿童的健康造成严重危害。
因此，儿童化妆品中真菌毒素的含量要求非常严格，通常不得超过国家相关标准规定的限量。
六、防腐剂的使用防腐剂是儿童化妆品中常用的抑制微生物生长的物质。
然而，防腐剂的使用也需要符合一定的标准。
儿童化妆品中所使用的防腐剂应符合国家相关标准，且使用量应控制在安全范围内，以避免对儿童皮肤造成刺激或过敏反应。
总结起来，儿童化妆品的微生物指标要求包括总菌落计数、大肠菌群、霉菌和酵母菌、致病菌、真菌毒素以及防腐剂的使用等方面的要求。
这些指标的严格控制可以保证儿童化妆品的安全性和质量，减少对儿童健康的潜在风险。
因此，在购买儿童化妆品时，家长们应该注意查看产品标签，确保所购买的产品符合相关的微生物指标要求，以保障儿童的健康与安全。
化妆品微生物五项检测
双倍胆盐乳糖
产酸：黄色 产气：气泡
EMB琼脂
镜检
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
化妆品微生物五项检验
菌落总数检验
菌落总数（Aerobic bacterial count）：化妆品检样经过处理,
在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、 pH值、需氧性质等）,1g（1mL）检样中所含菌落的总数.所得 结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和 兼性厌氧菌落总数.
配培 养基 和稀 释液
供试 品的 处理
耐盐分
Baird Parker’s 或血琼脂
增 菌 24±2h 培 36±1℃ 养
分
离 24~48h 纯 36±1℃ 化
镜检
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验
甘露醇发酵试验
金黄色葡萄球菌检查流程图
灰/黑色
问题2
油性样品如何处理
稀释子型表面活性剂,分子一端 是亲水基团,一端是亲油基团,常用作增溶剂和 油/水乳化剂.决定了加入的顺序.
微生物许可检验项目 问题3
检验项目
特殊用途化妆品
非特殊用途 育 化妆品 发 类
染 发 类
烫 发 类
脱 毛 类
谢谢大家
接种阳性菌计算回收率
推荐了解： 人员培训能力掌握的检验重要指标. 有条件可做视具体样品测试结果. 在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状
化妆品安全技术规范微生物检测
1、选取平均菌落数在30-300之间的平皿，当只有一个稀释度的平均菌落数在此范围时，即以该 平皿菌落数乘其稀释倍数报告之。（见下图）
2、若有两个稀释度在30-300之间，则应求出两菌落总数的比值来决定，若比值≤2，应报告其平 均数，若>2，则以其中稀释度较低的平皿菌落数报告之。（见下图）
2.1 化妆品采样要求
2.1.3 固体样品
称取10g，加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡混匀， 使其分散混悬，静置后，取清液作为供试液。
使用均质器时，则采用灭菌均质袋，将上述水溶性膏、霜、粉剂等 ， 称10g样品加入90mL灭菌生理盐水，均质1min~2min； 疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加10mL灭菌液体石 蜡， 10mL吐温80，70mL灭菌生理盐水，均质3min~5min。
2.1 化妆品采样要求 01 02 03 04 05
应从不少于2个包装单位的取样 中共取10g或10mL
包装应无破损，检验前不得 打开 样品应置于室温阴凉干燥处，不 要冷藏或冷冻 宜先取岀部分样品做微生物检 验，再将剩余样品做其他分析
所用器皿及材料均应事先灭菌
2.1 化妆品采样要求
微生物项目，若一个样品包装内各部分为独立包装, 应当分别检验 若一个样品包装内各部分为非独立包装，应混合取样检验 若产品为不同类别的彩妆组合，应分别检验。
2.6 金黄色葡萄球菌检验方法
Baird-Parker平板：圆形，光滑，凸 起，湿润，颜色呈灰色到黑色，边缘 为淡色，周围为一混浊带, 在其外层有 一透明带。用接种针接触菌落似有奶 油树胶的软度。
2.6 金黄色葡萄球菌检验方法
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化妆品微生物检验方法标准
化妆品微生物检验方法标准概述：化妆品微生物检验是对产品中的微生物含量和活性进行检测，旨在确保化妆品的质量和安全性。
本文将介绍化妆品微生物检验的方法标准，包括采样方法、微生物总数测试、致病微生物测试等内容。
一、采样方法采样是化妆品微生物检验的第一步，正确的采样方法对检验结果的准确性至关重要。
总体的采样方法包括以下几个方面：1. 选取适当数量和规格的样品，并确保样品具有代表性；2. 使用干净的取样工具，避免污染样品；3. 选择不同生产批次和生产日期的化妆品进行采样，以评估产品的质量稳定性；4. 遵循严格的卫生规范和操作规程进行采样。
二、微生物总数测试微生物总数测试是对化妆品样品中微生物总数量的测定。
其目的是评估产品的细菌污染程度和是否符合相关的卫生标准。
以下是常用的微生物总数测试方法：1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法通过分离、测定化妆品中微生物代谢产物的含量，从而推断微生物总数；2. 膜过滤法：通过将样品通过膜过滤器，然后将膜培养在适当的培养基上，计数培养基上出现的菌落数量；3. 稀释平板计数法：将样品进行系列稀释后，移取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的平板上，培养并计数菌落数量；4. 流式细胞术：利用流式细胞仪对样品中微生物进行计数和鉴定。
三、致病微生物测试致病微生物测试是对化妆品样品中致病微生物含量的检测。
该测试主要关注常见的致病菌，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
以下是常用的致病微生物测试方法：1. 酶免疫分析法（ELISA）：通过检测样品中致病菌特异性的抗原或抗体来判断样品是否存在致病菌；2. PCR技术：通过引物特异性扩增样品中的致病菌DNA，从而检测样品是否受到致病菌污染；3. 快速培养技术：利用快速培养方法，减少培养周期，快速检测致病菌的存在。
四、标准和参考文献化妆品微生物检验方法的标准和参考文献主要包括国际组织和国家相关机构发布的标准。
以下是几个常见的标准：1. 国家药品监督管理局发布的《化妆品质量规范》2. 国际标准化组织（ISO）发布的相关标准，如ISO 21149：2020 "Cosmetics -- Microbiology -- Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria"3. 美国食品药品管理局（FDA）发布的相关指导文件，如《微生物检验的尺度适应性》总结：化妆品微生物检验是保证化妆品质量和安全的重要环节。
化妆品原料微生物检验标准
化妆品原料微生物检验标准一、细菌总数1.目的：评估化妆品原料的细菌污染程度，反映化妆品生产过程中的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行细菌总数的测定。
3.判定标准：细菌总数小于或等于1000 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。
二、霉菌和酵母菌总数1.目的：评估化妆品原料的霉菌和酵母菌污染程度，反映原料的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行霉菌和酵母菌总数的测定。
3.判定标准：霉菌和酵母菌总数小于或等于100 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。
三、耐热大肠菌群1.目的：检测化妆品原料中是否存在耐热大肠菌群，反映原料的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行耐热大肠菌群的测定。
3.判定标准：未检出耐热大肠菌群为合格，检出耐热大肠菌群为不合格。
四、金黄色葡萄球菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在金黄色葡萄球菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行金黄色葡萄球菌的测定。
3.判定标准：未检出金黄色葡萄球菌为合格，检出金黄色葡萄球菌为不合格。
五、铜绿假单胞菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在铜绿假单胞菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行铜绿假单胞菌的测定。
3.判定标准：未检出铜绿假单胞菌为合格，检出铜绿假单胞菌为不合格。
六、沙门氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在沙门氏菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行沙门氏菌的测定。
3.判定标准：未检出沙门氏菌为合格，检出沙门氏菌为不合格。
七、志贺氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在志贺氏菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行志贺氏菌的测定。
3.判定标准：未检出志贺氏菌为合格，检出志贺氏菌为不合格。
八、大肠埃希氏菌O157:H71.目的：检测化妆品原料中是否存在大肠埃希氏菌O157:H7，预防感染性疾病的发生。
化妆品微生物检验方法
化妆品微生物检验方法在化妆品行业中，微生物检验是非常重要的过程。
因为化妆品中如果含有微生物，那么就会对人体带来危害。
那么，微生物检验方法有哪些呢？1.总菌落数检测法化妆品内的总菌落数是微生物检测的重点指标。
一般情况下，微生物的总数应该符合相关法规，不得超标。
检测总菌落数的方法通常采用平板计数法。
这种方法的基本步骤是，将一定数量的化妆品样品取出用无菌平板和无菌营养琼脂培养基进行平板计数，然后进行培养和计数。
2.霉菌和酵母菌检测法霉菌和酵母菌也是影响化妆品质量的重要微生物。
一般情况下，化妆品中的霉菌和酵母菌的数量也要符合相关法规的要求。
目前，霉菌和酵母菌检测的方法有两种，其中一种是表面计数法，另一种则是过滤法。
3.厌氧菌检测法厌氧菌是在低氧或无氧环境下生长的微生物，在化妆品行业中，一般用于指检测闭口容器中的细菌。
厌氧菌检测方法主要采用Vial计数法。
此法用于检测闭口容器中微生物数目。
4.病原微生物检测法病原微生物在化妆品中是较少出现的，不过，如果化妆品中含有病原微生物，那么会对人体健康带来严重的后果。
常见的病原微生物包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
检测该类微生物的方法则主要采用生化鉴别试验、酸碱指示剂培养和快速检测法。
5.防腐剂破产检测法防腐剂是一种能够防止微生物生长的药品，但该类药品会有破产的情况，即也就是防腐能力下降。
防腐剂破产的化妆品会对人体产生一定的危害，因此，也需要进行检测。
检测方法则是先将化妆品样品进行稀释，然后加入相应的菌苗和营养琼脂培养基，进行培养和计数。
综上所述，微生物检验对于化妆品的质量控制至关重要，而化妆品生产企业一定要严格按照相关法规来进行检测，以确保安全性和可靠性。
化妆品微生物检测流程
分 别 取检 液 1ml 注入两个 平皿和 9ml 生 理盐水试管中。
将试管混匀，分 别取 1ml 注入 两个灭 平皿，
（如样品菌量
高，再适当稀
释）
将 45-50℃的卵 磷脂吐温 80 营 养琼脂倾注至 平皿内，每皿约 15ml ，使检液 与培养基充分 混匀，并做空 白，待琼脂凝固 后倒置平皿于 36±1℃培养箱 内培养 48±2 小时 (为区分 颗粒和菌落，可 在每 100ml 琼 脂中加入 1ml 0.5%的 TTC 溶液)
1：10、1： 100、1： 1000分别 取1：10、 1：100、1： 1000检液 1ml 注入 两个平 皿，注入 融化并冷 至45± 1℃左右 的虎红培 养基，充 分摇匀。 翻转平 板，置28 ±1℃培 养72± 2h，计数。 若有霉菌 蔓延生 长，为避 免影响其 它霉菌和 酵母菌的 计数时， 于48±2h 应及时将 此平板取 出计数。
取可疑菌落2 -3 个，分别接种在 绿脓菌素测定 培养基上，置 36℃±1℃培养 24h±2h，加入 氯仿3-5mL，充 分振荡使培养 物中的绿脓菌 素溶解于氯仿 液，待氯仿提取 液呈蓝色时，用 吸管将氯仿移 到另一试管中 并加入1mol/L 的盐酸1mL 左 右，振荡后，静 置片刻。•上层 盐酸液内出现 粉红色到紫红 色时为阳性，表 示被检物中有 绿脓菌素存在。
被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆 为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明 胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜 绿假单胞菌。
挑取培养物，划线接种在•Baird Parker 氏培养基，，置36-±1℃培养 24-48h。。挑取单个菌落分纯在血琼 脂平板上，置36±1℃培养24±2h。
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血浆凝块
甘露醇高盐琼脂
液态血浆
16
结果报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检， 证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸， 血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色 葡萄球菌。
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17
霉菌和酵母菌 检验操作流程
霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）化妆品检样在一定条件下培养后，1g或 1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，以判 明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳
性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露 醇，血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种， 能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致 败血症。
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14
SCDLP培养基或 7.5%NaCl肉汤
配培 养基 和稀 释液
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8
铜绿假单胞菌 检验操作流程
未检出2天，检出4天
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假
单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿 脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐， 在 42℃±1℃条件下能生长。
该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血 症等。在自然界中分布甚广，空气、水、土壤
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9
SCDLP培养基
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
十六烷三甲基 溴化铵琼脂
增
菌 18~24h 培 36±1℃ 养
分 离 18~24h 纯 36±1℃ 化
无菌落或无特征菌落
灰白色、扁 平、周围有 水溶性蓝绿 色素
特征菌落
镜检
书写检验 记录单
最终结 果判断
精选★ppt铜绿假单胞菌检查流程图
供试 液的 制备
增
菌 44.5±0.5℃ 检查
培 养
24-48h
结果 判断
不产酸不产气
书写检验 记录单
最终结 果判断
★粪大肠菌群检查流程图 7
分离培养
产酸产气
36±1 ℃ 18~24h
蛋白胨水
培养
特
44.5±0.5℃ 24±2h
征 菌
落 靛基质
液面玫瑰红色
紫黑色
结果报告
根据发酵乳糖产酸产气，平 板上有典型菌落，并经证实 为革兰氏阴性短杆菌，靛基 质试验阳性，则可报告被检 样品中检出耐热大肠菌群。
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结果报告
被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆 菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被 检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而 液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为 阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。
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13
金黄色葡萄球菌 检验操作流程
未检出2天，检出3天
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4
接种阳性菌计算回收率
推荐了解：
人员培训能力掌握的检验重要指标。
有条件可做视具体样品测试结果。
在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状 的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方 法的有效性。
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5
耐热大肠菌群 检验操作流程
未检出2天，检出3-4天
耐热大肠菌群 Thermotolerant coliform bacteria系
化妆品微生物五项检验
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1
菌落总数检验
菌落总数（Aerobic bacterial count）：化妆品检样经过处理，
在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、 pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所 得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性
供试 品的 处理
耐盐分
Baird Parker’s 或血琼脂
增
菌 24±2h
培 36±1℃ 养
分
离 24~48h 纯 36±1℃ 化
镜检
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验
甘露醇发酵试验
金黄色葡萄球菌检查流程图
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15
灰/黑色
Baird Parker’s平板
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24
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20
常规洁净工作台设置
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21
目前大部分微生物实验室布局
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22
人员操作方面： 无菌操作，避免污染； 一定专业技术或工作经验（招聘与外部审核时） 相互协作； 测试结果的证明。
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23
日常维护： 设备的计量与保证； 超净台及时清洁与杀菌（操作前后半小时）； 检验后材料的及时处理； 环境卫生（沉降菌的检测每周）。
革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验
生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验
10
黄绿色 菌膜
灰白色 湿润
十六烷三甲基溴化铵平板
粉红/ 紫红色ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
SCDLP培养基
氧化酶试验
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11
盐酸层呈粉紫色 氯仿层呈蓝绿色
绿脓菌素试验
明胶液化 试验
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N2
硝酸盐还原产气试验 明胶液化 明胶培养基（高层）
和兼性厌氧菌落总数。
菌落总数的测定便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品 进行卫生学总评价的综合依据。
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2
测试流程
48小时出结果（30-300）：
供试液 的制备
混合平板 的制备
细菌的培 养
书写检验 记录单
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数据 处理
3
检查结果、 观察与计数
TTC亦不可多加会抑制菌落生长
为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂 吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5％的 TTC 溶液，如有细菌 存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎 红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌 和酵母菌数。（5-50）
精选ppt
18
革兰氏染色操作流程
精选ppt
19
保证检验结果正确
设备： 恒温培养设备 高压灭菌器（验证） 超净工作台（生物安全柜） 均质器(旋涡混合器) 天平（0.1g） 显微镜（可要可不要无硬性要求）
一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在 44.5℃培养24h—48h能发酵乳糖产酸并产气。
该菌主要来自人和温血动物粪便，可作为粪便污染指标 来评价化妆品的卫生质量, 推断化妆品中有否污染肠道 致病菌的可能。
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6
双倍胆盐乳糖
产酸：黄色 产气：气泡
EMB琼脂
镜检
配培 养基 和稀 释液
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