食品中胆固醇含量测定方法的研究与比较_丁卓平
食品中胆固醇的测定方法研究
食品中胆固醇的测定方法研究胆固醇是一种脂类物质，存在于动物源性食品中，如肉类、蛋类和奶制品中。
大量摄入胆固醇会增加心血管疾病的风险，因此对食品中胆固醇含量的准确测定具有重要意义。
本文将探讨当前用于测定食品中胆固醇的常见方法。
一、霉菌酶法霉菌酶法是目前广泛应用于胆固醇测定的方法之一。
该方法基于霉菌酶对胆固醇的选择性催化作用。
首先，将食品样品中的脂质提取出来，然后通过添加霉菌酶，使胆固醇转化为胆固醇酯。
接下来，通过酶反应或高效液相色谱等分析技术，测定出胆固醇的含量。
这种方法具有操作简单、结果可靠的优点，但也存在一些局限性。
由于霉菌酶只对胆固醇具有选择性催化作用，其他脂类物质可能会对测定结果产生干扰。
此外，该方法对样品的处理时间较长，且需要一些特殊试剂，增加了实验的复杂度。
二、氧化法氧化法是另一种常用的胆固醇测定方法。
这种方法利用氧化剂将胆固醇氧化为胆固酮，然后通过测定反应后的产物来确定胆固醇的含量。
目前常用的氧化剂包括酶、过氧化氢和碳氧化锌等。
氧化法具有测定速度快、操作简单的特点。
它适用于各种食品样品的胆固醇测定，且对其他脂类物质的干扰较小。
然而，氧化法可能会引起一些胆固醇的降解，从而影响测定结果的准确性。
此外，由于氧化剂的使用，需要一些特殊试剂和仪器设备，增加了实验的成本。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种基于分子之间相互作用的测定方法。
该方法将胆固醇和其他脂类物质分离，然后通过检测分离出来的胆固醇来确定其含量。
高效液相色谱法可使用不同的检测器，如紫外检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
高效液相色谱法具有分离效果好、测定结果准确的优点。
它可以对不同样品中的胆固醇进行定量分析，且对其他脂类物质的干扰较小。
然而，该方法的操作较为复杂，需要较长时间进行样品的处理和分析。
此外，高效液相色谱法需要一些昂贵的仪器设备和试剂，增加了实验的成本。
综上所述，目前主要有霉菌酶法、氧化法和高效液相色谱法等用于食品中胆固醇测定的方法。
胆固醇测定分析课件
监测治疗效果和调整治疗方案。
胆固醇测定的分类
总胆固醇测定
高密度脂蛋白胆固醇测定
检测血液中所有胆固醇的总量，包括 低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白 胆固醇和极低密度脂蛋白胆 的脂蛋白，其水平降低与心血管疾病 风险相关。
低密度脂蛋白胆固醇测定
低密度脂蛋白是一种富含胆固醇的脂 蛋白，其水平升高与动脉粥样硬化风 险相关。
VS
详细描述
冠心病患者通常需要降低低密度脂蛋白胆 固醇（LDL-C）水平，而高密度脂蛋白胆 固醇（HDL-C）水平较高则有利于降低 疾病风险。脑血管疾病患者同样需要关注 血脂水平，尤其是胆固醇和甘油三酯等指 标。糖尿病患者的胆固醇水平管理也是预 防并发症的重要手段之一。
05 胆固醇测定后的建议
对于高胆固醇的建议
02 胆固醇测定方法
实验室测定法
01 02
酶法
利用胆固醇氧化酶将胆固醇转化为胆烷酰过氧化物，再通过过氧化物酶 将胆烷酰过氧化物转化为胆烷酸，最后通过酸碱滴定法测定胆烷酸的含 量，从而计算出胆固醇的浓度。
化学法
利用化学反应将胆固醇转化为可测定的物质，如胆烷酸、丙二醇等，再 通过滴定法或分光光度法测定其含量，从而计算出胆固醇的浓度。
03
免疫法
利用抗体与抗原的特异性结合反应，将胆固醇与抗体结合，再通过酶标
法或荧光法测定酶或荧光的强度，从而计算出胆固醇的浓度。
快速测定法
试纸法
利用试纸上的酶和显色剂与胆固 醇发生反应，根据试纸的颜色变 化计算胆固醇的浓度。
便携式仪器法
利用便携式仪器检测全血或血清 中的胆固醇，一般采用酶法或化 学法，仪器具有操作简便、快速、 准确等特点。
增加营养补充
适量补充富含维生素和矿物质的食品，如坚果、 鱼和绿叶蔬菜等。
食品中胆固醇含量测定方法的研究与比较
食品中胆固醇含量测定方法的研究与比较丁卓平;王明华;刘振华;何钰;赵东艳【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2004(025)001【摘要】胆固醇存在于动物的所有组织中,是动物体维持正常生理活动所必需的.但人体内过多的胆固醇将引起高血脂,并进而引发一系列心血管疾病,所以我们要控制饮食中胆固醇的摄入,因此检测食品中胆固醇的含量,确立一种快速、准确的胆固醇含量的测定方法是十分必要的.本文采用比色法测定.该法样品微量,无需提取脂质,用直接皂化法即可.这样不仅避免用毒性大而昂贵的试剂,且操作时间大大缩短.通过充入氮气,加入三氟化硼乙醚,更加促进了整个皂化过程的完全.由正交试验选择出了最佳前处理条件.其测定结果的精密度高,变异系数为1.33%.回收率(83.0%～89.0%)也较满意,测定值13.717mg/g与传统比色法测定值13.382mg/g相比有良好的一致性.本文除对蛋黄中胆固醇含量进行测定外,还对部分水产品进行了测定.测定结果否定了鱿鱼中胆固醇含量很高的推论,说明这些胆固醇几乎完全存在于鱿鱼内脏里,人们食用鱿鱼不必顾虑胆固醇过高.测定结果表明本方法也适用于其它样品的测定.【总页数】6页(P130-135)【作者】丁卓平;王明华;刘振华;何钰;赵东艳【作者单位】上海水产大学食品学院,上海,200090;上海水产大学食品学院,上海,200090;上海水产大学食品学院,上海,200090;上海水产大学食品学院,上海,200090;上海水产大学食品学院,上海,200090【正文语种】中文【中图分类】TS207【相关文献】1.鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究 [J], 吴超;李润航;于中英;娄玉杰2.蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究 [J], 张旭;胡艳;蒋桂韬;王向荣;李昊帮;戴求仲3.婴幼儿配方食品中乳铁蛋白含量测定方法比较研究 [J], 李莉; 李硕; 董亚蕾; 刘钊; 王海燕; 丁宏4.氨基酸配方及蛋白质水解配方特殊医学用途婴儿配方食品中氯测定方法的比较研究 [J], 田洪芸; 李恒; 任雪梅; 张海红; 王文特; 傅俊青; 吴鸿敏5.禽蛋中胆固醇含量快速测定方法研究 [J], 章双杰;陆俊贤;高玉时;施祖灏;刘学贤;陈宽维因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胆固醇含量测定方法的研究进展_葛军营_宋从从_郑颖
［３］ 曹 劲 松 ． 两 种 测 定 鸡 蛋 胆 固 醇 方 法 的 比 较 ［Ｊ］． 食 品 科 学 ， １９９６，１７（９）：４８－５１．
［４］ 张佳程，骆承痒．直接皂化—比色法测定食品中胆固醇的研 究［Ｊ］．食品与发酵工业，２０００，２６（３）：３５－３８．
［８］ 万 莉，赵常志，徐华筠，等．基于蛋白质直接电子转移的全 胆固醇传感器［Ｊ］．高等学校化学学报，２００９，３０ （４）：６７０－６７４．
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Research progress of detemrination methods of cholesterol
ＧＥ Ｊｕｎｙｉｎｇ， ＳＯＮＧ Ｃｏｎｇｃｏｎｇ，ＺＨＥＮＧ Ｙｉｎｇ
( College of Applied Chemistry and Bioengineering, Weifang Engineering Vocational College, Qingzhou 262500,China ) Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎｃｌｕｄｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ， ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ｅｎｚｙｍｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｔｃ．． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｏｏｄｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｗｉｔｈ Ｒａｍａｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｓｅｎｓｏｒ ｗａｓ ｒｅｐｏｒｔｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｉｔ ｉｓ ｐｏｉｎｔｅｄ ｏｕｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ； ｄｅｔｅｍｒｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ； ｆｏｏｄ； ｓｅｒｕｍ
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究吴超;李润航;于中英;娄玉杰【摘要】试验随机选取了中华绿蛋鸡产的绿壳蛋和依莎褐蛋鸡产的褐壳鸡蛋各20枚,采用邻苯二甲醛分光光度计比色法和气相色谱法,测定鸡蛋中胆固醇的含量,比较两种方法在测定鸡蛋胆固醇含量上的差异.结果表明,用邻苯二甲醛比色法测得褐壳蛋蛋黄胆固醇含量176.79 mg/枚,浓度为13.35mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量142.74 mg/枚,浓度为9.69mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).用邻苯二甲醛比色法测得绿壳蛋蛋黄胆固醇含量158.12mg/枚,浓度为10.65 mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量128.70 mg/枚,浓度为8.54 mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P57-60)【关键词】胆固醇;比色法;气相色谱;鸡蛋【作者】吴超;李润航;于中英;娄玉杰【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S811.6在人们健康意识不断增强的今天，胆固醇往往片面的被认为是对人体有害的物质，但实际上，胆固醇是动物细胞各种膜结构及神经髓鞘的重要组成部分，可调节肠胃消化道中膳食脂肪的吸收，是胆汁酸、类固醇激素及维生素D3的前体，具有重要的生理功能[7]，但如果摄入量过多，可形成高血脂症，引起动脉粥样硬化，进而诱发冠心病、高血压等一系列心脑血管疾病[1-4]。
研究表明，来源于鸡蛋中的胆固醇与来源于其他原料的胆固醇相比更易导致人体血清胆固醇水平的提高[5-6]。
鸡蛋中的胆固醇总量在100～270 mg范围内变动[7]，为满足不同人群的需要，低胆固醇鸡蛋备受人们的关注，因而鸡蛋中胆固醇含量测定的方法及准确性是评定其营养价值的重要参数。
食品中胆固醇的测定
食品安全国家标准食品中胆固醇的测定1范围本标准规定了食品中胆固醇的测定方法㊂本标准适用于食品中胆固醇的测定,第一法气相色谱法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品㊁乳及乳制品等各类动物性食品以及植物油脂中胆固醇的测定;第二法高效液相色谱法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品㊁乳及乳制品等各类动物性食品中胆固醇的测定;第三法比色法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品等动物性食品中胆固醇的测定㊂第一法气相色谱法2原理样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,石油醚和无水乙醚混合提取,提取液浓缩至干,无水乙醇溶解定容后,采用气相色谱法检测,外标法定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂3.1.2无水乙醇(C2H5OH)㊂3.1.3石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂3.1.4无水乙醚(C4H10O)㊂3.1.5无水硫酸钠(N a2S O4)㊂3.1.6氢氧化钾(K O H)㊂3.2试剂配制3.2.160%氢氧化钾溶液:称取60g氢氧化钾,缓慢加水溶解,并定容至100m L㊂3.2.2石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比):将石油醚和无水乙醚等体积混合均匀㊂3.3标准品胆固醇标准品(C27H46O,C A S号:57-88-5):纯度ȡ99%㊂3.4标准溶液配制3.4.1胆固醇标准储备液(1.0m g/m L)称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.1m g),用无水乙醇溶解并定容至50m L,放置0ħ~4ħ密封可贮藏半年㊂3.4.2胆固醇标准系列工作液分别吸取标准储备液(1.0m g/m L)25μL㊁50μL㊁100μL㊁500μL㊁2000μL,用无水乙醇定容至10m L,该标准系列工作液的浓度分别为2.5μg/m L㊁5μg/m L㊁10μg/m L㊁50μg/m L㊁200μg/m L㊂现用现配㊂4仪器和设备4.1气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(F I D)㊂4.2电子天平:感量为1m g和0.1m g㊂4.3匀浆机㊂4.4皂化装置㊂5分析步骤5.1试样制备5.1.1肉及肉制品等各类固体试样取样品的可食部分200g进行均质㊂将试样装入密封的容器里,防止变质和成分变化㊂试样应在均质化24h内尽快分析㊂5.1.2植物油脂㊁乳品等液体试样取混匀后的均匀液体试样装入密封容器里待测㊂5.2样品处理5.2.1皂化称取制备后的样品0.25g~10g(准确至0.001g,胆固醇含量约为0.5m g~5m g),于250m L圆底烧瓶中,加入30m L无水乙醇,10m L60%氢氧化钾溶液,混匀㊂将试样在100ħ磁力搅拌加热电热套皂化回流1h,不时振荡防止试样黏附在瓶壁上,皂化结束后,用5m L无水乙醇自冷凝管顶端冲洗其内部,取下圆底烧瓶,用流水冷却至室温㊂5.2.2提取定量转移全部皂化液于250m L分液漏斗中,用30m L水分2次~3次冲洗圆底烧瓶,洗液并入分液漏斗,再用40m L石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比)分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗,振摇2m i n,静置,分层㊂转移水相,合并三次有机相,用水每次100m L洗涤提取液至中性,初次水洗时轻轻旋摇,防止乳化,提取液通过约10g无水硫酸钠脱水转移到150m L平底烧瓶中㊂5.2.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干,用无水乙醇溶解并定容至5m L,待气相色谱仪测定㊂不同试样的前处理需要同时做空白试验㊂5.3测定5.3.1仪器参考条件a)色谱柱:D B-5弹性石英毛细管柱,柱长30m,内径0.32mm,粒径0.25μm,或同等性能的色谱柱;b)载气:高纯氮气,纯度ȡ99.999%;恒流2.4m L/m i n;c)柱温(程序升温):初始温度为200ħ,保持1m i n,以30ħ/m i n速率升至280ħ,保持10m i n;d)进样口温度280ħ;e)检测器温度:290ħ;f)进样量:1μL;g)进样方式:不分流进样,进样1m i n后开阀;h)空气流量:350m L/m i n;i)氢气流量:30m L/m i n㊂5.3.2标准曲线的制作分别取胆固醇标准系列工作液注入气相色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积),以浓度为横坐标㊁峰面积为纵坐标,制作标准曲线㊂5.3.3测定试样溶液注入气相色谱仪,测定峰面积,由标准曲线得到试样溶液中胆固醇的浓度㊂根据保留时间定性,外标法定量㊂胆固醇标准溶液的色谱图见图A.1㊂6分析结果的表述试样中胆固醇的含量按式(1)计算:(1)X=ρˑVmˑ1000ˑ100式中:X 试样中胆固醇含量,单位为毫克每百克(m g/100g);ρ 试样溶液中胆固醇的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样溶液最终定容的体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000㊁100 换算系数㊂计算结果应扣除空白㊂结果保留三位有效数字㊂7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8其他当称样量为0.5g,定容体积为5.0m L,方法的检出限为0.3m g/100g,定量限为1.0m g/100g㊂第二法高效液相色谱法9原理样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,石油醚和无水乙醚混合提取,提取液浓缩至干,无水乙醇溶解定容后,采用高效液相色谱仪检测,外标法定量㊂10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂10.1试剂10.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂10.1.2无水乙醇(C2H5O H)㊂10.1.3石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂10.1.4无水乙醚(C4H10O)㊂10.1.5无水硫酸钠(N a2S O4)㊂10.1.6氢氧化钾(K O H)㊂10.2试剂配制10.2.160%氢氧化钾溶液:称取60g氢氧化钾,缓慢加水溶解,并定容至100m L㊂10.2.2石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比):将石油醚和无水乙醚等体积混合均匀㊂10.3标准品胆固醇标准品(C27H46O,C A S号:57-88-5):纯度ȡ99%㊂10.4标准溶液配制10.4.1胆固醇标准储备液(1.0m g/m L):称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.1m g),用无水乙醇溶解并定容至50m L,放置0ħ~4ħ密封可贮藏半年㊂10.4.2胆固醇标准系列工作液:分别吸取标准储备液(1.0m g/m L)25μL㊁50μL㊁100μL㊁500μL㊁2000μL,用无水乙醇定容至10m L,该标准系列工作液的浓度分别为2.5μg/m L㊁5μg/m L㊁10μg/m L㊁50μg/m L㊁200μg/m L㊂现用现配㊂11仪器和设备11.1匀浆机㊂11.2高效液相色谱仪:配有紫外检测器或相当的检测器㊂11.3电子天平:感量为1m g和0.1m g㊂12分析步骤12.1试样制备12.1.1肉及肉制品等各类固体试样样品取可食部分200g,使用绞肉机或匀浆机将试样均质㊂将试样装入密封的容器里,防止变质和成分变化㊂试样应在均质化24h内尽快分析㊂12.1.2乳品等液体试样取混匀后的均匀液体试样装入密封容器里待测㊂12.2样品处理12.2.1皂化称取制备后的样品0.25g~10g(精确至0.001g,胆固醇含量约为0.5m g~5m g),于250m L圆底烧瓶中,加入30m L无水乙醇,10m L60%氢氧化钾溶液,混匀㊂将试样在100ħ磁力搅拌加热电热套皂化回流1h,不时振荡防止试样黏附在瓶壁上,皂化结束后,用5m L无水乙醇自冷凝管顶端冲洗其内部,取下圆底烧瓶,用流水冷却至室温㊂12.2.2提取定量转移全部皂化液于250m L分液漏斗中,用30m L水分2次~3次冲洗圆底烧瓶,洗液并入分液漏斗,再用40m L石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比)分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗,振摇2m i n,静置,分层㊂转移水相,合并三次有机相,用水每次100m L洗涤提取液至中性,初次水洗时轻轻旋摇,防止乳化,提取液通过约10g无水硫酸钠脱水转移到150m L平底烧瓶中㊂12.2.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干,用无水乙醇溶解并定容至5m L,溶液通过0.45μm过滤膜,收集滤液于进样瓶中,待高效液相色谱仪测定㊂不同试样的前处理需要同时做空白试验㊂12.3测定12.3.1仪器参考条件a)色谱柱:C18反相色谱柱,柱长4.6mm,内径150mm,粒径5μm,或同等性能的色谱柱;b)柱温:38ħ;c)流动相:甲醇;d)流速:1.0m L/m i n;e)测定波长:205n m;f)进样量:10μL㊂12.3.2标准曲线的制作分别取10μL胆固醇标准工作液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积),以浓度为横坐标㊁峰面积为纵坐标,制作标准曲线㊂12.3.3测定将10μL试样溶液注入高效液相色谱仪,测定峰面积,由标准曲线得到试样溶液中胆固醇的浓度㊂胆固醇标准溶液的色谱图见图A.2㊂13分析结果的表述试样中胆固醇的含量按式(2)计算:(2)X=ρˑVmˑ1000ˑ100式中:X 试样中胆固醇的含量,单位为毫克每百克(m g/100g);ρ 试样溶液中胆固醇的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样溶液定容体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000㊁100 换算系数㊂计算结果应扣除空白㊂结果保留三位有效数字㊂14精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂15其他当称样量为1g,定容体积为5m L,方法的检出限为0.64m g/100g,定量限为2.1m g/100g㊂第三法比色法16原理样品进行脂肪提取后的油脂,经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,用石油醚提取,浓缩后加入冰乙酸,以硫酸铁铵试剂作为显色剂,采用分光光度计,在560n m~575n m波长下检测,外标法定量㊂17试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂17.1试剂17.1.1无水乙醇(C2H5O H)㊂17.1.2石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂17.1.3硫酸(H2S O4)㊂17.1.4冰乙酸(C2H4O2):优级纯㊂17.1.5磷酸(H3P O4)㊂17.1.6硫酸铁铵[F e N H4(S O4)2㊃H2O]㊂17.1.7钢瓶氮气(N2):纯度99.99%㊂17.1.8海砂㊂17.1.9氢氧化钾(K O H)㊂17.1.10氢氧化钠(N a O H)㊂17.1.11盐酸(H C l)㊂17.1.12乙醚(C2H5O)㊂17.2试剂配制17.2.1铁矾储备液:称取4.463g硫酸铁铵[F e N H4(S O4)2㊃H2O]于100m L磷酸中(如果不能充分溶解,超声后取上清液),贮藏于干燥器内,此液在室温中稳定㊂17.2.2铁矾显色液:吸取铁矾储备液10m L,用硫酸定容至100m L㊂贮藏于干燥器内,以防吸水㊂17.2.350%氢氧化钾溶液:称取50g氢氧化钾,用水溶解,并定容至100m L㊂17.2.45%氯化钠溶液:称取5g氯化钠,用水溶解,并定容至100m L㊂17.2.5盐酸溶液(1+1):将盐酸与水等体积混合均匀㊂17.2.6氢氧化钠溶液(240g/L):称取24g氢氧化钠,用水溶解并定容至100m L㊂17.2.7海砂:取用水洗去泥土的海砂或河砂,先用盐酸溶液(1+1)煮沸0.5h,用水洗至中性再用氢氧化钠溶液(240g/L)煮沸0.5h,用水洗至中性,经100ħʃ5ħ干燥备用㊂17.3标准品胆固醇标准品(C27H46O,C A S号:57-88-5):纯度ȡ99%㊂17.4标准溶液配制17.4.1胆固醇标准储备液(1.0m g/m L):称取胆固醇标准品0.10g(精确至0.1m g),用冰乙酸溶解并定容至100m L㊂放置4ħ密封可贮藏半年㊂17.4.2胆固醇标准工作液(100μg/m L):吸取胆固醇标准储备液(1.0m g/m L)10m L,用冰乙酸定容至100m L㊂现用现配㊂18仪器和设备18.1匀浆机㊂18.2分光光度计㊂18.3电子天平:感量为1m g和0.1m g㊂19分析步骤19.1胆固醇标准曲线的制作吸取胆固醇标准工作液0.0m L㊁0.5m L㊁1.0m L㊁1.5m L㊁2.0m L分别置于10m L试管中,在各管内加入冰乙酸使总体积均达4m L㊂沿管壁加入2m L铁矾显色液,混匀,在15m i n~90m i n内,在560n m~575n m波长下比色㊂以胆固醇标准浓度为横坐标,吸光度为纵坐标制作标准曲线㊂19.2测定19.2.1食品中脂肪的提取与测定根据食品种类分别用索氏脂肪提取法,研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪㊂并计算出每100g食品中的脂肪含量㊂19.2.2食品中胆固醇的测定将提取的油脂3滴~4滴(约含胆固醇300μg~500μg),置于25m L试管中,准确记录其质量㊂加入4m L无水乙醇,0.5m L50%氢氧化钾溶液,混匀,装上冷凝管,在65ħ恒温水浴锅中皂化1h㊂皂化时每隔20m i n~30m i n振摇一次使皂化完全㊂皂化完毕,取出试管,用流水冷却㊂加入3m L5%氯化钠溶液,10m L石油醚,盖紧玻璃塞,在电动振荡器上振摇2m i n,静置分层(一般约需1h以上)㊂取上层石油醚液2m L,置于10m L具塞玻璃试管内,在65ħ水浴中用氮气吹干,加入4m L冰乙酸,2m L铁矾显色液,混匀,放置15m i n后在560n m~575n m波长下比色,测得吸光度,在标准曲线上查出相应的胆固醇含量㊂不同试样的前处理需要同时做空白试验㊂20分析结果的表述试样中胆固醇的含量按式(3)计算:X=AˑCˑV1V2ˑmˑ1000 (3)式中:X 试样中胆固醇含量,单位为毫克每百克(m g/100g);A 测得的吸光度值在胆固醇标准曲线上的胆固醇含量,单位为微克(μg);C 试样中脂肪含量,单位为克每百克(g/100g);V1 石油醚总体积,单位为毫升(m L);V2 取出的石油醚体积,单位为毫升(m L);m 称取食品油脂试样量,单位为克(g);1000 换算系数㊂计算结果应扣除空白㊂结果保留三位有效数字㊂21精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂22其他方法的检出限为2.4m g/100g,定量限为7.2m g/100g㊂附录A胆固醇标准的色谱图A.1胆固醇标准溶液的气相色谱图见图A.1㊂图A.1胆固醇标准溶液的气相色谱图A.2胆固醇标准溶液的高效液相色谱图见图A.2㊂图A.2胆固醇标准溶液的高效液相色谱图。
蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究
取 新 鲜 蛋 黄 稀 释 液 （ 度 为 ０１ ・ １ 浓 ．ｇ ｍＬ ） ．ｍＬ ０ 于 １ ０ ｍＬ离 心管 中 ，加 入 ９ ％乙 醇 １ ，用 漩 涡 ５ ．ｍＬ ０ 振 荡器 混匀 后 ，加 入 乙醚 ２５ｍ ． Ｌ，再 次 混匀 后加 入 石 油 醚 ２５ｍ ，震 荡 混 匀 ，３００ｒｍ离 心 ５ｍｉ， ． Ｌ ０ ｐ ｎ
１ 材料 与 方法 １１ 试验 材料 ．
样 品前 处 理 方 法 同 １ ．，根 据 试 剂 盒 说 明将 ．Ｉ ２
样 品与工作 液混合 ，３ ７℃保 温 ５ｒｎ ，在波 长 ｉ后 ｎ ５ ０ｎ ０ ｍ处 比色 测 定 吸 光 度值 ，并 根 据样 品 管 和 校
准 管 的吸光 度值 及校 准 品浓度 计算 胆 固醇含 量 ，计
１２３ 试 剂 盒 法 ．．
反应来分析的传统方法 ，色谱法是适用范 围较广 、 灵敏 度较 高 的分析 方 法 ，而高 效液相 色谱 不需 要 载 气 ，在使用上较气相色谱和液相色谱一 质谱联用的方 法简 便 １ 试验 对液 相色谱 法 、皂化 一 。本 比色法 和 试剂 盒法 测 定蛋 黄胆 固醇 的过 程 和结果 进行 研究 和 比较 ，为鸡 蛋胆 固醇含量测 定工作提供 方法指导 。
入 冰 乙酸 １ 溶 解 残余 物 ，再 加 入显 色 液 ３ｍＬ于 ｍＬ ６ ０℃ 水 浴 １ ｉ，在 ４０ｎ 用 ７２ 光 光 度 计 ５ｍｎ ９ ｍ下 ２分 进 行 比色分 析 ，同法 做空 白样 。将胆 固醇标准 品 用 甲醇 溶解 配 成 １ ・ Ｌ 液 ，取 不 同体 积 胆 固醇 ｍ－ ｍｇ 溶 标 准 品溶 液 与样 品做 同样处 理 ，以胆 固醇 浓度 为横 坐 标 ，吸光 度值 为纵 坐标制 作 工作 曲线 。根据 样 品 的吸光 度值 计算样 品 中胆 固醇 含量 。
化学实验测定某种食品中胆固醇含量
化学实验测定某种食品中胆固醇含量随着人们对健康的日益关注，食品中的营养成分成为了大家关注的重点之一。
胆固醇作为一种常见的脂质，其摄入量过高可能会对人体健康产生负面影响。
因此，准确测定食品中的胆固醇含量对于保持身体健康至关重要。
在本文中，将介绍一种化学实验方法，用于测定某种食品中胆固醇含量的准确性。
实验材料和仪器1. 某种食品样品2. 石油醚（溶剂）3. 乙醇4. 无水硫酸铜5. 对氯苯甲酸6. 硫酸亚铁（0.1M）7. 高锰酸钾溶液（0.01M）8. 硝酸钾溶液（2%）9. 烧杯、试管、滴定管、移液管、天平等实验器材实验步骤第一步：样品准备1. 取食品样品适量，将其研磨成粉末状。
2. 称取2g食品粉末，放入玻璃烧杯中。
第二步：提取胆固醇1. 向烧杯中加入15mL石油醚，搅拌10分钟，使样品中的胆固醇充分溶解于石油醚中。
2. 将石油醚层转移至试管中。
第三步：胆固醇的定量分析1. 在试管中加入3mL乙醇，将其蒸发干净。
2. 在试管中加入2mL无水硫酸铜，并用试管架加热，使其变为蓝色。
3. 加入0.3g对氯苯甲酸，继续加热，使试管中的液体变为红色。
4. 将试管放置至水浴中冷却4分钟。
5. 加入1mL 0.1M硫酸亚铁，迅速滴定0.01M高锰酸钾溶液，直到试管中液体变为淡黄色。
记录滴定所需的高锰酸钾溶液体积V1。
计算胆固醇含量所含胆固醇质量 = (V1 × 0.01 ×被试样品质量 × 1000) / (2 × 0.3)实验注意事项1. 实验操作中需要保持实验环境干燥，以免水分与试剂发生反应影响实验结果。
2. 操作时需佩戴手套、护目镜等防护用具，以防实验中的化学品对身体造成伤害。
3. 称量操作应准确，以保证实验数据的精确性。
实验结果与讨论通过以上实验步骤，我们可以得到食品样品中胆固醇的含量。
胆固醇是食品中常见的脂质成分，其含量的准确测定对于人们控制饮食、保持心血管健康至关重要。
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由于深加工食品中模板含量少，需要利用高效的或
ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓ ａｖａｉｌａｂｌｅ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ
特殊的 Ｄ Ｎ Ａ 提取方法，以提取到其中微量的 Ｄ Ｎ Ａ 。针
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９９， （９）： ３８０－３８８．
对不同的深加工食品，需要设计不同的模板提取方法。 ［４］ Ｇｅｏｒｇ Ａ Ｓ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ Ｆｏｒ ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉ－
酸性溶液和弱碱性水溶液等。经过多次有机溶剂提取， ［１］ Ｄ Ｎ Ａ 大量损失；并且在酸碱和加热等提取条件下，使
Ｄ Ｎ Ａ 断裂成小片段。对于经过提纯的食品或食品原料， ［２］ 如大豆精炼油、大豆异黄酮、大豆卵磷脂、大豆蛋白
等，模板 Ｄ Ｎ Ａ 有二个显著特点：其一是含量少，其二 ［３］ 是片段小。
Ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｄｕｃｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｅｔｈｏｄ
ＤＩＮＧ Ｚｈｕｏ－ｐｕａ，ＨＥ Ｙｕ，ＺＨＡＯ Ｄｏｎｇ－ｙａｎ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＳＦＵ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００９０， Ｃｈｉｎａ）
130 2004, Vol. 25, No. 1
食品科学
※分析检验
３ 讨 论
样品中十几个拷贝的 Ｄ Ｎ Ａ 模板；用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 Ｎ Ｏ Ｓ ，
大豆异黄酮的提取，主要根据被提取物的性质及伴 存杂质的情况来选择合适的提取用溶剂。对大豆异黄酮 的甙类成分，一般用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、 水或某些极性较大的混合溶剂，甙元用极性较小的溶 剂，如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等来提取。在综合提取
经过探索，利用 Ｗｉｚａｒｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ，
可有效提取到了大豆异黄酮样品中 Ｄ Ｎ Ａ 模板。
［５］
加工工艺等因素使食品成品中的 Ｄ Ｎ Ａ 被破坏，所提
取的 Ｄ Ｎ Ａ 呈碎片状，大小从几十到数百对碱基不等，因
此选择引物时，必须考虑到该引物所扩增出的 Ｐ Ｃ Ｒ 产物 ［６］
收稿日期：２００３－０６－２５ 基金项目：农业部“八五”渔业科技计划填补项目（渔 ８５－９５－０８－０２） 作者简介：丁卓平（１９５７－），女，副教授，从事仪器分析、食品添加剂、食品保健与安全的教学和研究工作。
※分析检验
食品科学
2004, Vol. 25, No. 1 131
表明本方法也适用于其它样品的测定。 关键词：胆固醇；比色法；快速测定
可以检测到被扩增样品中上百个拷贝的 Ｄ Ｎ Ａ 模板。由于 本研究中建立的方法灵敏度高，所以能检测到大豆异黄 酮样品中相应的转基因成分。有些实验室不能检测到有 关大豆异黄酮样品中的转基因成分，可能和模板提取过 程、Ｐ Ｃ Ｒ 扩增过程、检测过程等环节有关。
大豆异黄酮时一般采用乙醇水溶液、甲醇水溶液、丙酮 参考文献：
从 ８ ０ 年代初期开始，作为一种可能危害人体健康的 食品组分——胆固醇已逐渐成为国内外食品医学界辩论的 热门话题［ １ ］ 。胆固醇是环戊烷并多氢菲的衍生物，亦称 “ 胆 甾 醇 ”， 是 动 物 体 内 最 重 要 的 固 醇 ，通 常 是 以 游 离 状态或酯化状态的形式存在于动物组织中［２］ ，是动物体维 持正常生理活动所必需的。近年来，我国人民的胆固醇 摄取量，由于动物性食物之摄食增加而逐年递增。但是 人体内过多的胆固醇将引起高血脂，并进而引发动脉粥 样硬化、高血压、冠心病等一系列心血管疾病［ ３ ］ ，因此 控制饮食胆固醇摄入是非常必要的。鸡蛋中含有大量的 胆固醇，是人体摄入胆固醇的重要途径。鱿鱼的营养价 值极高，蛋白质含量达 １ ６ ％ ～２ ０ ％ ，而且鱿鱼的脂肪里 含有大量的高度不饱和脂肪酸如 Ｅ Ｐ Ａ 、Ｄ Ｈ Ａ ，可有效减 少血管壁内所累积的胆固醇。尽管如此鱿鱼并未受到人 们的青睐， 在农业部“鱿鱼加工利用研究”课题的实施过 程中，来自山东等渔业公司反映，由于人们认为鱿鱼含 有很高的胆固醇，故鱿鱼的销售受到负面影响，但据分 析，这些胆固醇几乎完全存在于鱿鱼的内脏里，因此食 用鱿鱼不必顾虑胆固醇过高。为了验证这种推断，对鱿
食品中胆固醇含量测定方法的研究与比较
丁卓平，王明华，刘振华，何 钰，赵东艳 （上海水产大学食品学院，上海 ２０００９０）
摘 要：胆固醇存在于动物的所有组织中，是动物体维持正常生理活动所必需的。但人体内过多的胆固醇将引起 高血脂，并进而引发一系列心血管疾病，所以我们要控制饮食中胆固醇的摄入，因此检测食品中胆固醇的含量， 确立一种快速、准确的胆固醇含量的测定方法是十分必要的。本文采用比色法测定。该法样品微量，无需提取脂 质，用直接皂化法即可。这样不仅避免用毒性大而昂贵的试剂，且操作时间大大缩短。通过充入氮气，加入三 氟化硼乙醚，更加促进了整个皂化过程的完全。由正交试验选择出了最佳前处理条件。其测定结果的精密度高， 变异系数为１．３３％。回收率（８３．０％～８９．０％）也较满意，测定值１３．７１７ｍｇ／ｇ与传统比色法测定值１３．３８２ｍｇ／ｇ相比有良 好的一致性。本文除对蛋黄中胆固醇含量进行测定外，还对部分水产品进行了测定。测定结果否定了鱿鱼中胆固 醇含量很高的推论，说明这些胆固醇几乎完全存在于鱿鱼内脏里，人们食用鱿鱼不必顾虑胆固醇过高。测定结果
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｉｍａｌｓ，ａｎｄ ｉｔ＇ｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎｉｍａｌｓ ｔｏ ｍａｉｎｔａｉｎ ｔｈｅｉｒ ｎｏｒｍａｌ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｂｅｈａｖｉｏｒ．Ｂｕｔ ｔｈｅ ｓｕｒｐｌｕｓ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｏｄｙ ｗｉｌｌ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｈｉｇｈ ｂｌｏｏｄ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ，ｓｏ ｗｅ ｓｈｏｕｌｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ｉｔ ｉｓ ｇｒｅａｔｌｙ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｏｄ ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｅｔｔｌｅ ａ ｐｒｅｃｉｓｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｃｏｌｏｒｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏ－ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｉｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ，ｗｈｉｃｈ ｄｏｅｓｎ＇ｔ ｎｅｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ａｎｄ ｊｕｓｔ ｕｓｅｓ ｔｈｅ ｄｉｒｅｃｔ ｓａｐｏｎｏｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｕｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ａｖｏｉｄｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｓｔｔｏｘｉｃ ａｎｄ ｅｘｐｅｎｓｉｖｅ ｍａｔｅｒｉａｌ ｂｕｔ ａｌｓｏ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ ｓａｐｏｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｂｙ ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｇａｓ ａｎｄ Ｂｏｒｏｎ Ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｄｅ Ｅｔｈｅｒａｔｅ．Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｓａｐｏｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｒｅ ｃｈｏｓｅｎ ｏｕｔ ｂｙ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｈａｓ ａ ｈｉｇｈ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｖａｌｕｅ．Ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｉｓ １．３２％，ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｉｏ ｗｈｉｃｈ ８４．０％～８９．７％ ｍａｋｅｓ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ ｓａｔｉｓｆｉｅｄ．Ｉｎ ｔｈｅ ｐａｐｅｒ ｐａｒｔｓ ｏｆ ｓｅａｆｏｏｄｓ ａｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ，ｅｘｃｅｐｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｅｇｇ ｙｏｌｋ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｄｅｎｉｓ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｈｉｇｈ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｓｑｕｉｄｓ，ａｎｄ ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｎｅａｒｌｙ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｌｏｒｇａｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｑｕｉｄｓ，ｗｈｅｎ ｐｅｏｐｌｅ ｅａｔ ｔｈｅｍ，ｔｈｅｙ ｎｅｅｄｎ＇ｔ ｃｏｎｓｉｄｅｒ ｓｕｒｐｌｕｓ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ．Ｆｉｎａｌｌｙ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓｈｏｗｓ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ａｌｓｏ ａｄａｐｔ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ；ｔｈｅ ｃｏｌｏｒｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ；ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ 中图分类号：ＴＳ２０７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００４）０１－０１３０－０６
的片段不能太大，否则很可能由于引物不合适而未检出
外源基因，造成假阴性。本研究中所引用的引物均在 ２００
ｂ ｐ 以下，使得每对引物均能检测到特定的基因片段。 ［７］ 从 ３ ５ Ｓ 和 Ｎ Ｏ Ｓ 基因检测灵敏度试验看，该方法灵敏
度是很高的。用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ３ ５ Ｓ ，可以检测到被扩增