最新脂肪干细胞的体外培养专业知识讲座
体外培养成人脂肪间充质干细胞生物学特性及诱导分化为心肌细胞的研究
【 摘
要 】 目的 通过分离 、 培养脂肪问充质干细胞观察其生物学特性及诱导分化为心肌细胞 ， 为心肌再
胶原酶消化分离成人脂肪来源的问充质 干细胞并进行传代培养 ， 置相差显微 倒
生提供 良好 的干细胞来源。 方法
镜观察细胞形态 ， 流式细胞仪测定 Ｃ ２ 、 Ｄ １Ｃ ３ 、Ｄ ４及细胞周期 ， Ｔ绘制细胞生长 曲线。用第 ３ Ｄ ９ Ｃ ３ 、Ｄ ４Ｃ ４ ＭＩ 代细胞 进行诱导分化 ， 观察不 同浓度 ５ 氮杂胞苷 （－ ｚ ， ， ， ，０ １ ，０Ｉ ｏ Ｌ 及不 同作用 时间（２ ２ ，８ ７ ） 一 ５ Ａ ａ ｌ３ ５ ｌ ，５ ２ ｍ ｌ ） ｘ ／ １ ，４ ４ ，２ｈ 诱 导其向心肌细胞分化的差别 ， 采用最佳浓度 １ ｍ ｌ ， ０Ｉ ｏ Ｌ 最佳作用时间 ２ ￣ ／ ４ｈ进行实验 ， 分别在第 ７ ｌ ， ｌ２ 天用 ，４ ２ ，８ 免疫细胞荧光染色鉴定 心肌 细胞 一 横纹肌 、 肌球蛋 白重链 （ Ｃ 、 ＭＨ ）心肌肌钙蛋 白 Ｉｃ ｎ） （Ｔ Ｉ表达 ， ｌ 第 ４天反转 录一 聚合酶链反应 （ Ｔ Ｐ Ｒ） Ｒ — Ｃ 法检测心肌发育幸关 基因 Ｎ Ｘ ． Ｈ Ｋ ２５的表达 。结果 倒置相差显微镜下观察原代细胞 ， 可 见细胞呈梭型 、 圆形或椭圆形 ， 核 偶见双核 。 传代细胞 核原代细胞形态相似 ， 排列有了一定 的方 向性 。 流式细胞仪 检测结果显示 ， １３ ５ 第 、 、 代细胞均高表达 Ｃ ２ Ｄ ９和 Ｃ ４ ； Ｃ ３ 始终 表达很 弱 ， Ｄ４ 而 Ｄ １ 可认为呈阴性表达 ； Ｄ ４在第 Ｃ ３ １３ 、 代细胞弱表达 ， 在第 ５代细胞表达逐 渐减 弱为阴性 。细胞生长 曲线显示前 ３ｄ处于细胞潜 伏状 态 ， ４天进 第
ｓ ｕｒ ｆｓｅ ｃ ｌｓ ｆｒｍｙ ｅ ｒ ａ ｅ ｅ ｅ ａ ｉｎ Ｍ ｅｈｏｄｓ ｏ ｃｅｏ ｔｍ ｅ ｌ ｏ ａ ｄｉｌｒ ｇ ｎ ｒ ｔｏ ． ｏ ｔ ＡＤＭ Ｓ ｒ ｓ ｌｔ ｔ ｏｌｇ ｎａ ｅ ｄ ｇ ｓｉｎ ａ ｕ — Ｃｓ ｗｅ ｅ ｉｏａｅｄ ｗｉｈ ｃ ｌ ｅ ｓ ｉ ｅ ｔｏ ｎｄ ｃ ｌ ａ
脂肪干细胞
脂肪 Zuk, 2001, 2002；Sen, 2001；Von Heimburg D, 2001
神经 Safford, 2004；Ashjian, 2003；Rchman, 2004；杨立业, 2003, 2004
多向分化潜能
脂肪间充质干细胞向不同细胞分化是在特异性 诱导因子作用下进行的。
下面介绍常用的一些多向诱导分化因子及诱导 后的细胞特性。
脂肪间充质干细胞
Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells
汇报提纲
一. 研究背景 二. 脂肪干细胞优点及表面标记 三. 多向分化潜能 四. 猪脂肪干细胞分离培养、诱导分化及其建系 五. 应用前景及待解决的问题
一、研究背景
动物体内，脂肪组织不仅是重要的能量贮存库和 赋形组织，还是保持内环境稳定及具有分泌激素和细 胞因子的重要部位。脂肪细胞增殖与分化失常是导致 肥胖及Ⅱ型糖尿病的重要因素。因此，脂肪细胞分化 的研究一直是国内外医学及生物学领域的研究热点之 一。
脂肪间充质 干细胞优点
最后，从经济和社会效益看，从脂肪组织中获 取干细胞可将原本认为是废弃物的脂肪，如临床上 脂肪抽吸术后的脂肪组织及动物屠宰后不可实用的 内脏脂肪等变为干细胞库的重要来源，具有极大的 经济与社会效益。
表面标记
关于脂肪间充质干细胞标志，目前尚无统一标 准。一般认为，脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干 细胞均表达CD44、CD105、STRO-1、CD166及 CD117。其中CD117是一种干细胞因子受体，在全 能或多能干细胞中表达，包括胚胎干细胞。
成肌诱导后的形态学观察
A
B
C
D
成肌诱导
成肌诱导第7天出现细胞球形变化(A)，诱导第14天开始出现接 触、融合。部分出现伪足，形态变长(B)，诱导第21天周围梭形细 胞明显减少，形成巨大的球形细胞(C,D)。上图为茜素红染色。
体外诱导脂肪干细胞向内皮细胞及成血管的分化
Ａ ｂｓｔ ｒ ａｃ ｔ
体外诱导脂肪干细胞向内皮细胞及成血管的分化☆
马 丽’ ，黄鲁 刚’ ，林 毕
１四川 大学 华 西医 院小 儿外科 ， 四川省 戍都 市 ６ １ ０ ０ ４ １ ２四川 大 学华 西 医院老年 医学 研 究室 ，四川 省成 都市 ６ １ ０ ０ ４ １
文革 旯 点 ：
实验 结果 表 明，脂肪 干细 胞培养 传代 有 其优越 性 ，能定 向分化 为 内皮细 胞并 成血 管 ，参 与缺 ｍ组织 血运
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． ２ ０ ９ ５ — ４ ３ ４ ４ ． ２ ０１ ３ ． １ ０ ０ ０ ４ 印： ／ ／ ｗ ｗｗ ｃ ＃ ｅ ￣ ｏ ｒ ｇ ］ 屿诵．黄鲁ｌ ： 《 ｆ ｊ 槌苹 ｛ 奉 申 ｝ 诱导 肪ｆ维匏 向内受绝匏及戒血管的分｛ 七 １ ｛ ． 国组织 Ｉ程研竞 ．２ ０ １ ３ ． ７ （ １ ０ ） ： １ ７ ３ ０ 一 、 ７ ３ ５
中 组织工ｆ 究
‘ ７ ７誊 ７ ０
２ ０ １ ３—０ ３—０ ５｝ Ｈ 版
～ ｃ 一 。
Ｃｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕｒ ｎ ａｌ ｏ ｆＴ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ Ｅｎ ｇ ｉ ｎｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｍａ ｒ ｃ ｈ ５ ．２ ０ １ ３ Ｖ ｏ １ ． １ ７． Ｎｏ． １ ０
导 细胞 行免 疫组 织化 学检 查 ＣＤ ３ １ 的 表达 。
文献标识码 Ａ 文章编号： ２ ０ ９ ５ ． ４ ３ ４ ４
（ ２ ０ １ ３ ） １ ０ — ０ １ ７ ３ ０ — ０ ６
结果 与结 论 ：免 疫组 织化 学检 测脂 肪干 细胞 的 ＣＤ ３ １ 表 达 阴性 ，诱 导细胞 Ｃ Ｄ ３ １可 见阳性表 达 。在 三维 立 体培 养摹 内诱导 的细胞 ２ ４ ｈ 逐 渐迁 徙成 团 ，伸出伪 足 ，诱导 １周细 胞形 成网格 样 交叉 ， ２周形成 较 长 血 管 ，后ｍ 管增 粗 ，并 出现分 又 ，Ｃ Ｄ ３ １阳性 表达 。 因此 ，脂肪 干细 胞体 外可 以被 诱导 向内皮 细 胞表 型 转 分 化， 并形 成血 管 ，提 示脂 肪 干细 胞可 以作 为促进 组织 工程 移植物 血 管化 的种 子细 胞 的理 想选 择 。
体外培养成人脂肪间充质干细胞生物学特性及向心肌样细胞的诱导分化
摘 要 目的 ： 外 分 离 培 养 成 人脂 肪 组 织 来 源 的 间 充 质 干 细 胞 ， 索 其 基 本 生 体 探 物 学 特 性 及 向心 肌 细 胞 诱 导 分 化 的 潜 能 ，为 心 肌 再 生 提 供 理 想 的 自体 干 细 胞 来 源 方 法 ： 验 于 ２０ — １ １ 实 ０ ５ ０ ／ ２在解 放 军 兰 州 军 区 兰 州 总 医 院 医 学 实 验 中心 完 成 取 本 院 微 创 外 科 中心 一 急 性 单 纯 性 阑 尾 炎患 者 大 网 膜 脂 肪 组 织
细胞周期及 Ｃ ４ Ｃ ３ Ｄ ４、Ｄ ４的 表 达 ， 第 ４代 细 胞 用 ５ 氮 胞 苷 诱 导 使 其 向 一 心肌细胞分化 ， 免疫 细 胞化 学 鉴定 心 肌 样 细 胞 。 结 果 ： 分 离 培 养 的 脂 肪 间 充 质 干 细 胞 经 传 代 纯 化 后 细胞 形 态 呈 均 一 显 ， 染 色 质 多 ， 染 电 核 核 常 异
・
基础 研 究 ・
体外培养成人脂肪问充质干细胞生物学特性及向心肌样细胞的诱导分化☆
张 卫 泽 ， 陈跃 武 ， 永 清 ， Ｊ琴 ， 陈 哈Ｊ＼ 马 凌 －秦 ， 勉 ， 志 斌 ｚ 洪
１ —７ ｈｎ ｌ ４ ｛ ｉａ Ｃ
解 放 军 兰州 军 区 兰 州 总 医 院Ｇ 内科 ，甘 肃 省 兰州 市 ７ ｏ ５ ；兰 州 大 ３ ０ ０ 学 临床 医 学院 ， 肃 省 兰 州 市 ７ ０ ０ ；解 放 军 兰州 军 区 兰 州 总 医院 医 甘 ３ ０ ０ 学 实验 中， ， 肃 省 兰 州 市 ７ ０ ５ 甘 ３００ 张 卫 泽 ☆ ， ，９ ５年 生 ， 肃 省和 政 县 人 ， 族 ，ｏ ２年 中 国 协 和 医 科 男 １６ 甘 汉 ２０ 大 学毕 业 ， 士 ， 任 医师 ， 博 主 主要 从 事心 血 管 内科 临 床 与 基 础 研 究
脂肪干细胞的体外培养PPT讲稿
脂肪干细胞成脂分化
ASC在特定促进因素下可分化为脂肪细胞，长期培养仍可维持此种分化能力。 脂肪细胞分化过程大致如下：
（1）脂肪干细胞向脂肪细胞定向分化，形成脂肪母细胞（一种尚未出现脂滴的 梭形细胞）；（2）脂肪母细胞经过生长抑制、克隆性增殖，形成前体脂肪细胞 （此时细胞刚开始出现脂滴）；（3）前体脂肪细胞经过生长抑制、克隆性增殖 和一系列基因表达的变化，形成不成熟脂肪细胞或多室脂肪细胞（内含大量小脂 滴）；（4）多室脂肪细胞随着脂肪在细胞中的沉积，小脂滴逐渐汇集成一个大 脂滴充满脂肪细胞的大部分，形成成熟脂肪细胞或单室脂肪细胞，成为成熟的脂 肪细胞。
Zuk等认为，ASC可能由多种异源性细胞构成，其中包括内皮细胞、成纤维细
胞、平滑肌细胞以及前体脂肪细胞等。现有ASC主要由成纤维细胞以及来自间 叶组织的细胞构成，仅伴有少量内皮细胞与平滑肌细胞。上述细胞在ASC中的 含量甚低，不可能定向培养分化为其他组织细胞，但进一步确认和识别真正的 ASC的表面蛋白及其基因仍是必要的。
间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检
测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好 方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。
脂肪干细胞的表面标记
a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和 α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM 1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞 粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表 达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合 素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(E selectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin、 Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达 造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。
脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识
脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue-derived stromal/stem cells，ASCs)是从脂肪组织中分离提取得到的，具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。
ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容，也是组织工程及再生医学的研究热点。
大量研究表明，自体脂肪组织移植到软组织缺损部位后，其中40%~60%会被吸收，自体脂肪组织结合ASCs移植，能明显减少自体脂肪组织移植的吸收、液化、坏死及纤维化等情况发生，有利于构建具有生物学结构和功能的脂肪组织。
同时，利用脂肪组织可以进行大规模的ASCs提取、制备、储存，为再生医学提供种子细胞。
目前，国内外尚缺乏ASCs提取、分离、制备及储存的标准和质量管理规范，导致各制备机构或研究应用机构之间无法进行统一评估和交流，严重制约了ASCs在皮肤软组织修复重建等相关领域的发展。
为了建立安全、规范、稳定、可追溯的行业共识、指南及标准，从源头保证ASCs的提取、制备、储存的高质性和安全性，中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会联合从事细胞制备和存储、皮肤软组织修复重建、分子生物学及整形和美容外科等多学科的专家，参照中国医药生物技术协会《细胞库质量管理规范》及《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，组织起草脂肪组织采集及ASCs制备、检测、储存的标准和质量管理专家共识，旨在促进ASCs在皮肤软组织修复重建技术等领域研究成果的转化，进一步促进多学科的交流和发展。
1 脂肪组织采集1.1 脂肪组织采集机构要求脂肪组织的采集工作应在取得《医疗机构执业许可证》的医疗机构中实施。
采集人员应持医师或者护士执业证书，经过相应的专业技术培训。
采集机构应具有完整的标准化操作规程(standard operation procedure，SOP)，并备有采集过程中的应急预案。
脂肪干细胞培养方法 组织块培养法
脂肪干细胞是一种多能干细胞，存在于脂肪组织中，具有较强的自我更新和分化能力，因此在再生医学领域具有广阔的应用前景。
脂肪干细胞的培养方法是进行研究和应用的基础，其中组织块培养法是一种常用的培养方法，其流程和步骤需要严谨操作和控制，以获得高质量的脂肪干细胞。
一、脂肪组织的获得脂肪干细胞的来源是脂肪组织，脂肪组织的获得需要经过以下步骤：1. 临床患者手术采集：通过手术方式从患者身体的特定位置（如腹部、臀部等）采集脂肪组织。
2. 动物实验材料采集：通过特定的实验动物模型，在实验室条件下从动物体内获取脂肪组织。
脂肪组织的来源直接关系到后续脂肪干细胞的培养和应用性能，因此需要严格控制采集过程和条件，确保获得的脂肪组织质量和干细胞丰度。
二、脂肪组织处理和组织块制备1. 脂肪组织的去除杂质：将采集的脂肪组织在无菌条件下进行处理，去除多余的结缔组织、血管和表皮层，以获得纯净的脂肪组织。
2. 组织块的制备：将经过处理的脂肪组织切割成适当大小的块状（约1mm³），以便后续细胞的释放和培养。
三、脂肪干细胞的释放和培养1. 组织块的酶解：将制备好的组织块放入消化酶（如胰蛋白酶）的消化液中，在37℃的恒温培养箱内进行酶解，使脂肪干细胞从组织块中释放出来。
2. 细胞的培养和传代：将释放出的脂肪干细胞进行原代培养和传代培养，培养基的配方和培养条件需要进行严格控制和优化，以保证脂肪干细胞的生长和分化。
通过以上步骤和方法，我们可以获得高质量的脂肪干细胞，为其后续在再生医学、组织工程和临床治疗中的应用打下坚实基础。
在实际应用中，还需要结合特定的研究和临床需求，对脂肪干细胞进行进一步的分化和功能评价，以实现其在不同领域的应用和开发。
脂肪干细胞的培养方法对于再生医学和组织工程具有重要意义，通过持续的研究和优化，必将为人类健康事业带来更多的机遇和挑战。
希望本文对脂肪干细胞组织块培养方法的介绍，能够为相关研究和应用人员提供一定的参考和指导，共同推动脂肪干细胞领域的进步与发展。
人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化
人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅【摘要】目的:建立体外分离培养获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)的方法,并观察其形态、免疫表型、生物学特性.初步探讨其体外成骨过程中出现成脂现象的原因及机制.方法:剖宫产手术获得腹部皮下脂肪,0.15％Ⅰ型胶原酶消化法获得人脂肪间充质干细胞并进行体外培养.行MTT细胞增殖实验绘制增殖曲线,使用流式细胞及细胞免疫荧光技术检测细胞表面抗原,行成骨成脂分化鉴定其分化潜能.通过RT-PCR技术检测成骨成脂过程中过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2 (peroxisome proliferator activated receptorγ-2,PPARγ-2)和骨桥蛋白mRNA表达情况.结果:通过分离培养,获得了大量旋涡状生长的人脂肪间充质干细胞.MTT法显示细胞增殖能力强.流式细胞鉴定结果显示,CD29、CD73、CD105、CD166高表达,CD31、CD34、CD45、HLA-DR 低表达.细胞免疫荧光结果与之相符.hADSCs在特定诱导条件下,具有成骨成脂分化潜能.在成骨分化过程中同时伴有成脂发生.RT-PCR结果显示,与对照组相比,成脂诱导组PPARγ-2 mRNA有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).与对照组相比,成骨诱导组骨桥蛋白,PPARγ-2 mRNA均有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:建立了一种分离培养hADSCs简单可靠的方法.获得的细胞具有贴壁生长、增殖活性强、干细胞表型以及多向分化等特征.hADSCs体外成骨过程中,三酰甘油的形成对成骨具有一定的促进作用.%Objective:To establish the isolation and culture method of human adipose-derived mesenchymal stem cells (hADSCs) derived from human adipose in vitro,so as to explore their morphology,identify cell surface markers,observe biological properties,and discuss the possible causes and mechanism ofthe phenomenon of hADSCs' osteogenic differentiation accompanying with synthesis of triglycerides.Methods:Human adipose tissue were obtained from abdominal operation.The hADSCs were isolated from human adipose tissue by 0.15％ collagenase digesting.The cells were applied to do the experiments:MTT method,flowcytometry,immunofluorescence.Its differentiation potential was proved by osteogenic and adipogenic differentiation.The osteogenic and adipogenic related genes:PPARγ-2,osteopontin expression were detected by real-time fluorescent quantitative PCR technique.Results:After isolation and culture,we obtained a large amount of hADSCs,which grew like swirls.MTT revealed high capability for and proliferation.The flow cytometry showed CD29 +,CD31-,CD34-,CD45-,CD73 +,CD105 +,CD166 +,HLA-DR-,which fit the results of immuno fluorescence.Moreover,these cells could be functionally induced into adipocytes and osteoblasts in the presence of appropriate conditioned media.During osteogenic differentiation,we found it accompanying with the synthesis of triglycerides.RT-PCR results proved that during the differention process,osteogenic and adipogenic related genes began to be expressed gradually,which had statistically significant(P ＜0.01).Conclusion:Highly efficient isolation and cultivation methods for hADSCs have been developed.They are a kind of mesenchymal cells with great application prospect,which characterized with adherent growth,high proliferation,stem cell phenotype and multipotent differentiation.During vitro osteogenic differentiation,the triglyceride formation has a certain role in promoting osteogenesis.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(023)003【总页数】6页(P185-190)【关键词】人脂肪间充质干细胞;鉴定;成骨分化;成脂分化【作者】闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅【作者单位】江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;镇江市第二人民医院皮肤科,江苏镇江212002;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001【正文语种】中文【中图分类】R329.2对于间充质干细胞的研究，最初的对象是骨髓间充质干细胞，并且已经形成了成熟的分离培养方法［1］。
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脂肪干细胞生物学特性
2001年，Zuk等首次从人抽脂术抽取的脂肪组织中分离出一种多向分化干 细胞，因其与骨髓间充质干细胞(BMSC)形态相似而称为脂肪间充质干细胞 （ASC）。
脂肪干细胞具有向脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮、造血、肝、胰岛和神经 等多种细胞方向分化的多分化潜能,是一种理想的种子细胞。因脂肪干细胞 具有分化为脂肪的潜能，且其具有易获得性、可迅速扩增、不易衰老等特 点，目前脂肪干细胞已成为脂肪组织工程中种子细胞的研究热点。
a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和 α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM 1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞 粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表 达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合 素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(E selectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin 、Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达 造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。
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干细胞（Stem cell，SC）： − 干细胞（Stem cell，SC）是有自我复制、高度增殖和多向化潜能的细胞群 体，这些细胞以通过细胞分裂维持自身细胞的大小，同时又可以进一步分 成为各种不同的组织细胞，从构成机体各种复杂的组织器官。
干细胞技术: − 又称为再生医疗技术，是指通过对干细胞进行分离、体外培养、定向诱导、 甚至基因修饰等过程，在体外繁育出全新的、正常的甚至更年轻的细胞、 组织或器官，并最终通过细胞、组织或器官的移植实现对临床疾病的治疗。
干细胞是整个人体生长发育的基础“材料”。
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在缺少分化刺激因子的条件下，ASC表面标志蛋白有HLA-ABC、CD9、CD10、 CD13、CD29、CD34、CD44、CD49、CD54、CD55、CD59、CD105、CD146、 CD166；
经过14d的诱导培养后, ASC虽然发生了形态变化，表现出成脂细胞、成软骨细 胞、成骨细胞等分化的特征，但表面蛋白的表达却大致与未分化前一致，这些 表面蛋白与BMSC的表面蛋白很相似。
ASC和BMSC均表达CD13、CD29、CD44、CD105，均不表达CD31、CD34、 CD45、HLA-DR。虽然从分子标识上看ASC和BMSC具有相同的表面粘附分子 和受体分子，但两者仍有区别。ASC表达CD49d，而不表达CD106，BMSC则 相反，造成这种区别的机制可能与细胞所处的微环境及具体功能有关。
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脂肪来源血管基质成分
(Stromal Vascular Fraction,SVF)
富含大量的CD34+细胞, 从脂肪组织直接获得
脂肪来源干细胞
(Adipose Derived Stem Cell, ADSC)
富含一定量的CD34+细 胞,SVF培养P0-P2
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不同的试验结果结果有不同，但这种技术和流式细胞仪敏感性的不同而造成。总的 来说，PAL细胞的免疫表型与已经报道的骨髓间充质干细胞是相似的。
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间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检 测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好 方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。
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Zuk等认为，ASC可能由多种异源性细胞构成，其中包括内皮细胞、成纤 维细胞、平滑肌细胞以及前体脂肪细胞等。现有ASC主要由成纤维细胞以 及来自间叶组织的细胞构成，仅伴有少量内皮细胞与平滑肌细胞。上述细 胞在ASC中的含量甚低，不可能定向培养分化为其他组织细胞，但进一步 确认和识别真正的ASC的表面蛋白及其基因仍是必要的。
脂肪来源间充质干细胞 (Adipose Derived Msenchymal Stem Cell, AD-MSC(ASC))
不富含CD34+细 胞,SVF培养P2之后
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