植物中硝态氮的测定方法
植物中硝态氮_氨态氮_总氮测定方法的比较研究
2 结果与讨论
211 方法可行性
按上述三 种方 法 对 21 个植 物样 品 ( 包括 根、茎、叶和
花) 进行了平行三份试 验,
测定结
果见
表
1。为
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+ 4
+ NO-3 和总氮数据结 果看 起来 更为直 观, 我们 对它们 进行
主题词 植物; 凯氏 法; 硝态氮; 氨态氮; 总氮
中图分类号: O657132 文献标识码: A
文章编号: 1000-0593( 2004) 02- 0204-03
氮是植物生长 发育不 可缺 少的 营养 元素, 被 称为 生命 元素。植物中氮以有机氮、硝态 氮、亚 硝态氮 组成。有机氮 是构成蛋白质的成分, 表明植物正在利用的氮的含量 ; 硝态 氮是一种储藏形式 的氮, 而亚 硝态 氮很 容易 被氧 化成 硝态 氮[1] ; 总氮则代表植物总的氮元素 吸收情况, 因此, 在植物 生态学研究中经常需要 分别了 解植 物在生 长过 程中 各种形 态氮的状况。目前, 植物中硝态氮的测定 未见报道, 一般参 照食品中 硝 态 氮 转变 成 亚 硝 态氮 的 格 里 斯试 剂 比 色 法测 定[2] ; 有机氮的测定通常采用 靛酚蓝 比色法 和碱蒸 馏法[ 3] ; 而总氮的测定则需要在硫酸- 过氧化 氢凯氏消 煮前加 入水杨 酸并用还原剂将硝 基氮还 原成 氨基 氮, 然后 用碱 蒸馏 法滴 定, 这些 方法操 作繁琐, 不太 适合大 批样品 分析。2000 年, 吴建之等报道了用过硫 酸钾氧 化吸 光光度 法直 接测 定植物 总氮[ 4] , 改进了植物中总氮的测定方法, 并实现了同一份消 煮液可测定氮 及其 他十 几种 常量 及微 量元 素[5] 。在此 基础 上, 本文作了进一步研究, 利用野外明党参和峨参作为实验 材料, 样品经硫 酸- 过氧化 氢法 消煮后, 分 别用 过硫酸 钾氧 化吸光光度法测定总氮, 靛酚蓝比色法测定氨态氮, 紫外吸 光光度法直 接测定硝态氮。对 21 个 样品的测 试数据 进行了 比较和分析, 证明这三种方法之间的相应关系是: 总氮= 氨 态氮+ 硝态氮。2来自 07411 09
实验12 植物体内硝态氮含量的测定
实验12 植物体内硝态氮含量的测定植物对氮的吸收与利用，对于其生长发育和产量形成具有重要的影响。
氮素如果以亚硝酸盐或硝酸盐的形式被植物吸收，则称为植物体内的硝态氮(N-NO3-)含量。
在植物体内量测硝态氮含量，不仅可以为揭示植物氮素代谢的特点和生理机制提供数据，还可以指导植物耐受性研究和农业生产。
1 实验原理硝态氮是植物生长发育和产量形成的重要因素，在不同发育阶段的植物中，其含量也相应发生变化。
硝态氮含量可采用摄谱光度法和电化学法测定，其中电化学法的准确性更高且应用范围更广。
本实验是利用电化学法，根据硝酸与还原剂还原成亚硝酸或氨态氮时的电离电流大小的差异，测定植物体内的硝态氮含量。
2 实验步骤2.1 样品处理取适量新鲜样品，如茄子、番茄等，去皮、去籽并洗净。
将样品碾磨成泥状，加入特定的醋酸钾(KCH3COO)提取液(醋酸钾10 g/L)，摇匀，封口密封24 h在4℃下提取。
离心后，取上清，用玛瑙瓶收集。
将所需植物红单色隐花苣、矮生豌豆、楸树等的种子按5 g每袋加入15 mL的海绵培养体，在恒温箱中翻转培养6 d至10 d。
2.3 制备电极制备硝酸电极(NH4NO3-SCE单接)和参比电极，使用前需打磨至光亮。
取同样量的植物提取液和硝酸标准溶液，加入还原剂及缘草酸进行反应。
反应完毕后，测量1 min内的电流，计算硝态氮含量。
2.5 数据处理及统计按照硝态氮含量公式计算并汇总数据，进行ANOVA方差分析及t检验。
3 注意事项3.1 样品应尽量新鲜，提取液操作要快，以避免样品中硝态氮被还原。
3.2 试剂应准确、无杂质、无缺损，若出现异常，应立即更换。
3.3 电极应保持干燥、光洁，并调整标定。
3.4 电化学池应密封，避免气泡干扰或溢液现象。
4 结果分析实验结果如下表所示：在统计学分析中，各组数据的p值均小于0.05，表明差异极显著，比较表明楸树叶片硝态氮含量最高，其次是红单色隐花苣和矮生豌豆，而茄子和番茄中硝态氮含量最低。
转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法
六、氮含量〔硝酸盐、亚硝酸盐、游离氨基酸、铵态氮等〕的测定：〔2g〕样品提取液的提取: 称取新颖植物组织2g，参加15ml无离子水研磨成匀浆，置于45℃振荡机中摇动浸提〔或超声波〕lh后用5ml无离子水冲洗干净，然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色)，滤液备用。
备注〔lg的经历〕：可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。
1硝态氮的测定：标准氮试剂：精称KNO3 0.9021g，溶于少量重蒸无离子水中，并定容至250ml，含N 量为500µgNO3一N／ml。
5％水杨酸一硫酸溶液：称取水杨酸5g，溶于100ml浓H2SO4(比重1．84)中，搅拌溶解后贮于棕色瓶内，冰箱中至多保存l周，最好现用现配。
2mol／L NaOH溶液：称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中，参加重蒸无离子水200ml，溶解后定容至l000ml。
操作方法标准曲线制作取：50ml容量瓶6只(编号)，依次参加标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml，用无离子水定容，那么成为50、100、l50、200、250、300 ug／ml 的氮系列标准溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分别装入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶参加无离水0.2ml(作为O 点)；然后分别参加5％水杨酸一硫酸溶液0.8ml，混匀静置20--30min(显色)；最后参加2mol／L NaOH溶液l9ml，混匀。
冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；并以OD 值为纵座标，以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标，绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。
0.1ml滤液＋0.4ml 5％水杨酸一硫酸溶液，混匀静置20--30min(显色)；最后参加2mol／L NaOH溶液9.5ml，混匀。
冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；结果计算按照公式A= CV1/(WV2) 计算。
实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。
5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
植物体内硝态氮含量的测定教学总结
植物体内硝态氮含量的测定二、植物体内硝态氮含量的测定硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分子光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20cm326支；（4）刻度吸管0.1cm3. 0.5cm3. 5cm3. 10cm3各1支；（5）容量瓶50cm38个；（6）容量瓶25cm33个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200cm3。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100cm3,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1cm3. 2cm3. 3cm3. 4cm3. 6cm3. 8cm3. 10cm3. 12cm3分别放入501cm3容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11cm3，分别放入刻度试管中，以0.11cm3无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4cm3水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51cm3摇匀冷却至室温，显色液总体积为101cm3。
植物体内硝态氮含量的测定
原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应， 生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在 碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸 收峰的波长为量呈正比，可直接比 色测定。
材料、仪器与试剂
植物材料：菠菜 仪器：分光光度计；天平（感量0.1 mg）； 试管；刻度吸量管0.1 ml、0.5 ml、5 ml、10 ml各1支；50 ml容量瓶；小漏斗（ø 5cm）3个； 玻棒；洗耳球；水浴锅；封口膜；7 cm 定量 滤纸若干；
• 在标准曲线上查得或用回归方程计算出 硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含 量。 V NO3 -N含量= (C× 1000 )/W • 式中 C—标准曲线上查得或回归方程计 算得NO3- —N浓度； • V—提取样品液总量； • W—样品鲜重。
注意事项：
1、一定不要将5%水杨酸-硫酸溶液溅到桌面、
实验步骤 1. 标准曲线的制作
（1）吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml分别放入50 ml 容 量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、 40、60、80、100mg/L的系列标准溶液。
(2)吸取上述系列标准溶液0.1 ml，分别放入烘干的 试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。再 分别放入0.4 ml 5%水杨酸-硫酸溶液，摇匀，在室 温下放置20 min后，再加入8% NaOH 溶液9.5 ml， 摇匀冷却至室温。则显色液总体积为10 ml。 (3)绘制标准曲线：以空白作参比，在410 nm 波长 下测定吸光度。以吸光度为横坐标，硝态氮浓度 为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2.样品中硝酸盐的测定
(1)样品液的制备： 取一定量的植物材料，剪碎混匀， 用天平精确称取材料2 g 左右，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。到 时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容 量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。 (2)样品液的测定： 吸取样品液0.1 ml放入烘干的试管 中，然后加入5%水杨酸-硫酸溶液0.4 ml，混匀后置室 温下20 min，再慢慢加入9.5 ml 8% NaOH溶液，待冷 却至室温后，以空白作参比，在410 nm 波长下测其吸 光度。
叶片硝态氮测定方法
如何准确测定叶片硝态氮？
叶片硝态氮是影响植物生长的重要因素，因此测定叶片硝态氮含
量非常必要。
以下介绍两种常用的测定方法，帮助大家准确测定叶片
硝态氮。
方法一：酚-亚硝酸法
1. 取适量的样品，在磨细后加入足量的闭口水中搅拌均匀，放置20-30分钟，取出过滤。
2. 取少量滤液加入1%酚水和2%亚硝酸，混匀后放置20分钟。
3. 加入硫酸蒸馏，控制加热速度，在加热过程中不断搅拌，开始
收集第一个60mL蒸馏液，舍去，收集第二个60mL蒸馏液，用3%硫酸
钠溶液进行滴定，直到背景色消失。
方法二：自动氨态氮/硝态氮分析法
1. 取适量茎叶样品，磨碎后加入硝酸钾与过磷酸钠的混合液体中。
2. 将样品放入装有附有硝态氮/氨态氮分析仪的载样舱中，进行
测试。
注意：使用前需要对分析仪进行预热，同时，还需要使用标准物
质进行标定，确保结果准确。
通过以上两种方法的操作，我们可以准确地测定叶片硝态氮含量，为培育高产优质作物提供科学依据。
植物体内硝态氮含量的测定
植物体内硝态氮含量的测定
测定植物体内硝态氮含量的方法可以通过以下步骤进行：
1. 样品准备：选择一定数量的植物组织或器官作为样品，如根、茎、叶等。
将样品收集并保持新鲜。
2. 样品处理：将样品在离子交换树脂柱中进行前处理，使用硝化态氮还原剂将硝态氮还原为氨。
3. 反应体系：将还原后的样品与含有硫酚酸、过硫酸铵等试剂的反应体系混合，形成可测定的化合物。
4. 反应媒介：选择合适的反应媒介来测定反应产生的化合物，如使用紫外光谱法、分光光度法、电化学法等。
5. 检测与测量：使用相应的仪器或设备进行测量和记录，根据每种方法的特点和原理，选择合适的测量方式。
值得注意的是，硝态氮含量的测定方法可能因不同的植物物种和研究目的而有所差异，因此建议在实施前进行相关的文献调研和方法优化。
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硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具
（1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：
500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤
1. 标准曲线的制作
（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
以NO3-N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中硝酸盐的测定
（1）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克分别放入三支刻度试管中，加入10ml无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分钟，到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。
（2）样口液的测定吸取样品0.1 ml分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液0.4 ml，混
匀后置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测期吸光度。
在标准曲线上查得或用回归方程计算出NO3--N浓度，再用下公式计算其含量。