亚硝态氮的测定流程和步骤
硝态氮的测定方法
硝态氮的测定方法
硝态氮的测定方法主要有以下几种：
1. 硝酸还原法：该方法是最常用的硝态氮分析方法。
基本原理是将样品中的硝酸还原为亚硝酸，然后通过亚硝酸与铁离子反应生成显色物，根据显色物的吸光度或荧光强度来确定硝态氮的浓度。
2. 球囊发泡法：该方法通过将样品中的硝态氮与硫酸反应生成氮气，然后通过气泡的形成来判断硝态氮的浓度。
硝态氮浓度越高，气泡形成越多。
3. 原子吸收光谱法：该方法是通过测量硝态氮溶液中的硝酸根离子在特定波长下被原子吸收光的强度来确定硝态氮的浓度。
4. 电化学法：该方法是通过测量硝态氮在电极上的氧化还原反应电流来确定硝态氮的浓度。
以上方法根据实际需求和仪器设备的不同，选择适合的方法进行硝态氮的测定。
植物体内硝态氮含量的测定
植物体内硝态氮含量的测定【实验目的】伤流是植物根系主动吸水的证明，不同植物或同一种植物在不同季节的伤流强度均不同，伤流强度反应根系生理活动强弱和根系又吸收面积大小。
伤流除含有大量水分外，还含有各种无机盐及根部合成有机物包括植物激素。
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
【原理】硝态氮与硝酸试粉作用，生成粉红色的偶氮化合物，其颜色深浅与硝态氮的浓度成正相关，将样品显示的颜色与标准比色阶进行比较，可快速求得硝态氮的浓度。
硝酸试粉主要是由锌粉、柠檬酸、ɑ-萘胺、对氨基苯磺酸混合而成，硝态氮与硝酸试粉反应如下：【实验材料】接骨木伤流液【实验试剂】硝酸试粉、50%醋酸、50mg/L氮流液【实验步骤】在比色盘的五个孔中加入如表所示溶液：5min后即成5个不同浓度20、40、60、80、100mg/mL硝态氮的比色阶。
再用6号孔中加入伤流液5滴及硝酸试粉1勺，搅拌，5min后，将其所显粉红色与标准比色阶比较确定样品液中硝态氮的浓度。
【实验结果及处理】1.经过比色样品溶液的颜色介于2~3之间。
2.根据结果，伤流液中硝态氮的浓约为（10/5+20/10）/2=2mg/mL原理及方法如下：— 1 —硝态氮在经过硫酸2过氧化氢消煮的植物消煮液中，硝态氮和亚硝态氮以硝酸根离子（NO3-）存在，利用NO3-在紫外光区220nm处有特征吸收峰，可以直接测定试液的吸光度来定量硝态氮。
测定时，吸取5mL 消煮液于50mL比色管中，无氨水稀释至刻度，摇匀，在波长210nm处，用1cm石英比色皿，以无氨水作参比，在紫外分光光度计进行硝态氮测定。
3.通过伤流法测定植物中硝态氮含量中，伤流法需要收集伤流液，此环节消费时间长。
— 2 —。
水质中硝态氮和亚硝态氮测定
水质中的硝态氮测定(紫外分光光度法)原理:利用硝酸盐在220nm 波长具有紫外吸收和在275nm 波长不具吸收的性质进行测定,于275nm 波长测出有机物的吸收值在测定结果中校正.试剂:1.无硝酸盐纯水:采用重蒸馏或者蒸馏--- 去离子法制备,用于配制试剂及稀释样品.2.盐酸溶液(1+11).3.硝酸盐氮标准储备溶液[p(N03---N)=100ug/mL]:称取经105'C烤箱干燥2h的硝酸钾(KN03) 0.7218g,溶于纯水中并定容至1000mL,每升中加入2mL 三氯甲烷,至少可稳定6 个月.4.硝酸盐氮标准使用溶液[p(N03---N)=10ug/mL].仪器:1.紫外分光光度计以及石英比色皿.2. 具有比色管:50mL分析步骤:1.水预样处理:吸收50mL 水样于50mL 比色管中加1mL 盐酸溶液酸化.2.标准系列制备:分别吸收硝酸盐氮标准使用溶液0mL/L~7mg/L 硝酸盐氮标准系列，用纯水稀释到50mL,各加1mL盐酸溶液.3.用纯水调节仪器吸光度为0，分别在220nm和275nm波长测量吸光度.计算:在标准样品的220nm 波长吸光度中减去2倍于275nm 波长的吸光度,绘制标准曲线和在曲线上直接读出样品中的硝酸盐氮的质量浓度.注:若275nm波长吸光度的2倍大于220nm波长吸光度的10%时，本标准将不能适用.水质中亚硝态氮的测定(重氮偶合分光光度法)原理:在pH1.7 以下,水中亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺氮化,再与盐酸N-(1- 萘)-乙二胺产生偶合反应,生成紫红色的偶氮染料,比色定量.试剂:1.氢氧化铝悬浮液2.对氨基苯磺酰胺溶液3. 盐酸N-(1- 萘)-乙二胺溶液4. 亚硝酸盐氮标准储备液[p(NO2 —N)=50ug/mL]: 称取0.2463g 在玻璃干燥器内放置24h 的亚硝酸钠(NaNO2), 溶于纯水中,并定容至1000mL. 每升中加2mL 三氯甲烷保存.5. 亚硝酸盐氮标准使用溶液[p(NO2 —N)=0.10ug/mL]仪器:1.具塞比色管:50mL.2.分光光度计.分析步骤:1. 若水样浑浊或色度较深,可先取100mL, 加入2mL 氢氧化铝悬浮液,搅拌后静置数分钟,过滤.2.先将水样或处理后的水样用酸或碱调近中性.取50.0mL 置于比色管中.3.另取50mL 比色管8 支, 分别加入亚硝酸盐氮标准液0,0.50,1.00,2.50,5.00,7.50,10.00 和12.50mL, 用纯水稀释至50mL.4.向水样以及标准色列管分别加入1mL 对氨基苯磺酰胺溶液,摇匀后放置2min~8min.加入I.OmL盐酸N-(1-萘)-乙二胺溶液，立刻混匀.5.于540nm波长，用1cm比色皿，以纯水作参比，在10min至2h内,测定吸光度.如亚硝酸盐氮浓度低于4ug/L 时,改用3cm 比色皿.6.绘制曲线,查出亚硝态氮含量.计算:水样中亚硝态氮质量浓度计算见式:P(NO2-N)= m / VP(NO2-N):mg/L, 亚硝酸氮质量浓度M:从标准曲线上查的样品管中亚硝酸盐氮的质量，单位为微克(ug)V: 水样体积,mL。
亚硝酸盐氮测定操作规程
亚硝酸盐氮测定操作规程(N-(1-萘基)-乙二胺光度法)
1、操作前应先准备以下试剂：无亚硝酸盐的水；磷酸（ρ=1.70g/ml）；显色剂：250ml水和50ml磷酸，加入20.0g对氨基苯磺酰胺，再加入1.00g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶液中，转移至500ml容量瓶中，用水稀释至标线，混匀；亚硝酸盐氮标准贮备液；亚硝酸盐氮标准中间液；亚硝酸盐氮标准使用液；氢氧化铝悬浮液；高锰酸钾标准溶液(1/5KMnO4mol/L)。
2、校准曲线的绘制：在一组6支50ml比色管中，分别加入0、1.00、3.00、5.00、7.00和10.0亚硝酸盐标准使用液，用水释至标线。
加入1.0ml显色剂，密闭，混匀。
静置20min后，在2h以内，于540nm处，用光程10mm的比色皿，以水为参比，测量吸光度。
从测量的吸光度，减去零浓度空白管的吸光度后，获得校正吸光度，绘制以氮含量(μg)对校正吸光度的校准曲线。
3、水样的测定：当水样pH≥11时，可加入1滴酚酞指示液，边搅拌边逐滴加入(1+9)磷酸溶液，至红色刚消失。
水样如有颜色和悬浮物，可向每100ml水中加入2ml氢氧化铝悬浮液，搅拌，静置，过滤，弃去25ml 初滤液。
分取经预处理的水样于50ml比色管中，加入1.0ml显色剂，然后按
校准曲线绘制的相同步骤操作，测量吸光度。
经空白校正后，从校准曲线上查得亚硝酸盐含氮量。
4、空白试验：用实验用水代替水样，按相同步骤进行全程序测定。
5、计算：亚硝酸盐氮（N , mg/L）=m/V
式中：m—由水样测得的校正吸光度，从校准曲线上查得相应的亚硝酸盐氮的含量(μg)；
V—水样的体积(ml)。
亚硝酸盐氮的测定
亚硝酸盐氮的测定亚硝酸盐氮是氮循环的中间产物，不稳定。
在水环境不同的条件下，可氧化成硝酸盐氮，也可被还原成氨。
亚硝酸盐氮在水中可受微生物作用很不稳定，采集后应立即分析或冷藏抑制生物影响。
N-（1-萘基）-乙二胺光度法：1、原理在磷酸介质中，PH值为1.8±0.3时，亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺(简称磺胺)反应，生成重氮盐，再与N-(1-萘基)-乙二胺偶联生成红色染料，在波长540nm处有最大吸收。
2、仪器：分光光度计、G-3玻璃砂心漏斗试剂：(1)显色剂：于500ml烧杯中加入250ml水和50ml磷酸，加入20.0g对氨基苯磺酰胺；再将1.00gN-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶于上述溶液中，转移至500ml容量瓶中，用水稀至标线(2)亚硝酸盐氮标准贮备液：称取1.232g亚硝酸钠溶于150ml水中，移至1000ml容量瓶中，稀释到标线。
每毫升约含0.25mg亚硝酸盐氮。
本溶液加入1ml三氯甲烷，保存一个月。
(3)亚硝酸盐氮标准中间液：分取适量亚硝酸盐标准贮备液（使含12.5mg亚硝酸盐氮），置于250ml棕色容量瓶中，稀至标线，可保存一周。
此溶液每毫升含50微克亚硝酸盐氮。
(4)亚硝酸盐氮标准使用液：取10.00ml中间液，置于500ml容量瓶中，稀至标线。
每毫升含1.00微克亚硝酸盐氮。
三、实验步骤：1、校准曲线的绘制（1）在一组6支50ml的比色管中，分别加入0、1.00、3.00、5.00、7.00和10.0ml亚硝酸盐标准使用液，用水稀至标线，加入1.0ml显色剂，密塞混匀。
静置20min后，在2h内，于波长540nm处，用光程长10mm的比色皿，以水为参比，测量吸光度。
（2）从测定的吸光度，减去空白吸光度后，获得校正吸光度，根据回归方程（y=bx+a）绘制校准曲线。
2、水样的测定（1）当水样pH≧11时,加入1滴酚酞指示剂,边搅拌边逐滴加入(1+9)磷酸溶液,至红色消失。
（2）水样如有颜色或悬浮物，可向每100ml水中加入2ml氢氧化铝悬浮液，搅拌，静置，过滤弃去25ml初滤液。
氨氮、硝酸氮、亚硝酸氮测定方法总结
水中氨氮、亚硝酸盐氮和硝酸盐氮的测定一、目的和要求⏹了解水中3种形态氮测定的意义。
⏹掌握水中3种形态氮的测定方法与原理。
⏹水体中3种形态氮检出的环境化学意义二、仪器1．紫外可见分光光度计。
2．500~1000mL全玻璃磨口蒸馏装置。
3．pH计。
4．恒温水浴槽。
5．电炉：220V/1kW。
6．比色管：50mL。
7．陶瓷蒸发皿：100mL或200mL。
8．移液管：1mL、2mL、5mL。
9．容量瓶：250mL。
三、氨氮的测定——纳氏试剂比色法1、原理⏹氨氮与纳氏试剂反应生成黄棕色的络合物，其色度与氨氮的含量成正比，可在420nm波长下使用光程长为10mm的比色皿比色测定，最低检出浓度为。
2K2[HgI4]+3KOH+NH3＝[Hg2O·NH2]I+2H2O+7KI2、试剂⏹无氨水：水样稀释及试剂配制均需用无氨水。
配制方法包括蒸馏法〔每升蒸馏水中加入浓硫酸进行重蒸馏，馏出水接收于玻璃容器中〕和离子交换法〔让蒸馏水通过强酸型阳离子交换树脂柱来制备〕。
⏹磷酸盐缓冲液〔pH为〕：称取磷酸二氢钾和磷酸氢二钾，溶于水中并稀释至1000mL，配制后用pH计测定其pH值，并用磷酸二氢钾或磷酸氢二钾调节pH为。
⏹吸收液：2％硼酸或硫酸。
⏹纳氏试剂：碘化汞－碘化钾－氢氧化钠。
称取16g氢氧化钠溶于50mL水中，冷却至室温。
称取7g碘化钾和10g碘化汞，溶于水中，然后将此溶液在搅拌下，缓慢加入到氢氧化钠溶液中，并稀释至100mL。
贮存于棕色瓶内，用橡皮塞塞紧，于暗处存放，有效期可达一年。
⏹50%酒石酸钾钠溶液：称取50g酒石酸钾钠溶于100mL水中，加热煮沸，以驱除氨，充分冷却后稀释至100mL。
⏹氨氮标准溶液：CN＝1mg/mL。
称取无水氯化铵〔于100～105℃下干燥2h〕溶于无氨水中，转入1000mL容量瓶内，用无氨水稀释至刻度，摇匀，准确吸取该溶液于1000mL容量瓶内，用无氨水稀释至刻度，其浓度为10ug/mL。
土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法
土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法六、氮含量（硝酸盐、亚硝酸盐、游离氨基酸、铵态氮等）的测定：（2g）样品提取液的提取: 称取新鲜植物组织2g，加入15ml无离子水研磨成匀浆，置于45℃振荡机中摇动浸提（或超声波）lh后用5ml无离子水冲洗干净，然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色)，滤液备用。
备注（lg的经验）：可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。
1硝态氮的测定：标准氮试剂：精称KNO3 0.9021g，溶于少量重蒸无离子水中，并定容至250ml，含N 量为500µgNO3一N／ml。
5％水杨酸一硫酸溶液：称取水杨酸5g，溶于100ml浓H2SO4(比重1．84)中，搅拌溶解后贮于棕色瓶内，冰箱中至多保存l周，最好现用现配。
2mol／L NaOH溶液：称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中，加入重蒸无离子水200ml，溶解后定容至l000ml。
操作方法标准曲线制作取：50ml容量瓶6只(编号)，依次加入标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml，用无离子水定容，则成为50、100、l50、200、250、300 ug／ml的氮系列标准溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分别装入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶加入无离水0.2ml(作为O 点)；然后分别加入5％水杨酸一硫酸溶液0.8ml，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液l9ml，混匀。
冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；并以OD 值为纵座标，以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标，绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。
0.1ml滤液＋0.4ml 5％水杨酸一硫酸溶液，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液9.5ml，混匀。
实验七 水体铵态氮、亚硝态氮和硝态氮的测定
冷却后加入 酚二磺酸试剂1.0 mL
再研磨一次 放置10 min
加10ml纯水
转移至比色管
410 nm处比色 溶液呈黄色
加3~4mL
氢氧化钠
定容至标线
所有实验组水样集中比色
（五）结果分析与计算
氨氮标准曲线（纳氏法） 2005.04.20
0.250 责任人：××× 测定条件： 22℃ 7230分光 420nm 10mm比色皿
0.200
淡水 海水
0.150
海水 A = 0.1937 ρ + 0.0028
0.100
R 2 = 0.9991 试剂空白A 0 = 0.008
淡水 A = 0.1866 ρ + 0.0029
♪ 酚二磺酸
瓷蒸发皿 水浴锅 玻璃漏斗 50 mL具塞比色管 分光光度计 比色皿等
♪ 氢氧化钠溶液
♪ 硝酸盐氮贮备标准溶液
♪ 硫酸银溶液
♪ EDTA二钠溶液 ♪ 氢氧化铝混悬液等
（四）主要操作步骤
样品预处理（凝聚法）
2 mL氢氧化铝悬浮液
200 mL水样
于250 mL锥形瓶
中性滤纸过滤
弃去最初滤出 的25 mL滤液
实验七 水体氨态氮、亚硝态氮 和硝态氮的测定
Nessler's reagent Spectrophotometric
一、氨态氮的测定—纳氏试剂法
实验目的 实验原理 实验仪器和试剂
主要操作步骤
结果与计算
结果分析
（一）实验目的
复习分光光度计的使用 学习其中一种比色法测定水中氨氮含量的 原理和操作方法
（二）实验原理
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样品的采集保存和制备
样品采集 样品保存：样应该在 4℃下保存和运输，在 3 日内分析完毕，否则应该在-20℃（深度冷冻）下保存。 试样制备：采集后去除杂物，混匀，过筛，一份测定干物质质量，一份测定亚硝态氮 试料制备： 1. 40g 试样（空白不加试样） ，放入 500ml a) b) 中 或者在 4℃下，以静置 4h 的方式代替离心分离，制得试料 PE 瓶中，加入 200mlKCl（aq） ，在 20℃很稳水浴振荡器中振荡提取 1h。 转移约 60ml 提取液，于 100ml 聚乙烯离心管中，在 3000rpm 的条件下分离 10min。取离心后上清液 50ml 于 100ml 比色管
土壤中亚硝态氮的测定分析---磺胺/盐酸萘乙二胺-分光光度法
Байду номын сангаас
试剂及其配制
1. 2. 3. 4. 1) 2) 3) a) b) c) 浓磷酸：ρ ������3 ������������4 = 1.71g/ml 氯化钾： （KCl） ：优级纯 化钾溶液 c（KCl）=1mol/L（74.55gKCl，1L 水） 亚硝酸钠：优级纯，干燥器中干燥 24h。 亚硝酸钠标准储备液：ρ ������������2 − ������ = 1000mg/ml； （4.926g 亚硝酸钠，适量水溶解，定容至 1L） （存于 PE 瓶中，4℃，6 个月） 亚硝酸钠标准使用液 1：ρ ������������2 − ������ = 100mg/ml； （10ml 储备液。定容至 100ml 容量瓶） 亚硝酸钠标准使用液 2：ρ ������������2 − ������ = 10mg/ml； （10ml 使用液 1。定容至 100ml 容量瓶） 磺胺溶液（������6 ������8 ������2 ������2 ������） ； （1000ml 容量瓶中加入 600ml 水，再加入 200ml 浓磷酸，再加入 80g 磺胺，定容，4℃，1 年） 盐酸 N-（1-萘基）-乙二胺溶液； （0.4g 该物质溶于 100ml 水中。4℃保存，溶液颜色变深时停止使用） 显色剂； （20ml 磺胺、20ml 盐酸萘基溶液、20ml 浓磷酸与 100ml 棕色试剂瓶中，混合，4℃保存，溶液变黑时停止使用）
波长 543nm 处，水为参比，测定吸光度
亚硝态氮的分析操作步骤
标准使用液 1:0、1.00、5.00 标准使用液 2: 1.00、3.00、6.00 试料 空白
100mL 容量瓶定 容
标准曲线:0、10.0、50.0、100、300、600μg 试料 空白
各取 1ml 于 25 具塞比色管
加入 20ml 水，摇匀 各加入 0.2ml 显色剂，混匀，静置 60min~90min，室温显色