细胞凋亡、细胞周期
细胞周期与细胞凋亡
细胞周期与细胞凋亡细胞是构成生物的基本单位，而细胞中的生命周期是非常复杂的。
细胞周期是指细胞从出生到再生产的时间，并且由一系列的生物化学反应所组成。
这个过程通常可以分为两个主要部分：细胞分裂和细胞生长。
而细胞凋亡则是指细胞在自身内部或外部环境的压迫下，出现死亡或分解的现象。
在本文中，我们将详细了解细胞周期和细胞凋亡。
细胞周期细胞周期是指细胞在不断进行自我修复的过程中，完成细胞分裂和增殖。
在细胞周期中，细胞主要分为四个阶段，包括两个主要生理状态：有丝分裂和无丝分裂。
有丝分裂：这个阶段通常包括四个子阶段：前期、中期、后期和期间。
前期主要是为了准备染色体复制，而中期则是通过纺锤体结构，将染色体分为不同的细胞核。
后期是指染色体移动到不同的细胞极端上，并且准备分裂。
期间则是指细胞膜分离的过程。
无丝分裂：这个阶段与有丝分裂所不同的是，无丝分裂没有明显可见的细胞器支持，质体直接在单个分子的支持下进行细胞分裂和细胞生长。
无丝分裂具有多样性，包括一些特殊的细胞如低等植物和许多原生动物。
无丝分裂的周期分为长期和短期两种类型。
细胞凋亡细胞凋亡是指在某些条件下，细胞不能继续分裂和生长。
它与固体器官的形态形成是紧密相关的，是细胞无法进一步生长和分裂的结果。
在这种情况下，细胞通常会崩解或分解，并释放大量的无机物和有机物。
因此，在细胞凋亡这个过程中，通常可以观察到细胞内膜的塌陷、胞浆变成柿饼状等现象。
而细胞凋亡的原因则是当细胞DNA受到损害，细胞生存环境改变，或者遇到某些细胞分化因子的作用时。
细胞周期和细胞凋亡之间的关系细胞周期和细胞凋亡之间存在着某种程度的互动关系。
当细胞出现DNA损害或其他细胞周期相关的问题时，细胞凋亡时的细胞自发保护机制可能会被启动，以防止细胞从因损害和其他环境因素而无法重复分裂。
正常的分裂周期功能对细胞的长期生存至关重要，但如果细胞发现染色体分离和其他细胞生长相关的过程发生突变，那么这个过程就很难完成。
细胞生物学中的细胞凋亡和细胞周期
细胞生物学中的细胞凋亡和细胞周期细胞是人体所有生物活动的基本单位，可以说没有细胞就没有生命。
细胞在不断地生长和分裂，因此，细胞凋亡和细胞周期是细胞生物学中重要的研究领域。
本文将分别介绍细胞凋亡和细胞周期，分析其原理和机制。
细胞凋亡是一种重要的细胞死亡形式。
细胞凋亡是一种程序化死亡过程，它与坏死的死亡方式不同。
细胞凋亡是一种通过内部程序来调控的死亡过程，因此通常被称为程序性死亡，而坏死则是一种非程序性死亡，是由于严重的物理或化学损伤导致的细胞死亡。
细胞凋亡发生的原因很多，主要包括细胞受到外部刺激、受到DNA损伤、内部代谢异常等。
细胞凋亡的原理是什么呢？在细胞凋亡中，一系列信号通路被激活，从而让细胞进入凋亡状态。
其中，线粒体起着重要的作用，它们释放出一系列调控凋亡的蛋白质，从而引起多种凋亡反应。
一些应激信号可以直接作用于线粒体，例如氧气缺乏和代谢应激等。
其他应激信号可以间接引起线粒体功能障碍，例如DNA损伤、钙离子、ROS和炎症等。
为了完整地激活凋亡过程，这些信号必须穿过多个调节层面。
信号通路的复杂性和交叉性使细胞凋亡成为非常复杂的现象。
总之，凋亡机制是一个复杂的过程，需要多种因素的影响和协调。
细胞周期是细胞的生命周期，一般分为四个阶段：G1、S、G2和M期。
G1期是生长1期，S期是DNA合成期，G2期是生长2期，M期是有丝分裂期。
细胞周期是一种基本的细胞生物学过程，它控制细胞的生长、分裂和遗传信息的传递。
在细胞周期中，细胞需要在不同的细胞周期阶段进行不同的活动。
例如，在G1期和G2期，细胞必须合成必要的蛋白质，在S期，细胞需要合成DNA。
细胞周期的调节是执行细胞周期的关键，所涉及的调节分子通常被称为细胞周期调节蛋白。
这些蛋白相互作用并被激活或抑制，从而形成一个调节网络。
大约有三种蛋白家族被广泛认为是细胞周期的主要调节因子：细胞周期蛋白（CDK）、细胞周期蛋白相关激酶（CAK）和细胞周期蛋白抑制因子（CKI）。
细胞周期与细胞凋亡
细胞周期与细胞凋亡细胞是构成生物体的基本单位，细胞周期与细胞凋亡是细胞生命周期中两个重要的过程。
细胞周期是指细胞从分裂至再次分裂的整个过程，而细胞凋亡是指细胞主动死亡的过程。
本文将详细探讨细胞周期与细胞凋亡的定义、机制以及它们在生物体中的作用。
一、细胞周期细胞周期是细胞生命周期中的一个重要阶段，通常被分为四个阶段：G1期（细胞生长期）、S期（DNA复制期）、G2期（前期）和M期（有丝分裂期）。
这四个阶段紧密相连，因此形成了一个循环。
细胞周期的各个阶段以及转变的控制机制受到多种细胞因子、激素、营养物质等的调控。
1. G1期G1期是细胞周期的第一个阶段，也是细胞最为活跃的阶段。
在这个阶段，细胞进行生长、分化和合成DNA的准备工作。
这个阶段的持续时间因细胞类型和外部刺激而异。
G1期结束后，细胞将进入S期。
2. S期S期是细胞周期的第二个阶段，也是DNA复制的阶段。
在这个阶段，细胞的DNA复制酶活性增强，使得细胞能够合成新的DNA分子。
S期结束后，细胞将进入G2期。
3. G2期G2期是细胞周期的第三个阶段，也是细胞对S期完成的DNA进行检查和修复的阶段。
在这个阶段，细胞会检测是否有DNA损伤，以确保细胞在进入有丝分裂前的DNA完整性。
如果发现DNA损伤，细胞会进行相应的修复。
4. M期M期是细胞周期的最后一个阶段，也是有丝分裂的阶段。
在这个阶段，细胞的染色体复制以及有丝分裂的准备工作都完成了。
细胞将进行核分裂和细胞质分裂，将复制后的染色体平均分配给两个新细胞。
M期结束后，细胞再次进入G1期，细胞周期循环继续。
二、细胞凋亡细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，与细胞周期紧密相关。
细胞凋亡是一种主动性的细胞死亡过程，当细胞受到一些内外环境刺激时，会启动凋亡信号通路，触发细胞内的自毁程序，最终导致细胞死亡。
细胞凋亡的主要特点是细胞内的DNA断裂和核染色质凝集。
细胞凋亡可通过两个主要的通路来实现：内源性通路（也称为线粒体通路）和外源性通路（也称为死亡受体通路）。
细胞凋亡与细胞周期关系研究
细胞凋亡与细胞周期关系研究近些年来，随着生物技术的发展，人们对细胞的研究越来越深入。
其中，细胞周期与细胞凋亡的关系备受关注。
细胞周期是指细胞自生长至分裂再到死亡的整个生命周期，而细胞凋亡则是指因某种原因导致细胞自主死亡的现象。
那么，细胞周期与细胞凋亡之间存在着什么样的关系呢？一、细胞周期与细胞凋亡的基本概念在人的生长发育过程中，细胞的增殖和死亡不断发生。
当细胞增殖速度大于凋亡速度时，人体组织和器官会逐渐扩大，反之则会逐渐萎缩。
而细胞周期和细胞凋亡分别是控制细胞增殖与死亡的两个关键过程。
细胞周期是指细胞从一个生长阶段到下一个分裂阶段的过程。
它可以分为四个基本阶段：G1（细胞生长）、S（DNA复制）、G2（准备分裂）、M（细胞分裂）。
不同类型的细胞其周期长短不一，通常周期长的细胞更容易发生癌变。
细胞凋亡则是一种有目的的自我死亡现象。
当细胞受损或者DNA损伤过大时，细胞通过某些信号通路启动凋亡程序，自我死亡，从而避免细胞癌化等异常病变。
细胞凋亡可以分为两种类型：胶原溶解性凋亡和凝集性凋亡。
二、细胞周期与细胞凋亡是否存有联系？有研究表明，细胞周期与细胞凋亡存在一些联系。
1. G1期和凋亡在G1期内，细胞会接受来自体内外物质的信号，根据细胞情况来决定是否进入S期进行DNA复制。
如果在G1期内细胞受到DNA损伤等严重影响，细胞就会尝试进行凋亡来避免病变的发生。
这种现象也表明了G1期是DNA修复的重要阶段。
2. G2期和凋亡G2期是细胞分裂的第三个阶段，在此阶段细胞会准备完成分裂的必备物质，以确保准确分裂。
如果细胞在此阶段遇到比较严重的DNA损伤，细胞就有可能选择进入凋亡程序，而不是继续分裂。
此外，研究还发现，在一些特殊的情况下，细胞在G2期也可能触发癌变的敏感阶段。
3. M期和凋亡M期是指细胞真正开始分裂的过程，细胞会分成两个完全相同的女儿细胞。
在此期间，细胞内的各项机制都变得异常活跃，而细胞凋亡的发生也可能随时出现。
细胞凋亡与细胞周期
细胞凋亡与细胞周期细胞凋亡与细胞周期是细胞生物学中两个重要的概念。
细胞凋亡是一种程序性细胞死亡形式，它对于维持组织的稳态、调控发育以及防止肿瘤等方面起着重要作用。
而细胞周期则是指细胞在不断重复的一系列有序的生物学过程，包括细胞生长、DNA复制、细胞分裂等阶段。
细胞凋亡与细胞周期有着密切的关系，在维持细胞内平衡、维护正常生命活动过程中发挥着协同作用。
一、细胞凋亡细胞凋亡又被称为“程序性细胞死亡”，是一种通过激活内部程序实现的细胞死亡过程。
细胞凋亡在多细胞生物的正常生长发育过程中起着关键作用。
它是有序、可逆的自我毁灭过程，通过细胞内部的一系列信号传导网络激活核酸酶（Caspase）并引发一连串的细胞内事件，导致细胞核和细胞质的变化，最终使细胞死亡。
细胞凋亡的启动主要受两个信号途径的调控，即内源性途径和外源性途径。
内源性途径是指来自细胞内部的信号，如DNA损伤、蛋白质异常等。
外源性途径则是外界环境、生长因子或细胞间相互作用等因素的影响。
这两个途径共同促进细胞凋亡的进程。
细胞凋亡具有一系列特征，如细胞核收缩、染色质凝聚、形成“凋亡小体”等。
同时，细胞凋亡还可以通过配体-受体信号通路来调控。
主要的途径有肿瘤坏死因子（TNF）和寡聚核苷酸感应受体（NLRP3）等。
二、细胞周期细胞周期是细胞从一个代谢周期到下一个代谢周期的完整过程，包括细胞生长、DNA复制、有丝分裂等。
细胞周期可以分为四个不同的阶段：G1期（第一阶段），S期（第二阶段），G2期（第三阶段）和M期（第四阶段）。
G1期是细胞周期的起始，主要是通过细胞内各种外源和内源信号来调控。
在这一阶段，细胞进行生长和准备DNA复制所需的物质。
S期是DNA复制期，新合成的DNA以染色质形式存在，细胞中的DNA量加倍。
G2期是在DNA复制完成后，细胞为有丝分裂做准备的阶段。
细胞会合成一些需要用于分裂的特殊蛋白质。
M期是细胞的分裂期，包括有丝分裂和胞质分裂两个过程。
细胞和分子生物学中的细胞周期和凋亡
细胞和分子生物学中的细胞周期和凋亡细胞周期和凋亡是基本的生物学过程，在许多方面都具有重要的作用。
细胞周期指的是细胞从分裂到分裂的一个连续的过程，不同的细胞具有不同的细胞周期，但大致上可以分为G1期、S期、G2期和M期四个阶段。
凋亡是指细胞自身调节性死亡的过程，凋亡在生命的发展中也具有重要的作用。
本文将对细胞周期和凋亡这两个生物学过程进行介绍。
一、细胞周期细胞周期包括四个连续的阶段，即G1期、S期、G2期和M期。
在G1期，细胞主要进行生长和代谢活动，并且为进入下一个阶段做好准备。
在S期，细胞进行DNA复制，这是细胞周期中最重要的阶段之一，因为DNA的复制是确保基因型的遗传的源泉。
在G2期，细胞进一步生长和为进入M期做好准备。
在M期，细胞进行有丝分裂或减数分裂，确保遗传物质的正常分配。
细胞周期具有重要的作用，细胞必须确保其DNA完整性和正确的复制，以保证细胞和其后代的生存和繁殖能力。
如果细胞在不正确的时机进行分裂，可能会导致肿瘤和其他疾病。
因此，理解细胞周期对生物学的进步和治疗疾病具有重要意义。
二、细胞凋亡细胞凋亡是细胞自身调节性死亡的过程。
这一过程在许多不同的生物学现象中都极为重要，如细胞分化、组织发育、损伤修复和免疫抗体。
在这些过程中，细胞凋亡对于分化和组织的识别和调解具有重要作用。
细胞凋亡的过程可以通过许多途径实现，但这些途径通向一个共同的“执行程序”，即细胞的死亡执行程序。
这个程序包含多种信号传导和效应机制，包括线粒体形态学和能量代谢的变化、炎症和凋亡信号通路的激活、凝集和染色质分解。
尽管这个程序是复杂的，但其总体结果是细胞死亡。
细胞凋亡在治疗疾病中也具有重要作用。
例如，在某些类型的癌症治疗中，化疗和放疗会诱导癌细胞发生凋亡。
此外，许多疾病如心血管疾病、神经退行性疾病和炎症性疾病都与细胞凋亡异常有关。
因此，对细胞凋亡和其机制的理解对于诊断和治疗疾病具有重要意义。
结论细胞周期和凋亡是基本的生物学过程，对于生物体的正常生存和繁殖具有重要意义。
细胞凋亡和细胞周期的调控机制
细胞凋亡和细胞周期的调控机制细胞是构成生物体的最基本单位，细胞的生长、分裂和死亡是维持生物体内稳定状态的关键过程。
在生物体内，细胞的数量是通过细胞周期和细胞凋亡这两个过程相互调控而得以维持的。
细胞周期调控细胞生长和分裂，而细胞凋亡则是一种主动的细胞死亡形式，能够消除受到损伤或发生异常的细胞。
本文将讨论细胞凋亡和细胞周期的调控机制。
一、细胞凋亡的诱导和执行过程细胞凋亡是由一系列信号分子的作用引起的，包括外源性和内源性信号分子。
外源性信号分子包括细胞因子、抗癌药物、放射线等，内源性信号分子包括细胞内的DNA损伤和细胞周期阻滞等。
这些信号分子能够通过激活细胞凋亡途径，诱导细胞执行凋亡程序。
细胞凋亡的执行过程可以分为两个主要部分：信号传导和凋亡效应。
信号传导包括细胞内生死信号的识别和转导等，凋亡效应包括线粒体途径（释放细胞色素c等激活caspase进行凋亡）、死亡受体途径（结合死亡受体激活caspase进行凋亡）、内质网应激途径（释放内质网钙离子等激活caspase进行凋亡）等。
这些凋亡效应可以通过细胞膜发生位置不同等特征进行区分，但不同的途径可能会彼此影响，从而出现复杂的凋亡效应。
二、细胞周期的调控机制细胞周期包括G1、S、G2和M四个阶段，不同阶段的细胞周期调控机制也不同。
下面将对各个阶段的调控机制进行介绍。
G1阶段：这是细胞周期开始的阶段，也是细胞周期最长的阶段。
在这个阶段，细胞会检查自身是否适合进行DNA复制。
如果细胞内存在DNA损伤或者细胞内信号不足，那么细胞将在G1阶段停滞。
G1阶段的细胞周期调控主要是由p53这个关键基因调控的。
S阶段：在G1阶段结束后，细胞将进入S阶段。
在这个阶段，细胞会复制DNA，并检查自身是否拥有足够的DNA复制物质。
如果没有足够的DNA复制物质，那么细胞将无法进入S期。
S阶段的细胞周期调控主要是由Rb这个关键基因调控的。
G2阶段：在S阶段结束后，细胞将进入G2阶段。
细胞周期和细胞凋亡
细胞周期和细胞凋亡是细胞生物学中的两个重要概念。
细胞周期指的是细胞从分裂开始到下一次分裂之间的生命周期，包括有丝分裂和减数分裂两种方式。
细胞凋亡则是指细胞主动死亡的过程，这个过程对于细胞的发育、免疫调节、组织自我修复等方面有着非常重要的作用。
一、细胞周期细胞周期分为四个阶段: G1期、S期、G2期和有丝分裂期。
1. G1期在这个阶段中，细胞具有最高的代谢活性，并可合成大多数细胞器和蛋白质，积累足够的能量，为DNA复制做好充分准备。
在此时，细胞的核和细胞质均稳定，没有明显的形态变化，但会降低对DNA损伤的敏感性。
2. S期在这个阶段中，细胞开始复制DNA，在此之后新合成的染色体将会被均分到两个女儿细胞中。
此时DNA含量会翻倍，但染色体数目不变。
S期将持续数小时到数天不等，时间长短依据种类而异。
在蛋白质的帮助下，复制整个基因组会避免资料丢失或无法读取。
3. G2期在这个阶段，最后的准备工作已经完成，细胞会开始逐渐分裂。
该时期是细胞代谢活性的最高点，准备进入前缘组合。
在这个阶段中，细胞会开始合成新蛋白质和细胞器，为细胞复制做充分的准备。
4. 有丝分裂期有丝分裂期是细胞周期的最后一个阶段。
这个过程是指细胞核的复制和分裂，是所有有细胞核生物体中最常见的一种细胞分裂方式，其目的是制造新的细胞。
有丝分裂期可分为前期、中期和后期三个阶段。
在命名和明确过程中，该过程注重于染色体的生长、分离和移动。
二、细胞凋亡细胞凋亡是一种机能自毁现象，它致使细胞直接凋亡，而不是单纯地将脏器化到最低限度。
细胞凋亡在个体的生长、分化、发育、整治以及内在免疫调节中发挥着重要作用。
它不仅能消除病变或损伤细胞，而且能抑制异己突变细胞的生长、增殖和繁衍。
此外，细胞凋亡还具有诱导或保护神经轴突、调节组织发育和维持气体交换的作用。
细胞凋亡分为先天性凋亡和诱导凋亡，前者是指能够特异性地灭亡一部分或全部细胞的遗传程序；后者是指细胞伴随环境刺激而启动的自杀机制。
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TUNEL法: 流式分析晚期凋亡
APO-BrdU™ KIT 60 tests cat. 556405
Part A (store at 4℃) FITC-Labeled Anti-BrdU mAb
P.S. CV在5%的精度足够，CV值的可信度在8%以内，但 要视样本的固定和染色方法而定
DNA检测的常用术语
2. DNA指数（DNA index，DI）和倍体（Ploidy）
• DI (DNA index)：DNA指数，指的是肿瘤样本G0/G1峰的平均荧光强 度与正常二倍体G0/G1 峰的平均荧光强度（Mean）之间的比值。 DI为1 意味着二倍体（2c）（一般正常范围为0.9~1.1）。
• 样本最关键的就是减少碎片（EDTA/不可过度吹打/离心rpm） • PI既能与DNA结合，又能与RNA结合，所以要用RNase降解 • PI质量及RNase所加量很重要，建议用商品化试剂 • 污染脱氧核糖核酸酶会降解DNA，故玻璃器皿和试剂要干净灭菌
细胞周期样本检测
注意事项：
1. 进样速度：一般检测细胞浓度调整为2E5–2E6/ml，进样速度为低速。若 峰形较宽，可能就是进样速度太快 2. 仪器质控定期做，尽可能排除因机器设置引起的峰形加宽 3. 排除粘连细胞（FL2-A/FL2-W） 通过电压脉冲信号的宽度和面积区别实体组织标本中的粘连细胞群体，最 大程度的减少粘连细胞带来的假阳性结果
细胞凋亡与疾病的关系
3
细胞凋亡事件发生表
细胞膜事件 线粒体事件 Caspase事件 细胞核事件
1. 细胞膜变化的检测：Annexin V/PI
磷脂酰丝氨酸 (PS) 的检测：早期凋亡
早期凋亡PS检测及结果判定
早期凋亡特征：
• 磷脂膜(PS)外翻，但是 细胞膜保持完整性， 因此PI染色为阴性
• DNA没有发生断裂
• 细胞凋亡的标志
PARP cleaved 碱处理结果
Hela 细胞 A. 未处理组 B. 星孢菌素处理组裂解的PARP cleaved阳性
化疗前后胃癌活检标本中PARP Cleaved+细胞
4. 细胞核DNA检测
• 凋亡晚期 — DNA内切酶活性被激活升高，双链DNA在核
• CellQuest、WinMDI等软件均可以进行分析，但需要 手工进行参数统计和计算；
• 推荐使用ModFit分析软件（分析如下：） 1. 打开软件； 2. 在FL2-W/FL2-A散点图中设定单个细胞门（R1），去除聚集细 胞，必要时可以设两个门。 3. 在FL2-A直方图中显示R1中细胞的DNA含量直方图
• 倍体(Ploidy)：原指染色体数目，流式中为描述总的DNA含量。
二倍体细胞有正常细胞的DNA含量但不除外染色体异常。 DI为0.85-1.15为近二倍体，DI为1.9-2.1 的细胞为四倍体（CV为5%时 ），DI> 2.1的为多倍体，其余DI值均为非整倍体。一般把非二倍体统 称为异倍体。
结果分析
– Caspase 3是参与DNA维护和调控细胞 的重要组分，即Caspase 3激活==细胞 凋亡
– 检测原理：是通过特异性抗体检测 全长或者剪切后的Caspase活性。
Caspase-3 data（IHC）
Jurkat T-Cells
6 µM camptothecin for 4 h untreated
注意事项：
1. 细胞制备或储存时细胞膜损伤，造成假阳性 2. 贴壁细胞消化时避免使用EDTA，螯合钙离子
BD Annexin V 流式检测试剂盒
Kit
Cat no.
Annexin V:FITC Apoptosis Detection Kit I 556547
Annexin V:FITC Apoptosis Detection Kit II-Contains unlabeled recomb. Annexin V
Annexin V:PE Apoptosis Detection Kit I
556570 559763
提供FITC, PE, APC,CY5,CY5.5, BD Horizon V450, BD Horizon V500 等多种荧光标记的Annexin V以及纯净的Annexin V。
Annexin V检测常见问题
早期凋亡PS检测及结果判定
Annexin V-FITC
PI
细胞膜变化的检测：Annexin V/PI
优点：简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞
样本设置：
1. 空白对照：辅助判断管，即不加Annexin V/PI，但用它调电压的话，电 压偏高，即根据它确定的阴阳性界限是偏低的。 2. 阴性对照：未诱导的，Annexin V/PI双染，细胞绝大部分都 在双阴性区域，用它来确定两荧光通道的电压，这是为了排除非 特异性结合。 3. 单阳样本：诱导凋亡，Annexin V单染，用来调补偿 4. 单阳样本：诱导凋亡，PI单染，用来调补偿
Cat No.
550480 550914
PARP cleaved –Caspase 3水解产物
• PARPs：一类由DNA链断裂而被激活 的DNA 修复酶。PARP可以被Caspase3水解成两个大小分别为24-和89-kDa 的片段而失活
• PARP cleaved是凋亡细胞中活化的 Caspase-3水解产物，代表Caspase酶 失去活性
Caspase-3 data（FCM）
Jurkat T-Cells
Mouse Thymocytes
Caspase-3 Kits
FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit
FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit
PE Active Caspase-3 Apoptosis Kit
细胞周期的样本制备
样本来源
• 培养的细胞、血液、骨髓、体液、灌洗液、外科手术活检、细针 穿刺物等的细胞都可用来做DNA分析。 • 新鲜的、冰冻或固定保存的、或常规固定/包埋用于组织检查的样 本均可。通常最好的结果来自新鲜标本。 • 标本的细胞数应>106
注意事项： 获得单个细胞，尽量避免DNA的降解
APO-DIRECT™ KIT 50 tests cat. 556381
Part A (store at 4℃)
PI/Rnase staining buffer
Reaction buffer Rising buffer Wash buffer
Part B (store at －20℃)
FITC-dUTP
• 只要Ca离子不影响该表面Marker就可以同时做
2. 线粒体水平的检测
激活Caspase 9—激活Caspase 3—启动细胞凋亡
2. 线粒体水平的检测
• 凋亡与线粒体膜电位的去极化相关 • BD Mitoscreen (JC-1) Cat# 551302 25 tests • JC-1: 可穿透细胞膜的亲脂性阳离子荧光素 • 原理：
小体之间切断形成~185bp为基数的有序片段 。
• 检测方法 — Tunel流式法:通过在核酸片段末端标记计算凋
亡百分比 — 末端转移酶标记技术
细胞核DNA检测原理：APO-BrdU
TdT: 脱氧核糖核苷酸末端转移酶
Brd UTP的渗入率显著高于dUTP，因此检测灵敏度高
TUNEL法: 流式分析晚期凋亡
• 备注：该软件可以自动分析，也可手动分析；可以分析凋亡 、异倍体、各期比例等；结果均自动计算。
结果分析
正常细胞周期分析
肿瘤组织中的各种DNA倍体
肿瘤细胞
细胞周期与DNA倍体分析应用
FACS应用：辅助肿瘤早期诊断与鉴别诊断
药物对细胞周期的影响
更多的产品或技术信息，详见…
/cn
1. 是否 Annexin V Kits 可以检测小鼠或其他物种?
• Annexin V试剂盒可以检测多种属
2. 这个试剂盒是否可用于贴壁细胞、固定或冻存的细 胞、或组织?
• No. 上述样本的细胞细胞膜都会或多或少受到损害，这样的 样本建议用免疫荧光技术 (Cat. No. 550911)
3. 是否与细胞表面标记兼容? CD11B/MAC-1 LY-71
PI/Rnase staining buffer Reaction buffer Rising buffer Wash buffer
Part B (store at －20℃) Br-dUTP
Negative control cells Positive control cells TdT Enzyme
BD流式系列课堂-1：
研究细胞生命活动的流 式解决方案
细胞凋亡概述
• 又称为程序性细胞死亡 (Programmed Cell Death) 是机体主动的、高 度有序地清除无用细胞的过程。和细胞坏死 (Necrosis) 相区别，坏死 是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程 。 薄膜有小泡状形成
JC-1在正常细胞中以聚合体形式存在于线粒体基质上产生红色荧光（ FL-2 Channel）； 细胞凋亡时，线粒体膜电位发生去极化，膜电位降 低，JC-1 以单体形式存在于胞浆内，荧光 强度减弱甚至消失 ，故用 荧光信号的变化判别凋亡的发生。
p 操作简单，试剂直接加入细胞中，20分钟后检测
JC-1检测结果流式图
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总结
BD流式系列课堂-1：
研究细胞生命活动的流 式解决方案
DNA含量与细胞周期
检测原理
利用特殊的荧光染料(PI等)与 细胞内DNA碱基结合，被这些 荧光染料染色的细胞在激光 照射下发射出荧光，荧光强 度与DNA含量成正比。流式细 胞仪通过测定细胞的荧光强 度推算出细胞的DNA含量。