免疫学实验操作流程
免疫学实验方案重要
抗体的制备一、实验目的掌握抗体制备的实验原理和方法。
二、实验原理三、实验试剂及器材四、操作步骤将兔放入一个特造的木匣或笼内，耳露于箱（笼）外，也可由另一人捉住兔身。
剪去耳缘的毛，用少许二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管扩张、充血。
用手轻拉耳尖，以单面剃须刀或尖的手术刀片，快速切开动脉或静脉，血液即流出，每次可收集30～40ml 。
然后用棉球压迫止血，凝血后洗去二甲苯。
放血过程中要严格按无菌要求进行。
收集的血液，4000rmp离心10min，弃上清，得到血浆，即抗体。
抗体的制备、鉴定、纯化及纯度鉴定一、实验目的⒈加深对抗体基本知识的了解。
⒉了解多克隆抗体的制备及纯化的基本方法。
⒊了解免疫电泳的基本过程和实验依据。
1、抗体的制备一、实验原理当将抗原注射入实验动物体内时，一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合，受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。
多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。
将抗原导入敏感动物体内后，可刺激网状内皮细胞系统，尤其是淋巴结和脾脏中的淋巴细胞大量增殖。
如图所示，实验动物对初次免疫和二次免疫的应答有明显的不同。
通常初次免疫应答往往比较弱，尤其是针对于易代谢，可溶性的抗原。
首次注射后大约7天，在血清中可以观察到抗体但抗体的浓度维持在一个较低的水平，在大约10天左右抗体的滴度会达到最大值。
但同种抗原注射而产生的二次免疫应答的结果明显不同，和初次免疫应答相比抗体的合成速度明显增加并且保留时间也长。
免疫应答的动力学结果取决于抗原和免疫动物的种类，但初次和二次免疫应答之间的关系是免疫应答的一个重要特点。
三次或以后的抗原注射所产生的应答和二次应答结果相似：抗体的滴度明显增加并且血清中抗体的种类和性质发生了改变，这种改变被称为免疫应答的成熟，具有重要的实际意义。
通常在抗原注射4-6周后会产生具有高亲和力的抗体。
酶联免疫吸附法实验步骤
酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学检测方法，其实验步骤大致如下：
1.准备所需的试剂和设备，如酶标板、酶标抗体、抗原、洗涤液等。
2.将抗原或抗体与酶标记物结合，形成酶标抗原或酶标抗体。
3.在酶标板中加入酶标抗原或酶标抗体，并使其与待测样本中的相应抗体或抗
原发生反应。
4.洗涤酶标板，去除未结合的酶标抗原或酶标抗体。
5.加入底物溶液，使酶催化底物生成有色产物。
6.洗涤酶标板，去除未结合的底物。
7.加入终止液，使反应停止。
8.在酶标仪中测量各孔的光密度值，根据标准曲线确定待测样本中的抗原或抗
体的浓度。
需要注意的是，具体的实验步骤可能会因不同的实验需求和试剂而有所差异。
在进行实验前，建议仔细阅读试剂说明书和实验指南，确保正确操作。
免疫组织化学实验流程
免疫组织化学实验流程免疫组织化学实验是一种利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过标记的抗体来定位抗原的生物学技术。
以下是免疫组织化学实验的基本流程：一、实验准备组织样本处理：获取的组织样本需要经过固定、脱水、透明和浸蜡等处理步骤，以便于切片和后续的免疫组织化学实验。
抗体选择：根据实验目的选择相应的抗体，确保抗体的特异性高、亲和力强，并且与抗原的结合效果好。
实验试剂准备：准备好免疫组织化学实验所需的抗体、二抗、底物、DAB染色剂等试剂，确保试剂的质量和有效性。
二、切片制作将经过处理的组织样本切成薄片，厚度一般为3-5微米。
将切片放置在载玻片上，用滤纸吸去多余的蜡滴。
在切片上滴加适量的抗体，使其与抗原充分结合。
三、免疫组织化学染色在切片上加入适量的二抗，与一抗结合，形成抗原-抗体复合物。
加入底物溶液，使其与抗原-抗体复合物反应，生成有色产物。
用DAB染色剂对有色产物进行染色，使其呈现明显的颜色。
四、观察与记录在显微镜下观察染色结果，根据抗原的分布和染色强度进行记录。
可以使用图像分析系统对染色结果进行定量分析，进一步了解抗原的表达情况。
五、结果分析根据染色结果，分析抗原在组织中的分布和表达情况，与正常组织进行比较，判断其与疾病的关系。
将结果与其他实验室指标相结合，进行综合分析，为临床诊断和治疗提供依据。
需要注意的是，免疫组织化学实验的结果受到多种因素的影响，如抗体的质量、抗原的特异性、组织处理的方法等。
因此，在进行实验时需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
同时，对于结果的解读需要结合临床背景和实验室其他指标进行综合分析，避免出现误判或漏诊的情况。
间接elisa实验流程
间接elisa实验流程
间接ELISA实验流程
ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗体或抗原的存在。
其中，间接ELISA是一种常用的抗体检测方法，其流程如下：
1.涂层：将待检测的抗原溶液加入96孔板中，使其在孔底形成一层涂层。
通常使用1%的牛血清白蛋白（BSA）或羊血清白蛋白（GSA）作为涂层缓冲液，以防止非特异性结合。
2.阻断：将孔中的涂层缓冲液倒掉，加入5%的牛血清或羊血清，使其在孔底形成一层阻断液。
阻断液可以防止非特异性结合，提高检测的灵敏度。
3.加入一抗：将待检测的样品加入孔中，与涂层中的抗原结合。
一般情况下，使用稀释后的血清或纯化的抗体作为一抗。
孵育时间一般为1-2小时。
4.加入二抗：加入与一抗特异性结合的辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，孵育时间一般为1小时。
二抗可以与一抗结合形成复合物，
从而增强信号。
5.加入底物：加入HRP底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺），孵育时间一般为10-30分钟。
HRP底物在酶的作用下会发生颜色变化，从而形成信号。
6.停止反应：加入停止液，如2M的硫酸，停止底物的反应。
停止液可以防止底物的继续反应，从而保证结果的准确性。
7.测量：使用酶标仪测量吸光度值，计算样品中抗体或抗原的浓度。
总结：间接ELISA是一种常用的抗体检测方法，其流程包括涂层、阻断、加入一抗、加入二抗、加入底物、停止反应和测量。
通过这种方法可以检测样品中抗体或抗原的存在，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
免疫细胞荧光实验步骤
免疫细胞荧光实验步骤
1.准备所需的仪器和试剂，如生物组织摊烤片机、普通冰箱、盖玻片、载玻
片、无水乙醇、3%双氧水、中性树胶、二甲苯、PBS缓冲粉、柠檬酸缓冲液等。
2.组织免疫荧光技术操作：将切片置于二甲苯中10分钟，进行脱蜡处理，然
后用100%，95%，85%和75%乙醇分别将切片置于其中，进行洗脱。
之后用PBS缓冲液洗涤3次，每次5分钟。
3.热修复抗原：将切片浸入柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)中，在微波炉高火加热8
分钟，冷却后用PBS缓冲液洗涤3次。
4.加入3% H2O2，室温10分钟以灭活内源性酶。
然后用PBS缓冲液洗涤3
次。
5.封闭：将切片滴加血清并放入湿盒中，室温20分钟。
然后用PBS缓冲液洗
涤3次。
6.孵育一抗：将切片滴加适当稀释的一抗，放入湿盒中，4℃孵育过夜。
7.复染核：用DAPI染色液复染核，然后在荧光显微镜下观察并采集图像。
1.4免疫学实验兽医免疫学
1.琼扩板的制备：称取1.2g琼脂粉，加至100mL 8%的高渗盐水中，煮沸使之 溶解。待溶解的琼脂温度降至55℃左右时倒入平皿，厚约3mm。（已制备） 2.打孔：待凝固后，用梅花打孔器在琼脂凝胶上打孔，用牙签挑出孔内琼脂 3.封底：将琼脂板底部在酒精灯火焰上轻轻拖过，至手背感觉微烫 4.加样 （以检测抗血清的效价为例）抗原加中心孔，待检血清做2倍比 （1:2，1:4，1:8，1:16等）稀释后置周围孔。设标准阴阳性血清对照。 （加样时，不要溢出小孔） 5.孵育：加样完毕，静置10min，湿盒内37℃孵育，24-48h观察并记录结果
结果判孔 之间出现一条清晰的白色沉淀线，标准阴性血清与抗原孔直接无 沉淀线，则实验成立。
➢以出现沉淀带的待检血清最高稀释倍数为该血清的琼扩效价。
免疫系统疾病实验操作步骤
免疫系统疾病实验操作步骤为了深入了解免疫系统疾病的发展和治疗，科学家们进行了大量的实验研究。
在实验过程中，正确的操作步骤是至关重要的，它直接决定了实验结果的准确性和可靠性。
本文将为您介绍免疫系统疾病实验的基本操作步骤。
一、实验前准备在进行免疫系统疾病实验之前，必须做好充足的准备工作。
首先，确保实验室环境的洁净和安全，准备好必要的实验设备和试剂。
其次，研究人员应熟悉实验操作流程，并且了解相关免疫系统疾病的研究背景和目的。
二、动物模型建立实验中常使用动物模型来模拟免疫系统疾病，例如自身免疫性疾病。
建立动物模型是实验的第一步，它可以帮助研究人员更好地理解和研究该疾病的机制和治疗方法。
在建立动物模型时，需要选择合适的实验动物，并按照特定的操作步骤进行操作，如给予特定的药物或接种疾病相关的抗原。
三、采集样本在实验过程中，采集样本是非常重要的一步。
通过采集动物体内的血液、组织或细胞等样本，可以获得免疫系统疾病发展的相关信息。
样本的采集需要采用无菌技术，以确保样本的纯净和可靠性。
采集后的样本需要进行合适的处理和保存，以便后续的实验分析。
四、实验操作实验操作过程中，需要根据实验目的和设计进行相应的实验操作。
这包括但不限于细胞培养、免疫分析、蛋白质检测、基因表达分析等。
实验操作需要严格按照实验方案和操作步骤进行，以保证实验的可重复性和准确性。
同时，实验过程中需要注意安全操作，避免对实验人员和环境造成伤害。
五、数据分析和结果解读实验结束后，需要对实验结果进行统计和分析。
通过数据的分析和结果的解读，可以得出研究的结论和相关的科学发现。
数据分析可以采用统计学方法、实验图表等，以直观地呈现实验结果。
结果的解读需要结合之前的研究背景和已有的科学知识，不断完善对免疫系统疾病机制和治疗方法的理解。
六、讨论与总结在实验报告中，需要对实验结果进行讨论和总结。
讨论部分可以对实验结果进行分析，探讨其中的原因和机制，并与已有的研究成果进行比较和讨论。
免疫学实验的流程
2、取待检样本（矿泉水三种），原液 各一毫升，加样至培养皿中间。 3.60℃ 水浴中取出培养基，倾注到培养 皿中（约1/4~1/3高度），将培养基与样 本轻轻混匀，自然冷却 注意：要 将瓶口用 火烤一下， 以防止空 气中的细 菌进入
4、做好标记，从超净做台取出，放 入培养箱，37℃ 培养24小时。
5、观察菌落结果计数
实验得出3号样品细菌最多，4 号最少细菌。
提醒我们不能吃开封过久的 食物，不然会对身体不好哦。
谢谢
免疫学实验的流程
固定培养基配制步骤
1、称量 7.6g—200ml
2、溶灭菌
空气水中微生物检测
准备：高压蒸汽灭菌器 无菌培养皿 普 通琼脂培养基 一毫升无菌枪头 一毫升 移液器 恒温培养箱
步骤
1、配制普通琼脂培养基，高压灭菌 后用，使用前溶解，然后放入60℃ 水 浴保温。
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免疫学实验操作流程
第一次实验 双向免疫扩散试验
1、小鼠摘眼球取血，双侧均摘取，(搞眼球者和用Eppendorf 管接血者配合好，尽量不要让血液流到管外)。
收集血液于Eppendorf 管中(1管/鼠)。
(小鼠取血前12小时停止给固体食物，多给水)
2、待血液凝固后，用牙签剥离血块，将Eppendorf 管于37℃放置半小时后，转入4℃ 冰箱中，直至血清彻底析出(约2小时)。
3、在第一个半小时内(37℃ 孵育)，解剖小鼠，观察小鼠免疫器官的状、大小、位置等。
4、在4℃ 的2个小时内，要做两件事情。
一是为第二天的ELISA 实验做准备，具体是包被的那一步骤；二是双向免疫扩散的实验操作。
(1) ELISA 的包被
包被是将抗原吸附于酶标板的过程。
抗原的包被浓度为10ug/ml 。
48孔酶标板各孔依次加包被液100ul/孔，注意设置空白对照。
包被好的酶标板置于4℃ 过夜。
包被说明：设三复孔。
A1-A3不包被抗原，C1-C3不包被抗原，它们用于阴性对照。
2 4
3 5 6 7 8 10 9 12
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(2) 琼脂双向免疫扩散实验操作步骤
①制板
配制1.5%琼脂粉溶液(用生理盐水)，微波炉加热至琼脂成溶胶状态(短间隔多次)，室温自然冷却至50℃左右(手摸上去能忍受)将琼脂粉溶液倾倒至载玻片上，待琼脂成凝胶状态后进行下一步。
(琼脂凝胶尽可能厚一些)
②打孔用打孔器在琼脂上打孔。
③为稀释抗体和抗原(倍比稀释)做准备。
抗体浓度在做预实验时从原浓度开始稀释至8倍结束共3个梯度。
稀释方法：取三个EP管，分别标记为1/2、1/4、1/8。
每管先加50ul的生理盐水。
取血清50ul，加入标记1/2的EP管内，充分混匀后，用加样器吸出50ul，加入到标记有1/4的EP管内，再充分混匀后，再取出50ul，加入至标记1/8的EP管内，充分混匀。
再将各管内的血清加入到对应的孔内，每个对应孔加25ul(见图)。
④加样结束后将载玻片置于一个湿盒内，置于37℃孵箱中过夜。
第二次实验 ELISA
1、于水池内甩净40孔酶标板孔内的包被缓冲液，倒置于吸水纸上，控干孔内液体。
2、封闭：1%牛血清白蛋白(BSA)，200ul/孔。
37℃放置1小时。
3、洗涤：采取步骤1中的方法倾倒封闭液，将洗液(含0.05% Tween-20的PBS)加至满孔，室温放置2分钟，倾倒洗液。
重复2-3次。
最后一次倾倒洗液要彻底。
4．加一抗(待检血清)。
血清从1：200起始按倍比稀释至10240倍结束，100ul/孔，同一浓度设三复孔。
加完样后盖好酶标板于37℃孵育1小时。
AB 两排用于检测不加佐剂组的血清，CD 两排用于检测加佐剂组的血清。
以不加佐剂组的血清为例，简述待测血清抗体的稀释方法如下：取8个EP 管，分别标记为1-8号。
向第1号管中加入995ul 的PBS ，向2-8号管中分别加入500ul 的PBS 。
取待测血清5ul ，加入至第1号管内，充分混匀后，吸出500ul 加入至第2号管内。
再混匀从第2号管内吸出500ul 加入至第3号管内。
依此类推直至第8号管也混匀为止。
加佐剂组的血清也用同样的方法稀释(注意用不同的EP 管)。
稀释全部完成后，按如下对应的方式加样：
不加佐剂组血清：
1号：A1-A3；2号：A4-A6；3号：A7-A9；4号：A10-A12；
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5号：B1-B3；6号：B4-B6；7号：B7-B9；8号：B10-B12。
加佐剂组血清：
1号：C1-C3；2号：C4-C6；3号：C7-C9；4号：C10-C12；
5号：D1-D3；6号：D4-D6；7号：D7-D9；8号：D10-D12。
5、洗涤：同步骤3。
6、加二抗(酶标抗体)：
每孔加100ul，酶标板置于37℃孵箱中孵育40分钟。
7、洗涤：同步骤3。
8、加底物：底物要现用现配。
所选用底物为邻苯二胺(OPD)，用底物缓冲液(柠檬酸盐缓冲液)配制。
每孔中加入100ul的底物后避光放置3-5分钟，加入2M H2SO4终止液，每孔50ul，终止反应。
用酶标仪测量OD值。
9、结果分析
选2倍于阴性对照OD值的抗体最高稀释倍数作为抗体的效价。