组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
酸性磷酸酶(ACP)检测
迪信泰检测平台
酸性磷酸酶（ACP）检测
酸性磷酸酶（Acid phosphatase, ACP）是一种是非特异性磷酸单酯酶，可以催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，生成无机磷酸和相应的醇、酚、糖等，还可以催化磷酸基团的转移反应，并直接参加磷代谢，在钙、磷的消化、吸收和分泌过程中发挥了重要的作用。
诱导并分泌酸性磷酸酶是植物应对低磷环境的重要适应性反应之一，血清酸性磷酸酶活力已成为诊断和监测多种疾病重要手段。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测酸性磷酸酶的活性变化。
此外，我们还提供其他酯酶类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定酸性磷酸酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 酸性磷酸酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
酸性磷酸酶的
4000rpm，10min离心
（溶解ACP，
沉淀杂蛋白） 上清液 IV
EDTA9ml，饱和硫酸铵 10ml /100ml上清液 IV，
4000rpm，10min离心
2倍体积预冷甲醇
（ 沉淀ACP）
缓慢搅拌
沉 淀（酶纯化物）
蒸馏水溶解，洗涤 4000rpm，10min离心
上清液 V （酶液）
二、 ACP的比活性分析 1.各上清液中蛋白质含量测定
原理：染料结合比色法——CBBG-250， max=595nm；
步骤：标准曲线制作
各上清液中总蛋白测定（做平行管，进 行重复实验，减少随机误差。
2.各上清液中ACP活性测定
酚-4-AAP显色法:以磷酸苯二钠为底物，由 ACP催化生成苯酚，在碱性条件下苯酚与4AAP缩合最终生成红色醌类化合物，max = 510 nm；
上清液I 中ACP的比活性
各上清液中ACP的活性 总体积 酶的回收率= 上清液I中ACP的活性总体积
还可以计算蛋白回收率，反映纯化效果，代表方法的特异性。
三、 ACP的动力学分析 1. 时间进程（t-A ）曲线
酚生 A 成量
时间（t）
ACP的 t-A 曲线
2. 酶浓度-速度（[E]-A）曲线
反应 速度
实验安排
1. 实验分组 2. 实验时间安排 3. 实验内容选择与分工 4. 实验报告书写
活性测定的原理、方法和影响因素； 4. 熟悉酶活性测定的条件选择和方法建立。
试剂与器材
一、ACP的分离纯化试剂：见实验 教材P31； 二、ACP动力学分析试剂：见实验 教材P35；
三、器材：普通离心机，721分光光 度计，恒温水浴箱，研钵等。
实验内容
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC0090规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体0.33mL×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL 试剂一；用不完的试剂4℃保存一周；试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
POD 催化H 2O 2氧化特定底物，在470nm 有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min。
3、样本测定表试剂名称（µL）测定管样本15蒸馏水270试剂一520试剂二130试剂三135在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s 后的吸光值A2。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明货号：G4561有效期：6个月有效。
产品内容：名称规格（4×10ml）保存试剂(A):TRAP固定液50ml4℃避光试剂(B):TRAP孵育液B1:AS-BI Buffer1ml-20℃避光B2:GBC染色液0.1ml4℃避光B3:TRAP Buffer9ml RT避光临用前，按B1:B2:B3=10:1:90混合，即为TRAP孵育液，即配即用。
试剂(C):苏木素染色液10ml4℃避光试剂(D):甲基绿染色液10ml RT避光产品说明：酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。
各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。
存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。
血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚不重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。
该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
自备材料：1、蒸馏水、恒温箱2、载玻片、推玻片3、光学显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)血液、细胞涂片：1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。
2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1060规格：10T/5S产品简介：CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环第一个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在412nm处有特征吸光值。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
产品内容：提取液：液体5mL×1瓶，-20℃保存；试剂一：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：液体0.1mL×1支，-20℃保存；试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入1mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入500μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1.5mL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；操作步骤：一、样本前处理组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL提取液和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2将匀浆液600g，4℃离心5min。
3将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS。
5在沉淀中加入200μL试剂一和2μL试剂二，反复吹打充分混匀，用于CS测定。
6柠檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热10min左右（保证无沉淀）。
土壤酸性磷酸酶(soil acid phosphatase)活性测定试剂盒(分光光度法)使用说明
土壤酸性磷酸酶（soil acid phosphatase）活性测定试剂盒（分光光度法）使用说明货号:BC0140规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。
产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1支，4℃避光保存。
临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。
（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1支，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。
8000rpm，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A空白管。
3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A标准管。
4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A测定管。
土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4048
土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4048规格：50T/48S可见分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体21mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三液体11mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×2支2-8℃保存标准品液体1mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：用前加50mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存8周；2、试剂四：临用前取1瓶加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂可以2-8℃保存2周（变褐色后不能再使用）；3、标准品：0.5μmol/mL苯酚标准液。
产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。
Phenyl Disodium Phosphate S-A CP,H+Phenol+Na2HPO4Phenol+2,6-Dibromobenzoquinone Chlorimide Alkaline Conditions Indoxyl(660nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、研钵、可调式移液器、冰、蒸馏水、30-50目筛、乙醇和甲苯（不允许快递）。
实验十一 酸性磷酸酶(ACP)的
二 实验原理
细胞内酸性磷酸酶+作用底物（外加的，含有磷
酸酯，在PH=5.0） → PO43-+Pb2+(外加底物中含 有的) → Pb 3（PO4）2↓无色+S2- → PbS↓棕黑色。 通过一定的条件，保持酶的活性，最后通过有色 沉淀PbS反馈出酸性磷酸酶的存在部位。
网状细胞：酸性磷酸酶
酸性磷酸酶精浆酸性磷酸酶酸性磷酸酯酶碱性磷酸酶偏低碱性磷酸酶偏高磷酸酸性碱性磷酸酶骨碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶磷酸酶实验十Βιβλιοθήκη 酸性磷酸酶（ACP）的显 示方法
1.实验目的
2.实验原理
3.试剂与器材
4.操作方法
5.注意事项
6.作业与思考
一、实验目的
1.了解细胞内生物大分子在细胞内存在的部
位。 2.学习酶化学检测方法。
则呈阴性。
温度：37℃，保持酶的活性。 片子注意晾干。
六、作 业与思考
1.图示巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。
2.在什么情况下，细胞中酸性磷酸酶会图示 巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。 发生变化？
肝再生过程中酸性磷酸酶(ACP)分布及活动性变化
三、试剂与器材
1.材料：小鼠。
2.试剂：淀粉溶液、Gomori硝酸铅作用液、1
％硫化铵溶液等。
3.器材：显微镜、注射器、解剖用具、恒温 水浴锅、载玻片、盖玻片等。
四、操作方法
1.实验前4~6天用无菌注射器取3%淀粉溶液 1ml注射于小鼠腹腔内，每天一次，以激活 吞噬细胞。
2.断颈出死小鼠，抛开腹腔，吸取腹腔液制 备涂片。 3. 10%福尔马林中固定5min。
四、操作方法
4. 放入37℃ACP作用液中处理30min。
alp试剂盒 说明书
碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)，也称碱性磷酸酯酶，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。
哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。
常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。
干细胞，如iPS中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS成功诱导的标志。
另外，分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会显著升高，被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。
此外，血清中碱性磷酸酯酶的升高，被称作高碱性磷酸酶血症(hyperalkalinephosphatasemia)，被认为和恶性胆管阻塞(malignant biliary obstruction)、原发性胆管硬化(primary biliary cirrhosis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosing cholangitis)、肝淋巴瘤(hepatic lymphoma)和肝肉瘤(hepatic sarcoidosis)等肝胆疾病密切相关。
血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨头生成密切相关，因为碱性磷酸酶是成骨细胞的副产物。
血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。
儿童和孕妇血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。
血清中碱性磷酸酶活性范围在20-140U/L。
SOP文件酸性磷酸酶ACP染色
SOP文件酸性磷酸酶（ACP）染色1. 引言酸性磷酸酶（ACP）是一种重要的酶，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。
ACP染色是一种常用的染色方法，可以用于检测细胞中ACP的表达和定位。
本文档旨在提供一份标准操作程序（SOP）文件，详细描述了ACP染色的实验步骤和注意事项。
2. 材料和试剂准备•ACP抗体：购买自可靠的供应商，存储在-20℃的冰箱中。
•PBS缓冲液：含有0.1%的Tween 20，pH 7.4。
•4%的多聚甲醛（PFA）：用于细胞固定。
•0.1%的Triton X-100：用于细胞渗透。
•3%的过氧化氢（H2O2）：用于抑制内源性酶活性。
•5%的牛血清白蛋白（BSA）：用于阻断非特异性结合位点。
•3,3’-二氨基苯基亚甲基环丙烷（DAB）底物液：用于显色反应。
3. 实验步骤3.1 细胞处理和固定1.将待检细胞培养在适当的培养基中，使其达到适当的生长状态。
2.使用适当的方法将细胞固定在载玻片上，例如用4%的PFA进行细胞固定，固定时间为15分钟。
3.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。
3.2 抗原检出4.使用0.1%的Triton X-100进行细胞渗透，渗透时间为10分钟。
5.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。
6.使用5%的BSA阻断非特异性结合位点，阻断时间为30分钟。
7.加入ACP抗体，适当稀释后，与载玻片反应，反应时间为1小时。
8.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。
3.3 显色反应9.加入3%的H2O2抑制内源性酶活性，反应时间为10分钟。
10.加入DAB底物液进行显色反应，反应时间根据样品的不同，通常为5-30分钟。
11.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。
4. 实验结果和分析使用光学显微镜观察载玻片下的细胞，如果目标细胞中有ACP的表达，则可见棕色的沉积物或颗粒。
通过比较不同实验组的染色结果，可以评估ACP的表达和定位情况。
5. 注意事项•所有步骤中的时间和温度应严格控制，以保证实验结果的准确性和可重复性。
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组织及血液酸性磷酸酶（ACP）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2130
规格：50T/24S
产品内容：
提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体1mL×1支，2μmol/mL酚标准液，4℃保存。
临用前蒸馏水稀释至0.5μmol/mL备用。
产品说明：
ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。
ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。
血液可直接用于测定，如果浓度高的话，用提取液稀释。
二、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴中预热30min以上。
试剂名称（μL）测定管对照管空白管标准管蒸馏水--100-
0.5μmol/mL标准品---100
上清液100---
试剂一200200200200
试剂二200200200200
混匀后置于37℃水浴中保温15min
试剂三600600600600
上清液-100--混匀后于510nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、ACP活性计算：
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
ACP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
ACP(U/g鲜重)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(W÷V提取×V样)÷T =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3.按血液体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
ACP(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷V样÷T
=0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品：标准品浓度，0.5μmol/mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；
T：反应时间，15min；V提取：加入提取液体积，1mL；
W：样本鲜重，g。
注意事项：
1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不完全。
4、ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠，使pH降至6.5以下，或5mL血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。