本科生实验-水的细菌学检查
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实验十 水的卫生细菌学检验(综合)
实验十水的卫生细菌学检验（综合）a)水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。
二、实验材料样品: 水样2.培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料), 伊红美兰琼脂(EMB)平板, 乳糖发酵管。
3.其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。
由于病原菌的数量少, 检测过程复杂, 因此, 直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。
由于大肠菌群在粪便中数量大, 在体外存活时间与肠道致病菌相近, 且检验方法比较简便, 因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。
如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量, 则说明此水已被粪便污染, 并有可能含有病原菌。
大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌, 并能在乳糖培养基中, 经37℃24~48h培养能产酸产气。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。
检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种, 其中稀释培养法是标准分析法, 为我国大多数卫生单位和水厂所使用。
它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
四、方法与步骤1.采样: 取100ml磨口带塞玻璃瓶, 包扎后, 干热灭菌备用。
2.取自来水样时, 至少应先放水5min, 以冲去龙头口所带的微生物, 获得主流管中有代表性的水样。
取样时, 用右手握瓶, 左手启开瓶塞, 用覆盖瓶口的纸托住瓶塞, 收集样品后, 连同覆盖纸一起将瓶口塞好, 并用线绳在原处扎好。
注意手指不得触及瓶口内部。
在静水中取样时, 先用右手揭去塞子, 瓶口朝下浸入水下约30cm处, 然后将瓶子反转过来, 待水注满后, 取出塞好瓶口。
如果水在流动, 瓶口必须迎着水流, 以免手上的细菌被水冲进瓶子。
3.水样放置过程中, 内含的细菌数目和类型会发生变化, 所以要求水样品应于6~10℃贮存,并不超过6h。
4.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内, 10ml接种量采用双料发酵管, 而lml及lml以下接种量采用单料管。
实验11水的细菌学检查
轻度污染：100ml、10ml、1ml、0.1ml各一份。 中度污染：10ml、1ml、0.1ml、0.01ml各一份 重度污染：1ml、0.1ml、0.01ml、0.001ml各一份
（1）将水样稀释成Байду номын сангаас0-1。 （2）分别吸取10-1的稀释水样1ml和原水样1ml，分 别加入装有10ml乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml
2．细菌总数测定
自来水 （1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两 个平皿。 （2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白 胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养 基充分混匀。 （3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作空白对照。 （4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进 行菌落计数。
二、实验原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌 种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不 可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能 生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用 普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
和100ml原水样，分别注入装有 5 ml和50ml三倍
浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。混匀后 置37℃培养24h。 以下步骤同生活饮用水的试验方法。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：乳糖蛋白胨液体培养基（内有倒置的杜 氏小管），3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基（内有 倒置的杜氏小管），伊红美蓝琼脂平板培养基。
四、实验步骤
1．水样的采取 同水中细菌总数测定实验。
自来水检查
（1）初发酵试验 在2个含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养 液的烧瓶中，各加入水样10ml；在10支含有3ml三倍浓缩 乳糖蛋白胨发酵管中，各加入水样10ml。混匀后置37℃培 养24h。
（1）将水样稀释成Байду номын сангаас0-1。 （2）分别吸取10-1的稀释水样1ml和原水样1ml，分 别加入装有10ml乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml
2．细菌总数测定
自来水 （1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两 个平皿。 （2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白 胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养 基充分混匀。 （3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作空白对照。 （4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进 行菌落计数。
二、实验原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌 种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不 可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能 生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用 普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
和100ml原水样，分别注入装有 5 ml和50ml三倍
浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。混匀后 置37℃培养24h。 以下步骤同生活饮用水的试验方法。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：乳糖蛋白胨液体培养基（内有倒置的杜 氏小管），3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基（内有 倒置的杜氏小管），伊红美蓝琼脂平板培养基。
四、实验步骤
1．水样的采取 同水中细菌总数测定实验。
自来水检查
（1）初发酵试验 在2个含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养 液的烧瓶中，各加入水样10ml；在10支含有3ml三倍浓缩 乳糖蛋白胨发酵管中，各加入水样10ml。混匀后置37℃培 养24h。
微生物实验-水的细菌学检查
水的细菌学检查
一、实验目的 1．学习水样细菌总数的测定方法。 2．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的
重要性。
生活用水的水源常被生活污水或工业废水或人与动 物的粪便所污染，可能含有不同类型的微生物，有 腐生性的和病原性的。
腐生性微生物对人无害，而病原性微生物则能引起 传染病的发生。
必须对生活用水及其水源进行严格的细菌学检查。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～ 300之间，则以最接近300或30的平均菌落数 乘以稀释倍数进行报告。
五、思考题
你所测的池塘水、河水或湖水的污秽程度 如何?通过实验你对保护水源水有何看法？
经检查，水样是否合乎饮用标准？
2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水
①水样稀释 ②吸取稀释后水样1ml加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20 mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
3.菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 。
（2）选择平均菌落数在30～300之间稀释度 的平板。当只有一个稀释度的平均菌落数 符合此范围时，则以该平均菌落数乘以稀 释倍数，作为该水样的细菌总数进行报告。
我国规定1 ml自来水中的总菌数不得超过100个。
三．实验用品
培养基： 牛肉膏-蛋白胨培养基
四、实验操作
（一）细菌总数的测定 1. 水样采集
自来水 将自来水龙头用火焰烧灼3 min灭菌，再拧开水龙头 流水5 min，以排除管道内积存的死水，随后用已灭 菌的三角瓶接取水样，以供检测。
池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15 cm深的 水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满 后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于 冰箱，但不能超过24 h。
一、实验目的 1．学习水样细菌总数的测定方法。 2．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的
重要性。
生活用水的水源常被生活污水或工业废水或人与动 物的粪便所污染，可能含有不同类型的微生物，有 腐生性的和病原性的。
腐生性微生物对人无害，而病原性微生物则能引起 传染病的发生。
必须对生活用水及其水源进行严格的细菌学检查。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～ 300之间，则以最接近300或30的平均菌落数 乘以稀释倍数进行报告。
五、思考题
你所测的池塘水、河水或湖水的污秽程度 如何?通过实验你对保护水源水有何看法？
经检查，水样是否合乎饮用标准？
2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水
①水样稀释 ②吸取稀释后水样1ml加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20 mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
3.菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 。
（2）选择平均菌落数在30～300之间稀释度 的平板。当只有一个稀释度的平均菌落数 符合此范围时，则以该平均菌落数乘以稀 释倍数，作为该水样的细菌总数进行报告。
我国规定1 ml自来水中的总菌数不得超过100个。
三．实验用品
培养基： 牛肉膏-蛋白胨培养基
四、实验操作
（一）细菌总数的测定 1. 水样采集
自来水 将自来水龙头用火焰烧灼3 min灭菌，再拧开水龙头 流水5 min，以排除管道内积存的死水，随后用已灭 菌的三角瓶接取水样，以供检测。
池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15 cm深的 水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满 后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于 冰箱，但不能超过24 h。
医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
[请在此处插入参考文献2]
[请在此处插入参考文献1]
01
03 02
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
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03 02
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培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
水的细菌学检查
24h和48h产酸产气的初发酵菌落均需在 伊红美蓝琼脂或复红亚硫酸钠培养基上， 进行平板划线，分离出阳性菌落。
3．复发酵试验 阳性菌落经涂片染色鉴别为G-，无芽 孢杆菌者，再经过乳糖蛋白胨液体培养 基进行复发酵试验，经24h培养产酸产气 者，可确认为大肠菌群阳性结果。
三．实验用品
培养基： （一）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 （二） 乳糖蛋白胨液体培养基 3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基 红美蓝琼脂培养基（制成平板）
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释 倍数进行报告。 （6）若所有稀释度的平均菌落数均不在 30～300之间，则以最接近300或30的平 均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
四、实验操作
（二）多管发酵法测定水中的大肠菌群 1. 水样采集 2. 自来水检查 （1）初（步）发酵试验 （2）平板分离 （3）复发酵试验
2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水 ①水样稀释 ②吸取稀释后水样加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
水样稀释 取1ml水样加入到9ml无菌水的试管，振 1 荡混匀，得稀释度为10－1； 从10－1管中取水样1ml加到第二支9ml无 菌水的管中，振荡混匀，得10－2……
大肠菌群的测定 若水源被粪便污染，则有可能也被肠 道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容 易死亡与变异，因此数量较少，要从中特 别是自来水中分离出病原菌常较困难与费 时，这样就要找到一个合适的指示菌，此 指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原 菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则 大多数情况也保证没有病原菌。最广泛 应用的指示菌是大肠菌群(coliform group)。 大肠菌群的定义是：一群好氧和兼性厌氧、 革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖 培养基中，经37℃，24～48 h培养能产酸产气。 根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被 粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌 污染的可能性。
(完整版)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后,所得1 mL水样所含菌落的总数.细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。
由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分2.2 制法：根据实际需要量,按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7。
6,分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤.），经103。
43 kPa（121°C，15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。
4.仪器和材料4.1仪器:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱.4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。
4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3—5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml.5.2纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.5.3地表水的取样:应取距水面10-15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
医学：水中的细菌学测定
了解其浓度和分布情况。
条件致病菌
条件致病菌
是指在特定条件下能够引起疾病的细菌，如大肠杆菌、绿 脓杆菌、变形杆菌等。
条件致病菌的特性
通常为人体肠道或呼吸道正常菌群，但在特定条件下，如 机体免疫力降低或细菌数量增多时，可以引起疾病。
条件致病菌的测定
在水中条件致病菌的测定中，通常采用同样方法进行增菌、 分离培养、鉴定等，以了解水中是否存在条件致病菌，并 评估其对人群健康的潜在威胁。
体情况制定限量标准。
03
其他常见致病菌数量
根据具体情况制定其他常见致病菌的数量限量标准。
06 水中的细菌学测定在实际 应用中的问题与挑战
测定方法的局限性
培养基选择性
01
培养基的成分和培养条件可能对某些细菌的生长产生限制，导
致某些细菌无法被检测到。
培养时间
02
培养时间较长，需要一定时间才能得到结果，可能影响细菌的
背景
随着工业化和城市化的快速发展，水 污染问题日益严重，水中的细菌学测 定对于保障人类健康和生态平衡具有 重要意义。
重要性
健康保障
政策制定
通过水中的细菌学测定，可以及时发 现并控制水体中的有害细菌，防止水 源性疾病的传播，保障公众健康。
基于水中的细菌学测定结果，政府可 以制定和调整相关政策，加强水质监 管，提高水质标准。
细菌种类的鉴别挑战
形态学相似
有些细菌在形态上相似，可能难以区分，导致鉴定不准确。
基因测序技术
基因测序技术是更准确的方法，但需要较高的技术和设备支持，且 成本较高。
抗原性差异
不同细菌的抗原性存在差异，但抗原性检测需要特定的试剂和设备， 且结果可能存在主观性。
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条件致病菌
条件致病菌
是指在特定条件下能够引起疾病的细菌，如大肠杆菌、绿 脓杆菌、变形杆菌等。
条件致病菌的特性
通常为人体肠道或呼吸道正常菌群，但在特定条件下，如 机体免疫力降低或细菌数量增多时，可以引起疾病。
条件致病菌的测定
在水中条件致病菌的测定中，通常采用同样方法进行增菌、 分离培养、鉴定等，以了解水中是否存在条件致病菌，并 评估其对人群健康的潜在威胁。
体情况制定限量标准。
03
其他常见致病菌数量
根据具体情况制定其他常见致病菌的数量限量标准。
06 水中的细菌学测定在实际 应用中的问题与挑战
测定方法的局限性
培养基选择性
01
培养基的成分和培养条件可能对某些细菌的生长产生限制，导
致某些细菌无法被检测到。
培养时间
02
培养时间较长，需要一定时间才能得到结果，可能影响细菌的
背景
随着工业化和城市化的快速发展，水 污染问题日益严重，水中的细菌学测 定对于保障人类健康和生态平衡具有 重要意义。
重要性
健康保障
政策制定
通过水中的细菌学测定，可以及时发 现并控制水体中的有害细菌，防止水 源性疾病的传播，保障公众健康。
基于水中的细菌学测定结果，政府可 以制定和调整相关政策，加强水质监 管，提高水质标准。
细菌种类的鉴别挑战
形态学相似
有些细菌在形态上相似，可能难以区分，导致鉴定不准确。
基因测序技术
基因测序技术是更准确的方法，但需要较高的技术和设备支持，且 成本较高。
抗原性差异
不同细菌的抗原性存在差异，但抗原性检测需要特定的试剂和设备， 且结果可能存在主观性。
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〖医学〗水的细菌学检查---细菌总数的测定
实验报告及思考题
• 一 . 实验报告以论文形式提交 • 二. 思考题
• 1、从自来水水样细菌总数检测的结果判断是否符合饮用 水的卫生标准?
• 2、你所测的池塘水、河水、湖水的污秽度如何?通过实 验你对保护水资源有何认识?
• 3、试与其他同学的实验结果进行比较,从中判断你的实验 结果误差如何?原因是什么?
在西方，盖伦的一生生活在罗马帝国时 安东尼 父子的 执政期 。彼时 ，（高 血压心 脏病糖 尿病） 罗马帝 国的繁 荣，为 盖伦的 医学成 就、以 及西方 医学的 昌盛， 提供了 可靠的 政治、 经济、 科技和 文化保 证。盖 伦继承 希波克 拉底的 学术思 想，著 述200余 部著作 ，（肺 血液血 小板红 血球 白血球 ）现存 的83部 著作中 ，内容 涉及解 剖、生 理、病 理、卫 生、药 物、《 希波克 拉底文 集》研 究、哲 学、语 言学、 逻辑学 、数学 、历史 、法律 等。倡 导实证 医学， 他的科 学方法 论（传 染病丙 肝乙肝 甲肝） 具有重 视实验 、疾病 局部定 位思想 、重视 形式逻 辑、强 调演绎 法等特 点，对 后世西 医学的 （肺血 液血小 板红血 球白血 球）发 展影响 深远。 （肺炎青霉素肝炎）
水的细菌学检查---细菌总 数的测定(开放)
• 目的要求
1、培养学生自行设计实验流程,判断实验结 果的能力。
2、对所学习过的实验方法进行综合技能训练。
3、通过实验掌握水样的采集和水样中细菌总 数测定的方法。
实验原理
• 生活用水的水源常被生活污水、工业废水 以及人畜粪便所污染。
• 腐生性微生物对人无害,而病源性微生物则 能引起传染病甚至流行病,如霍乱、伤寒、 细菌性痢疾和阿米巴性痢疾以及脊髓灰质 炎和传染性肝炎等病毒性疾病。
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2
大肠菌群的测定
大肠菌群是指：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的 杆状细菌，并在乳糖培养基中37℃培养24~48 h能产酸产气。水 中大肠菌群的数目可以说明水源是否被粪便污染，并间接推测 水源受肠道病原菌污染的可能性。标准：1000 ml自来水中大 肠菌群数不超过3个。
一 水中细菌总数的测定 目的要求
器
材
1 培养基：煌绿乳糖胆盐肉汁培养基发酵管（内 有倒置德氏小管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌 水 2 实验用具：灭菌三角烧瓶，灭菌吸管，灭菌试 管
操作步骤
1 采集水样
采用细菌总数测定实验中的池水样品，取其原水样、10–1稀释水 样、10–2 稀释水样。
2. 初发酵试验
吸取上述三种水样各1 ml，分别注入装有10 ml普通浓度煌绿乳 糖胆盐肉汁发酵管中。另取10 ml原水样注入装有5 ml三倍浓缩 煌绿胆盐乳糖肉汁的试管中。混匀后，37℃培养24 h。
3. 平板分离
经24 h培养后，将产酸产气的发酵管分别划线接种于伊红美蓝琼 脂平板上，于37℃培养24 h，将符合下列特征的菌落的一小部分， 进行革兰氏染色，镜检。 a. 深紫黑色、有金属光泽。 b. 紫黑色、不带或略带金属光泽。 c. 淡紫红色、中心颜色较深。
4. 复发酵试验
经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，则挑取该菌落的另一部分，重 新接种于普通浓度的煌绿胆盐乳糖肉汁发酵管中，每管可接种来自 同一初发酵管的同类型菌落1~3个，37℃培养24h，结果若产酸又产 气，即证实有大肠菌群存在。 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性结果，结合大肠 菌群检数表(接种水样总量为11.11 ml，10、1、0.1、0.01 ml各1份， “+”发酵阳性；“-”发酵阴性 )得到大肠菌群数。
操作步骤
1 采集水样
1) 自来水：打开水龙头使水流5 min后，用灭菌三角烧瓶接取 水样。 2) 池水：用灭菌三角烧瓶采集水样。
2
测定细菌总数
1) 自来水： a. 取三个空的灭菌培养皿，用灭菌吸管在其中两个分别加入1 ml水样，第三个不加。 b. 在以上三个培养皿中分别倾注15 ml已溶化并冷却到45℃左 右的营养琼脂培养基，并立即在实验台上作平面旋转，使 水样与培养基混匀。 c. 培养基凝固后，倒置于37℃温箱中培养24 h，计算菌落数。
1 学习水样细菌总数测定的方法。
2 了解水源水的平板菌落计数的原则。
基本原理
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌 总数。目前一般是以在营养琼脂培养基平板上生长 出来的菌落来计算水中细菌总数，因此仅是一种近 似值。
器
1
材
培养基：营养琼脂培养基，灭菌水
2 实验用具：灭菌三角烧瓶，灭菌培养皿，灭菌 吸管，灭菌试管
池水细菌总数测定(10-1)
初发酵实验
10ml原水样
1ml原水样
0.1ml原水样
0.01ml原水样
平板分离
3、0.1ml原水样
复发酵实验
1,2 1ml原水样 3,4 0.1ml原水样 5,6 0.01ml 原水样
水的细菌学
大肠菌群
First day
afternoon-night
night night
自来水，池水稀释 倒平板 营养琼脂平板
计算菌落数
自来水，池水稀释 接乳糖发 酵管（内置德氏管）
划线于Ｅ－Ｍ平板上 分离单菌落 镜检 并进行复发酵试验
Second day Third day
Fourth day
night
பைடு நூலகம்看复发酵试验结果
Thank you for your attention
发酵管内装有煌绿乳糖胆盐肉汁培养基（液体），培养基内加有溴 甲酚紫作为pH指示剂，并倒有一德氏小管。
2. 平板分离
产酸产气的菌液在伊红美蓝琼脂平板上培养，大肠菌群发酵培养 基中乳糖造成酸性环境时，伊红和美蓝两种染料结合成复合物， 使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。
3. 复发酵试验
上述深紫色菌落经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，再进行发 酵试验，24 h后产酸产气者确定为大肠菌群阳性结果。
水的细菌总数及大肠 菌群的测定
授课教师:
孙运军
研 究 生:
穰 杰 王冶红
张印江 陆秀青
概论
测定水样是否合乎饮用标准，通常包括下列两个 项目： 1 细菌总数的测定
细菌总数是指1 ml水样在营养琼脂培养基中37℃培养24 h后所 生长的菌落数。水中细菌总数可说明水样被有机物污染的程度。 标准：1 ml自来水中细菌总数不超过100个。
每组：
• • • • • • 2个灭菌三角瓶（300ml，装水样用） 5根2ml移液管 2根10ml移液管 15个平板 5支灭菌空试管（15ml，稀释水样用） 16支空试管
• 300mlLB琼脂培养基(蛋白腖3g, yeast extract 1.5g NaCl 3g ,琼脂粉 1.5%-2%)，分2瓶。 • 150 ml煌绿乳糖胆盐肉汁培养基，(已配好， 30 g /1000 ml )，分12支（带德氏小管，6支1 包）。 • 50ml 3倍浓缩煌绿乳糖胆盐肉汁培养基，（需 要另外配制），分3支(带德氏小管） • 100ml 伊红美蓝琼脂培养基（已配好，44g /1000 ml） • 100ml 乳糖复发酵胨水，(已配好，35 g /1000 ml )
2) 池水 a. 稀释水样：取4个灭菌空试管，分别加入9 ml灭菌水。取1 ml 水样注入第一管、摇匀，再从第一管取1 ml至下一管，如此 稀释到第四管，则4管稀释度分别为10–1 、10–2 、10–3 与10–4 。 b. 从以上4管中各取1 ml稀释水至空的灭菌培养皿中，每一稀释 度做两个培养皿。 c. 向上述8个培养皿各倾注15 ml已溶化并冷却至45℃左右的营 养琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。 d. 凝固后倒置于37℃温箱中培养24 h。
3 菌落计数方法
1) 先计算相同稀释度的平均菌落数（整板均匀、半板均匀、片 状菌苔超过一半）。 2) 根据各稀释度的平均菌落数按下表计算菌落总数（平均菌落 数理想值：30~300）。
二 多管发酵法测定水中大肠菌群
目的要求
学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
基本原理
检查水中大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法。多管 发酵法是将不同体积的水样接种到乳糖胆盐发酵培养基 中，然后对各发酵管进行初发酵试验、平板分离和复发 酵实验(本次试验初发酵使用煌绿胆盐肉汁培养基) 。 1. 初发酵试验