实验11水的细菌学检查
老师整理的实验报告水处理微生物学标准实验报告 实验十 细菌菌落总数cfu的测定
南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验十细菌菌落总数（CFU）的测定一、实验目的：1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2．了解培养基平板菌落计数原则二、实验基本原理：细菌菌落总数（CFU）是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。
它是有机污染程度的指标，也是卫生指标。
在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水有机污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。
但还应当指出的是，水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。
因此，结合大肠菌群数以判断水的污染的安全程度就更全面。
我国现行生活饮用水的卫生标准（GB5749－2006）规定：细菌菌落总数在1ml自来水中不得超过80个。
细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们的培养基才能将它们培养出来。
然而在实验工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机污染程度。
三、主要仪器设备及耗材：电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，电热培养箱，恒温水浴，冰箱，菌落计数器，放大镜，肉膏蛋白胨脂培养基，灭菌水，灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、实验步骤：1．水样的采取供细菌学检验用的水样，必须按无菌操作的基本要求进行采样，并保证在运送，贮存过程中不受污染。
为了要正确反映水质在采样时的真实情况，水样在采取后应立即送检，一般从取样到检验不应超过4小时。
条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
（1）生活饮用水（自来水）先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，用灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
（2）池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，立即返回实验室检查，否则需放入冰箱中保存。
实验十 水的卫生细菌学检验(综合)
实验十水的卫生细菌学检验（综合）a)水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。
二、实验材料样品: 水样2.培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料), 伊红美兰琼脂(EMB)平板, 乳糖发酵管。
3.其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。
由于病原菌的数量少, 检测过程复杂, 因此, 直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。
由于大肠菌群在粪便中数量大, 在体外存活时间与肠道致病菌相近, 且检验方法比较简便, 因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。
如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量, 则说明此水已被粪便污染, 并有可能含有病原菌。
大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌, 并能在乳糖培养基中, 经37℃24~48h培养能产酸产气。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。
检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种, 其中稀释培养法是标准分析法, 为我国大多数卫生单位和水厂所使用。
它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
四、方法与步骤1.采样: 取100ml磨口带塞玻璃瓶, 包扎后, 干热灭菌备用。
2.取自来水样时, 至少应先放水5min, 以冲去龙头口所带的微生物, 获得主流管中有代表性的水样。
取样时, 用右手握瓶, 左手启开瓶塞, 用覆盖瓶口的纸托住瓶塞, 收集样品后, 连同覆盖纸一起将瓶口塞好, 并用线绳在原处扎好。
注意手指不得触及瓶口内部。
在静水中取样时, 先用右手揭去塞子, 瓶口朝下浸入水下约30cm处, 然后将瓶子反转过来, 待水注满后, 取出塞好瓶口。
如果水在流动, 瓶口必须迎着水流, 以免手上的细菌被水冲进瓶子。
3.水样放置过程中, 内含的细菌数目和类型会发生变化, 所以要求水样品应于6~10℃贮存,并不超过6h。
4.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内, 10ml接种量采用双料发酵管, 而lml及lml以下接种量采用单料管。
本科生实验-水的细菌学检查
2
大肠菌群的测定
大肠菌群是指：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的 杆状细菌，并在乳糖培养基中37℃培养24~48 h能产酸产气。水 中大肠菌群的数目可以说明水源是否被粪便污染，并间接推测 水源受肠道病原菌污染的可能性。标准：1000 ml自来水中大 肠菌群数不超过3个。
一 水中细菌总数的测定 目的要求
器
材
1 培养基：煌绿乳糖胆盐肉汁培养基发酵管（内 有倒置德氏小管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌 水 2 实验用具：灭菌三角烧瓶，灭菌吸管，灭菌试 管
操作步骤
1 采集水样
采用细菌总数测定实验中的池水样品，取其原水样、10–1稀释水 样、10–2 稀释水样。
2. 初发酵试验
吸取上述三种水样各1 ml，分别注入装有10 ml普通浓度煌绿乳 糖胆盐肉汁发酵管中。另取10 ml原水样注入装有5 ml三倍浓缩 煌绿胆盐乳糖肉汁的试管中。混匀后，37℃培养24 h。
3. 平板分离
经24 h培养后，将产酸产气的发酵管分别划线接种于伊红美蓝琼 脂平板上，于37℃培养24 h，将符合下列特征的菌落的一小部分， 进行革兰氏染色，镜检。 a. 深紫黑色、有金属光泽。 b. 紫黑色、不带或略带金属光泽。 c. 淡紫红色、中心颜色较深。
4. 复发酵试验
经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，则挑取该菌落的另一部分，重 新接种于普通浓度的煌绿胆盐乳糖肉汁发酵管中，每管可接种来自 同一初发酵管的同类型菌落1~3个，37℃培养24h，结果若产酸又产 气，即证实有大肠菌群存在。 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性结果，结合大肠 菌群检数表(接种水样总量为11.11 ml，10、1、0.1、0.01 ml各1份， “+”发酵阳性；“-”发酵阴性 )得到大肠菌群数。
一般生菌数检验方法
一般生菌数检验方法
一般生菌数检验方法如下：
1.制备10倍品匀液。
按上一步操作程序，每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
2.取样并制备平板。
同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内空白对照。
及时将15mL-20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃士1℃恒温水浴锅中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
3.待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃士1℃培养48h+2h。
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按2.1条件进行培养。
4.平板上菌落计数可使用自动化菌落计数仪，也可用肉眼观察（必要时可用放大镜观察）记录培养基上菌落数量和相应的稀释倍数。
选取菌落数在30-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
以上就是一般生菌数检验方法，希望对解决您的问题有所帮助。
实验十二-水中细菌总数和大肠杆菌检测
30
2
1
150
2
2
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2
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1
20032Fra bibliotek240
95%可信限
上限
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710
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2
11000
1500
48000
3
3
3
≥24000
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色
产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试 管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生， 需进一步试验。
稀释度选择及细菌总数报告方法
平均 菌落
医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
[请在此处插入参考文献1]
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03 02
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培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
最新水质实验报告
最新水质实验报告
实验目的：
评估当前水源的水质状况，检测是否存在污染物质，确保水质符合饮
用水标准。
实验日期：
2023年4月15日
实验地点：
城市中央水库
实验方法：
采用标准水质检测方法，包括但不限于色度、浑浊度、pH值、溶解氧、生化需氧量（BOD）、化学需氧量（COD）、重金属含量（如铅、汞、镉）、细菌总数和特定病原体等指标进行检测。
实验结果：
1. 色度：水源无色透明，无可见悬浮物，符合《生活饮用水卫生标准》要求。
2. 浑浊度：平均值为10 NTU，低于标准限值20 NTU，表明水质清澈。
3. pH值：测量值为7.2，处于6.5-8.5的适宜范围内，表明水质中性
偏碱。
4. 溶解氧：平均值为9.5 mg/L，高于最低限值7 mg/L，有利于水生
生物的生存。
5. 生化需氧量（BOD）：平均值为2 mg/L，低于标准限值3 mg/L，表
明有机物含量较低。
6. 化学需氧量（COD）：平均值为15 mg/L，低于标准限值30 mg/L，
表明水质未受明显有机污染。
7. 重金属含量：铅、汞、镉等重金属含量均低于国家规定的限值，未检测到异常。
8. 细菌总数：检测结果显示细菌总数低于标准限值，未发现致病性细菌。
结论：
根据本次实验结果，城市中央水库的水质良好，各项指标均符合国家饮用水标准。
建议继续定期监测，确保水质安全。
同时，加强水源地保护，防止潜在的污染风险。
水质 细菌总数的测定 菌落计数
水质细菌总数的测定菌落计数1.适用范围本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水细菌总数的测定。
2.原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。
因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。
所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。
3.仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱解剖镜。
采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121°C（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。
培养基营养琼脂培养基：市售营养琼脂培养基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121C高压蒸汽灭菌15min,经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。
4.步骤4.1选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30〜300之间。
大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL,所得的菌落总数可适于计数。
4.2水样的稀释方法①将水样用力振摇20〜25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。
②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。
按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。
注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。
4.3操作方法①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2〜3个适宜浓度的稀释水样ImL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每个水样应倾注两个平皿。
②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37C恒温箱内培养24h,进行菌落计数。
4.4菌落计数培养之后，立即进行平皿菌落计数。
如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5〜10C冰箱内，且不得超过24h。
但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。
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（1）将水样稀释成Байду номын сангаас0-1。 （2）分别吸取10-1的稀释水样1ml和原水样1ml，分 别加入装有10ml乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml
2．细菌总数测定
自来水 （1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两 个平皿。 （2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白 胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养 基充分混匀。 （3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作空白对照。 （4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进 行菌落计数。
二、实验原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌 种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不 可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能 生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用 普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
和100ml原水样，分别注入装有 5 ml和50ml三倍
浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。混匀后 置37℃培养24h。 以下步骤同生活饮用水的试验方法。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：乳糖蛋白胨液体培养基（内有倒置的杜 氏小管），3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基（内有 倒置的杜氏小管），伊红美蓝琼脂平板培养基。
四、实验步骤
1．水样的采取 同水中细菌总数测定实验。
自来水检查
（1）初发酵试验 在2个含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养 液的烧瓶中，各加入水样10ml；在10支含有3ml三倍浓缩 乳糖蛋白胨发酵管中，各加入水样10ml。混匀后置37℃培 养24h。
释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取10-1、
10-2、10-3 3个连续稀释度，污秽严重的取10-2、 10-3、10-4 3个连续稀释度。
（2）自最后3个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入
空的灭菌培养皿中，每一稀释度做2个培养皿。 （3）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋 白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。 （4）凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。
经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，
则挑取相同的菌落，重新接种于普通浓度的乳糖蛋 白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同
类型菌落1-3个,置37℃培养24h，有产酸产气者，即
证实有大肠菌群存在。
根据证实有大肠菌群存在的阳性管数查表12-1，报 告每升水样中的大肠菌群数。 污染水：用于培养的水量，应根据污染程度选择下 列不同量做培养。
• 两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。
池水、河水
（1）稀释水样 以无菌操作方法吸取0.5ml充分混匀 的水样，注入盛有4.5ml无菌水的试管中混匀成
10-1的稀释液。按上法依次进行倍比稀释，稀释
度分别为10-1、10-2、10-3 、10-4。稀释倍数看水 样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30300个之间的稀释度最为合适，若3个稀释度的菌 数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀
厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，在乳糖
培养基中，经37℃24h培养能产酸产气。根据水中 大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染， 并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。我 国规定每升自来水中大肠菌群不超过3个；若只经
过加氯消毒即作生活饮用水的水源水，大肠菌群
数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加 氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群 数平均每升不得超过10000个。
（2）平板分离 培养24h后，将产酸产气及只产酸的发酵管 （瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，置37℃培
养24h，挑取符合下列特征的菌落，进行涂片，革兰氏染
色镜检。
（3）伊红美蓝琼脂平板上的菌落
（a）深紫黑色、有金属光泽。
（b）紫黑色、不带或略带金属光泽。 （c）淡紫红色、中心颜色较深。
（4）复发酵试验
菌落计数方法
（1）选择平均菌落数在30-300之间的，当只有1个稀释度的
平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍 数即为该水样的细菌总数。
（2）若有2个稀释度的平均菌落数均在30-300之间，则按两
者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者 的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂固体培养基
四、实验步骤
1．水样的采取 （1）自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌， 再开放水龙头使水流5分钟后，以灭菌三角烧瓶接 取水样，备用。 （2）池水、河水应取距水面10—15cm的深层水样， 先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后 翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则 需放入冰箱中保存。
（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则按稀释度最
高的平均菌落数乘以稀释倍数。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则按稀释度最 低的平均菌落数乘以稀释倍数。
大肠菌群的检查
一、实验目的
1、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、实验原理
大肠菌群（coliform group）指一群好氧和兼性
实验十一、水中细菌总数及大肠菌群的测定
细菌总数测定
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度。 细菌数越多，有机物质含量越大。 细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中， 37℃经24小时培养后，所生长的菌落数。 我国规定自来水1ml的总菌数不得超过100个。
一、实验目的
1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。 2．了解水源水的平板菌落计数的原则。