水 中 细 菌 总 数 的 检 测
水-中-细-菌-总-数及大肠菌群的检测方案
水中细菌总数的检测及大肠菌群的测定一、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。
我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。
所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。
因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数。
此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。
缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。
生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤3个大肠菌群/1L饮水，≤100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和材料(三)实验器材(1) 菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。
2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
(2)大肠菌群的测定；1)培养基：伊红美蓝琼脂培养基：蛋白胨10g，乳糖10g， K2HP042g， 2％伊红水溶液20Ml，0.65％美蓝水溶液lOmL，琼脂17g，水1000mL，pH7.1。
制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于水中，校正pH后分装．121℃灭菌15min备用。
临用时加入乳糖并熔化琼脂，冷至50-55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测
实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测摘要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。
初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。
对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。
关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。
细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)]，可用稀释平板计数法检测。
水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。
特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。
多管发酵法初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气；分离培养：伊红美蓝（EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落；复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。
材料和方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5.0 g，琼脂8g，蒸馏水1000ml；pH 7.0乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵1×：蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL（调pH值后加）、水1000mL、pH 7.2－7.4三倍浓缩液（3×）：除水以外，其余成分取三倍用量分装：1×的培养基分装9ml/管，3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。
灭菌条件：115℃，15min。
EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基，按说明书操作，水用量为90%。
水源：紫竹院河水仪器：高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。
试剂：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤：1），相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。
一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。
二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌(烘箱)。
3．水浴隔热培养箱。
4．冰箱。
5.培养皿(直径9ml)。
6．吸管(10.0ml、1.0m1)。
三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。
四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。
[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。
二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。
饮用水中菌落总数的测定
饮用水中菌落总数的测定饮用水是人们生活中必不可少的资源之一，因此其质量问题也非常重要。
菌落总数测定是饮用水质量检验中的一项重要指标，它可以反映饮用水中微生物污染的情况。
本文将介绍饮用水中菌落总数的测定方法。
一、实验原理菌落总数测定是通过将水样分别接种在含营养物质的固体培养基上，在适宜的温度下培养一定时间后，观察菌落形成的数量来表示水样中菌落总数的多少。
菌落总数包括细菌、真菌、放线菌等不同种类的微生物。
二、实验材料1.培养基：通用营养琼脂培养基。
2.试剂：无菌纯水。
3.实验器材：培养皿、无菌玻璃滴管、高压蒸汽灭菌器、无菌工作台、温度控制器、数码计数器等。
三、实验步骤1. 准备工作：将通用营养琼脂培养基溶解，加入适当的营养成分，灭菌后，倒入消毒好的培养皿中，存放于恒温箱内。
2. 取样：在取样前，应将集水设施、自来水输送管道和水龙头清洗干净，进行彻底冲洗，然后使用无菌玻璃滴管从水源处取样，放入无菌瓶内。
3. 接种：将取出的水样用无菌玻璃滴管滴入消毒好的培养皿上，每个培养皿中加入约1ml水样，然后轻轻摇晃培养皿，使水样与琼脂培养基充分混合。
4. 培养：消毒好的培养皿放入恒温箱中，在恒温箱内控制温度为35℃左右，培养时间一般为24小时。
5. 统计菌落：在培养24小时后，取出培养皿，观察菌落的数量和形态，使用数码计数器统计菌落数量。
四、实验注意事项1. 取样前，应使用无菌玻璃滴管，避免外界细菌和真菌的污染。
2. 原水样取到之后应及时送到实验室或者进行现场测定，避免对样品存放时间过长而影响实验结果。
3. 在接种培养皿时，应将培养皿扣开盖盖起来，避免细菌、真菌等污染。
4. 培养皿在放入恒温箱时，要均匀摆放，避免温度分布不均，影响菌落的生长。
5. 统计菌落时，应仔细观察，避免漏掉菌落数，影响实验结果。
五、实验结果分析1.道路和公共场所的饮用水菌落总数标准为1000 CFU/ml。
通过菌落总数的测定可以了解饮用水中微生物的污染状况，若菌落总数超出标准值，则说明水源存在严重的微生物污染，需要进行处理和消毒。
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。
这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。
2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。
通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。
3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。
这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。
4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。
这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。
5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。
这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。
- 1 -。
生活饮用水水质检测 细菌菌落总数测定
3.3 生活饮用水细菌菌落总数的测定
冷却至50℃的 培养基
12～15ml
水样
各取1mL 水样
冷却 倒置
37℃、24h
计数
3.4 河水、池水等的菌落总数的测定
1. 水样稀释
9 ml 无菌水
1 ml
水样
9 ml 无菌水
1 ml
9 ml 无菌水
1 ml
10-1
10-2
10-3
稀释倍数视水污染程度而定，选择在平板上能长出30～300 个菌落的稀释倍数为宜。
细菌菌落总数的测定
教学目标
生活饮用水 水质检测
任务9
知识目标
（1）细菌总数、菌落；（2）细菌总 数与水质的关系；（3）水中细菌总数 的测定原理、平板菌落计数法。
能力目标 （1）水样采集；（2）培养基的配制和 灭菌技术，无菌操作，细菌的接种； （3）细菌的培养、菌落的观察、计数
素质目标 1）整洁、有序、规范；（2）多实践、 巧动手，严格执行无菌操作；（3）培 养实事求是、严谨认真的科学态度；善 于观察、分析问题
n 细菌的数量和大肠菌群数是生活饮用水监测的重要生物 指标。
1.2 菌落总数
菌落(colony)：在固体培养基上，一个母细菌不断繁殖， 形成一堆肉眼可见、有一定形态构造特征的细菌集合。
n 单个细菌难以直接计数，但细菌在固体培养基上生长，形 成具有各种颜色和不同外观的菌落，却易观察，易计数。
n 在水质卫生学检验中，细菌总数是指1mL水样在牛肉膏蛋白 胨培养基中经37℃、24h培养后，所生长出的细菌菌落总数。
教学内容
细菌及菌落总数
细菌菌落总数测定的原理 平板菌落计数法 注意事项与思考题
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
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01
03 02
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感谢您的观看
培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
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水中细菌总数的检测
一、实验的目的要求
1、学习并掌握水的细菌学检测方法
2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
二、实验原理
细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。
我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。
所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。
因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
平板菌落计数法的优点：
能测出样品中的活菌数。
此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。
缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。
生活饮用水细菌卫生标准
我国饮用水卫生标准：
≤3个大肠菌群/1L饮水，≤100个细菌总数/1ml饮水
三、实验仪器和材料
1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。
2、消毒酒精、消毒水。
3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处理好备用）
4、培养基
蛋白胨10g 牛肉膏3g 氯化钠5g 琼脂10~20g 蒸馏水1000ml 制备方法：
按照实际的需要量，按上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH 为7.4~7.6，，分装于玻璃容器中，用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min，倒制成平板后储存于冷处备用。
5、水样：自来水、中水。
四、实验内容：
（一）、培养基的制备：
实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板。
（二）、取水样：
1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，
打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三角瓶接取水样200毫升。
2、纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用
无菌空三角瓶接取水样200毫升。
3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃
塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱
中保存。
（三）、接种培养：（要求无菌操作）
用无菌吸管吸取1毫升水样，加入平板中（每个水样平行做两个平板），用无菌涂布器涂抹均匀，在培养皿侧面标注清楚后，置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后，统计细菌菌落的总数。
（四）、菌落记数：
菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。
在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，则不宜采用，而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。
然后再求该稀释度的平均菌落数。
五、实验注意事项
六、实验报告内容；
1、记录实验方法和步骤。
2、列表说明检测结果。
（1）自来水
（2）饮用水
3、思考题：
（1）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？
（2）你所测的水样污秽程度。