初始污染菌实验方法验证(文件模板)
初始污染菌检验方法验证方案
初始污染菌检验方法适用性验证方案文件编号：编制/日期：审核/日期：批准/日期：XXXX有限公司1.验证目的---------------------------------------------------------32.范围-------------------------------------------------------------33.验证小组成员及职责-----------------------------------------------34.参考资料---------------------------------------------------------35.检验仪器及器具---------------------------------------------------36.菌种信息---------------------------------------------------------47.试验环境---------------------------------------------------------48.产品选择---------------------------------------------------------49.方法适用性验证---------------------------------------------------410.修正系数（校正因子）--------------------------------------------611.测试结果--------------------------------------------------------712.再验证周期------------------------------------------------------713.结论------------------------------------------------------------714.附表------------------------------------------------------------81.验证目的证明本公司医疗器械产品初始污染菌洗脱培养计数检验方法的适宜性和准确性。
2024初始污染菌实验方法验证
2024初始污染菌实验方法验证
2024年初始污染菌实验的方法验证可以包括以下几个方面的内容：
实验目的、实验设备和材料、实验步骤、实验结果及讨论等。
实验目的：验证2024年初始污染菌实验的方法是否可靠、有效，能
够准确测定菌的数量和种类。
实验设备和材料：实验设备包括培养皿、培养基、试管，实验材料包
括空气样品、表面拭子、蘑菇、硒酸纸等。
实验步骤：以下为可能的实验步骤，但实际步骤可能因具体实验设计
而有所不同。
1.收集空气样品：在实验环境中放置一定数量的培养皿，在一定时间
内吸取一定体积的空气样品。
2.采集表面拭子：使用含有菌落细栏的纹理拭子通过轻轻刷拭的方式
采集表面的微生物。
3.采集其他样品：根据具体实验设计，采集其他可能受污染的样品，
如食品、水源等。
4.制备培养基：按照一定比例配制适当的培养基，可以包括营养琼脂、血琼脂等。
5.接种培养基：将收集到的空气、表面拭子等样品分别接种到培养基中。
6.孵育培养基：将接种好的培养基置于恰当的温度和湿度条件下，进
行孵育。
7.菌落计数：根据特定的方法和标准，对培养基上的菌落进行计数，并记录下来。
8.分离和鉴定菌株：对菌落进行分离，选取单个菌落进行进一步的培养和鉴定，可以通过形态学、生理生化等方法鉴定。
实验结果及讨论：根据实验结果，分析验证的方法在初始污染菌实验中的可靠性和准确性，讨论可能存在的问题和改进方向，提出实验方法的优化建议。
总结：通过以上实验验证方法，可以确保2024年初始污染菌实验结果的准确性和可靠性，为后续的相关研究和实验提供了基础数据和方法参考。
2020初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请：3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版5.验证计划：5.1实验操作人员确认；5.2实验室实验设备及器材的确认；5.3产品取样及方法确认。
6.验证内容：6.1菌种和菌液制备6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，加人3〜5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
初始染菌验证方案
初始染菌验证1.概述无菌试验是为测定必须经灭菌处理物品带微生物情况的一种试验。
由于多种原因及遵照概率函数，一些微生物总以有限机会得以生存，灭菌结果只能把微生物的存活概率降到最低限度(10－6)，即允许在100万个试验对象中，有1个以下的有菌生长就为无菌；另外无菌试验只能是一种抽样检验，所以其结果的可靠性是有限的，应与灭菌程序监测等结合进行才较安全。
选取样本量的大小：无菌试验抽样的数量取决于：(1)总体(被灭菌物品)的数量；(2)污染率；(3)原始微生物污染数量及要求无菌的概率；(4)不同物品种类及能接受的工作量等。
2.验证目的确定使用方法的正确性3.验证内容和方法3.1 仪器与试剂3.1.1 培养基营养琼脂培养基3.1.2 菌种金黄色葡萄球菌3.1.3 压力蒸汽灭菌器3.1.4 净化工作台3.1.5 电热鼓风干燥箱3.1.6 生化培养箱 (23～28℃)3.1.7 霉菌培养箱(35～37℃)3.2 验证方法3.2.1培养基和洗脱液制备方法：应选用卫生部认可单位生产的营养琼脂培养基和玫瑰红钠培养基等，准确称量、配制、培养基。
经115℃灭菌30分钟备用。
3.2.2对照用菌液：金黄色葡萄球菌菌液，取金黄色葡萄球菌(26003)的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种1白金耳至需营养肉汤培养基内，在30～35℃培养16～18小时后，用灭菌的生理盐水稀释成50-100cfu即得。
3.2.3 洗脱液：制备的洗脱液应该是无菌的，并且能促使细菌从被检样品上脱离下来，又不影响悬液的渗透压。
常用的洗脱液含0.1%非离子活性剂(吐温－80)、1%蛋白胨和0.85%氯化钠。
本验证采用的为0.9%无菌氯化钠缓冲液。
3.2.4产品采集与样品处理3.2.4.1 随机抽取10件样品，供试品不能采用破坏性（如管道外部、非管道类）取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积＜100cm2取全部表面，被采表面积≥100cm2取100cm2.加入到10ml灭菌生理盐水中。
初始污染菌验证方案
初始污染菌验证方案、报告文件编号：起草人：质管部：日期：审核人：质管部：日期：批准人：日期：有限公司1 验证目的：为减少初始污染菌对产品的影响，更有效的控制产品质量，对一次性使用无菌溶药器、一次性使用无菌注射器带针、一次性使用输液器带针、一次性使用静脉输液针、一次性使用延长管产品的初始污染菌进行控制。
2 验证依据GB15980—1995《一次性使用医疗用品卫生标准》3 验证小组：负责验证过程的组织指导工作。
：负责验证现场人员的安排组织工作。
：负责验证过程检测工作。
4 验证方案在有效环境监控下，任意连续三批取产品进行初始污染菌检测5 验证方法使用仪器设备：压力蒸汽灭菌器、超净工作台、天平、HH.B11.360型电热恒温培养箱，202—A0型台式干燥箱（以上设备经上海市计量测试技术研究院检定合格）以及试管、培养皿Φ9cm、刻度吸管、有盖广口瓶、玻璃注射器、营养琼脂（均经无菌处理）。
操作步骤：制备检验液，取产品剪碎后浸泡在有100ml灭菌生理盐水的有盖广口瓶中，充分震荡后制备成1：10的检验液，用灭菌吸管吸取2ml，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml，另取1ml 注入到9ml灭菌生理盐水试管中，更换1支吸管，并充分混匀，使成1：100稀释液。
吸取2ml，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml，另取1ml注入到9ml灭菌生理盐水试管中，更换1支吸管，并充分混匀，使成1：1000稀释液.将溶化并冷至45℃—50℃的营养琼脂培养基傾注于平皿内，每皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。
随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后翻转平皿，置30℃—35℃培养箱内培养48小时。
6 验证确认：通过3批对产品的初始污染菌检测，确认每批产品初始污染菌在有效的环境监控下是能达到要求的。
7 方案会签表1.验证目的：为减少初始污染菌对产品的影响，更有效的控制产品质量，对一次性使用无菌溶药器、一次性使用无菌注射器带针、一次性使用输液器带针、一次性使用静脉输液针、一次性延长管5个产品的初始污染菌进行控制。
初始污染菌检验报告模板
初始污染菌检验报告模板
检验单位信息
•检验单位名称：
•联系人：
•联系方式：
•检验日期：
化验样品信息
•样品名称：
•样品编号：
•生产日期：
•检验日期：
•样品数量：
•检验人员：
检验依据和方法
•检验依据：
•检验方法：
•检验标准：
检验结果
菌种CFU/g 结果
菌名1
菌名2
菌名3
菌名4
菌名5
结论和建议
本次检验样品存在菌落总数超标的现象，请及时采取措施解决。
建议对生产环节进行进一步检测，找出问题根源并进行解决。
备注
•检验人员需要进行个人身体健康检查。
•检验过程中需要掌握正确的检验方法和操作流程，确保检验结果真实可靠。
•所有检验结果仅适用于样品本身，不代表其他样品的检验结果。
初始污染菌方法验证
1.目的验证产品初始污染菌数的试验方法。
2.范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。
3.职责质量检验人员负责执行此规程。
4.依据标准及相关文件2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录ⅪJ微生物限度检查法GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌- 微生物学方法 - 第一部分产品中微生物数量的估计》GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》5.试验产品6.注意事项6.1本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度 100级的无菌操作台内进行。
操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。
6.215min 后方可进行实验操作。
6.3膜在过滤前后的完整性。
7.器材与试剂7.1器材35℃恒温培养箱、 23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环7.2稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。
pH 7.0无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液0.9%无菌氯化钠溶液。
7.3培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。
改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。
8.计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。
若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。
对各试验菌的回收率应逐一进行验证。
8.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为0 代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus〔 CMCC B26 003 〕大肠埃希菌 Escherichia coli〔 CMCC B 11 102 〕枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis〔CMCC B 63 501 〕白色念珠菌 Candida albicans〔 CMCC F 98 001 〕黑曲霉 Aspergillus niger〔 CMCC F98 003 〕8.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，30-35 ℃培养 18-24 小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上23-28 ℃培养 24-48小时。
初始污染菌校正因子的测定报告（模板）
初始污染菌校正因子确认报告1.概述公司制定的《初始污染菌检验规程》是用于描述产品中的活微生物群体。
但准确地确定初始污染菌是不可能的，因此，在实践中，采用校正因子将活菌计数转换成产品中初始污染菌评估，此因子用于补偿洗脱效率。
2.检验依据ISO 11737.1-2006医疗器械的灭菌微生物方法第1部分：产品上微生物总数的测定方法进行测定。
中国药典2015版第四部 1105 非无菌产品微生物限度3.实验过程3．1 洗脱液的制备：分别选取三支新制备的样品，在净化工作台上，用无菌医用钳将每支样品剪碎，称重10g，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加入约（样品重量×10）ml的pH7.0 氯化钠-蛋白胨灭菌洗脱液，加塞，充分震荡，使样品得到充分的洗脱，然后将洗脱液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。
3．2 营养琼脂培养基的制备：将营养琼脂培养基按说明书要求进行配制，在121℃高压蒸气灭菌锅内灭菌15min，放入50℃左右的水浴中备用。
3．3 接种：在净化工作台上，用移液管吸取1ml上述制备的洗脱液注入经过灭菌的平皿内，将约15-20ml已融化的45℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
同样方法每组洗脱液做10个平行试验，同时另用一个平皿只倾注1ml灭菌洗脱液于营养琼脂培养基内作为空白对照。
3．4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h。
3．5 菌落计数：记录各平皿中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积数（ml），即得到洗脱液中的全部菌落数。
重复3.1-3.5步，分别进行第二次、第三次、第四次、第五次洗脱，其中第五次洗脱为直接将四次洗脱后的产品接种于培养基内，将五次洗脱后所得的菌落数分别填入数据表1、表2。
4.校正因子的计算用第一次洗脱液得到的菌落数除以五次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，取三个样品的第一次冲洗去除率的平均值，平均值的倒数即为校正因子。
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电子天平
已校量
在有效期内
符合要求
电热恒温培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
霉菌培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
确认人/日期：
审核/日期：
3.2 使用材料及菌种：胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄 糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培对照养基、沙氏葡萄糖琼脂 对照培养基、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（菌 种购买单位均为微生物种质资源库）。
该实验使用仪器及器具主要有：灭菌移液管及移液枪吸嘴、无菌小泵管、培养皿、 小型蠕动泵、薄膜过滤器、灭菌锅、百级工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温 培养箱、霉菌培养箱。
设备名称
是否校量
是否在有效期内
结论
灭菌锅 百级工作台 生物安全柜
已校量 已校量 已校量
在有效期内 在有效期内 在有效期内
符合要求 符合要求 符合要求
表1
培养基菌落数 cfu
结论
加入菌种 铜绿假单胞菌
培养
胰酪大豆胨琼脂
条件 胰酪大豆胨琼脂培 胰酪大豆胨琼脂对照 培养基/胰酪大豆
养基
培养基
胨琼脂对照培养
基
平均值
金黄色葡萄球菌 平均值
枯草芽孢杆菌 平均值
白色念珠菌
33℃,48 小时
菌落形 态大小于对 照培养基上 的菌落一致
平均值 黑曲霉
23℃,72 小时
菌悬液若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2〜8 ℃在 24h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在 2〜8℃，在验证过的贮存期内用。
3.4 培养基适用性检查 3.4.1 需氧菌的计数 分别取 1ml 的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、 铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在 30-35℃，培养不超过 3 天；白色念珠菌、黑曲霉在 20-25℃， 培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养 基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.2 霉菌和酵母菌的计数 分别取 1ml 的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的 对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.3 结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养 基管比较，试验菌应生长良好。 3.4.4 试验结果见表 1
平均值
培养基菌落数 cfu
沙氏葡萄糖琼脂
加入菌种
培养条件
沙氏葡萄糖琼脂培 养基
沙氏葡萄糖琼脂对照 培养基
培养基/沙氏葡萄 糖琼脂对照培养 基
结论
白色念珠菌 平均值 黑曲霉 平均值
23℃,72 小时
菌落形 态大小于对 照培养基上 的菌落一致
结论：从以上检测结果可知，上述批号的培养基适用性检查符合要求，可用于日常产品检测中的计数。
般取相当于 1g、1ml 或 10cm2 的供试品, 若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌 情减量），加至适量的稀释液中,混匀,过滤。用适量的冲洗液冲洗滤膜。每株试验菌每 种培养基至少制备一张滤膜。
若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；若测定 霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。
6.3.4.4 薄膜过滤法计数方法验证实验结果见表 3
初始污染菌实验方法验证报告
报告编号： 报告时间：
目录
1、目的
初始污染菌实验方法验证报告
2、概述
3、测试方法与试验结果
4、结论 5、重新验证条件
1.目的： 参照《中国药典》2015 版，通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用 性，从而验证现在使用初始污染菌实验方法是否准确合格。 2.概述： 产品型号为 26 型：批号为：20150101 3.测试方法及检验结果： 3.1 实验设备及器材：
按下列要求进行供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的 体积应不超过供试液体积的 1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最 低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。
（1）试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每 1ml 供试液或 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于 100cfu。
原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性， 从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的： 通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请： 3.1 质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 3.2 生产技术部负责按验证方案生产相关样品
初始污染菌实验方法验证方案
产品名称：一次性包皮环切缝合器
编制： 审核： 批准：
日期： 日期： 日期：
…………医疗器械股份限有限公司
目录
初始污染菌实验方法验证方案 1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容
初始污染菌实验方法验证方案
1.概述： 初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热
（2）供试品对照组 取制备好的供试液, 以稀释液代替菌液同试验组操作。 （3）菌液对照组 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操 作加入试验菌液并进行微生物回收试验。 若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行 方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。如果供试品对微生 物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再 加入试验菌悬液进行方法适应性试验。
3.3 菌液制备： 接种金色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养 基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养 18〜24 小时；接种白色念珠菌的培养物 至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养 2-3 天，上述培 养后的新鲜培养物用 PH7.0 无菌化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌化钠溶液制成每 lml 菌 数小于 100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基
初始污染菌实验方法验证申请表
验证组
姓名
职务
单位
黄燕
组长
质量管理部经理
龙章宏 苏俊
组员 组员
化验员 化验员
………Байду номын сангаас医疗器械股份有限公司
胡梓鹏
组员
化验员
批
准
经研究：同意以上成员组成验证小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方
法进行验证。
批准人：
年月日
4.依据： 《中国药典》2015 版 5.验证计划： 5.1 实验操作人员确认； 5.2 实验室实验设备及器材的确认； 5.3 产品取样及方法确认。 6.验证内容： 6.1 菌种和菌液制备
6.1.1 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第 0 代）， 并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 6.1.2 菌液制备 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基 中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养 18〜24 小时；接种白色念珠菌的培养物至 沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养 2-3 天，上述培养 后的新鲜培养物用 PH7.0 无菌化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌化钠溶液制成每 lml 菌数 小于 100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上， 20〜25℃培养 5〜7 天，加人 3〜5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯 80 的 pH7.0 无菌化钠-蛋白 胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至 无菌试管内，用 0.05% (ml/ml)聚山梨醋 80 的 pH7.0 无菌化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无 菌氯化钠溶液制成每 lml 孢子数量小于 100cfu 的孢子悬液。 菌悬液若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2〜8 ℃在 24h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在 2〜8℃，在验证过的贮存期内用。 6.2 计数培养基适用性检查 6.2.1 需氧菌的计数 分别取 1ml 的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、 铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在 30-35℃，培养不超过 3 天；白色念珠菌、黑曲霉在 20-25℃， 培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养 基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2 霉菌和酵母菌的计数 分别取 1ml 的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的 对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2 结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养 基管比较，试验菌应生长良好。 6.2.3 试验结果见表 1 6.3 计数方法验证 6.3.1 供试液的制备： 洗脱液用 0.9%的灭菌生理盐水，检品液制备在 10000 级环境中进行。 6.3.2 接种和稀释
6.3.3 抗菌活性的去除或灭活 供试液接种后，按下列“微生物回收”规定的方法进行微生物计数。若试验组菌落 数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌数值的 50%，可采用下述方法消除供 试品的抑菌活性。 ⑴ 增加稀释液或培养基体积。 ⑵ 加入适宜的中和剂或灭活剂。 6.3.4 微生物的回收 按照 6.2 的计数培养基所用的试验菌逐一进行微生物回收试验，回收试验采用平皿 法和薄膜过滤法。 6.3.4.1 平皿法--倾注法 取 6 个直径 90mm 的无菌平皿。2 个分别注入照上述“试验组”制备的供试液 1ml； 2 个分别注入照上述“供试品对照组”制备的供试液 1ml；2 个分别注入照上述“菌 液对照组”制备的供试液 1ml。每个平皿注入 15～20ml 温度不超过 45℃熔化的胰酪大 豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。计算各试验组的平均菌落 数。 6.3.4.2 平皿法试验结果见表 2 6.3.4.3 薄膜过滤法 薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于 0.45μm,直径一般为 50mm,若采用其他直 径的滤膜,冲洗量应进行相应的调整。选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微 生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时,应保证滤膜在 过滤前后的完整性。供试液经薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗 量一般为 100ml。总冲洗量不得超过 1000ml,以避免滤膜上的微生物受损伤。 取照上述 “试验组”、“供试品对照组”和“菌液对照组”制备的供试液适量（一