2015初始污染菌实验方法验证
初始污染菌检验方法验证方案
初始污染菌检验方法适用性验证方案文件编号：编制/日期：审核/日期：批准/日期：XXXX有限公司1.验证目的---------------------------------------------------------32.范围-------------------------------------------------------------33.验证小组成员及职责-----------------------------------------------34.参考资料---------------------------------------------------------35.检验仪器及器具---------------------------------------------------36.菌种信息---------------------------------------------------------47.试验环境---------------------------------------------------------48.产品选择---------------------------------------------------------49.方法适用性验证---------------------------------------------------410.修正系数（校正因子）--------------------------------------------611.测试结果--------------------------------------------------------712.再验证周期------------------------------------------------------713.结论------------------------------------------------------------714.附表------------------------------------------------------------81.验证目的证明本公司医疗器械产品初始污染菌洗脱培养计数检验方法的适宜性和准确性。
初始污染菌实验方法验证(文件模板)
电子天平
已校量
在有效期内
符合要求
电热恒温培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
霉菌培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
确认人/日期：
审核/日期：
3.2 使用材料及菌种：胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄 糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培对照养基、沙氏葡萄糖琼脂 对照培养基、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（菌 种购买单位均为微生物种质资源库）。
该实验使用仪器及器具主要有：灭菌移液管及移液枪吸嘴、无菌小泵管、培养皿、 小型蠕动泵、薄膜过滤器、灭菌锅、百级工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温 培养箱、霉菌培养箱。
设备名称
是否校量
是否在有效期内
结论
灭菌锅 百级工作台 生物安全柜
已校量 已校量 已校量
在有效期内 在有效期内 在有效期内
符合要求 符合要求 符合要求
表1
培养基菌落数 cfu
结论
加入菌种 铜绿假单胞菌
培养
胰酪大豆胨琼脂
条件 胰酪大豆胨琼脂培 胰酪大豆胨琼脂对照 培养基/胰酪大豆
养基
培养基
胨琼脂对照培养
基
平均值
金黄色葡萄球菌 平均值
枯草芽孢杆菌 平均值
白色念珠菌
33℃,48 小时
菌落形 态大小于对 照培养基上 的菌落一致
平均值 黑曲霉
23℃,72 小时
菌悬液若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2〜8 ℃在 24h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在 2〜8℃，在验证过的贮存期内用。
3.4 培养基适用性检查 3.4.1 需氧菌的计数 分别取 1ml 的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、 铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在 30-35℃，培养不超过 3 天；白色念珠菌、黑曲霉在 20-25℃， 培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养 基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.2 霉菌和酵母菌的计数 分别取 1ml 的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的 对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.3 结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养 基管比较，试验菌应生长良好。 3.4.4 试验结果见表 1
产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案
产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案产品初始污染菌和微粒污染是产品质量管理过程中非常重要的一环。
产品初始污染菌是指产品在生产过程中受到外界环境的污染，例如空气中的细菌和真菌；微粒污染则是指产品中存在的微小颗粒物质，例如灰尘、纤维和金属碎屑。
为了确保产品质量和用户安全，对于这两种污染的控制需要进行验证。
一、初始污染菌的验证方案初始污染菌的验证是为了检验产品在生产过程中是否受到了外界环境的污染，以下是一个可能的验证方案：1.选择合适的验证样本：根据产品的特性，选择适当的验证样本。
比如，如果是食品类产品，可以选择食品样本进行验证。
2.收集样本：在生产过程中，从不同环节收集样本。
包括原材料、生产设备以及成品等。
3.分离和培养：使用适当的培养基将样本中的细菌和真菌分离出来，并培养出纯种。
4.定量检测：使用合适的方法对细菌和真菌进行定量检测，比如菌落数、菌群总数等。
5.数据分析：分析定量检测结果，并与相应的标准进行比较，以确定产品是否达到要求。
6.结果记录和分析：记录所有的验证结果，并进行数据分析。
如果产品未达到要求，需要进一步分析原因，并采取相应的措施进行改进。
7.验证报告编制：根据验证结果，编制相应的验证报告。
报告中应包括验证方法、样本信息、检测结果、分析和结论等内容。
二、微粒污染的验证方案微粒污染的验证是为了确保产品中不存在过多的微小颗粒物质，以下是一个可能的验证方案：1.选择合适的验证样本：根据产品的特性，选择适当的验证样本。
比如，如果是医疗器械，可以选择器械表面进行验证。
2.收集样本：在生产过程中，收集验证样本。
可以使用适当的方法，如粘取法、吸尘法等，将待验证的表面的微粒物质收集到相应的样品容器中。
3.预处理：对样品进行适当的预处理，如过滤、离心等，以获得适合检测的样品。
4.检测方法选择：选择合适的检测方法对样品中的微粒进行分析。
常用的方法有显微镜分析、粒径分析法等。
5.定量检测：使用选择的方法对样品中的微粒进行定量检测，并得到相应的数据。
初始污染菌检测
初始污染菌检测样品编号：检验开始时间：年月日样品名称：检验完成时间：年月日检测项目：初始污染菌检测依据：l.采样方法：1.1 对可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液(血)器、注射器、透析器及各类导管等，按中华人民共和国药典(2015年版)规定执行。
1.2对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品可用浸有无菌生理盐水的棉式子涂抹采样，被采表面<100 cm2取全部表面；被采表面≥lOOcm2取lOOcm2。
1.3 敷料类可用无菌手续取lOg放入100mL无菌生理盐水中，充分振荡后取样。
2.检验方法及结果计算：每样取5份平行样，检验方法参照GB7918.2规定执行。
无菌操作吸取1∶10稀释的检液1ml加入到9ml的无菌生理盐水中，混匀，做成1∶100的稀释液。
以上法制备10-3、10-4……稀释液。
选择合适的稀释度，吸取1ml加入到无菌平皿中，每一稀释度做2个平皿同时，分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
加入冷至46±1∶的无菌卵磷脂吐温-80营养琼脂约15ml，混匀，凝固后，翻转平板，于日时分，置36 ∶±1∶开始培养，日时分，取出平板，共培养小时分钟。
计数平板上菌落数（CFU）。
菌落数／每件次(或g)=平均菌数×稀释倍数/件次或重量3.结果：电子天平编号：使用状况试验前：试验后：培养箱编号：使用状况试验前：试验后：检测人：校核人：审核人：无菌检验样品编号：检验开始时间：年月日样品名称：检验完成时间：年月日检测项目：无菌检验检测依据：l.采样方法：□ 外科敷料、手术衣等，取2个小包装与不同部位剪取lcm×3cm的2l片样品，每3片分别接种需氧-厌氧菌培养基管7支(阳性及阴性对照各1支)与真菌培养基管4支(阳性及阴性对照各1支)。
□ 针头、棉签等小件物品，取样品支直接分别接种需氧-厌氧菌培养基管7支(阳性及阴性对照各1支)与真菌培养基管4支(阳性及阴性对照各1支)。
初始染菌验证方案
初始染菌验证1.概述无菌试验是为测定必须经灭菌处理物品带微生物情况的一种试验。
由于多种原因及遵照概率函数，一些微生物总以有限机会得以生存，灭菌结果只能把微生物的存活概率降到最低限度(10－6)，即允许在100万个试验对象中，有1个以下的有菌生长就为无菌；另外无菌试验只能是一种抽样检验，所以其结果的可靠性是有限的，应与灭菌程序监测等结合进行才较安全。
选取样本量的大小：无菌试验抽样的数量取决于：(1)总体(被灭菌物品)的数量；(2)污染率；(3)原始微生物污染数量及要求无菌的概率；(4)不同物品种类及能接受的工作量等。
2.验证目的确定使用方法的正确性3.验证内容和方法3.1 仪器与试剂3.1.1 培养基营养琼脂培养基3.1.2 菌种金黄色葡萄球菌3.1.3 压力蒸汽灭菌器3.1.4 净化工作台3.1.5 电热鼓风干燥箱3.1.6 生化培养箱 (23～28℃)3.1.7 霉菌培养箱(35～37℃)3.2 验证方法3.2.1培养基和洗脱液制备方法：应选用卫生部认可单位生产的营养琼脂培养基和玫瑰红钠培养基等，准确称量、配制、培养基。
经115℃灭菌30分钟备用。
3.2.2对照用菌液：金黄色葡萄球菌菌液，取金黄色葡萄球菌(26003)的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种1白金耳至需营养肉汤培养基内，在30～35℃培养16～18小时后，用灭菌的生理盐水稀释成50-100cfu即得。
3.2.3 洗脱液：制备的洗脱液应该是无菌的，并且能促使细菌从被检样品上脱离下来，又不影响悬液的渗透压。
常用的洗脱液含0.1%非离子活性剂(吐温－80)、1%蛋白胨和0.85%氯化钠。
本验证采用的为0.9%无菌氯化钠缓冲液。
3.2.4产品采集与样品处理3.2.4.1 随机抽取10件样品，供试品不能采用破坏性（如管道外部、非管道类）取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积＜100cm2取全部表面，被采表面积≥100cm2取100cm2.加入到10ml灭菌生理盐水中。
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程1.?目的?检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。
?2.?适用范围?适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。
?3.职责?由质检部负责执行实施。
4.技术要求产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g5.引用标准GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典（2015版）GB/T 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法6.试剂和培养基洗脱液 %Nacl称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。
胰蛋白胨大豆琼脂培养基取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为±，灭菌分装。
玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为±，灭菌分装。
7.仪器设备锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球8.操作方法样品处理无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。
?对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。
保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。
接种需厌氧菌取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。
取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。
霉菌取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。
取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。
培养需厌氧培养基置于37℃培养3d ，霉菌培养置于28℃培养5d9.观察计数达到培养时间后，观察阴性对照，若阴性对照有菌，则实验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数，记录每个平皿菌落数10.结果计算与报告公式污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数/克重菌落计数基本规则?选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案
初始污染菌和微粒污染控制验证方案1.目的通过设计试验确认XX半成品的储存环境和存放有效期。
其可能存在的环节如下：（1）在内包装封口前初始污染菌是否满足控制要求（定期监控）；（2）等待灭菌的产品，密封严实存放在外包间，其初始污染菌随储存时间变化。
2.适用范围本验证方案适用于本产品，通过试验研究，以确定在各种情况下的储存有效期。
3.发放范围管理者代表、生产部和质量部等有关部门及人员。
4.规范性引用文件《中华人民共和国药典》2015版附录微生物限度检查法5.组织和职责根据验证工作量的大小，本公司成立验证组，由公司管理者代表任组长，生产部、质量部、有关部门及人员任组员。
验证小组职责：负责验证方案的起草、批准；负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施；负责验证数据结果的审核；负责验证报告的审批；负责发放验证证书；负责确定该项验证的再验证周期。
5.1主责部门本方案的主责部门为公司管理者代表，其职责为:负责审批验证方案和验证报告，颁发验证证书。
5.2相关部门本方案的相关部门为质量部，其职责为：按标准操作规程及验证方案进行各项确认，及时报告确认结果，形成验证报告；负责操作培训和现场监督。
6.步骤和方法6.1计划及进度本验证由质量部提出完整的验证计划，经验证小组批准后实施，由质量部完成，整个验证活动分为两个阶段完成：运行确认(OQ)从年月日到年月日性能确认(PQ)从年月日到年月日6.2初始污染菌和微粒检测方法及可接受标准6.2.1抽样方法和抽样规律以每一个生产批为产品抽样批，随机抽取样品1片（长宽约5cm×2cm）记为1单位，在洁净条件下精确称重，并标记。
需要临时或长期存放时间预计不超过30天（1个月），综合细菌的生长规律及可能存在的存放天数，其抽样检测的时间设计为存入后：第1天、第2天、第3天、第5天、第7天、第15天、第30天。
6.2.2供试液制备1)取0.9%的生理盐水溶液10ml，盛于已灭菌的试管内；2)将取样依次投入试管，充分摇匀。
3 产品初包装初始污染菌的验证报告
产品初包装初始污染菌的验证报告编号：YFB100301编制：评审：评审组成员批准：日期：有限公司一、验证目的确定公司产品初包装高密度聚乙烯袋在贮存过程中不破损、无污染，具有防护能力,并确定高密度聚乙烯袋的贮存期限。
二、验证范围适用于本公司产品（XXXXXX）的初包装-xxxxx的贮存时限的验证。
三、验证依据GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准聚乙烯袋四、验证小组成员五、验证项目产品初包装高密度聚乙烯袋初始污染菌在产品初包装贮存过程中的变化情况,并确定高密度聚乙烯袋的贮存期限。
六、验证过程及结果1.对采购进厂的初包装在进厂时和贮存3个月、6个月、9个月及12个月后的初始污染菌分别进行检测。
2.检测结果：1.运输包装医用XXXXX 的应该以 个为单元装入双层聚乙烯塑料袋内，再装入纸箱。
纸箱应能充分保护小包装在运输贮存过程不受损坏、污染。
2.小包装的贮存时间储存3个月、6个月、9个月的的初始污染菌符合要求。
储存12个月的高密度聚乙烯袋的初始污染菌虽然合格，但已接近不合格范围了，所以小包装自进厂之日起最长贮存时间不得超过9个月。
八. 验证的周期产品初包装高密度聚乙烯袋初始污染菌的验证周期为2年贮存期 细菌数(cfu/ 100cm 2)真菌数(cfu/ 100cm 2)大肠埃希菌(cfu/ 100cm 2)进厂时 3个月 6个月 9个月 12个月九．附表：产品初包装高密度聚乙烯袋初始污染菌微生物检查记录内包装袋微生物限度检查记录检验人：日期：年月日复核人：日期：年月日内包装材料初始污染菌微生物检查记录检验人：日期：年月日复核人：日期：年月日。
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初始污染菌实验方法验证方案产品名称:一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核: 日期：批准: 日期：江西狼与医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1。
概述2。
验证目得３.职责与验证申请4.验证依据5．验证计划6。
验证内容初始污染菌实验方法验证方案1、概述：初始污染菌得数量可以反映出车间环境卫生得清洁度,与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系,故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性,从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品得安全性.2、目得:ﻫ通过实验验证检测方法得适用性及计数用培养基得适用性。
3、职责与验证申请:３、1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
３、2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表４、依据:《中国药典》2０15版5、验证计划：5、１实验操作人员确认；5、2实验室实验设备及器材得确认;５、３产品取样及方法确认。
6、验证内容:6、1菌种与菌液制备6、1、1 菌种试验用菌株得传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0 代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性.6、１、２菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌得培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上,３0〜35℃培养18〜２4小时;接种白色念珠菌得培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20〜25℃培养2—３天，上述培养后得新鲜培养物用PH7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或０、9％无菌化钠溶液制成每ｌｍl菌数小于１0０cfu（菌落形成)得菌悬液.接种黑曲霉得培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上,20〜2５℃培养5〜7天,加人３〜５ml 0、05%（ml/ml) 聚山梨酯80得pH7、０无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后,采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用0、0５％（ml／mｌ)聚山梨醋80得pＨ7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成每lｍl孢子数量小于1０0cfｕ得孢子悬液.菌悬液若在室温下放置,应在2小时内使用；若保存在2〜8 ℃在２4h 内使用。
黑曲霉孢子悬液存在2〜８℃,在验证过得贮存期内用.６、2计数培养基适用性检查6、2、１需氧菌得计数分别取1ｍl得金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。
金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30—35℃,培养不超过３天；白色念珠菌、黑曲霉在２0－25℃,培养不超过5天.每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。
同时，用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
6、2、2霉菌与酵母菌得计数分别取1ml得白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液,接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。
在20—25℃，培养不超过5天。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿.同时，用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
6、2、２结果判定被检固体培养基上得菌落平均数与对照培养基上得菌落平均数得比值应在0、5-2 范围内,且菌落形态大小应与对照培养基上得菌落一致;被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
6、２、3试验结果见表16、3计数方法验证6、３、１供试液得制备：洗脱液用０、９%得灭菌生理盐水,检品液制备在１０000级环境中进行。
6、3、２接种与稀释按下列要求进行供试液得接种与稀释,制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液得体积应不超过供试液体积得1%。
为确认供试品中得微生物能被充分检出,首先应选择最低稀释级得供试液进行计数方法适用性试验．（1）试验组取上述制备好得供试液,加入试验菌液,混匀,使每1mｌ供试液或每张滤膜所滤过得供试液中含菌量不大于1０0cfu.（2）供试品对照组取制备好得供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
(３)菌液对照组取不含中与剂及灭活剂得相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验.若因供试品抗菌活性或溶解性较差得原因导致无法选择最低稀释级得供试液进行方法适用性试验时,应采用适宜得方法对供试液进行进一步得处理。
如果供试品对微生物生长得抑制作用无法以其她方法消除,供试液可经过中与、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适应性试验。
6、3、3 抗菌活性得去除或灭活供试液接种后,按下列“微生物回收"规定得方法进行微生物计数。
若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数得值小于菌液对照组菌数值得50%,可采用下述方法消除供试品得抑菌活性．⑴增加稀释液或培养基体积。
⑵加入适宜得中与剂或灭活剂。
6、３、4 微生物得回收按照6、2得计数培养基所用得试验菌逐一进行微生物回收试验,回收试验采用平皿法与薄膜过滤法。
６、3、４、1 平皿法－—倾注法取6个直径9０mｍ得无菌平皿．２个分别注入照上述“试验组”制备得供试液１ml;2个分别注入照上述“供试品对照组”制备得供试液1ml；２个分别注入照上述“菌液对照组”制备得供试液1ml。
每个平皿注入１5～20ml 温度不超过4５℃熔化得胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,倒置培养。
计算各试验组得平均菌落数。
６、3、４、２平皿法试验结果见表26、3、４、3 薄膜过滤法薄膜过滤法所采用得滤膜孔径应不大于 0、45μm，直径一般为5０mm,若采用其她直径得滤膜,冲洗量应进行相应得调整．选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物得充分被截留。
滤器及滤膜使用前应采用适宜得方法灭菌。
使用时，应保证滤膜在过滤前后得完整性.供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ｍｌ。
总冲洗量不得超过1000ｍl,以避免滤膜上得微生物受损伤。
取照上述“试验组”、“供试品对照组”与“菌液对照组”制备得供试液适量（一般取相当于１ｇ、１ml 或1０cｍ２得供试品，若供试品中所含得菌数较多时,供试液可酌情减量)，加至适量得稀释液中，混匀，过滤．用适量得冲洗液冲洗滤膜。
每株试验菌每种培养基至少制备一张滤膜。
若测定需氧菌总数,转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上;若测定霉菌与酵母总数,转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。
6、３、4、4薄膜过滤法计数方法验证实验结果见表3初始污染菌实验方法验证报告报告编号:报告时间:目录初始污染菌实验方法验证报告１、目得2、概述３、测试方法与试验结果4、结论5、重新验证条件1、目得:参照《中国药典》201５版，通过实验验证检测方法得适用性及计数用培养基得适用性,从而验证现在使用初始污染菌实验方法就是否准确合格。
2、概述:产品型号为26型：批号为:3、测试方法及检验结果：3、1实验设备及器材：该实验使用仪器及器具主要有:灭菌移液管及移液枪吸嘴、无菌小泵管、培养皿、小型蠕动泵、薄膜过滤器、灭菌锅、百级工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温培养箱、霉菌培养箱。
3、2使用材料及菌种:胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培对照养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（菌种购买单位均为微生物种质资源库)。
３、３菌液制备：接种金色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌得培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时;接种白色念珠菌得培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2０〜25℃培养2－3天,上述培养后得新鲜培养物用PH7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌化钠溶液制成每ｌml菌数小于１００cfｕ(菌落形成)得菌悬液。
接种黑曲霉得培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，2０〜25℃培养5〜７天,加人３〜5ｍl ０、05％(ｍl/ｍl) 聚山梨酯８０得pH7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、９％无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。
然后,采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0、05％ (ml/ml）聚山梨醋80得pH７、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或０、9%无菌氯化钠溶液制成每lｍl孢子数量小于１0０cfu 得孢子悬液。
菌悬液若在室温下放置,应在２小时内使用;若保存在２〜8 ℃在24h 内使用。
黑曲霉孢子悬液存在2〜8℃,在验证过得贮存期内用。
３、４培养基适用性检查3、4、1需氧菌得计数分别取1mｌ得金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板.金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在３0－３5℃,培养不超过３天;白色念珠菌、黑曲霉在20－25℃,培养不超过5天.每一试验菌株平行制备2 管或２个平皿。
同时,用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
3、4、2霉菌与酵母菌得计数分别取1ml得白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。
在２0-25℃，培养不超过5天。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。
同时,用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
3、4、3结果判定被检固体培养基上得菌落平均数与对照培养基上得菌落平均数得比值应在0、5—2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上得菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
3、4、4试验结果见表1表13、5计数方法验证３、５、1供试液得制备:洗脱液用0、9%得灭菌生理盐水，检品液制备在1０0０0级环境中进行。
3、５、2 接种与稀释按下列要求进行供试液得接种与稀释,制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液得体积应不超过供试液体积得1%。
为确认供试品中得微生物能被充分检出,首先应选择最低稀释级得供试液进行计数方法适用性试验.(1）试验组取上述制备好得供试液,加入试验菌液,混匀,使每1ｍl供试液或每张滤膜所滤过得供试液中含菌量不大于１00ｃfu.（2)供试品对照组取制备好得供试液, 以稀释液代替菌液同试验组操作。
(３）菌液对照组取不含中与剂及灭活剂得相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
若因供试品抗菌活性或溶解性较差得原因导致无法选择最低稀释级得供试液进行方法适用性试验时,应采用适宜得方法对供试液进行进一步得处理。
如果供试品对微生物生长得抑制作用无法以其她方法消除,供试液可经过中与、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适应性试验。
3、5、３抗菌活性得去除或灭活供试液接种后,按下列“微生物回收”规定得方法进行微生物计数。
若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数得值小于菌液对照组菌数值得50%,可采用下述方法消除供试品得抑菌活性。