微生物生理生化实验培养基配方
常用培养基的配方
伊红美蓝培养基原理一般用来鉴定大肠杆菌。
伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。
当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。
在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。
金葡菌在此培养基上不生长。
常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。
如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。
用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌步骤如下：①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。
③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。
用平板划线分离法进行分离。
④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。
培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。
⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。
配置方法蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 20~30g蒸馏水 1000ml2%伊红水溶液 20ml0.5 %美蓝水溶液 13ml储备培养基的制备先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。
临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
麦康凯培养基原理1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基2.一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。
配置方法蛋白胨 17g脙胨3g猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g氯化钠 5g琼脂 17g蒸馏水1000mL乳糖10g0.01%结晶紫水溶液 10mL0.5%中性红水溶液 5mL麦康凯-制法1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。
微生物工程实验报告
实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。
4.每2人一组，每人一份实验报告。
二、实验材料1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。
3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。
三、实验内容(一) 培养基的配制1．培养基的配制方法和步骤1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。
2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。
4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。
5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。
6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。
7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。
2．培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E 液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0，酵母粉1.0，海水1L，pH 8.0。
取50mL 分装250mL 三角瓶后，8 层纱布封口，外包1层牛皮纸，121℃，高温灭菌20min。
B. 2216E 斜面（固体）：海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内。
加入3mL，121℃高温灭菌20min，灭菌后摆斜面。
C. 无菌生理盐水和保种液：生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。
每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。
保种液：生理盐水，加25%甘油D. 碳源优化培养基：以海水2216E 液体培养基（蛋白胨0.5%，酵母粉0.1%，磷酸铁0.01%，人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。
微生物生理生化实验
【实验题目】微生物生理生化实验【实验目的】1.了解生理生化的意义。
2.掌握几种常用生理生化的实验方法。
【实验器材】1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌2、试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等3、仪器和用具：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等4、培养基淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验）蛋白胨水培养基（吲哚实验）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红培养基）【实验原理】在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。
许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。
各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。
具体实验原理如下：一、大分子物质的水解实验原理1、淀粉水解由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。
已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。
2、油脂水解脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。
二、糖发酵实验原理糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。
微生物培养基及其成分介绍
微生物培养基及其成分介绍培养基通常指人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质。
广义上说，凡是支持微生物生长和繁殖的介质或材料均可以作为微生物的培养基。
培养基的种类繁多，因考虑的角度不同，可将培养基分成以下一些类型：天然培养基：利用生物组织、器官及其抽取物或制品配成；根据对培养基成分了解的程度合成培养基：使用成分完全了解的化学药品配制而成；半合成培养基：由部分天然材料和部分已知的纯化学药品组成液体培养基：各营养成分按一定比例配制而成的水溶液或液体状态的培养基；根据培养基物理状态固体培养基：液体培养基中加入一定量的凝固剂配制而成的固体状态的培养基；半固体培养基：琼脂加入量为0.2%-0.5%而配制的固体状态的培养基；种子培养基：适合微生物菌体生长的培养基；培养基根据培养的目的发酵培养基：用于生产预定发酵产物的培养基；繁殖培养基：主要用于菌种保藏，大部分情况下就是斜面培养基；保藏培养基：主要用于菌种保藏，大部分情况下就是斜面培养基；基本培养基：能满足某菌种的野生型菌株最低营养要求的合成培养基；加富培养基：在普通培养基中加入血、血清、动（植）物组织液或其他营养物质（或生长因子）；选择培养基：根据某种或某类微生物的特殊营养要求，或对某些物理、化学条件的抗性而设计的培养基；根据培养基的特殊用途鉴别培养基：在培养基中添加某种或某些化学试剂后，某种微生物生长过程中产生的特殊代谢产物会与加入的这些化学物反应，并出现明显的特征性变化，从而使其与其他微生物区别开来；测定生理生化特性的培养基：鉴定微生物时，为了观察微生物的培养特征或测定生理生化反应而采用的培养基；税则品目3821项下制成的微生物培养基包括能为细菌、真菌、病原菌、病毒及其他微生物提供营养及繁殖条件的各类制剂，通常是用肉汁、鲜血或血清、蛋、土豆、藻酸盐、琼脂、胨、明胶等配制而得的，但不包括未制成培养基的产品。
现介绍几种常见的配制培养基用的物质及其归类。
几种培养基的配方
几种培养基的配方培养基是用于培养和繁殖微生物的营养物质的混合物。
根据微生物的特性和应用需求，可以设计出不同成分和配方的培养基。
以下是几种常见的培养基配方：1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）的配方：-牛肉膏：5g-蛋白胨：5g-水解酵母膏：1.5g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将牛肉膏、蛋白胨和水解酵母膏溶解在蒸馏水中，添加纯化琼脂，混合并加热直至溶解，然后倒入培养皿中。
2. EMB（Eosin Methylene Blue）培养基的配方：-蛋白胨：17g-明胶胨：3g-乳糖：10g-酵母提取物：3g-果糖：1g- Eosin Y：0.4g-亚甲蓝：0.065g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将蛋白胨、明胶胨、乳糖、酵母提取物和果糖溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加Eosin Y和亚甲蓝，最后加入纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
3. 铡锰培养基（Sabouraud Agar）的配方：-葡萄糖：40g-酵母膏粉：5g-水解麦粉：15g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将葡萄糖、酵母膏粉和水解麦粉溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
4.胰蛋白酶-大豆酪蛋白肉汤培养基（TRYPTICASE™SOYBROTH）的配方：-胰蛋白酶胨：15g-大豆酪蛋白胨：5g-食盐：5g-葡萄糖：20g-蒸馏水：1000mL将胰蛋白酶胨、大豆酪蛋白胨、食盐和葡萄糖溶解在蒸馏水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温。
5. M9盐碱培养基（M9 minimal medium）的配方：-磷酸一氢二钾：3g-硫酸镁：0.5g-氯化钠：0.5g- 氨氯化铁：7.5mg-葡萄糖：4g-去离子水：1000mL将磷酸一氢二钾、硫酸镁、氯化钠和氨氯化铁溶解在去离子水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温后添加葡萄糖。
这只是几种常见的培养基配方，实际上还有很多不同成分和配方的培养基。
微生物培养基的配制
其他物质
总结词
提供特殊营养或生理功能的物质。
详细描述
除了上述基本成分外，根据不同种类的微生物和实验需求，培养基中可能还需要添加其他物质，如维生素、氨基 酸、碱或酸等。这些物质可以提供特殊营养或调节培养环境的酸碱度，以满足某些特殊微生物的生长需求。
03
微生物培养基的配制步骤
确定培养目的
01
02
03
分离培养
为了分离出特定的微生物， 选择适合该微生物生长的 培养基。
鉴别培养
通过培养基上的微生物生 长表现，鉴别微生物的种 类或菌株。
生理生化研究
为了研究微生物的生理生 化特性，选择适合该特性 的培养基。
选择合适的培养基类型和材料
固体培养基
选择适宜的营养成分
用于微生物的分离、纯化和鉴别，常 加入琼脂作为凝固剂。
根据需要调整培养基的pH值，保证微生物的正常 生长。
灭菌处理
将配置好的培养基进行高温高压灭菌，以消除杂菌污染。 灭菌后，待培养基冷却至适宜温度后，进行分装、保存或使用。
04
微生物培养基的优化方法
通过实验确定最佳配方
实验设计
通过单因素实验、正交实验等方 法，系统地改变培养基中各成分
的浓度，以确定最佳配方。
溶氧量
对于好氧微生物，通过控制通气速率和搅拌 速度，探究溶氧量对微生物生长和产物生成 的影响，找到最适溶氧量。
选择合适的菌种或菌株
根据生产需求选择合适的菌种或菌株， 了解其生理生化特性，以便为其提供 适宜的培养条件。
对于具有相同功能的菌种或菌株，可 通过比较实验，选择生长快、产物产 量高、耐受性强的菌种或菌株。
实验指标
选择适宜的指标（如菌体生长速率、 产物产量等）来评估培养基的效果， 并确定最佳配方。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质，能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件，因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方：-蛋白胨或复合氮源：10g-酵母浸出物：5g-葡萄糖：1g-NaCl：5g-K2HPO4：2g-MgSO4：0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方：-牛心提取物：3g-高级琼脂糖：15g-葡萄糖：10g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方：-玉米浸出物：4g-高级琼脂糖：15g-酵母浸出物：1g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方：-液体LB培养基：10mL-高级琼脂糖：15g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方：-羊血：50mL-肉浸出物：3g-酵母浸出物：3g-肉汤培养基：1L-红细胞素：5g-高级琼脂糖：3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方：-肉浸出物：5g-酵母浸出物：5g-NaCl：5g-蒸馏水：900mL- 加入0.1%的L-cysteine：10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项：-培养基中的成分应严格按照配方比例加入，并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感，需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整，一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中，避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方，不同的微生物有不同的需求，可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中，还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
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配方1（用于细菌葡萄糖发酵---半固体穿刺培养）：
蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，1%溴酚蓝3ml，葡萄糖10g，琼脂8g，水1000ml。
115度灭菌20分钟。
小提示：先将蛋白胨和NaCl溶于热水，调pH至7.4（这时总体积接近1000ml），再加入1%溴酚蓝3ml，再加入糖，溶解均匀后分装。
配方2（用于细菌乳糖发酵---半固体穿刺培养）：
蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，1%溴酚蓝3ml，乳糖10g，琼脂8g，水1000ml。
115度灭菌20分钟。
小提示：先将蛋白胨和NaCl溶于热水，调pH至7.4（这时总体积接近1000ml），再加入1%溴酚蓝3ml，再加入乳糖，溶解均匀后分装。
配方3:MR与VP试验-------请实验员准备
蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl5g，水1000ml，调pH至7.2-7.4左右，115度灭菌20分钟。
甲基红试剂（需新配）
40%KOH，-萘酚（需新配）
配方4:柠檬酸盐利用试验步骤（液体-直接观察现象）-------请实验员准备
NaCl5g，MgSO4.7H2O0.2g，磷酸氢二铵1g，K2HPO41g，柠檬酸钠2g，水1000ml，调pH至6.8-7.0左右后加入1%溴酚蓝10ml。
1%溴酚蓝：称取0.08g溴酚蓝溶于0.5ml95%乙醇中，再加水至总体积到10ml。
以上成分加热溶解后，调pH至6.8，然后加入指示剂，摇匀。
制成后为黄绿色，分装试管，121度灭菌20分钟。
配方5:淀粉酶实验
0.2%淀粉2g，蛋白胨1g，1.5%琼脂20g，调pH7.0至7.2，水1000ml。
小提示：可先将琼脂放入水中加热，待完全溶解后，加淀粉。
混匀后高压灭菌。
检测用卢戈氏碘液
过氧化氢酶试验
过氧化氢溶液
配方6:吲哚试验-------
胰蛋白胨10g，NaCl5g，水1000ml，调pH至7.2-7.4左右，121度灭菌20分钟。
检测用乙醚及吲哚试剂
配方7:H2S试验：柠檬酸铁铵半固体培养基
1000ml蛋白胨10g，氯化钠5g，Na2S2O3.5H2O0.5g，柠檬酸铁铵0.5g，琼脂8g，pH7.2，121度灭菌20分钟。
配方8:明胶液化实验（穿刺培养）-----不做
明胶15g，牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，水100mL,将明胶加入肉汤中，水浴加热溶解，调pH7.2-7.4，分装试管，115度高压灭菌20min，取出迅速冷却，使其凝固。
配方9:尿素酶试验（液体）：-------
氯化钠5g，KH2PO42g，蛋白胨1g，酚红0.012g(溶于500mL水中，取60mL加入即可)，水1000mL，pH6.8。
尿素20g（将上述溶液灭菌后冷却至60度加入混匀即可分装）
配方10:苯丙氨酸脱氨酶试验（固体斜面）：
DL-苯丙氨酸2g，氯化钠5g，酵母浸膏3g，磷酸氢二钠1g，琼脂20g，水1000mL，pH7.0，115度灭菌20分钟。
检测用10%FeCl3
配方11:硝酸盐还原试验（液体）：----
蛋白胨5g，硝酸钾2g（分析纯），水1000mL，pH7.4，121度灭菌20分钟。
要求容器非常洁净。
甲液：甲基-萘胺0.6g，5M冰醋酸100mL，稍加热溶解，用脱脂棉过滤，放棕色瓶中，4-10
度保存。
乙液：对氨基苯磺酸0.8g，5M冰醋酸100mL，先用30mL冰醋酸溶解对氨基苯磺酸，再加冰醋酸至100mL。
放入带塞的玻璃瓶中，4-10度保存。