流式及分子诊断进展(崔巍)
临床血液学基础检验常见问题的应对
镜检阳性判断标准
n 白细胞计数异常 n Dohle小体粒细胞显见 n 中毒颗粒粒细胞显见 n 空泡变性粒细胞显见 n 原始和幼稚细胞≥ 1% n 早、中幼粒细胞≥ 1% n 晚幼粒细胞>2% n 异型淋巴细胞>5%
n 存在异常红细胞 n 可见NRBC
n 存在巨大血小板 n 存在血小板聚集
统计分析
– 应使用枸橼酸钠抗凝剂 – 血液与抗凝剂的体积比一般为9:1 – 当标本HCT>0.55时，应对血液与抗凝剂的体积比
调整
红细胞比容（HCT）增高的处理
• HCT>55% 时，血浆相对减少
– 调整抗凝剂
• 采血量不变，Hct增大，所需抗ห้องสมุดไป่ตู้剂减少，总量减少
所需抗凝剂(ml)=(100% - Hct)×血液(ml)×0.00185 – 针对3ml血量1:9抗凝的采血管，取出多余抗凝剂
XS-800i
WBC (x10^9/L) < 3或 > 30
PLT (x10^9/L) < 80或 >1000
不成熟粒细胞 有核红细胞 异常红细胞 血小板聚集
不成熟粒细胞 血液科全推
血常规复检规则的统计分析
复检规则设置流程
确定方案及目标
确定镜检阳性标准 仪器校准/比对 双盲法 仪器检测和镜检
多余抗凝剂(ml)=0.3 ml -所需抗凝剂(ml) – 用注射器取2.7ml静脉血，因取出抗凝剂过程破坏
采血管负压，需告知临床用注射器采血后，取下
5.4 检验前程序
5.4.8 • 应根据检验项目明确列出不合格标本的类
型（如有凝块、采集量不足、肉眼观察有 溶血的标本等）和处理措施
不合格标本处理
红细胞碎片
基于结构的药物设计
• 计算策略 格点对接：在空间节点上计算相互作用能 碎片生长：以锚定碎片为中心，生长分子 结构
DOCK
• 以球体探针扫描大分子表面，并形成负模 丛集
• 确定对接位点的负模丛集，围绕其形成格 点盒子，计算能量
• 将配体分子拆分为刚性碎片 • 配体分子在负模丛集内重新生长为完整分
子，依靠格点盒子提供的信息计算能量
分子动力学
ai (t )
Fi (t ) mi
Fi
U q (t ) qi
dqi H dt pi dpi H dt qi
速度方程 力方程
分子动力学
所有原子 的位置
体系总势能
所有原子 的位置
体系总势能
所有原子 的位置
体系总势能
势能梯度 （力）
势能梯度 （力）
化学键的振动
α-螺旋 β-折叠 蛋白质折叠
10-15
10-12
10-9
10-6
10-3
100
(fs)
(ps)
(ns)
(μs)
(ms)
(s)
Time
分子动力学
分子动力学轨迹的分析
• 温度
• 温度的变化
• 能量很重要 • 绿色：动能 • 红色：势能 • 黑色：总能
• 有时候我们 更关心势能
• 能量最低构象
SurFlex
• 确定对接区域 • 以碎片探针在对接区域进行扫描，保留能
量值合理的位置，形成丛集 • 根据可旋转键拆分配体分子成基本碎片 • 在由探针构成的丛集中重新组合配体分子
碎片，并调用探针计算出的能量值 • 重复组合配体分子
AutoDock
• 空间匹配 以探针测定格点
微流控技术在临床检测中的应用
微流控技术在临床检测中的应用
沈韧;万谅;贾艳伟
【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》
【年(卷),期】2018(010)005
【摘要】微流控技术是近二三十年来飞速发展的一种对微小量级的液体进行操控的技术.通过压力装置、机械装置、电路控制系统、甚至是光波、声波等多种装置可以驱动微升到皮升量级的连续液体或者离散液滴进行移动、融合、分裂等动作.应用于生物医学领域,微流控技术可以节省样本和试剂用量,减少反应时间,缩小仪器体积,并提高实验的自动化程度,具有将一系列生化反应集成到一张微小的"芯片实验室"上的潜力.本文概述了微流控技术的基本原理以及微流控芯片在核酸检测、免疫分析、细胞分析等领域的应用,以展示该技术在临床检测领域的应用前景及挑战.【总页数】6页(P289-294)
【作者】沈韧;万谅;贾艳伟
【作者单位】澳门大学模拟与混合信号超大规模集成电路国家重点实验室,澳门999078;澳门大学模拟与混合信号超大规模集成电路国家重点实验室,澳门999078;澳门大学模拟与混合信号超大规模集成电路国家重点实验室,澳门999078
【正文语种】中文
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流式细胞术的临床应用
一、诊断性指标如图1所示，图（左）白血病细胞成为一个单一的群体，很难区分原始或病态的白血病细胞和成熟的细胞。
但是通过CD45和（SSC）设门法之后（图右），看到图（左）无法区分细胞被分成了五群。
在这五群中，成熟细胞CD45表达的荧光比较强。
A门里是淋巴细胞，B门里是单核细胞，C门里就是粒细胞群，D门里是原始细胞，一般CD45表达较弱。
一些细胞碎片、红细胞和转移来的瘤细胞，由于不表达CD45，可能位于D门、D门偏下或者E门的位置。
CD45结合侧向散射光之后能把白血病细胞找出来，减少了其它细胞的干扰。
对D门里的白血病细胞做进一步的分型，就能准确看到白血病细胞群免疫分型的表达情况。
图13.白血病的特异性标志免疫表型分析主要是根据细胞的特异表面标志，把白细胞分成T细胞、B细胞和原始细胞。
T淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD3、抗TCRαβ、抗TCRγδ、CD2、CD5、CD8、CD10和CD7；B淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD79a、CD22、CD19 、CD10和CD20；髓系白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cMPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15和CD64；NK淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有CD16、CD56和CD57；红白血病一般表达的分化抗原有GlyA和CD36；巨核细胞白血病一般表达的分化抗原有CD41、CD42和CD61；一系列非特异标志在不同的白血病中可能都有表达，尤其是表达在早期的造血干组细胞上，一般表达的分化抗原有CD34和HLA-DR。
其中，对T淋巴细胞白血病来讲比较特异的是胞浆内的CD3，当胞浆内CD3出现阳性的时候，高度怀疑是T淋巴细胞白血病。
对于B淋巴细胞白血病来讲，胞浆内的CD79a和CD19是比较特异的，cCD79a最具特异性。
cCD3和cCD79a分别表达于早期T细胞和B细胞。
cMPO是髓系特异标志。
如图2所示为B-ALL的表达图。
2014 年中华医学科技奖获奖项目
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新疆哈萨克族高血压遗传资源的收集、保存和候选基因的关联研究新疆维吾尔自治区人民医院李南方、姚晓光、周玲、索菲娅·阿布力克木、张德莲、常桂娟、周克明、努尔古丽·买买提201403313 医药卫生科学数据共享网中国医学科学院、中国人民解放军总医院、中国中医科学院中医药信息研究所、中国医学科学院基础医学研究所、中国疾病预防控制中心刘德培、尹岭、何毅、王恒、崔蒙、陈杰、洪晓顺、杜冠华201403029 炎症标志物在冠状动脉性疾病中的临床应用中国医学科学院阜外心血管病医院李建军、陆宗良、惠汝太、徐波、郭远林、朱成刚、吴娜琼、徐瑞霞201403165 高血压的发病机理及遗传学临床应用研究南京医科大学第一附属医院、南京医科大学占伊扬、朱国庆、沈冲、丁海霞、贾坚、门琛、李妍妍201403238 广西黑衣壮族和白裤瑶族人群血脂异常和高血压的危险因素广西医科大学尹瑞兴、刘唐威、潘尚领、林伟雄、冯启明、杨德寨、吴锦珍、吴海201403020 血脂异常防治技术及在基层的推广应用北京大学人民医院、复旦大学、中国人民解放军总医院、北京市朝阳区第二医院、首都医科大学附属北京同仁医院胡大一、陈红、孙艺红、叶平、李瑞杰、余金明、丁荣晶、王家宏201403039 疑难性心肌肥厚疾病诊断技术研究中国医学科学院北京协和医院方全、程中伟、田庄、曾勇、方理刚、张抒扬、严晓伟、朱文玲201403104 心肌重构发生发展的机制研究与临床应用复旦大学附属中山医院邹云增、龚惠、姜红、葛均波、苑洁、孙爱军、陈瑞珍、杨茗201403037 中国过敏性疾病诊疗体系建立及关键技术研究中国医学科学院北京协和医院、北京新华联协和药业有限责任公司尹佳、叶世泰、乔秉善、孙劲旅、周俊雄、王良录、李宏、王瑞琦201403097 代谢性炎症调控对糖尿病β细胞功能保护和血管并发症防治作用上海交通大学附属第一人民医院、上海长征医院彭永德、刘志民、丁晓颖、石勇铨、王育璠、钱镭、邹俊杰、陈向芳201403094 肝炎病毒感染相关肝病疾病进展的基础和临床上海交通大学医学院附属瑞金医院、上海人类基因组研究中心谢青、韩泽广、项晓刚、黄健、王晖、邓庆、蔡伟、桂红莲201403040 肌萎缩侧索硬化发病机制、早期诊断和治疗研究中国医学科学院北京协和医院崔丽英、李晓光、刘明生、管宇宙、邹章钰、王悦、翦凡、李本红201403175 抑郁症的共病诊断、治疗及发病机制研究东南大学附属中大医院、苏州大学附属第一医院、南京医科大学附属脑科医院袁勇贵、吴爱勤、侯钢、张志珺、刘阳、柏峰、李海林、李晶晶201403085 边疆少数民族先天性心脏病批量介入救治方法规范的研究中国人民武装警察部队总医院刘惠亮、郑静晨、马东星、吴晓霞、陈金宏、李红、侯海军、张璐201403041 基于流式细胞术的细胞表型和分子表型的临床系列应用研究中国医学科学院北京协和医院崔巍、韩冰、张之南、郭野、黄春梅、陈倩、刘定华、王斐201403129 视网膜色素变性和视网膜母细胞瘤的临床分子遗传学研究中国人民解放军第三军医大学第一附属医院、香港中文大学眼科医院张晓莉、府伟灵、彭智培、谭霭仙、黄庆、陈翠敏、朱静、汪江华201403071 超声引导子宫及卵巢病变原位治疗方法建立及其临床应用研究中国人民解放军总医院张晶、韩治宇、梁萍、于晓玲、张冰松、关铮、李秀丽、马霞201403019 中国黑色素瘤个体化治疗模式的初步建立北京肿瘤医院郭军、孔燕、斯璐、迟志宏、崔传亮、盛锡楠、毛丽丽、李思明201403128 射频消融术治疗肝胆外科疾病的系列研究与推广应用中国人民解放军第三军医大学第一附属医院、四川大学华西医院马宽生、曾勇、吴泓、夏锋、李晓武、陈敏、冯凯、黄纪伟201403170 基于异种细胞的新型生物人工肝安全性研究及临床应用南京大学医学院附属鼓楼医院、东南大学、江苏省传染病医院施晓雷、丁义涛、顾忠泽、赵伟、吴亚夫、韩冰、任昊桢、郑以山201403038 GP73在肝癌早期诊断，治疗效果评价和术后复发监测中的应用中国医学科学院北京协和医院、中国人民解放军总医院、中国医学科学院基础医学研究所毛一雷、杨华瑜、徐海峰、田亚平、桑新亭、卢欣、张宏冰、钟守先201403288 活体肝移植核心技术的应用研究中国人民武装警察部队总医院、天津市第一中心医院沈中阳、陈新国、潘澄、徐光勋、李威、蒋文涛、淮明生、刘蕾201403233 主动脉瘤和主动脉夹层的治疗及发病学研究中山大学附属第一医院王深明、常光其、李晓曦、林勇杰、胡作军、吕伟明201403132 膀胱癌应用基础及临床治疗重庆医科大学吴小候、罗春丽、张尧、唐伟、何云锋、王德林、尹志康、陈在贤201403123 应用组织工程技术修复下尿路疾病的基础研究与临床应用上海交通大学附属第六人民医院、东华大学徐月敏、傅强、张耀鹏、王华平、冯超、邵惠丽、陈仕艳、张炯201403294 心脏移植临床关键技术和基础研究华中科技大学同济医学院附属协和医院董念国、夏家红、方敏、刘金平、史嘉玮、王国华、孙宗全、蒋雄刚201403063 颅底肿瘤的基础和临床研究首都医科大学附属北京天坛医院、北京市神经外科研究所张俊廷、吴震、贾桂军、张力伟、刘阿力、贾旺、万虹、陈绪珠201403108 子宫内膜异位症中NF-KB/PR-B失平衡机制的研究及其临床转化应用复旦大学附属妇产科医院刘惜时、郭孙伟、袁蕾、聂姬婵、卢媛、郑峪201403161 乙型肝炎病毒和巨细胞病毒母婴传播防治的基础和临床研究南京大学医学院附属鼓楼医院周乙华、胡娅莉、王志群、陈洁、戴毅敏、张姝、武巧珍、许碧云201403093 糖尿病视网膜病变的临床与实验研究天津医科大学总医院颜华、由彩云、于金国、毛春洁、张惟、韩金栋、高军、胡艳滨201403100 视网膜脱离视觉功能保护策略研究与应用上海交通大学附属第一人民医院孙晓东、汪枫桦、宋正宇、刘海芸、宫媛媛、董凯、王雯秋、冯竞仰201403246 口腔颌面部肿瘤侵袭转移分子机制及热化疗干预的研究四川大学华西口腔医院梁新华、李龙江、汤亚玲、潘剑、陈宇、李一、华成舸、张壮201403118 重要疑难真菌病及皮肤病的诊治研究上海长征医院、中国人民解放军第二军医大学、上海交通大学附属第一人民医院廖万清、姜远英、潘炜华、曹永兵、施伟民、王彦、方伟、陈敏201403018 生物活性短肽的产学研集成研究北京大学、中国食品发酵工业研究院李勇、蔡木易、张召锋、王军波、朱翠凤、许雅君、林峰、梁江201403028 HPV DNA检测技术筛查宫颈癌的系列研究及临床应用中国医学科学院肿瘤医院、襄垣县妇幼保健院乔友林、赵方辉、张询、章文华、潘秦镜、陈凤、陈汶、李凌201403043 人感染高致病性禽流感H5N1的流行病学研究及应用中国疾病预防控制中心、北京大学人民医院、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、湖南省疾病预防控制中心、浙江省疾病预防控制中心余宏杰、王宇、杨维中、冯子健、高占成、廖巧红、高立冬、陈恩富201403187 生命不同阶段暴露环境内分泌干扰物对男（雄）性生殖发育的损害效应安徽医科大学徐德祥、王华、姬艳丽、孟秀红、张程、陈远华、赵梅201403068 水体生物污染危害、检测与控制关键技术研究与应用中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所、复旦大学、中国人民解放军第三军医大学李君文、屈卫东、舒为群、邱志刚、郑唯韡、陈济安、金敏、谌志强201403116 基于方证相应的阴虚动风证帕金森病异动症研究与临床应用上海中医药大学、上海中医药大学附属龙华医院、上海交通大学附属第六人民医院、上海市徐汇区枫林街道社区卫生服务中心何建成、袁灿兴、孙永宁、浦斌红、庄燕鸿、罗瑞静、滕龙、洪芳201403065 银屑病（白疕）“从血论治”辨证体系的系统确证研究首都医科大学附属北京中医医院、北京市中医研究所、中国中医科学院广安门医院、北京中医药大学东直门医院、中日友好医院王莒生、周冬梅、孙丽蕴、王萍、邓丙戌、张广中、陈维文、张苍国际合作奖1项201404045钱秉中比尔及梅琳达盖茨基金会（美国）北京代表处卫生管理奖2项201405099 日间手术中心的规范化建设与管理上海交通大学附属第一人民医院、四川大学华西医院、上海交通大学、上海第二工业大学王兴鹏、程南生、钟力炜、唐国春、马洪升、刘国华、许迅、万国华201405211 我国县域医疗服务体系管理体制及运行机制研究华中科技大学方鹏骞、张晋、朱嘉龙、王碧艳、熊昌娥、陈婷、张霄艳、张凤帆医学科普奖2项201406183 基于地域特点的心血管疾病防治系列健康教育科普作品绍兴市人民医院郭航远、袁敏、陈利坚、王勋英、彭放、池菊芳、邢杨波、杨芳芳201406180 《相约健康》综合科普项目浙江省医学会、杭州市卫生局、杭州电视台骆华伟、王莉、滕建荣、方健国、夏茂松、毛国雄、邵珍珍、朱立卫生政策奖1人201407319胡善联复旦大学。
血液科新技术研究进展
血液科新技术研究进展随着现代医学的发展，血液科研究取得了突破性的进展。
新技术的引入不仅提高了血液疾病的诊断和治疗水平，还为研究人员提供了更多的研究思路和工具。
本文将对血液科新技术的研究进展进行探讨。
一、基因编辑技术在血液科研究中的应用基因编辑技术是近年来备受瞩目的技术之一。
它通过改变细胞内的基因序列，能够对遗传性疾病进行治疗或预防。
在血液科领域，基因编辑技术已经成功地应用于血液病的治疗。
例如，在遗传性贫血病的治疗中，通过编辑患者的造血干细胞，成功地纠正了异常基因，将健康的细胞重新引入到患者体内，实现了血红蛋白的正常合成。
这一研究成果为遗传性贫血病的治疗提供了新的思路和方法。
二、流式细胞术在血液科诊断中的应用流式细胞术是一种通过流式细胞仪对细胞进行快速准确分析的技术。
它通过对细胞的大小、形状、颜色等特征进行检测和分析，可以对血液中的异常细胞进行鉴定和定量。
在血液科诊断中，流式细胞术已经成为不可或缺的工具。
通过流式细胞术，医生们能够快速有效地判断血液病的类型和程度，提高了诊断的准确性和效率。
三、免疫治疗在血液科治疗中的应用免疫治疗是指通过激活或调节机体的免疫系统，以增强机体对抗疾病的能力。
在血液科治疗中，免疫治疗已经取得显著的成果。
例如，采用CAR-T细胞免疫疗法治疗淋巴瘤和白血病已经取得了非常好的效果。
CAR-T细胞疗法通过改造患者自身的T细胞，使其具备识别和攻击癌细胞的能力，从而有效地杀灭癌细胞，并带来长期的疗效。
四、血浆输注技术在血液科临床中的应用血浆输注技术是一种将新鲜血浆输注给患者的治疗方法。
血浆是由血液离心分离得到的液体部分，其中含有许多生物活性物质和细胞因子。
在血液病和某些自身免疫性疾病的治疗中，血浆输注被广泛应用。
例如，在免疫性血小板减少症的治疗中，输注血浆可以有效地提高患者的血小板数量，减轻出血症状，提高生活质量。
五、液体活检技术在血液科研究中的应用液体活检技术是一种通过检测血液中的循环肿瘤DNA和细胞来实现早期癌症诊断和治疗监测的技术。
质谱成像技术前沿进展及其在药物研究中的应用
学 报Journal of China Pharmaceutical University 2023，54（6）：653 - 661653质谱成像技术前沿进展及其在药物研究中的应用王颂凯1，2，邹宇琛1，2，孙士鹏1，2，闫郅烨1，2，汤维维1，2，李萍1，2*，李彬1，2**（1中国药科大学多靶标天然药物全国重点实验室，南京 211198；2中国药科大学中药学院，南京 211198）摘 要 质谱成像（MSI）作为一种无标记的分子成像技术，弥补了传统液质联用等分析技术空间分辨能力的不足，已被广泛应用于小分子代谢物、脂质、多肽及蛋白质的组织分布研究。
随着MSI技术灵敏度和空间分辨率的不断提高，该技术在精确定位药物组织分布、可视化药物代谢过程、追踪药物递送等研究领域备受关注，为药物临床前研究提供了新技术和新方法。
本文介绍了多种常见MSI技术的基本原理、技术关键参数、技术优势与不足，重点综述了近年来MSI技术在药物有效性及安全性评价、药物组织分布研究、药物递送、中药分析等领域的应用，以期拓展MSI技术在药物研发中的应用，推动药物研发进程。
关键词质谱成像；组织分布；药物临床前研究；药物递送；药物分析；中药分析中图分类号O657 文献标志码 A 文章编号1000 -5048（2023）06 -0653 -09doi：10.11665/j.issn.1000 -5048.2023091901引用本文王颂凯，邹宇琛，孙士鹏，等.质谱成像技术前沿进展及其在药物研究中的应用［J］.中国药科大学学报，2023，54（6）：653–661.Cite this article as：WANG Songkai，ZOU Yuchen，SUN Shipeng，et al. Recent advances in mass spectrometry imaging and its application in drug research［J］.J China Pharm Univ，2023，54（6）：653–661.Recent advances in mass spectrometry imaging and its application in drug researchWANG Songkai1,2, ZOU Yuchen1,2, SUN Shipeng1,2, YAN Zhiye1,2, TANG Weiwei1,2, LI Ping1,2*, LI Bin1,2**1State Key Laboratory of Natural Medicines, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198;2School of Traditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198,ChinaAbstract Mass spectrometry imaging (MSI), a label-free molecular imaging technique, has been applied widely in the spatial localization of small molecule metabolites, lipids, peptides, and proteins, with its unique advantage of high spatial resolving power compared to traditional liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS).With the nonstop advancement of its achievable sensitivity and spatial resolution, MSI technique has been providing novel perspectives into the preclinical studies of drugs, such as in vivo localization of drugs and their metabolites, visualization of drug metabolism, and drug delivery tracking.This review introduces the basics of MSI tech⁃niques, including basic principles, key features, technical advantages, and limitations, with particular highlight of the recent applications of MSI in drug efficacy and safety evaluation, drug distribution research, drug delivery research, and analysis of Chinese medicine from recent publications, aiming to promote the utilization and further expansion of MSI in the research and development of drugs.Key words mass spectrometry imaging; tissue distribution; preclinical drug research; drug delivery; pharma⁃ceutical analysis; analysis of Chinese medicineThis study was supported by the National Natural Science Foundation of China (No.82374028)收稿日期2023-09-19 通信作者*Tel：************E-mail：liping2004@**Tel：************E-mail：binli@基金项目国家自然科学基金资助项目（No.82374028）学 报 Journal of China Pharmaceutical University 2023，54（6）：653 - 661第54 卷药物效应的强弱主要取决于药物分子与靶点的结合强度以及机体对药物的处置。
血液分析仪日常室内质量控制中新鲜血比对方案的建立
文章编号：1673-8640（2021）06-0662-05 中图分类号：R446 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2021.06.018血液分析仪日常室内质量控制中新鲜血比对方案的建立郑翠玲，王 力，程 焱，崔 巍（国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院检验科，北京 100021）摘要：目的建立新鲜血比对方案，完善血液分析仪日常室内质量控制（IQC），保证临床标本检测结果的可比性和一致性。
方法每日采用血液分析仪配套质控品完成IQC后，抽取检测结果在参考区间内，且血量约为2 mL的新鲜血标本。
选择性能良好的血液分析仪作为靶机，以其他血液分析仪为比对仪器。
以新鲜血标本在靶机中测定的结果作为靶值，比对仪器的测定结果作为测定值，比较靶值和测定值的差异，计算白细胞（WBC）计数、红细胞（RBC）计数、血红蛋白（Hb）、血细胞比容（HCT）、血小板（PLT）计数项目的相对偏差。
仪器间相对偏差标准为1988年美国临床实验室改进法案（CLIA'88）允许误差的1/2，血液分析仪运行过程中的相对偏差标准为CLIA'88允许误差的1/3。
根据偏差标准对相对偏差进行评价。
结果比对仪器与靶机的相对偏差符合1/2 CLIA'88允许误差的偏差范围的要求，仪器间检测结果具有可比性；血液分析仪运行过程比对数据的相对偏差符合1/3 CLIA'88允许误差的偏差范围的要求。
结论建立的新鲜血比对方案既能保证血液分析仪间检测结果的可比性和仪器运行过程中的稳定性，又能对血液分析仪进行方便、经济、有效的日常IQC。
关键词：血液分析仪；新鲜血；比对方案；室内质量控制Fresh blood comparison program in daily internal quality control of hematology analyzers ZHENG Cuiling，WANG Li，CHENG Yan，CUI Wei.（Department of Clinical Laboratory，the National Cancer Center，the National Clinical Research Center for Cancer，Cancer Hospital，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Beijing 100021，China）Abstract：Objective To establish a fresh blood comparison program so as to ensure the comparable and consistent results of clinical specimens，and to improve the daily internal quality control（IQC） of hematology analyzers. Methods After the completion of daily IQC with supporting quality control products，2 mL fresh blood sample was drawn with test results within reference ranges. A hematology analyzer with good performance was selected as the target，and the remaining instruments were used as comparison instruments. The results tested by the target instrument were used as the target values，while the results tested by the comparison instruments were used as the measured values. Comparing the target values and the measured values，the relative deviations of white blood cell（WBC），red blood cell（RBC），hemoglobin（Hb），hematocrit（HCT） and platelet（PLT） were calculated. The 1/2 of allowable error in the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988（CLIA'88）was the relative deviation standard between different instruments，while the 1/3 of allowable error was the relative deviation standard of the same hematology analyzer at different times. The relative deviation was evaluated according to the relative deviation standard. Results The relative deviations of the comparison data among the comparison instruments and the reference instrument met the requirements of 1/2 CLIA'88 deviation range，showing the accurate and comparable determination results among the instruments. The relative deviations of the comparison data during the operation of the whole cell analyzers met the requirements of the 1/3 CLIA'88 deviation range，indicating the stable instruments. Conclusions The fresh blood comparison program could not only ensure the comparability of determination results among hematology analyzers and the stability of the same instrument during operation，but also perform convenient，economical and effective IQC on the hematology analyzers.Key words：Hematology analyzer；Fresh blood；Comparison program；Internal quality control基金项目：国家科技重大专项项目（2018ZX10302-205）；中国医学科学院肿瘤医院教学研究课题（E2019D07）作者简介：郑翠玲，女，1978年生，博士，副主任技师，主要从事肿瘤分子诊断研究。
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崔巍 中国医学科学院肿瘤医院
背景 MDS诊断进展
细胞表面分子
流式细胞术免疫分型
单纯形态学 1976年FAB分型
细胞内部遗传物质
染色体核型 + 基因分子生物学
诊断标准
MDS 诊断需满足两个必要条件和一个确定标准 (⑴)必要条件： ① 持续一系或多系血细胞减少：红细胞 (HGB<110 g/L)、中性粒细胞 [中性粒细胞绝对计数 (ANC)<1.5×109/L]、血小板 (PLT<100×109/L)； ② 排除其他可以导致血细胞减少和发育异常的造血及非造血系统疾患 (2) 确定标准： ① 发育异常：骨髓涂片中红细胞系、粒细胞系、巨核细胞系中发育异 常细胞的比例≥10%； ② 环状铁粒幼红细胞占有核红细胞比例≥15%； ③ 原始细胞：骨髓涂片中达 5%～19%； ④ MDS 常见染色体异常。
正常造血过程中： 原始细胞向单核细胞分化：CD45增强（绿色箭头） 原始细胞向粒细胞分化：先是颗粒增多/SSC增强，早幼粒时SSC达到顶峰，后颗粒减少， CD45增强（橙色箭头） MDS时：粒细胞颗粒度减低/SSC减小，“Blast hole”被趋于成熟的粒细胞占据，单用 CD45/SSC射门时可能导致原始细胞计数不准确
SF3B1突变见于75.3%的RARS/RCMD-RS
Yoshida K, et al. Nature 2011; 478: 64-69.
K700E为SF3B1最常见突变位点
Papaemmanuil E, et al. N Engl J Med 2011; 365: 1384-1395.
SF3B1突变MDS表型特征
诊断——SF3B1突变
SF3B1: Splicing Factor 3B Subunit 1 (剪接因子3B亚基1) 其编码蛋白是剪切体中U2小核核糖核蛋白（U2snRNP）的核心成分,在RNA剪接 过程中发挥重要作用。 SF3B1基因突变引起的异常剪接与多种恶性血液病有关。
Yoshida K, et al. Nature 2011; 478: 64-69.
骨髓增生异常综合征诊断与治疗中国专家共识（2014 年版）
诊断标准
当患者符合必要条件、未达确定标准、临床表现高度疑似 MDS 时，应进
行MDS辅助诊断标准指标的检测 辅助标准： ① 流式细胞术检查结果显示骨髓细胞表型异常，提示红细胞系和（或） 髓系存在单克隆细胞群； ② 遗传学分析提示存在明确的单克隆细胞群； ③ 骨髓和（或）外周血中祖细胞的 CFU（±集簇）形成显著和持久减少。 符合者基本为伴有骨髓功能衰竭的克隆性髓系疾病，此类患者诊断为高度 疑似 MDS。
500,000 细胞/管 上机检测
PBS+ 0.5%PFA
室温放置 ＜24小时
室温 10分钟
＜300g
室温，避光 15分钟
抗体选择
粒细胞成熟过程中核心标志物表达水平的变化趋势
原始 早幼 中幼 晚幼、杆状核 分叶核
Leuk. Res. 2008;32(1):5–17.
MDS病态造血表现
正常对照 MDS
2016 WHO 髓系肿瘤新分类
2016 WHO 髓系肿瘤新分类
2016 WHO 髓系肿瘤新分类
MDS: Report requirements and tips
Report: • Must still count morphologic blast % in blood and BM and include actual % in report • Provide % dysplasia (any unique features) • Flow cytometry “ok” as ancillary tool, but not required • Flow blast % should not replace morphologic % • Cytogenetics required on all cases (del 5q, other) • Molecular testing has utility (e.g. SF3B1 (if rings), NPM1 (if approaches AML), TP53 (prognosis) )
骨髓增生异常综合征诊断与治疗中国专家共识（2014 年版）
诊断方法
MDS免疫分型
Ø Ø Ø Ø
操作流程的规范化 抗体选择 分析方案的选择 流式积分系统
操作流程
抗凝剂： 首选肝素 (备选EDTA) 骨髓标本 裂解红细胞
氯化铵 红细胞裂解液 (不含固定剂） 离心 洗涤 染色
PBS+ 0.5%BSA/HSA 洗涤 固定
• 白细胞计数更高 • 血小板计数更高 • 无进展生存期更长
Papaemmanuil E, et al. N Engl J Med 2011; 365: 1384-1395.
SF3B1突变有望成为独立亚型纳入MDS诊断标准
Malcovati L, et al. Blood. 2014;124(9):1513–21.
Leuk. Res. 2008;32(1):5–17.
MDS病态造血表现——粒细胞
粒细胞CD13/CD16表达模式 正常对照 MDS
MDS患者未成熟粒细胞CD13表达缺失
Leuk. Res. 2008;32(1):5–17.
MDS病态造血表现——粒细胞
MDS患者中性粒细 胞颗粒度减少
粒细胞CD13/CD16 表达模式异常
MDS患者幼稚单核细胞 (CD36+CD14-)增多 或成熟单核细胞CD14表 达减弱/缺失
MDS患者单核细胞 异常表达CD56
Leukemia (2012) 26, 1730 - 1741
MDS病态造血表现——红系组分
MDS患者红系组分CD71/CD235a表达模式改变
Leukemia (2012) 26, 1730 - 1741
MDS流式评分系统
MDS流式评分系统
Ogata流式评分系统
流
表 Ogata 参数 CD34+髓系原始细胞百分比(%) CD34+B 系祖细胞百分比(%) 淋
式评分系统 cut-off 值 ≥2 ≤5 ≤4 或≥7.5 ≤6 得分 1 1 1 1
巴细胞/髓系原始细胞 CD45 平均荧光强度比值 淋
Leukemia (2012) 26, 1730 - 1741
MDS病态造血表现——单核细胞
单核细胞/粒细胞 CD11b/HLA-DR表达模式
正常对照 MDS
MDS患者单核细胞 增多，且HLA-DR弱 表达部分显著增多
粒细胞正常
Leuk. Res. 2008;32(1):5–17.
MDS病态造血表现——单核细胞
粒细胞/ 巴细胞 SSC 峰值比 得分≥2 时即为 Nhomakorabea合 MDS
Ogata流式评分系统
P4
Della Porta MG, et al. Haematologica. 2012;97(8):1209–17.
MDS分子诊断进展
90%MDS存在重现性基因突变
Rafael Bejar, and David P. Steensma Blood 2014;124:27932803