常见PCR检测项目表
pcr实验有哪些
pcr实验有哪些1. 引言PCR（聚合酶链反应）是一种在分子生物学中广泛使用的技术，可以在短时间内扩增DNA片段。
PCR实验是生物学研究和临床诊断中不可或缺的步骤，它可以在病毒检测、基因测序、基因定量等方面发挥重要作用。
2. 反应体系PCR反应体系主要包括模板DNA、引物、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）、聚合酶、反应缓冲液和水。
模板DNA是待扩增的DNA片段，引物是加在模板DNA上的两个特异性序列，dNTPs是四种脱氧核苷酸（A、T、C、G），聚合酶用于DNA合成，反应缓冲液提供了合适的酶活性和pH条件。
3. 扩增步骤PCR实验一般分为三个步骤：变性、退火和延伸。
3.1 变性在PCR反应开始时，反应体系中的DNA双链被高温（通常为94°C-98°C）变性成两条单链。
这个步骤不仅可以破坏DNA的二级结构，还可以使DNA解开成两条单链，为下一步的引物结合提供条件。
3.2 退火PCR反应体系中加入的引物会与目标DNA序列互补结合。
退火步骤通过降低温度（通常为50°C-65°C）来促进引物与模板DNA的互补结合，从而在目标DNA序列的两端形成初始的引物结合位点。
3.3 延伸在延伸步骤中，聚合酶利用模板DNA上的引物，以dNTPs为原料合成新的DNA 链。
这个步骤的温度通常为72°C，因为常用的聚合酶具有较高的温度稳定性。
4. PCR类型PCR实验根据不同的应用领域和需要，还可以进行多种特殊扩增技术。
4.1 实时定量PCR实时定量PCR（qPCR）是一种能够实时监测PCR扩增过程的技术。
它可以定量检测样本中的目标DNA的数量，并且具有高灵敏度和高特异性。
4.2 反转录PCR反转录PCR（RT-PCR）是一种将RNA转化为DNA的技术，常用于研究基因的表达水平。
在RT-PCR中，RNA首先经过逆转录反应转化为互补的DNA（cDNA），然后再进行PCR扩增。
PCR检测技术(一) 模板
3.DNA聚合酶
目前PCR扩增中最常用的DNA聚合酶是TagDNA聚合酶，它是由水生栖热菌(Ther-masaquaticus)产生，热稳定性好，可耐94℃高温，在此温度下短时光内对活力无多大影响。最适反应温度为72℃,70℃催化核酸链延伸的速度是2800核苷酸/min，在100uL反应体系中普通用2单位，它的用量多少对PCR扩增效率及特异性有一定影响。除了TagDNA聚合酶外，近年来耐热的pfuDNA聚合酶也被广泛地用于PCR反应，此酶是山极端嗜热的激烈热球菌(Pyrococcusfuriosus)产生的DNA聚合酶，是迄今发觉的掺人错误率最低的耐热DNA聚合酶，但其延长速度比TagDNA聚合酶低550核苷酸/min；另外得到应用的还有一种rTthDNA聚合酶，因为PCR反应以DNA模板举行扩增反应，而rTthDNA聚合酶可将反转录和聚合作用融合在一起，挺直由其将RICA反转录后扩增出大量的DNA片段，因而可大大简化操作程序，提高效率。
TagDNA聚合酶往往会在DNA链3'末端加上非模板互补核苷酸，从而产生不易克隆的PCR产物。通过用其他DNA聚合酶(如T4DNA聚合酶)处理扩增产物，补平或除去突出末端可解决这一问题。
4．反应缓冲液
PCR反应中常用的反应缓冲液含10～50mmol/L(pH8.3～8.8)的Tris-HCl,50mmol/LKCl和1.5mmol/LMgCl2。反应缓冲液的pH至关重要，假如KCl浓度过高，则会抑制酶的活性。在反应中存在适当浓度的Mg2+至关重要，它是TagDNA聚合酶活力所必须的，并可影响PCR产物的特异性和产量、引物退火的程度、模板与PCR产物链的解离温度、引物的特异性、引物二聚体的形成以及酶的活性和精确性等。因为EDTA或磷酸根能影响Mg2+的浓度，所以应注重模板DNA溶液中的EDTA浓度和PCR反应中所加模板和引物的量以及dNTP浓度(dNTP可提供磷酸基团，从而影响Mg2+浓度)。要获得最佳反应结果，必需挑选合适的Mg2+浓度，普通为2～5mmol/L。
分子诊断室收费标准
1190.7
新鲜组织 / 270700003 石蜡组织 / 腹水 270700004 S-1 270700003 270700005 S-2
828
5~6 工作 日
212.4 414 1710 5~6 工作 日 4~5 工作 日
荧光定 量 PCR
详见“西妥昔单抗检测意义”
新鲜组织/ 石蜡组织/ 胸水
270700004 S-1
774.9
4~5 工作 日
270700003
828
5~6 工作 日 4~5 工作 日
KRAS 突变在我国 NSCLC 中约占 KRAS 基因 12,13 号 10%，KRAS 突变与 EGFRTKI 靶 密码子突变 向药物耐药或疗效不佳相关。 用于治疗既往接受 过化学治疗或不适 于化疗的局部晚期 EGFR 基因拷贝数 或转移性非小细胞 肺癌(NSCLC) EGFR 基因 20 号外 显子 T790M 突变 MET 基因扩增 EGFR 基因拷贝数变异与 EGFR 突变或蛋白表达相关，可能与 EGFR TKI 疗效相关。 EGFR-TKI 的主要耐药机制之一。 MET 基因扩增与 NSCLC EGFR TKI 继发性耐药相关。
IGH/c-myc 染色体易位检测 IGH/CCND1 染色体易位检测
API2/MALT1 染色体易位检测
第一部分肿瘤个体化用药分子检测
1、肿瘤个体化用药——靶向药物篇
吉非替尼、 表皮生长因 厄洛替尼、 子受体酪氨 酸激酶抑制 埃克替尼、 剂 (EGFR-TKI) 阿法替尼 肿瘤多基因突变分 型 BIM 基因 2 号内含子 片段缺失
靶向药物 药物性质 适应证 检测项目 检测意义 检测 方法 适用样本 省物价局 编码 收费 标准 报告 周期
PCR开展项目简介
4沙眼
性病科、妇产科（优生优育科）、泌尿科、皮肤科、外科
*解脲脲原体
UU-DNA
1引起泌尿生殖道感染；
2不孕症；
3新生儿支原体性肺炎或低体重儿；
性病科、妇产科（优生优育科）、泌尿科、皮肤科、外科
人乳头瘤病毒
HPV-DNA
1尖锐湿疣；
2新生儿孕妇患此病婴儿通过产道可发生喉部乳头瘤；
3肿瘤。（HPV6,11型主要引发的是：尖锐湿疣；HPV16,18型主要引发的是：宫颈癌、宫颈息肉）
*丙肝病毒
HCV-RNA
丙型肝炎
内科、传染科、妇产科（优生优育科）
性
传
播
性
疾
病
类
检
查
*淋球菌
NG-DNA
1淋病；
2不孕症；
3新生儿淋菌性眼结膜炎；
4引起泌尿生殖系统感染。
性病科、妇产科（优生优育科）、泌尿科、皮肤科、外科
*沙眼衣原体
CT-DNA
1体性肺炎、眼炎及其他脏器损害；
3宫颈癌发生有关
内科、妇产科（优生优育科）
育
类
检
查
弓形虫（弓形体）
TOX-DNA
1弓形虫性疾病
PCR方法学妇产科检查项目(HPV+GBS)基本情况
1.人乳头瘤病毒（HPV）检测生理情况非感染人体不存在HPV，荧光定量PCR结果为阴性。
病理情况HPV可引起人皮肤、黏膜不同程度的增生性病变，临床表现为良性疣或乳头状瘤，HPV也是尖锐湿疣的病原体，某些型别可使组织发生癌变，引起宫颈癌、口腔鳞状细胞癌、皮肤癌、肛门癌。
HPV基因组为双链环状DNA，HPV的复制方式独特，皮肤中只有基底层细胞可以分裂增殖，基底层细胞向表皮层分化为棘细胞、颗粒细胞、角质层细胞。
即HPV DNA复制、衣壳蛋白的合成与装配分别在上皮不同的细胞层内进行，所以HPV不能在体外细胞培养中增殖。
主要通过直接接触感染者的病变部位或间接接触HPV污染的物品感染，而生殖器的HPV感染主要通过性交传播，少数可经污染的内裤、浴盆、浴巾而间接受染。
新生儿出生时，可经带病毒的产道感染而患喉部乳头瘤。
HPV感染人的皮肤黏膜，主要引起各种疣状损害，无病毒血症。
HPV型别不同，引起的病变不同。
HPV6型、11型主要引起尖锐湿疣；HPV16型、18型主要感染子宫颈，与宫颈癌的发生有密切关系。
HPV33型、31型也可引起子宫颈癌；口腔鳞状细胞癌与HPV16型感染有关等。
标本类型分泌物或活检组织检验干扰因素和注意事项①要求用无菌技术采集标本，应使用无菌有盖容器收集，杜绝污染。
②禁止加福尔马林浸泡。
1.人乳头瘤病毒（HPV）检测生理情况非感染人体不存在HPV，荧光定量PCR结果为阴性。
病理情况HPV可引起人皮肤、黏膜不同程度的增生性病变，临床表现为良性疣或乳头状瘤，HPV也是尖锐湿疣的病原体，某些型别可使组织发生癌变，引起宫颈癌、口腔鳞状细胞癌、皮肤癌、肛门癌。
HPV基因组为双链环状DNA，HPV的复制方式独特，皮肤中只有基底层细胞可以分裂增殖，基底层细胞向表皮层分化为棘细胞、颗粒细胞、角质层细胞。
即HPV DNA复制、衣壳蛋白的合成与装配分别在上皮不同的细胞层内进行，所以HPV不能在体外细胞培养中增殖。
主要通过直接接触感染者的病变部位或间接接触HPV污染的物品感染，而生殖器的HPV感染主要通过性交传播，少数可经污染的内裤、浴盆、浴巾而间接受染。
PCR检测记录表参考模板
基因扩增荧光定量检测记录表
实验日期：检测项目：Linegene保存文件名：
使用说明
1、严格按单一流向进行实验，即试剂准备区（1区）→样本处理区（2区）→扩增分析区（3区），严禁逆向。
本记录表的流向亦遵循此流程；
2、各项目执行后在相应项目前的方框内打√；
3、实验室内温度为15～30℃为合格范围；
4、实验后对实验室的清洁与消毒方法参见“PCR实验室清洁程序”，实验后次日关闭通风设备和移动紫外灯；
5、实验结束后，将标本的检测结果登记至标本记录本上以备查询。
本记录表保存在归档文件夹中，存放在实验室文件柜中，保存2年；
6、Linegene扩增仪中结果保存于D盘对应实验日期的文件夹中，如2004年4月的结果保存于“D：\2004\04\”中，每月底将当月资料备份于软盘中，保存2年。
常见PCR检测项目表
RNA类
丙型肝炎病毒(HCV)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
10人份/盒
RNA类
丙型肝炎病毒(HCV)基因分型检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
10人份/盒
性病类
DNA类
沙眼衣原体(CT)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
20人份/盒
DNA类
淋球菌（NGH）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒
20人份/盒
DNA类
解脲脲(UU)原体核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒
20人份/盒
DNA类
人乳头瘤病毒（6，11型）(HPV6,11)核酸定量检测试剂盒（PCR荧光法）
20人份/盒
DNA类
单纯疱疹病毒II型(HSV II)核酸扩增（PCR）荧光定量测定试剂盒
20人份/盒
RNA类
人类免疫缺陷病毒1型(HIV I)核酸定量检测试剂盒（巢式PCR-荧光法）
DNA类
人乳头瘤病毒（16、18型）(HPV16,18)核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒
20人份/盒
DNA类
人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法(RDB))
20人份/盒
遗传疾病类
DNA类
α-地中海贫血基因诊断试剂盒（gap-PCR法）
20人份/盒
DNA类
β-地中海贫血基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法）
检测种类
核酸种类
产品名称
规格
肝炎类
DNA类
乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
20人份/盒
DNA类
乙型肝炎病毒(HBV)基因分型检测试剂盒（PCR-反向点杂交法）
PCR方法学常见感染系列检查项目(VZV+B19+HAV+TOX)基本情况
生理情况非感染人体不存在VZV，荧光定量PCR结果为阴性。
病理情况水痘-带状疱疹病毒VZV在儿童初次感染时引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，少数人在青春期或成年后引起带状疱疹，皮肤是病毒的主要靶细胞。
小儿水痘好发在3~9岁，多在冬春季流行。
病毒主要通过呼吸道或接触传播。
带状疱疹仅发生于过去有水痘史的人，成人和老人多发。
儿童患水痘康复后，体内存在的病毒不能全部被清除，少量病毒可潜伏于脊髓后根神经节或脑神经的感觉神经节中。
标本类型全血或水疱液或粪便生理情况非感染人体不存在VZV，荧光定量PCR结果为阴性。
病理情况水痘-带状疱疹病毒VZV在儿童初次感染时引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，少数人在青春期或成年后引起带状疱疹，皮肤是病毒的主要靶细胞。
小儿水痘好发在3~9岁，多在冬春季流行。
病毒主要通过呼吸道或接触传播。
带状疱疹仅发生于过去有水痘史的人，成人和老人多发。
儿童患水痘康复后，体内存在的病毒不能全部被清除，少量病毒可潜伏于脊髓后根神经节或脑神经的感觉神经节中。
标本类型全血或水疱液或粪便2.人细小病毒（B19）DNA检测生理情况非感染人体不存在B19，荧光定量PCR结果为阴性。
病理情况B19感染后引起的常见疾病是1）儿童性传染性红斑，潜伏期为1~2周，患者出现发热、全身不适、呼吸道症状等，经过1周左右，病人可出现变态反应。
首先在面颊部出现玫瑰色融合性斑丘疹，随后胸背、上肢、臀股、手足等部位出现网状、环形斑丘疹。
皮疹多持续1~2周即消退，可因日晒、沐浴、情绪紧张等刺激复发。
2）再生障碍性贫血危象，多见于15岁以下儿童。
若病人同时患有慢性溶血性贫血（镰刀细胞性贫血、遗传性球形红细胞增多症、海洋性贫血、全身免疫性溶血性贫血），则容易发生严重的再生障碍性贫血危象。
病人出现发热、苍白、乏力等症状，外周血血红蛋白可降至40g/L以下，但常在1周内恢复基础水平。
3）多发性关节炎，本病多见于成年妇女，B19感染后，病人出现感冒症状，肌肉疼痛、关节疼痛等，约经1周左右症状消失。
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DNA类
肺炎支原体(MP)核酸定量检测试剂盒（PCR荧光探针法）
20人份/盒
RNA类
呼吸道合胞病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
10人份/盒
消化道类
RNA类
柯萨奇病毒A16型核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
24人份/盒
RNA类
肠道病毒通用型核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
24人份/盒
检测种类
核酸种类
产品名称
规格
肝炎类
DNA类
乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
20人份/盒
DNA类
乙型肝炎病毒(HBV)基因分型检测试剂盒（PCR-反向点杂交法）
10人份/盒
DNA类
乙型肝炎病毒(HBV)YMDD基序突变检测试剂盒(PCR反向点杂交法)
10人份/盒
DNA类
乙型肝炎病毒(HBV)前C区BCP区突变检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)
20人份/盒
DNA类
解脲脲(UU)原体核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒
20人份/盒
DNA类
人乳头瘤病毒（6，11型）(HPV6,11)核酸定量检测试剂盒（PCR荧光法）
20人份/盒
DNA类
单纯疱疹病毒II型(HSV II)核酸扩增（PCR）荧光定量测定试剂盒
20人份/盒
RNA类
人类免疫缺陷病毒1型(HIV I)核酸定量检测试剂盒（巢式PCR-荧光法）
RNA类
肠道病毒71型核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
24人份/盒
DNA类
幽门螺旋杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
20人份/盒
肿瘤类
DNA类
EB病毒核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒
10人份/盒
DNA类
高危型人乳头瘤病毒（8个型）(HR-HPV 8)核酸定量检测试剂盒（PCR荧光法）
20人份/盒
DNA类
人乳头瘤病毒（16、18型）(HPV16,18)核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒
20人份/盒
DNA类
人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法(RDB))
20人份/盒
遗传疾病类
DHale Waihona Puke A类α-地中海贫血基因诊断试剂盒（gap-PCR法）
20人份/盒
DNA类
β-地中海贫血基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法）
10人份/盒
RNA类
丙型肝炎病毒(HCV)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
10人份/盒
RNA类
丙型肝炎病毒(HCV)基因分型检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
10人份/盒
性病类
DNA类
沙眼衣原体(CT)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
20人份/盒
DNA类
淋球菌（NGH）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒
10人份/盒
DNA类
21-三体和性染色体多倍体检测试剂盒（荧光PCR毛细管电泳法）
50人份/盒
常见PCR检测项目表
10人份/盒
DNA类
解脲脲原体基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)
10人份/盒
优生优育类
DNA类
人巨细胞病毒(HCMV)核酸扩增荧光定量检测试剂盒
20人份/盒
呼吸道类
DNA类
结核分支杆菌(TB)核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒
20人份/盒
RNA类
甲型流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）