纯净水检验作规程
饮用水(自来水)质量标准及检验规程

饮⽤⽔(⾃来⽔)质量标准及检验规程⽬的:明确⽣活饮⽤⽔质量标准,规范⽣活饮⽤⽔检验⽅法。
适⽤范围:⽣活饮⽤⽔的检验。
责任者:化验员。
1.标准依据:GB5749-85GB5750-852.质量标准:3.检验规程:3.1⾊:铂钴标准⽐⾊法:⽤氯铂酸钾和氯化钴溶液配成标准⾊列,与⽔样进⾏⽐较,规定相当于1毫克铂在1升⽔中所具有的颜⾊称为1度,作为⾊度单位。
3.1.1仪器:50ml具塞⽐⾊管3.1.2试剂:铂钴标准溶液称取1.246克化学纯氯铂酸钾(K2PtCL6)及1.000克化学纯氯化钴(CC12·6H2O),溶于100ml蒸馏⽔中;加⼊100ml浓盐酸,然后⽤蒸馏稀释⾄1000ml。
此标准溶液的⾊度为500度。
3.1.3步骤:3.1.3.1取50ml透明的⽔样于⽐⾊管中,如⽔样⾊度过⾼,可少取⽔样,加纯⽔稀释后⽐⾊,将结果乘以稀释倍数。
3.1.3.2如⽔样浑浊,可将⽔样放置澄清或⽤离⼼法沉淀,取上清⽔样进⾏⽐⾊。
3.1.3.3另取50ml具塞⽐⾊管11⽀,分别加和铂⼀钴标准溶液0,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00,3.50,4.00,4.50及5.00ml,加纯⽔⾄刻度,摇匀,即配成⾊度为0,5,10,15,20,25,30,35,40,45及50度的标准⾊列,可长期使⽤。
3.1.3.4将⽔样与铂钴标准⾊列⽐较,如⽔样与标准⾊列的⾊调不⼀致,即为异⾊,可⽤⽂字描述。
3.1.3.5计算:MC=────×500V式中:C----⽔样的⾊度M----相当于铂⼀钴标准溶液⽤量,mlV----⽔样体积,ml3.2浑浊度:是反映天然⽔饮⽤⽔的物理性状的⼀项指标。
天然⽔的浑浊度是由于⽔中含有泥沙、粘⼟、有机物、微⽣物等微粒悬浮物所致。
分光光度法-甲聚合物标准。
本法适⽤于测定⽣活饮⽤⽔及其⽔源⽔的浑浊度,最低检测限3度。
3.2.1原理:在适当温度下,硫酸肼与六次甲基四胺聚合成为⼀种⽩⾊的⾼分⼦聚合物,可⽤来作为浑浊度标准。
纯净水化验方法步骤

纯净水化验方法步骤
1. 准备样品:取一定体积的水样,通常为50 mL或100 mL,通过滤膜或其他方法去除悬浮物和颗粒物,并避免空气接触。
2. pH测试:使用pH计测量水样的酸碱度。
将电极浸入样品中,等待数秒直到稳定读数。
记录pH 值。
3. 溶解氧测试:使用溶解氧仪测量水样中的溶解氧含量。
将溶解氧电极浸入样品中,等待数分钟直到稳定读数。
根据仪器的操作指南记录溶解氧含量。
4. 总硬度测试:使用滴定法或分光光度计测量水样中的总硬度。
准备石蕊试剂,用标准酸溶液滴定水样中的钙离子,直至颜色变为淡红色。
记录滴定所耗酸的体积,根据计算公式计算出总硬度。
5. 铁含量测试:使用原子吸收光谱仪或分光光度计测量水样中的铁含量。
准备铁标准溶液,测量吸光度并按照线性关系计算出铁含量。
6. 微生物测试:利用菌落计数法或膜过滤法测试水样中的微生物含量。
将一定体积的水样经过滤膜过滤,将过滤后的膜放置在培养基上,培养并计数菌落或过滤膜上的微生物。
以上是一些常见的纯净水化验方法步骤,具体步骤和方法可能因实验目的、设备
和试剂的不同而有所差异。
在进行实验时,请参考具体的实验方法和操作指南。
纯净水检测标准

纯净水检测标准一、引言。
纯净水是指经过严格处理和过滤的水,其中几乎不含任何杂质和有害物质。
纯净水在日常生活和工业生产中具有重要的作用,因此对纯净水的检测标准是非常重要的。
本文将介绍纯净水检测的标准和方法,以便确保纯净水的质量和安全性。
二、外观检测。
纯净水的外观检测是最基本的检测方法之一。
首先,要检查纯净水的透明度,确保没有任何悬浮物和浑浊现象。
其次,要观察纯净水的颜色,正常的纯净水应该是无色透明的。
最后,要检查纯净水的气味,确保没有任何异味。
外观检测是最简单的纯净水检测方法,但也是非常重要的一环。
三、pH值检测。
纯净水的pH值是指其酸碱度的指标,通常应在6.5-8.5之间。
pH值的检测可以通过专用的pH试纸或者电子pH计来进行。
在进行pH值检测时,需要注意将纯净水样品置于室温下,避免温度对pH 值的影响。
通过检测纯净水的pH值,可以了解其酸碱度是否符合标准要求。
四、电导率检测。
电导率是指水中电解质的含量,通常用于检测水的纯度。
纯净水的电导率应该非常低,通常在0.1us/cm以下。
电导率的检测可以通过电导率仪来进行,将纯净水样品置于电导率仪中,即可得到相应的电导率数值。
通过检测纯净水的电导率,可以了解其是否含有过多的溶解物质。
五、微生物检测。
微生物检测是纯净水检测中非常重要的一环。
纯净水中微生物的含量应该非常低,通常通过菌落总数和大肠杆菌群的检测来进行评估。
微生物检测需要使用培养基和相应的培养条件,通过培养出的菌落数量和种类来判断纯净水的微生物污染情况。
六、重金属检测。
重金属是纯净水中常见的污染物之一,包括铅、镉、汞等。
重金属的检测可以通过原子吸收光谱仪或者电感耦合等离子体质谱仪来进行。
通过检测纯净水中重金属的含量,可以了解其是否符合相关的标准要求。
七、总结。
纯净水的检测标准是确保其质量和安全性的重要手段。
通过外观检测、pH值检测、电导率检测、微生物检测和重金属检测等多种方法,可以全面评估纯净水的质量。
纯水检测标准

纯水检测标准
本标准规定了纯水检测的各项指标和检测方法,以确保纯水质量符合相关要求。
一、温度
1. 检测方法:使用温度计测量纯水的温度。
2. 合格标准:纯水温度应保持在25℃左右,允许波动范围为±2℃。
二、PH值
1. 检测方法:使用PH试纸或PH计测量纯水的PH值。
2. 合格标准:纯水的PH值应保持在6.5-7.5之间,不得低于
6.0或高于8.0。
三、电导率
1. 检测方法:使用电导率仪测量纯水的电导率。
2. 合格标准:纯水的电导率应小于10μS/cm,特殊情况下可放宽至20μS/cm。
四、溶解氧
1. 检测方法:使用溶解氧仪测量纯水中的溶解氧含量。
2. 合格标准:纯水中的溶解氧含量应小于0.1mg/L。
五、硬度
1. 检测方法:使用硬度计测量纯水的硬度。
2. 合格标准:纯水的硬度应小于10ppm(以CaCO3计)。
六、悬浮物
1. 检测方法:观察纯水中的悬浮物,可使用显微镜进行观察。
2. 合格标准:纯水中不得含有悬浮物。
七、污染物
1. 检测方法:使用相关仪器检测纯水中的污染物含量,如有机物、氨氮、氯离子等。
2. 合格标准:纯水中的污染物含量应符合相关标准要求。
八、重金属
1. 检测方法:使用原子吸收光谱法、原子荧光法等检测纯水中的重金属含量。
2. 合格标准:纯水中的重金属含量应符合相关标准要求,如不得含有铅、汞、镉、铬等有害重金属。
饮用水检验操作规程

饮用水检验操作规程
1. 目的
建立饮用水检验标准操作规程,使饮用水检验操作规范化。
2. 范围
适用于饮用水的质量检验。
3. 术语或定义
N/A
4. 职责
质量控制部对本规程的实施负责。
5. 程序
5.1 检验依据
5.1.1 中华人民共和国国家标准GB 5749-2006《生活饮用水水质标准》。
5.1.2 饮用水质量标准(质量标准编号:);
5.1.3 《中国药典》2020年版四部。
5.2 性状:
本品为无色的澄明液体。
5.3 检查
5.3.1臭和味:应无异臭、异味。
5.3.2 肉眼可见物:应无肉眼可见物。
5.3.3 pH值
5.3.3.1仪器与试剂:4.00的邻苯二甲酸缓冲溶液、
6.86的标准磷酸盐缓冲溶液。
5.3.3.2开机通电预热数分钟,调节零点与温度补偿,用
6.86的标准磷酸盐缓冲溶液进行校正(定位),使仪器读数与标示pH值一致;再用4.00的邻苯二甲酸缓冲溶液调节斜率进行核对。
5.3.3.3 按样品50ml,置小烧杯中,用供试液淋洗电极数次,将电极浸人供试液中,轻摇供试液平衡稳定后,进行读数。
取二次pH读数的平均值为其pH值。
5.3.4微生物限度(薄膜过滤法)
取本品1ml,经薄膜过滤法处理,采用R2A琼脂培养基,30~35℃培养不少于5天,点计
菌落数。
1ml供试品中需氧菌总数不得过80cfu。
每10ml供试品中大肠埃希菌不得检出。
6.附件
饮用水检验记录。
纯化水标准检验规程

純化水标准檢驗規程純化水檢驗操作規程適用範圍:純化水檢驗操作。
責任:全體檢驗人員對本規程的實施負責,檢驗室主任對本規程的有效執行承擔監督檢查責任。
程序:1. 設備和儀器:比色管、水浴堝、具塞量筒、燒杯、蒸發皿、105℃烘箱及玻璃儀器。
2. 試劑和試液:甲基紅指示液、溴麝香草酚藍指示液、硝酸、硝酸銀試液、氯化鈉試液、草酸銨試液、10%氯化鉀溶液、0.1%二苯胺硫酸溶液、硫酸、對氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液(1→100)、鹽酸萘乙二胺溶液(0.1→100)、鹼性碘化汞鉀試液、氯化銨溶液(取氯化銨31.5mg,加無氨水適量使溶解並稀釋成1000ml)、氫氧化鈣試液、稀硫酸、高錳酸鉀滴定液(0.02mol/L)、醋酸鹽緩衝液(PH3.5)、硫代酰胺試液、標準鉛溶液。
無硝酸鹽的水,無亞硝酸鹽的水,無氨水。
標準硝酸鹽溶液〔取硝酸鉀0.163g,加水溶解並稀釋至100ml,搖勻,精密量取1ml,加水稀釋成100ml,再精密量取10ml,加水稀釋成100ml,搖勻即得(每1ml相當於1μgNO3)〕標準亞硝酸鹽〔取亞硝酸鈉0.750g(按乾燥品計算),加水溶解,稀釋至100ml,搖勻,精密量取1ml,加水稀釋成100ml,搖勻,再精密量取1ml,加水稀釋成50ml,搖勻即得(每1ml相當於1μgNO2)〕3. 性狀:取本品倒出少許於燒杯內,觀察,嗅味,品嘗,應爲無色的澄明液體,無臭;無味。
4. 檢查:4.1 酸鹼度:4.1.1 原理:酸遇甲基紅顯紅色,堿遇溴麝香草酚藍顯藍色。
4.1.2 方法:取本品10ml,加甲基紅指示液2滴,不得顯紅色;另取10ml,加溴麝香草酚藍指示液不得顯藍色。
4.2 氯化物、硫酸鹽與鈣鹽:4.2.1 原理:氯離子與銀離子,硫酸根離子與鋇離子,草酸根離子與鈣離子,均能發生沈澱反應。
4.2.2 方法:取本品分置三支試管中,每管各50ml。
第一管中加硝酸5滴與硝酸銀試液1ml,第二管中加氯化鋇試液2ml,第三管中加草酸銨試液2ml,均不得發生渾濁。
纯净水检测标准
纯净水检测标准一、引言。
纯净水是指不含杂质、微生物和重金属离子,PH值接近7的水。
纯净水的质量直接关系到人们的健康和生活质量,因此纯净水的检测标准至关重要。
本文将围绕纯净水的检测标准展开讨论,以期为相关领域的从业者提供参考和借鉴。
二、纯净水检测项目。
1. 外观检测。
外观检测是纯净水检测的第一步,主要检测水的透明度、色泽和异物等情况。
检测过程中应使用透明的玻璃容器,并在光线充足的环境下进行观察。
2. pH值检测。
水的pH值是衡量水酸碱性的重要指标,一般来说,纯净水的pH值应接近于7,处于中性或微弱碱性。
pH值的检测可以采用酸碱度试纸或专业的pH检测仪器。
3. 溶解氧检测。
溶解氧是水中生物生存的重要条件之一,也是水质好坏的重要指标之一。
溶解氧的检测可以采用溶解氧仪器进行定量检测。
4. 电导率检测。
电导率是指水中电解质的含量,也可以反映水的纯度。
一般来说,纯净水的电导率应该很低。
电导率的检测可以采用电导率仪进行。
5. 微生物检测。
微生物是水中的重要污染源,包括细菌、病毒、藻类等。
微生物的检测可以采用培养基培养法或PCR法进行。
6. 重金属离子检测。
重金属离子是水中的有害物质之一,包括铅、汞、镉等。
重金属离子的检测可以采用原子吸收光谱仪等仪器进行。
7. 有机物检测。
有机物是水中的另一种污染物,包括农药、药物残留等。
有机物的检测可以采用气相色谱仪、液相色谱仪等仪器进行。
三、纯净水检测标准制定。
纯净水的检测标准应当根据国家相关法律法规和行业标准进行制定,同时也需要考虑到实际生产和使用中的情况。
在制定纯净水检测标准时,应当充分考虑到纯净水的用途和水质要求,确保检测标准既科学又实用。
四、纯净水检测的意义。
纯净水的检测是保障人们饮用水安全的重要环节,也是保障工业生产和环境保护的重要手段。
通过对纯净水进行全面、科学的检测,可以及时发现水质问题,保障人们的健康和生活质量。
五、结论。
纯净水的检测标准是保障水质安全的重要保障,对于纯净水生产企业和相关从业者来说,制定科学合理的检测标准,严格把关水质是至关重要的。
(完整版)纯化水、注射用水检验操作规程
工艺用水检验操作规程1.目的规定了工艺用水的监测、取样、标准检验管理要求,确保工艺用水的检验结果可靠性。
2.范围适用于质量保证部部对本厂工艺用水的全性能监测管理。
3.参考/引用文件3.1 2015版《中国药典》4.定义4.1纯化水:本品为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的制药用水,不含任何添加剂。
4.2注射用水:本品为纯化水经蒸馏所得的水。
5. 职责5.1检验员负责按照本规程实施工艺用水检测,出具检验结果。
5.2质量工程师负责审核检验报告,负责不符合结果的跟踪、处理,并定期根据检验结果完成数据趋势统计。
5.3生产部门负责查明工艺用水数据不符合的原因,组织纠正。
6.操作程序6.1仪器、设备超净工作台、立式高压灭菌器、电热恒温水浴锅、薄膜过滤器、无菌滤膜、旋涡振荡器、电子天平、pH计、电导率仪、电热恒温鼓风干燥箱、电热恒温培养箱、菌落计数器、酒精灯、烧杯、培养皿、试管架、试管、比色管等。
6.2取样方法化学性能测试:放水30s之后取水对容器震荡三次以后,进行取样。
总有机碳:采样时必须使用密闭容器,采样后容器顶空应尽量小,并应及时测试。
所使用的玻璃器皿必须严格清洗有机残留物,并用总有机碳检查用水做最后的淋洗。
微生物性能测试:使用经高温蒸汽灭菌的容器取样,取样前,先放水30s,尽量缩短瓶盖开启的时间。
6.3操作步骤6.3.1性状取本品50ml用肉眼和鼻子进行观察检测,应为无色、无臭的澄明液体;6.3.2酸碱度(纯化水)a.溶液配制①0.05mol/L氢氧化钠溶液:取0.2g氢氧化钠,加水稀释至100 ml,摇匀,即得。
②甲基红指示液:取甲基红0.1g,加0.05mol/L的氢氧化钠溶液7.4ml使溶解,再加水稀释到200ml,即得。
③溴麝香草酚蓝指示剂:取溴麝香草酚蓝0.1g,加0.05mol/L的氢氧化钠溶液3.2ml 使溶解,再加水稀释到200ml,即得。
b.检验与合格判断标准④取本品10ml,加甲基红指示液2滴,不得显红色。
饮用水检验标准操作规程
1.目的建立饮用水的标准,规范饮用水的检测方法,确保企业使用的饮用水符合国家的相关标准,保证公司产品的质量。
2.范围本规程适合饮用水检验的全过程。
3.责任3.1.QC检验员负责本规程的执行。
3.2.QA负责本规程的监督实施。
4.内容4.1.引用标准:《生活饮用水标准》GB5749-2006。
4.2.饮用水的检验项目和质量标准:2.有“ ”的项目每半年做一次检测。
3.上表中的具体数值都是不得大于标准数值。
4.3.取样操作4.3.1.取样器具准备:250ml蓝盖瓶1个,250ml黄盖瓶一个。
其中蓝盖瓶需要清洁干燥,用于理化试验的取样;另外黄盖瓶需要清洁后,用121℃湿热灭菌20min后冷却备用,用于微生物试验的取样。
4.3.2.操作内容A.带上述适宜器具到取样地点。
打开阀门排水1分钟后取样。
B.理化试验用的取样:先用取水样荡洗蓝盖瓶3次后再取样,蓝盖瓶需要取满水样再盖盖拧紧。
C.微生物指标检查用的取样:取样人先用酒精棉进行手消毒后,取黄盖瓶开盖迅速取样后盖盖,注意不能满瓶取样。
D.每次取样后,在取样瓶外应贴上标签,内容包括品名、取样地点、时间、取样人。
E.在同一水源,同一个时间采取几个水样时,用作微生物检查的水样应避免采样点被污染。
F.用做微生物试验的样品一般从取样到检验不应超过2小时。
条件不允许立即检验时,应冷藏保存,但不能超过4小时。
4.3.3.取样点见饮用水取样点布置图,见附件1。
4.4.检验项目(每次检测都需要填写饮用水检验记录,见附件2)。
4.4.1.微生物指标A.试剂:①.消毒剂:0.1%新洁尔灭溶液;量取40ml新洁尔灭溶液加水至1000ml,混匀。
②.培养基:营养琼脂培养基,配制方法见《培养基配制标准操作规程》。
A. B.仪器用具:恒温培养箱;量筒;放大镜;无菌培养平皿(直径9cm);移液枪; 移液枪,1ml移液枪头(放入灭菌盒中,牛皮纸包裹121℃灭菌15min)、C.操作方法:以无菌操作方法用移液枪吸取1ml充分混匀的水样,注入无菌平皿中,倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀,每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养作为阴性对照。
纯水检验标准操作规程
1.目的建立生产用纯水的检验标准操作规程,对生产用纯水检验进行规范。
2.范围生产用纯水检验。
3.职责QC负责本规程实施,部门负责人监督执行。
4.仪器4.1电导率仪4.2ABI7500荧光定量PCR仪4.3微量移液器及相匹配的带滤心吸头4.4生物安全柜4.5数字式酸度计4.6恒温培养箱4.7超净工作台4.8250ml砂芯容器过滤器5.材料与试剂5.1待检纯水(由纯水系统制备);5.2检验合格的α-地中海贫血(--SEA型)检测试剂盒;5.3灭菌过的1.0 ml PCR反应管或1.5ml的离心管;5.4营养琼脂培养基5.5PCR反应管6.规程6.1 性状:本品为无色的澄清液体;无臭,无味。
6.2 PH值的检测:6.2.1 量取100ml纯水,按《数字式酸度计使用、维护、保养规程》,需对各出水管道进行PH值检测6.2.2 评价标准:PH值范围(25℃)应在5.0-7.5。
6.3 电导率的检测:6.3.1 准备一个烧杯,开始测试前将各接水口的开关打开,使水预流冲洗烧杯半分钟,然后将电导率测定仪电极放入烧杯中,记录下趋于稳定的读数;电导率应在取水口在线检测。
6.3.2 各使用点的纯水的电导率应≤5.0μs/cm则可判定为合格;6.4 PCR扩增:(必要时检测)以待检纯水做为模板,利用本司已检验合格的α-地中海贫血(--SEA型)检测试剂盒(实时荧光PCR法),依照《α-地中海贫血(--SEA型)检测试剂盒(实时荧光PCR法)说明书》进行PCR扩增,重复操作3人份。
扩增结果为阴性。
6.5微生物限度:6.5.1准备工作:6.5.1.1.将待测纯水样品、培养基等实验相关物品放置于无菌室传递窗,开启传递窗紫外灯照射灭菌30分钟;6.5.1.1操作人员更换无菌衣,从缓冲间进入到菌检室内,将超净工作台操作面和酒精灯,已灭菌好的1ml移液管、试管、生理盐水、微量移液器以及吸头盒子等实验器具用75%酒精擦拭干净后摆放整齐备用,按超净工作台的标准操作规程作净化准备;6.5.1.1从传递窗内取出相关的样品、培养基和实验器具,按种类和实验组别在经75%酒精擦拭后,在超净工作台上摆放整齐备用。
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河南新乡亚洲啤酒有限公司纯净水检验操作规程净含量测定:容量法3.1仪器3.2量筒3.3玻璃铅笔(或记号笔)3.4分析步骤将瓶装纯净水置于(20±0.5)℃水浴中恒温30 min。
取出,擦干瓶外壁的水,用玻璃铅笔对准饮料的液面划一条细线,将水倒入量筒,测量水的体积,即为瓶装饮料的净含量(以m L或L表示)。
电导率的测定A l 方法提要电导率是距离1cm和截面积1cm2之两个电极间所测得电阻的倒数,由电导率仪直接读数。
A 2 仪器和试剂A 2 . 1 仪器A 2 . 1 . 1 电导率仪( 附配套电导电极) 。
A 2 - 1 - 2 恒温水浴锅。
A 2 . 1 - 3 1 0 0 mL或2 5 0 mL烧杯。
A 2 . 2 试剂0 . 0 1 0 0 m o l / L氯化钾标准溶液: 取少量氯化钾( 优级纯) ,在1 1 0 ' C 烘箱内干燥2 h ,冷却后精确称取。
. 7 4 5 6 g , 溶于新煮沸放冷的重蒸馏水中( 电导率小于1 P S / C M) ,转移到1 0 0 0 m L容量瓶中,并稀释至刻度。
此溶液在2 5 ℃时的电导率为1 4 1 1 . 8 3 p S / c m,溶液储存在具有玻璃塞的硬质玻璃瓶中。
A 3 分析步骤按电导率仪使用说明,选好电极和测量条件,并调校好电导率仪,将电极用待测溶液洗涤3 次后,插入盛放待测溶液的烧杯( A 2 . 1 - 2 ) 中。
选择适当量程,读出表上读数即可计算出待测溶液的电导率值。
注1 电极引线不要受潮,否则将影响测量的准确度。
2 盛放待测溶液的烧杯应用待测溶液清洗3 次,以避免离子污染.A 4 精密度和准确度同一实验室对电导率为1 . 3 6 W S / c m的水样,经1 0 次测定,其相对标准偏差为1。
%。
A 5 电极常数的测定取未知电极常数的电极,用氯化钾标准溶液( A 2 . 2 ) 洗涤5 次后,插人盛放氯化钾标准溶液( A 2 . 2 )的烧杯中,测量一定温度下的电导率,即可计算出电极的电极常数。
电极常数=K / S ··············”··…( A I )式中: K—一定温度下氯化钾标准溶液的电导率,可从G B 6 6 8 2 附录A中查出。
S —同一实验条件下,测出的氯化钾标准溶液的电导。
注: 有的电导率仪出厂时已标明配套电极的电极常数,可直接进行电极常数的补偿校正。
若未知电极的电极常数,则可用本法A l i 定菌落总数测定6.1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:6.1.1恒温培养箱:36℃±1℃,30℃±1℃。
6.1.2冰箱:2℃~5℃。
6.1.3恒温水浴箱:46℃±1℃。
6.1.4天平:感量0.1 g。
6.1.5均质器。
6.1.6振荡器。
6.1.7 无菌吸管:1 m L(具有0.01 m L刻度)、10 m L(具有0.1m L刻度)或微量移液器及吸头。
6.1.8无菌锥形瓶:容量250 m L、500 m L。
6.1.9无菌培养皿:直径90 mm。
6.1.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
6.1.11放大镜或(和)菌落计数器。
6.2 培养基和试剂6.2.1平板计数琼脂培养基。
6.2.2磷酸盐缓冲液。
6.2.3无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min。
6.2.4 1mol/L氢氧化钠(NaOH):称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中。
6.2.5 1mol/L盐酸(HCl):移取浓盐酸90mL,用蒸馏水稀释至1000mL。
6.2.6菌落总数测试片和压板。
6.3 检验程序菌落总数的检验程序见下图。
6.4 操作步骤6.4.1样品的稀释6.4.1.1以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。
6.4.1.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。
6.4.1.3按6.4.1.2操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次,换用一次1mL无菌吸管或吸头。
6.4.1.4根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加入两个无菌平皿内。
同时分别取1mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。
6.4.1.5及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
6.4.2培养6.4.2.1琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1℃培养48h±2h。
6.4.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(4m L),凝固后翻转平板,按6.4.2.1条件进行培养。
6.4.3菌落计数可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units,CFU)表示。
6.4.3.1选取菌落数在30 CFU~300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30 CFU的平板记录具体菌落数,大于300的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.4.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
6.4.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
6.5 结果的表述6.5.1菌落总数的计算方法6.5.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(或毫升)中菌落总数结果。
6.5.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按下式计算:N =∑C/(n1+0.1n2)d式中: N——样品中菌落数;∑C——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;n1——第一个适宜稀释度平板上的菌落数;n2——第二个适宜稀释度平板上的菌落数;d——稀释因子(第一稀释度)。
6.5.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
6.5.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
6.5.1.5若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
6.5.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30~300之间,其中一部分小于30或大于300时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
6.5.2菌落总数的报告6.5.2.1菌落数在100以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告。
6.5.2.2大于或等于100时,第三位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前两位数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
6.5.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。
6.5.2.4若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
6.5.2.5称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。
7 大肠菌群计数7.1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:7.1.1 恒温培养箱:36℃±1℃。
7.1.2冰箱:2℃~5℃。
7.1.3恒温水浴箱:46℃±1℃。
7.1.4天平:感量0.1 g。
7.1.5均质器。
7.1.6振荡器。
7.1.7无菌吸管:1 m L(具有0.01 m L刻度)、10 m L(具有0.1m L刻度)或微量移液器及吸头。
7.1.8无菌锥形瓶:容量500 m L。
7.1.9无菌培养皿:直径90 mm。
7.1.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
7.1.11菌落计数器。
7.2 培养基和试剂7.2.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤。
7.2.2 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。
7.2.3 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。
7.2.4 磷酸盐缓冲液。
7.2.5 无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min。
7.2.6 1mol/L氢氧化钠(NaOH):称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中。
7.2.7 1mol/L盐酸(HCl):移取浓盐酸90mL,用蒸馏水稀释至1000mL。
7.3 检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见下图。
7.4 操作步骤7.4.1样品的稀释7.4.1.1液体样品,以以无菌吸管吸取25 mL样品,置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。
7.4.1.2样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间,必要时分别用1mol/L氢氧化钠(NaOH)或1mol/L盐酸(HCl)调节。
7.4.1.3 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。
7.4.1.5 根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。
7.4.2初发酵试验每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每管接种1mL(如接种量超过1mL,则用双料LST肉汤),36℃±1℃培养24h±2h,观察倒管内是否有气泡产生,如未产气则继续培养至48h±2h。
记录在24h和48h内产气的LST 肉汤管数。
未产气者为大肠菌群阴性,产气者则进行复发酵试验。