流产组织染色体异常检测
NGS染色体异常基因检测
NGS染色体异常基因检测—1M报告技术的发展非常的迅猛，在生命科学领域的重要性也是不言而喻的。
我们知道近些年来全球癌症的发病率是非常高的，为了早日攻克这一世界性的难题，医疗科技的进步也是非常重要的，我们来简单的了解一下Ngs基因检测是什么意思?Ngs检测高通量测序技术(High-throughput sequencing)又称Ngs检测，属于高通量测序技术的简称，也被称为下一代测序技术，近些年来基因检测“下一代”测序技术("Next-generation" sequencing technology)，以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。
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Ngs基因检测高通量测序经过近十年来的迅猛发展，已经深入到生命科学的各个领域，不仅有力地推动了基础研究的发展，也在逐渐征服临床应用。
与Sanger法为代表的传统测序法相比，高通量测序技术在处理大规模样品时具有显著的优势，又快(两天)又多(数百万克隆)，成为目前组学研究的主要技术。
当前主要的测序技术平台，主要分为：1、solexa测序技术(即大家耳熟能详的illumina测序平台);2、454测序技术(读长长，但是准确度较低，成本较高，即焦磷酸测序技术，少量市场占有);3、solid测序技术(双色编码技术，目前基本在市场上见不到了)Ngs基因检测什么意思根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序(Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆(Polony Sequencing)、454焦磷酸测序(454 pyrosequencing)、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序(Ion semiconductor sequencing)、DNA 纳米球测序(DNA nanoball sequencing)等。
211131305_自然流产及指征引产组织与染色体异常的关系
㊃论著㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2023.08.010自然流产及指征引产组织与染色体异常的关系*胡勤,叶强,周子靖,金朝ә四川省自贡市妇幼保健院检验科,四川自贡643000摘要:目的探讨自然流产及指征引产组织与染色体异常的关系㊂方法采用低深度高通量全基因组拷贝数变异测序(C N V-S e q)技术对自然流产组织和指征引产胎儿组织进行染色体检测,其中自然流产标本141例,指征引产标本69例㊂结果自然流产组织141例,指征引产组织69例均检测成功㊂141例自然流产组织中染色体异常65例,检出率为46.10%,其中染色体数目异常46例,意义不明或良性结构异常12例,致病性结构异常7例;69例指征引产组织中染色体异常28例,检出率为40.58%,其中染色体数目异常13例,意义不明或良性结构异常10例,致病性结构异常5例㊂结论染色体异常(数目和结构)是导致自然流产和指征引产的主要原因,采用C N V-S e q技术检测自然流产和指征引产组织有利于查找遗传学病因,对再次生育指导有重要意义㊂关键词:低深度高通量全基因组拷贝数变异测序;稽留流产;指征引产;染色体异常中图法分类号:R715.5;R714.21文献标志码:A文章编号:1672-9455(2023)08-1063-05A n a l y s i s o f c h r o m o s o m a l a b n o r m a l i t i e s i n s p o n t a n e o u s a b o r t i o n a n d r e f e r e n c e a b o r t i o n t i s s u eb y w h o l e g e n o m ec o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g*HU Q i n,Y E Q i a n g,Z H O U Z i j i n g,J I N Z h a oәD e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y,Z i g o n g M a t e r n a l a n d C h i l d H e a l t h C a r eH o s p i t a l,Z i g o n g,S i c h u a n643000,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n s p o n t a n e o u s a b o r t i o n t i s s u e,c i t a t i o n a n d c h r o m o s o m a l a b n o r m a l i t i e s.M e t h o d s L o w d e p t h a n d h i g h t h r o u g h p u t c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g (C N V-S e q)t e c h n i q u e w a s u s e d t o d e t e c t c h r o m o s o m e s i n s p o n t a n e o u s a b o r t i o n t i s s u e s a n d r e f e r e n c e f e t u s e s, i n c l u d i n g141c a s e s o f s p o n t a n e o u s a b o r t i o n t i s s u e a n d69c a s e s o f i n d u c e d l a b o r t i s s u e.R e s u l t s A t o t a l o f141 c a s e s o f s p o n t a n e o u s a b o r t i o n t i s s u e a n d69c a s e s o f i n d u c e d l a b o r t i s s u e w e r e d e t e c t e d s u c c e s s f u l l y.T h e r e w e r e65c a s e s o f c h r o m o s o m e a b n o r m a l i t y i n s p o n t a n e o u s a b o r t i o n(46.10%),i n c l u d i n g46c a s e s o f c h r o m o-s o m e a b n o r m a l i t y,12c a s e s o f u n k n o w n o r b e n i g n s t r u c t u r a l v a r i a t i o n,7c a s e s o f p a t h o g e n i c s t r u c t u r a l v a r i a-t i o n.A t o t a l o f28c a s e s o f c h r o m o s o m e a b n o r m a l i t y(40.58%)w e r e i d e n t i f i e d,i n c l u d i n g13c a s e s o f c h r o m o-s o m e a b n o r m a l i t y a n d5c a s e s o f p a t h o g e n i c s t r u c t u r a l v a r i a t i o n.C o n c l u s i o n C h r o m o s o m e a b n o r m a l i t y(n u m-b e r a n d s t r u c t u r e)i s t h e m a i n c a u s e o f s p o n t a n e o u s a b o r t i o n a n d i n d u c t i o n o f l a b o r.T h e d e t e c t i o n o f a b o r t i o n a n d i n-d u c t i o n o f l a b o r b y c h r o m o s o m e c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g t e c h n o l o g y i s h e l p f u l t o f i n d t h e g e n e t i c c a u s e, w h i c h i s o f g r e a t s i g n i f i c a n c e f o r f e r t i l i t y g u i d a n c e a g a i n.K e y w o r d s:h i g h-t h r o u g h p u t w h o l e g e n o m e c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g; d e l a y e d a b o r t i o n;r e-f e r s t o t h e i n d u c t i o n o f l a b o r;c h r o m o s o m a l a b n o r m a l i t y自然流产指非人为目的造成的流产,在所有临床妊娠中,大约15%会发生自然流产[1]㊂近年来有研究表明,高龄㊁生殖器官异常㊁黄体功能不全㊁配偶精子异常㊁妊娠感染㊁初产妇㊁自然流产史及不良生活习惯等均是自然流产的主要危险因素[2]㊂从遗传学角度分析,染色体异常可导致自然流产,并且可增加后续妊娠失败和其他并发症的发生率㊂国外有研究表明, 50%的自然流产存在染色体异常,包括嵌合体㊁结构和数目异常,如三体㊁单体㊁多倍体和X单体[3]㊂因此,分析流产组织中的染色体有助于了解终止妊娠的病因,以及改善自然流产患者后续妊娠的管理㊂在所有孕妇中,胎儿结构异常占3%,几十年来,基于超声波的筛查一直是常规产前检查的组成部分,可发现明显的结构异常,临床推荐引产并查找畸形原因[4]㊂大约一半的主要结构异常可以在妊娠前3个月检测到,包括颅内/无脑畸形㊁腹壁缺陷㊁前脑无裂畸形和囊性水瘤等㊂然而,由于有些器官㊁系统的持续发展,部分异常直到怀孕后期才会显现出来㊂随着检查能力及经㊃3601㊃检验医学与临床2023年4月第20卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2023,V o l.20,N o.8*基金项目:四川省自贡市科学技术局重点项目(2019Y L S F35)㊂作者简介:胡勤,女,主管技师,主要从事产前诊断的分子遗传学及新生儿遗传代谢性疾病方面的研究㊂ә通信作者,E-m a i l: 452672995@q q.c o m㊂Copyright©博看网. All Rights Reserved.验的增加,让中枢神经系统和心血管系统的详细检查成为可能,目前在有产前诊断资质的机构广泛进行胎儿神经超声图和胎儿超声心动图等专门检查㊂当产前检查发现重大结构异常时,建议使用染色体芯片或者全基因组拷贝数变异测序技术进行基因检测,因为它具有更高的基因组分辨率[5]㊂本研究选取自然流产组织和指征引产胎儿组织,采用低深度高通量全基因组拷贝数变异测序(C N V-S e q)技术检测其染色体,并分析染色体与自然流产组织及指征引产胎儿组织的关系,现报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料选取2019年1月至2020年12月于本院就诊孕妇的141例流产组织和69例胎儿组织作为研究对象,临床诊断为自然流产排出的绒毛组织㊁稽留流产行清宫术后留取的标本及有临床指征需要引产的胎儿组织㊂其中自然流产标本141例,指征引产标本69例㊂自然流产组织孕妇平均年龄(29.89ʃ4.45)岁,受检时平均孕周(9.50ʃ1.52)周,平均自然流产次数(1.29ʃ0.94)次;指征引产组织孕妇平均年龄(27.28ʃ3.88)岁,受检时平均孕周(20.52ʃ5.82)周㊂所有患者均知情同意并签署知情同意书,本研究经本院伦理委员会审核批准㊂1.2方法1.2.1取样自然流产组织为小孕周时,取约10 m g新鲜绒毛组织;可见胎儿组织时,取1c mˑ1c m 胎儿组织标本㊂使用生理盐水多次漂洗,除去血液㊁污物后剪碎㊂1.2.2基因组D N A提取采用博奥生物集团试剂盒提取基因组D N A,裂解液和蛋白酶K消化组织过夜,后续纯化和收集D N A,用于高通量测序检测; N a n o D r o p2000(美国T h e r m o F i s h e r s c i e n t i f i c I N C)测定D N A浓度,保证建库用量大于600n g,A260/A280为1.8~2.0,置于-70ħ冰箱储存备用,避免标本D N A反复冻融㊂1.2.3基因组建库将600n g基因组D N A通过片段化酶消化为片段,将末端修复,加上特异序列标签后扩增短片段,采用S Y B G r e e n实时荧光定量技术检测,为测序做准备㊂1.2.4测序检测及结果判读采用博奥生物集团I o n T o r r e n t测序平台对标本进行检测,严格按照实验室标准操作规程进行,设置检测400个F l o w s㊂芯片质控I S P L o a d i n g>75%,P o l y c l o n a l<35%,L o w Q u a l i t y<10%,T o t a l R e a d s>75M b,每个标本数据量>3.5M b㊂对染色体非整倍体及ȡ5M b的微缺失和微重复进行分析㊂通过人类染色体不平衡和表型数据库D E C I P H E R(h t t p s://d e c i p h e r.s a n g e r.a c. u k/i n d e x)㊁C l i n G e n(h t t p s://w w w.c l i n i c a l g e n o m e. o r g)㊁在线人类孟德尔遗传数据库(OM I M,h t t p s:// w w w.o m i m.o r g)和基因组变异数据库(D G V,h t-t p://d g v.t c a g.c a/d g v/a p p/h o m e)等公共数据库进行比对分析,判断所检出C N V的性质,进行结果判读㊂参照美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南[6],将检测标本中发现的C N V s分为以下5个级别:明确致病性C N V㊁可能致病C N V㊁良性C N V㊁可能良性C N V㊁临床意义不明C N V㊂2结果2.1自然流产组织和指征引产组织检出率及染色体异常结果比较纳入本研究的141例自然流产组织和69例指征引产组织均检测成功,数据达到质控标准㊂染色体异常93例,检出率为44.29%(93/210)㊂141例自然流产组织中染色体异常65例,检出率46.10%,其中染色体数目异常46例,致病性结构异常7例,意义不明或良性结构异常12例㊂69例指征引产组织中染色体异常28例,检出率40.58%,其中染色体数目异常13例,致病性结构异常5例,意义不明或良性结构异常10例㊂2.2染色体数目异常分析(1)65例自然流产组织染色体异常中染色体数目异常46例,占异常染色体的70.77%,其中三体型33例,单体型11例(T u r n e r 综合征10例,21号染色体单体1例),三倍体2例(多重S T R位点分析验证一致)㊂(2)28例指征引产组织染色体异常中染色体数目异常13例,占异常染色体的46.43%,其中三体型9例,单体型4例,均为T u r n e r综合征㊂9例三体中有7例为18号染色体三体,均因为B超检查提示异常而进一步进行诊断,其中4例胎儿水肿合并淋巴水囊瘤,2例胎儿多发畸形, 1例胎儿为足内翻;另外2例三体分别为13号染色体三体和21号染色体三体,表现为胎儿唇裂㊁全身水肿和先天性心脏病㊂4例T u r n e r综合征均表现为水肿㊁淋巴水囊瘤㊂见表1㊂表1 C N V-S e q技术检测流产组织染色体数目异常结果[n(%)]检测结果描述自然流产组织数目异常(n=46)指征引产组织数目异常(n=13)S e q(2)ˑ32号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(5)ˑ35号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(6)ˑ36号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(7)ˑ37号染色体三体2(4.35)0(0.00)S e q(8)ˑ38号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(9)ˑ39号染色体三体6(13.04)0(0.00)㊃4601㊃检验医学与临床2023年4月第20卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2023,V o l.20,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.续表1 C N V-S e q技术检测流产组织染色体数目异常结果[n(%)]检测结果描述自然流产组织数目异常(n=46)指征引产组织数目异常(n=13) S e q(12)ˑ312号染色体三体3(6.52)0(0.00)S e q(13)ˑ313号染色体三体4(8.70)1(7.69)S e q(15)ˑ315号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(16)ˑ316号染色体三体8(17.39)0(0.00)S e q(17)ˑ317号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(18)ˑ318号染色体三体1(2.17)7(53.85)S e q(20)ˑ320号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(21)ˑ121号染色体单体1(2.17)0(0.00)S e q(21)ˑ321号染色体三体1(2.17)1(7.69)S e q(22)ˑ322号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(x o)ˑ1T u r n e r综合征10(21.74)4(30.77)三倍体69,X X Y三倍体2(4.35)0(0.00)2.3染色体致病性结构异常组织分析自然流产组织染色体结构异常19例,其中致病性结构异常7例;指征引产组织染色体结构异常15例,其中致病性结构异常5例㊂见表2㊂表2 C N V-S e q技术检出的致病性结构异常组织分析致病性结构异常组织结果描述自然流产组织1S e q[h g19]3q29(193.04~197.84M b)ˑ3,S e q[h g19]5q35.2q35.3(174.70~180.72M b)ˑ1, S e q[h g19]22q11.1q11.2(17.06~18.62M b)ˑ33号染色体q29(193.04~197.84M b)位置存在约4.80M b的拷贝数重复;5号染色体q35.2q35.3(174.70~180.72M b)位置存在约6.02M b的拷贝数缺失; 22号染色体q11.1q11.21(17.06~18.62M b)位置存在约1.56M b的拷贝数重复㊂根据C N V评判标准,综合认定这3个位置的变异均为致病性C N V㊂自然流产组织2S e q[h g19]d e l(8)(p23.3p11.23), S e q[h g19]d u p(8)(q12.1q24.3)m o s 8号染色体p23.3p11.23(0.16~38.30M b)位置存在约38.14M b的拷贝数缺失;同时8号染色体q12.1q24.3(61.50~146.30M b)位置存在约84.80M b的拷贝数重复(拷贝数为2.6)㊂根据C N V评判标准,综合认定这2个位置的变异均为致病性C N V自然流产组织3S e q[h g19]X q25(122.90~123.18M b)ˑ1X染色体q25(122.90~123.18M b)位置存在约0.28M b的拷贝数缺失,临床表型特征为:X-连锁淋巴增生综合征2型自然流产组织4S e q[h g19]d e l(11)(q13.3q14.1)11号染色体q13.3q14.1(69.30~82.90M b)位置存在约13.60M b的拷贝数缺失,常见特征包括发育迟缓㊁智力障碍㊁行为问题和独特的面部特征自然流产组织5S e q[h g19]2p25.3(0.02~3.04M b)ˑ3,S e q[h g19]13q21.2q34(61.58~115.10M b)ˑ12号染色体p25.3(0.02~3.04M b)位置存在约3.02M b的拷贝数重复,为临床意义不明确C N V;13号染色体q21.2q34(61.58~115.10M b)位置存在约53.52M b的拷贝数缺失,为致病性C N V自然流产组织6S e q[h g19]3q29(195.66~197.34M b)ˑ13号染色体q29(195.66~197.34M b)位置存在约1.68M b的拷贝数缺失,为致病性C N V自然流产组织7S e q[h g19]6p25.3p24.3(0.14~9.40M b)ˑ1, S e q[h g19]6q13q27(71.50~170.92M b)ˑ3[50%]6号染色体p25.3p24.3(0.14~9.40M b)位置存在约9.26M b的拷贝数缺失;同时6号染色体q13q27(71.50~170.92M b)位置存在约99.42M b拷贝数嵌合重复,嵌合比例约为50%㊂根据C N V评判标准,综合认定这2个位置的变异均为致病性C N V指征引产组织1S e q[h g19]3q22.3q25.1(138.08~151.16M b)ˑ13号染色体q22.3q25.1(138.08~151.16M b)位置存在约13.08M b的拷贝数缺失,为致病性C N V指征引产组织2S e q[h g19]10q23.2q26.3(88.70~135.44M b)ˑ310号染色体q23.2q26.3(88.70~135.44M b)位置存在约46.74M b的拷贝数重复,为致病性C N V指征引产组织3S e q[h g19]11q24.2q25(124.30~134.94M b)ˑ111号染色体q24.2q25(124.30~134.94M b)位置存在约10.64M b的拷贝数缺失,为致病性C N V指征引产组织4S e q[h g19]8p23.2(2.34~2.78M b)ˑ3,S e q[h g19]17p13.3p13.2(2.48~3.80M b)ˑ18号染色体p23.2(2.34~2.78M b)位置存在约0.44M b的拷贝数重复,为临床意义不明确C N V;常染色体17号染色体p13.3p13.2(2.48~3.80M b)位置存在片段大小约1.32M b的拷贝数缺失,为致病性C N V指征引产组织5S e q[h g19]d u p(10)(q23.2q26.3)10号染色体q23.2q26.3(88.70~135.44M b)位置存在约46.74M b的拷贝数重复,为致病性C N V㊃5601㊃检验医学与临床2023年4月第20卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2023,V o l.20,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.3讨论染色体病是由于先天性染色体数目异常或结构异常导致的具有多发畸形㊁发育迟缓等一系列临床症状的疾病[7]㊂不明原因流产及指征引产主要原因为染色体数目异常,这与本研究结果一致,不明原因流产组织中32.62%是由于染色体数目异常导致的,指征引产组织中18.84%是因为染色体数目异常引起的[7]㊂C N V-s e q技术除了能检测染色体非整倍体问题外,还可以检测>5M b的染色体微小拷贝数变异,目前,C N V-s e q技术被应用于生长发育迟缓㊁多发畸形㊁智力障碍等表现的儿童㊁成人罕见病或者自然流产物㊁指征引产物原因分析,可对产前诊断中核型结果异常进行分析,但无法对异常片段的来源进行D N A水平分析,还可对产前超声检查异常而染色体核型分析结果正常的胎儿进行进一步遗传学检测等[8-9]㊂本研究结果显示,自然流产组织染色体数目异常46例,占异常染色体的70.77%(46/65),其中三体型33例,单体型11例(T u r n e r综合征10例,21号染色体单体1例),三倍体2例㊂不明原因自然流产高发原因核型分别为X O㊁T16㊁T9等,这些三体或单体核型还存在不同程度的嵌合,46例染色体数目异常标本中13例为嵌合体㊂指征引产组织染色体数目异常13例,占异常染色体的46.43%(13/28),其中三体型9例;单体型4例,均为T u r n e r综合征㊂9例三体中有7例为18号染色体三体,均因为B超检查提示异常而进一步进行诊断,其中4例胎儿水肿合并淋巴水囊瘤,2例胎儿多发畸形,1例胎儿为足内翻;另外2例三体分别为13号染色体三体和21号染色体三体,表现为胎儿唇裂㊁全身水肿和先天性心脏病㊂4例T u r n e r综合征均表现为水肿㊁淋巴水囊瘤㊂除染色体数目异常外,本研究还发现染色体结构异常,结构异常会表现出较为严重的临床症状㊂自然流产组织染色体结构异常19例,其中致病性结构异常7例㊂有1例自然流产组织受检原因为孕妇反复稽留流产3次,孕妇35岁,第4次怀孕同样不明原因流产,检测结果有3个染色体片段异常:(1)3号染色体q29(193.04~197.84M b)位置存在约4.80M b的拷贝数重复,q29区域共涉及41个蛋白编码基因,包含10个已知的M o r b i d基因,该区域重复完全覆盖 3q29微重复综合征 (3:195726835-197344663,约1.61M b;OM I M611936),大部分由父母一方遗传,少数为新发突变㊂个体间临床表型存在差异,该重复为致病性结构变异㊂(2)5号染色体q35.2q35.3 (174.70~180.72M b)位置存在约6.02M b的拷贝数缺失,5号染色体q35.2q35.3区域完全覆盖 5q35复发(S o t o s综合征)区域(包括N S D1) (c h r5:175,728,979-177,047,793),C l i n G e n数据库单倍剂量不足,评分为3分,目前有足够证据表明其发生一个拷贝数的缺失可以导致疾病,单倍剂量不足关联 S o t o s 综合征 ,又称小儿巨脑畸形综合征,主要临床表型特征包括特殊面容㊁学习障碍㊁过度生长等[10],为致病性C N V㊂(3)22号染色体q11.1q11.2(17.06~18.62 M b)位置存在约1.56M b的拷贝数重复,22号染色体q11.1q11.2区域完全覆盖 22q11.2复发(猫眼综合征)区域(包括C E C R2) (c h r22:17,392,953-18, 591,860),C l i n G e n数据库三倍剂量敏感评分为3分,敏感关联的表型为 猫眼综合征 (OM I M115470)[11]㊂ 猫眼综合征 是一种罕见的染色体疾病,具有高度可变的临床表现,主要临床特征:虹膜缺损和肛门闭锁合并瘘管,下斜睑裂,耳前皮赘和/或凹陷,心脏畸形和肾畸形频发,精神发育正常或接近正常[11],该重复为致病性C N V㊂综合3个位置的染色体结构异常,评估该标本的异常可能源自父母染色体易位,存在一定再发风险㊂经过与产前诊断中心和生殖中心沟通,建议该对夫妇进行胚胎移植前诊断技术(第3代试管婴儿)㊂指征引产组织染色体结构异常15例,其中致病性结构异常5例,1例因B超检查显示胎儿颅内结构发育异常引产,分子诊断为S e q[h g19]8p23.2(2.34~ 2.78M b)ˑ3,S e q[h g19]17p13.3p13.2(2.48~3.80 M b)ˑ1,8号染色体约0.44M b的拷贝数重复,17号染色体约1.32M b的拷贝数缺失㊂8号染色体p23.2区域不涉及蛋白编码基因,不包含已知的M o r b i d基因,为临床意义不明确C N V;17号染色体p13.3p13.2区域共涉及17个蛋白编码基因,包含5个已知的M o r b i d基因:其中P A F A H1B1基因的单倍剂量不足,评分为3分,有足够证据表明其发生一个拷贝的缺失可以导致疾病,单倍剂量不足关联 经典无脑畸形 (MO N D O:0015146),为致病性C N V,所以该胎儿B超检查显示颅内结构异常的原因可能是17号染色体发生缺失引起的㊂染色体微小的结构异常涉及重要基因同样导致严重的疾病及表型,当然C N V-S e q技术只能检测到染色体>5M b的非整倍体问题,对于整倍体和平衡性易位等问题导致的流产会漏检,所以临床常推荐C N V-s e q技术与染色体核型分析联合应用,虽然染色体核型分辨率较C N V-S e q技术差,但能检测整倍体和平衡性易位等染色体异常,两种技术互补应该可以提高检出率㊂染色体微阵列分析技术是胎儿超声影像检查异常时的首选推荐检测方法,是利用涵盖大量染色体重要片段的高密度D N A探针与经荧光标记的样品D N A特异性杂交,从而获得样品分子的序列和数量等信息,除了检测拷贝数变异外,该方法还可以查出单亲二倍体㊁杂合性缺失㊁三倍体或多倍体,但因㊃6601㊃检验医学与临床2023年4月第20卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2023,V o l.20,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.芯片上探针有限,范围不如C N V-S e q技术广㊂每种技术均有其优势与局限性,各种技术联合检测是最理想的状态,但现实是患者会根据自己的经济情况只选择其一,这也是本研究的局限性,没有完全统计各种检测技术的检出率及漏检情况㊂通过累计更多的检测数据,希望可以进一步完善该研究㊂产前诊断方法多样化可以避免因检测方法局限而漏诊,完善出生缺陷二级预防㊂综上所述,染色体异常(数目和结构)是造成自然流产和指征引产的主要原因,C N V-s e q作为新的分子检测技术,通过对染色体非整倍体问题及>5M b的染色体微小拷贝数变异进行分析,可快速㊁有效地检测流产和引产组织的遗传学病因,对再次生育指导具有重要意义㊂参考文献[1]B I Y I K I,A L B A Y R A K M,K E S K I N F.P l a t e l e t t o l y m-p h o c y t e r a t i o a n d n e u t r o p h i l t o l y m p h o c y t e r a t i o i n m i s s e d a b o r t i o n[J].R e v B r a s G i n e c o l O b s t e t,2020,42(5):235-239.[2]G O N G G F,Y I N C X,HU A N G Y Q.A s u r v e y o f i n f l u-e n c i n gf a c t o r s o f m i s s e d a b o r t i o n d u r i ng th e t w o-c hi l d p e a k p e r i o d[J].J O b s t e t G y n a e c o l,2021,41(6):977-980.[3]L I F X,X I E M J,Q U S F,e t a l.D e t e c t i o n o f c h r o m o s o m a la b n o r m a l i t i e s i n s p o n t a n e o u s m i s c a r r i a g e b y l o w c o v e r a g e n e x t g e n e r a 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分子生物学技术检测自然流产组织染色体异常
胞 钙 水 平 和脂 质 过 氧 化 的 影 响 ［ Ｊ ］ ． 环境科学学报 ， ２ ０ ０ ５ ， ２ ５ （ ６ ） ：
８ ４ ５ ．
［ ５ ２ ３ Ｋｉ ｍ Ｙ Ｋ， Ｊ ｕ ｎ ｇ ｊ ｓ ， Ｌｅ ｅ Ｓ Ｈ， ｅ ｔ ａ １ ．Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ
Ｃ ａ ｉ ｎ ｃ ｉ ｓ ｐ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ － ｉ ｎ ｄ ｅ ｅ ｄ ｃ ｅ ｌ ｌ ｉ ｎ ｊ ｕ ｒ ｙ ｉ ｎ ｒ ａ ｂ ｂ ｉ ｔ ｒ ｅ ｎ ａ ｌ ｃ ｏ ｒ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｌ ｉ ｃ ｅ ｓ
【 收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３ —０ ９ —２ ５ ）
ｉ ａ ｅ ［ Ｊ ］ ． Ａｍ Ｊ Ｒｅ ｓ ｐ ｉ ｒ Ｃｅ ｌ ｌ Ｍｏ ｌ Ｂ ｉ ｏ ｌ ， ２ ０ ０ ７ ， ３ ６ （ ４ ） ： ４ ６ ０ ． ［ ５ ４ ］ Ｌ ｕ ｎ ｄ ｂ ｏ ｒ ｇ Ｍ， Ｄａ ｈ ｌ ６ ｎ Ｓ Ｅ， Ｊ ｏ ｈ ａ ｒ ｄ Ｕ， ｅ ｔ ａ １ ． Ａｇ ｇ ｒ ｅ ｇ ａ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｆ ｉ ｎ ｅ
终止 者 ， 发病 的几率 约 为 １ ５ 一 ４ Ｏ ｌ １ ］ 。在 导致早 期
自然 流 产 的众 多 因 素 中最 常 见 的 是染 色体 的异 常 ，
约占６ ０ ９ ／ ６ ］ 。本 文 就 近 几 年 对 染 色 体 异 常 的多 种
一
３ ３ ８ 一
Ｃｈ ｉ ｎ Ｊ Ｌａ ｂ Ｄｉ ａ ｇ ｎ， Ｆｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ， ２ ０ １ ４， Ｖｏ ｌ １ ８ ， Ｎｏ ． ２
ｅ ｐ ｉ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｔ ｏ ｗｅ ｌ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｅ ｄ ｆ ｉ ｎ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ ｓ ［ Ｊ ］ ． Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ， １ ９ ９ ８，
420例流产物染色体核型分析
终止的情况。有文献报道临床诊断妊娠者发生流产的概
流产是指妊娠不足 28 周、胎儿体重不足 1 000g 而
计划生育门本院人体研究伦理委员会批准。 1.2 方法
的宫腔搔刮或负压抽吸的流产物，并存于密封的容器。 由 高 年 资 的 细胞遗传 学研 究者分 离 流 产
Cytogenetic analysis of miscarriage samples , China 【 Abstract 】 Objective Results To examine the chromosome abnormalities in miscarriage samples. Methods Tissue samples were collected from uterine curettage or vocuum suction in 420 miscarriage patients, and the karyotype analysis was performed. There were 145 cases of normal results (34.5%), 230 cases of abnormal results (54.8%), and in 45 samples there was no cell growth (10.7%). In 230 abnormal samples numerical abnormalities were the most frequent, including 16-trisomy (42 cases), triploidy (28 cases), monosomy X (25 cases), tetraploidy (12 cases) and 15-trisomy (12 cases); the other abnormalities were chromosome deletion, duplication, insertion and translocation. miscarriages and 16-trisomy is the most frequent one. 【 Key words 】 Karyotype analysis Miscarriage Chromosomal alterations Conclusion Cytogenetic alterations are important cause of
高通量测序在稽留流产绒毛组织染色体检测中的应用分析
高通量测序在稽留流产绒毛组织染色体检测中的应用分析熊英;谭世桥;吕康模【摘要】目的:应用新一代高通量测序技术对稽留流产患者绒毛组织染色体进行分析,为临床诊治提供依据.方法:选择本院行手术终止妊娠的稽留流产患者作为研究对象,收集绒毛组织标本-80℃保存,解冻检测DNA总量和浓度.构建并获得全基因组重测序文库行Illumina HiSeq平台测序.将高通量测序所得数据进行生物信息学分析,获得染色体拷贝数变异数据,分析稽留流产患者染色体特点.结果:共检测成功54例稽留流产患者绒毛组织,检测成功率88.5％,染色体异常检出率77.8％(42/54).其中染色体数目异常31例(73.8％,31/42),主要为非整倍体数目异常,1例同时有15和18三体异常;染色体结构异常11例(26.2％,11/42).染色体非整倍体检出率57.4％(31/54),其中以X染色体单体(22.6％)及16号染色体三体最为常见(22.6％).染色体双三体1例(1/54).结论:在稽留流产绒毛组织中染色体异常占较大比例,异常多为非整倍体,其中近50％是X染色体单体及16号染色体三体.高通量测序技术不仅可以检测染色体数目和结构异常,还可以检测100kb染色体片段的微缺失和微重复,具有较好的技术优势.【期刊名称】《中国计划生育学杂志》【年(卷),期】2018(026)007【总页数】5页(P607-611)【关键词】稽留流产;绒毛;染色体异常;高通量测序【作者】熊英;谭世桥;吕康模【作者单位】四川省成都市妇女儿童中心医院 610091;四川大学华西第二医院;四川省成都市妇女儿童中心医院 610091【正文语种】中文稽留流产是自然流产的一种特殊类型[1]，在我国的临床发生率为13%，且近年来呈现上升趋势[2]，严重影响孕妇的身心健康。
明确流产病因，有利于缓解孕妇心理负担，有助于对患者进行合理的治疗和遗传咨询，并通过对再次妊娠流产风险的预测，为下一胎优生优育提供科学指导。
染色体拷贝数变异测序联合STR 分型在
[收稿日期]2021-07-26 [修回日期]2022-07-20[基金项目]安徽省重点研究与开发计划项目(202004j07020004)[作者单位]1.安徽医科大学附属合肥医院(合肥市第二人民医院)检验科,安徽合肥230011;2.安徽医科大学附属妇幼保健院医学遗传中心,安徽合肥230001[作者简介]庞 宇(1996-),男,硕士,检验师.[通信作者]朱健生,硕士研究生导师,主任技师,教授.E⁃mail:593130772@[文章编号]1000⁃2200(2022)12⁃1719⁃04㊃检验医学㊃染色体拷贝数变异测序联合STR 分型在流产物遗传学分析中的应用庞 宇1,2,王朝红2,唐俊湘2,王森林2,朱健生2[摘要]目的:对150例流产物进行遗传学检测,并对结果进行分析,为探究自然流产的遗传学病因积累临床资料㊂方法:选择2020年2-7月在安徽省妇幼保健院妇产科就诊的150例自然流产病人,运用拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV⁃Seq)联合短串联重复序列(Short tandem repeats,STR)分型对流产物进行遗传学检测㊂结果:150例流产物均成功检测,染色体正常71例(47.33%),染色体异常79例(52.67%),其中染色体数目异常56例,占染色体异常总数的70.89%,染色体微重复/微缺失4例(2.67%),嵌合体14例(9.33%),染色体数目合并结构异常3例(2.00%),单亲二倍体2例(1.33%)㊂导致自然流产最主要的染色体异常为染色体数目异常(37.33%),包括染色体非整倍体(32.67%)㊁三倍体(4.67%);其次为嵌合体(9.33%)㊂与自然流产密切相关的染色体异常依次为:45,X㊁16⁃三体;69,XNN㊁21⁃三体;18⁃三体;16⁃三体嵌合体㊂结论:CNV⁃Seq 联合STR 技术适用于流产物染色体异常的检测,可覆盖更多范围的染色体异常,能实现更加准确㊁全面的诊断,对明确自然流产的遗传因素,指导孕妇再次备孕,实现优生优育具有重要的意义㊂[关键词]自然流产;拷贝数变异测序;短串联重复序列;染色体数目异常;染色体结构异常[中图法分类号]R 714.55 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2022.12.023Application of chromosome copy number variation sequencing combinedwith STR typing technique in the genetic analysis of abortionPANG Yu 1,2,WANG Chao⁃hong 2,TANG Jun⁃xiang 2,WANG Sen⁃lin 2,ZHU Jian⁃sheng 2(1.Clinical Laboratory ,Hefei Hospital ,Anhui Medical University ,Hefei Second People′s Hospital ,Hefei Anhui 230011;2.MedicalHeredity Research Center ,Affiliated Maternal and Child Health Hospital of Anhui Medical University ,Hefei Anhui 230001,China )[Abstract ]Objective :To explore the genetic causes of spontaneous abortion and accumulate clinical data by genetic detection and analysis of the 150cases of abortion.Methods :A total of 150patients with spontaneous abortion who underwent in the Obstetrics and Gynecology Department of Anhui Province Maternity and Child Health Hospital from February 2020to July 2020were selected.Copy number variation sequencing(CNV⁃Seq)combined with short tandem repeats(STR)typing technique were used to detect the genetic characteristics of abortion.Results :All 150cases of abortion were detected successfully,71cases were normal(47.33%),79cases were chromosomal abnormalities (52.67%).Among them,56cases (70.89%)had chromosome number abnormality,4cases had chromosome microduplication /microdeletion(2.67%),14cases had mosaicisms (9.33%),3cases had chromosome number and structure abnormality(2.00%),and 2cases had uniparental diploid(1.33%).The main chromosomal abnormality which leading to spontaneous abortion was chromosomal number abnormality (37.33%),including chromosome aneuploidy (32.67%)and triploid(4.67%),followed by mosaicisms(9.33%).The chromosomal abnormalities which closely related to spontaneous abortion were (45,X),trisomy 16,(69,XNN),trisomy 21,trisomy18andmosaic trisomy16.Conclusions :CNV⁃Seq combined with STRtyping technique is suitable for the detection of chromosomal abnormalities in abortion.It can cover more chromosomal abnormalities and also can realize more accurate and comprehensive diagnosis in abortion.It has great significance to diagnose the genetic factors for spontaneous abortion,guide pregnant women to prepare for pregnancy againand realize the[14] LU J,SHEN G,LI Q,et al .Genotype distribution characteristicsof multiple human papillomavirus in women from the Taihu River Basin,on the coast of eastern China[J].BMC Infect Dis,2017,17(1):226.[15] YOU W,LI S,DU R,et al .Epidemiological study of high⁃riskhuman papillomavirus infection in subjects with abnormal cytological findings in cervical cancer screening [J].Exp TherMed,2018,15(5):412.(本文编辑 卢玉清)eugenics.[Key words]spontaneous abortion;copy number variation sequencing;short tandem repeats;chromosome number abnormality; chromosome structure abnormality 胚胎染色体异常是导致自然流产的重要原因之一,占自然流产因素的50%~70%[1],主要为染色体数目异常如染色体三体㊁多倍体㊁X染色体单体等,其次为染色体结构异常如染色体微重复/微缺失㊁染色体嵌合体㊁染色体易位等[2]㊂自然流产不仅对女性的健康造成一定的伤害,而且给社会和家庭增加了负担㊂对流产物的染色体检测,为探究流产的病因,指导孕妇下一次备孕,实现优生优育,具有重要的意义,本研究采用拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV⁃Seq)联合短串联重复序列(short tandem repeats,STR)分型的方法,对150例流产物进行遗传学检测,并对结果进行分析,为探究自然流产的遗传学病因积累临床资料㊂1 资料与方法1.1 一般资料 选择2020年2-7月在安徽省妇幼保健院妇产科就诊的150例流产病人㊂其中初发流产63例,复发流产87例,年龄21~44岁;孕6~ 36+6周,超声诊断为胚胎停育,其中流产组织46份,绒毛104份;经遗传咨询,自愿接受流产的病因学检查,留取流产物(流产组织或绒毛)经处理并保存备用,所有病人均签署知情通知书㊂1.2 方法 1.2.1 流产物的CNV⁃Seq测序 送检的流产组织或绒毛,用0.9%氯化钠溶液反复冲洗,尽量去除母体细胞的污染,放置专用试管内,-20℃冰箱保存㊂选取10mg的流产组织或绒毛,应用Qiaqen QIAamp DNA Blood Mini Kit试验盒,提取基因组DNA,利用Covaris S220超声波破碎仪将DNA打断,文库构建㊁纯化㊁定量㊁DNA混合文库在illumina Nocaseq6000测序仪上进行双端测序,利用Nx Clinical生信分析软件对染色体非整倍体及100kb以上的拷贝数变异(CNV)进行分析,对比至人类基因库[hg19]或[GRCh37],并通过OMIM㊁DGV㊁GLINGEN㊁ClinVar㊁PubMed㊁DECIPHER㊁ISCA㊁NCBI㊁UESC等数据库比对,对检测结果进行判读㊂1.2.2 流产物STR分型检测 把DNA样本进行多重荧光PCR扩增,将其产物在ABI3500Dx遗传分析仪上进行毛细管电泳,检测出不同分型的相对定位,应用Genc Mapper软件对结果进行计算分析㊂2 结果2.1 流产物染色体检测结果 本研究检测流产物150例,均成功检测,检测成功率100%,染色体正常71例(47.33%),染色体异常79例(52.67%)(见表1)㊂2.2 染色体非整倍体㊁多倍体㊁嵌合体检测结果 本研究共检出染色体非整倍体49例(染色体三体38例,X染色体单体11例);多倍体7例(69,XXY, 4例;69,XXX,3例),染色体数目异常在X㊁16㊁21号染色体发生率较高;嵌合体14例,其中16㊁X号染色体嵌合体发生率较高(见表2)㊂表1 不同类型染色体异常的检测结果染色体异常类型具体异常情况n占总数比例/%染色体数目异常染色体非整倍体4932.67多倍体7 4.67染色体结构异常染色体微重复/微缺失4 2.67染色体嵌合体嵌合三体10 6.67嵌合单体2 1.33多条染色体嵌合2 1.33纯合区域单亲二倍体2 1.33两种类型及以上异常染色体数目+结构异常3 2.00合计7952.67表2 150例流产物染色体非整倍体㊁多倍体㊁嵌合体检测结果检测结果n占总数比例/% 45,X117.33 69,XXY4 2.67 69,XXX3 2.00 47,XN,+310.67 47,XN,+43 2.00 47,XN,+52 1.33 47,XN,+1310.67 47,XN,+142 1.33 47,XN,+153 2.00 47,XN,+1610 6.67 47,XN,+185 3.33 47,XN,+2010.67 47,XN,+216 4.00 47,XN,+2210.67 49,XN,+3,+14,+510.67 48,XN,+7,+202 1.33 46,XN/45,X2 1.33续表2检测结果n 占总数比例/%46,XN /47,XN,+32 1.3346,XN /47,XN,+510.6746,XN /47,XN,+610.6746,XN /47,XN,+710.6746,XN /47,XN,+164 2.6746,XN /47,XN,+2110.67多条染色体嵌合体21.332.3 染色体CNV 的检测结果 本研究共检出染色体微重复/微缺失4例(2.67%),同时存在染色体数目㊁结构异常3例(2.00%)㊂涉及1㊁13㊁14㊁17㊁18号染色体,经数据库查询,均存在不同类型的致病性表型(见表3)㊂3 讨论 基于高通量测序的CNV⁃Seq 对流产物染色体的测序,是通过将目标染色体的DNA 剪切成小片段,构建文库,PCR 扩增,以及遗传学信息检测,克服了传统细胞核型技术的染色体制备不良㊁培养失败㊁分辨率低等缺点,对染色体非整倍体和染色体CNV 可以提供更加准确的遗传学信息,但对染色体多倍体㊁单亲二倍体㊁母源性细胞污染的鉴别仍显不足[3]㊂而STR 分型方法是设计荧光引物扩增特定的序列,再进行毛细管电泳,由荧光峰值面积来表达产物扩增的数量,通过等倍基因的剂量变化,来诊断染色体数目异常,对排除母源性细胞污染,以及染色体多倍体㊁单亲二倍体㊁性染色体数目异常的诊断具有快速㊁准确的特点,可弥补CNV⁃Seq 的不足[4]㊂CNV⁃Seq 联合STR 分型方法应用于流产物染色体异常的检测,可覆盖更大范围的染色体异常,能实现对流产物的遗传信息更加准确㊁全面的诊断,为合理备孕提供科学的依据㊂表3 流产物染色体CNV 的检测结果序号年龄/岁孕周/周孕产史就诊原因检测结果致病性分析1298+3G1P0胚胎停育Seq[GRCh37]1q21.1q21.2(145866610⁃147915109)X1发育迟缓,先天性心脏病,面部畸形,成人期精神分裂症23911+5G4P1胚胎停育Seq[GRCh37]18p11.32(1⁃1553527)X1发育迟缓,心脏畸形,前脑无裂畸形3266+6G1P0稽留流产1:Seq [GRCH37]13q31.2q34(87778439⁃15169878)X12:3q25.32(158047415⁃158583714)X3小头畸形,心脏畸形4289+4G1P0稽留流产1:Seq[GRCh37]14q11.1q33.33(18944037-107349540)X32:45,X智力低下,发育迟缓,肌张力低下,特纳综合征5319+5G1P0胚胎停育1:Seq [GRCh37]17P12(14076298-15490260)X12:47,XN,+22发育迟缓,肾脏畸形,智力低下,22⁃三体综合征6408+5G5P2胚胎停育1:Seq [GRCh37]17p12(14080405⁃15473084)X32:46,XN /47,XN,+22Chareot⁃Marie Tooth 病7349+6G5P2胚胎停育Seq [GRCh37]22q11.21(1888423⁃21524732)X1DiGeorge 综合征 本研究共检出染色体异常79例(52.67%),其中染色体数目异常56例,包括染色体非整倍体49例;三倍体7例;嵌合体14例;染色体微重复/微缺失4例;同时存在染色体数目㊁结构异常3例;单亲二倍体2例㊂本研究的结果提示:导致自然流产最主要的染色体异常为染色体数目异常(37.33%),其中主要是染色体非整倍体(32.67%);其次为嵌合体(9.33%)和三倍体(4.67%)㊂与自然流产密切相关的染色体异常依次为:45,X㊁16⁃三体;69,XNN㊁21⁃三体;18⁃三体;16⁃三体嵌合体㊂在染色体异常中的占比依次为13.92%㊁12.66%㊁8.86%㊁7.59%㊁6.33%㊁5.06%㊂相关的临床表现为:69,XNN,常于孕早期出现流产,胎儿可表现为先天性心脏病,肾脏畸形㊁脑积水㊁脑部畸形和脊髓脊膜膨出等;45,X,表现为特纳综合征,胎儿发育迟缓,身体矮小,先天性性腺发育不良等,部分胎儿发生孕早期流产;16染色体三体,表现为早孕期胚胎停育㊂其他染色体三体也有表现为不同程度的,多样性的胎儿畸形,胚胎停育㊁胎儿宫内生长发育迟缓等临床表现,但检出率较低㊂NIKITINA 等[5]分析了563例自然流产物染色体,染色体正常为296(52.6%),染色体异常为267(47.4%);导致自然流产最主要的染色体异常依次为非整倍体㊁三倍体等,且先前胚胎具有异常核型的孕妇再次受孕后,发生复发流产的频率仍很高㊂因此,自然流产物的遗传学检查,对指导再次妊娠具有积极意义㊂本研究中染色体嵌合体检出14例(9.33%),分布于3㊁5㊁6㊁7㊁16㊁21㊁X号染色体,其中16号染色体三体嵌合体检出率率最高(2.67%)㊂16号染色体三体嵌合主要是胚胎早期 三体自救”形成单亲二倍体,或为16⁃三体/16⁃二体的复合体,临床表现为:胎儿宫内生长受限㊁胚胎停育㊁先天性心脏病㊁多脏器畸形等[6]㊂嵌合体的形成可能会增加自然流产的发生率,且嵌合体中异常核型比例越高,临床症状就越明显[7]㊂单亲二倍体可能因涉及遗传印迹基因㊁隐性基因纯合突变等,使胎儿出现各种临床综合征,表现为胎儿宫内生长受限㊁器官畸形㊁胚胎停育等临床症状㊂本研究中染色体微重复/微缺失以及同时合并染色体数目异常的共7例(4.67%),均存在不同类型的致病性表型㊂其中22q11.2微缺失可能导致DiGeorge综合症㊁腭心面综合症㊁TaKao综合症等,临床表现包括多种先天畸形:先天性心脏㊁胸腺发育不全㊁甲状旁腺功能减退和/或面部畸形㊂随着时间的推移可能出现的其他临床问题是自身免疫㊁肾功能不全㊁发育迟缓㊁胚胎流产㊁恶性肿瘤和神经系统表现,如精神分裂症等[8]㊂17q12微重复涉及Chareot⁃Marie Tooth病1A型的发生以及压迫麻痹性神经病变,表现为一种慢性进行性肌萎缩症[9]㊂1q21.1微缺失综合症表现为小头畸形㊁癫痫发作㊁发育迟缓和各种先天性异常,如心脏异常和泌尿生殖系统异常等,以及成人期精神分裂症的发生相关[10]㊂18p11.32微缺失最常见的特征包括严重程度不一的智力低下㊁身材矮小㊁流产㊁前脑无裂畸形㊁颅面畸形以及言语和认知发育迟缓㊂其他较少见的临床症状包括行为障碍㊁心脏畸形㊁肌张力障碍㊁生长激素缺乏和自身免疫性疾病[11]㊂染色体CNV也是导致自然流产的重要因素[12-13],但其检出率较染色体数目异常低㊂如检查结果为致病性CNV,还需进一步明确其为新发突变,还是来源于父母㊂对于检查结果为非致病性的CNV,可能应寻找CNV遗传因素之外的自然流产病因如精子畸形㊁妇科疾病㊁内分泌疾病㊁感染㊁药物㊁化学毒物㊁自身免疫疾病等,可为再次备孕的产前诊断㊁遗传咨询提供有价值的临床资料㊂综上所述,染色体非整倍体是自然流产的主要遗传学原因㊂流产物的遗传学的检测,仍需更多的样本量的临床研究㊂对流产物染色体易位㊁倒位㊁单基因病等检测仍面临着一定的困难,仍需选择更多精准的检测方法,避免漏检㊂对流产物染色体异常的病人,还应结合夫妻双方染色体的检测,从而明确染色体异常的来源,指导再次妊娠㊂总之,对流产物的遗传学检测可以从基因层面揭示自然流产的病因,对提高生育质量,减少出生缺陷,实现优生优育具有重要的意义㊂[参考文献][1] YANG L,TAO T,ZHAO X,et al.Association between fetalchromosomal abnormalities and the frequency of spontaneousabortions[J].Exp Ther Med,2020,19(4):2505.[2] RAJCAN⁃SEPAROVIC E.Next generation sequencing in recurrentpregnancy loss⁃approaches and outcomes[J].Eur J Med Genet,2020,63(2):103644.[3] ZHANG J,TANG X,HU J,et al.Investigation on combined copynumber variation sequencing and 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FISH 技术检测稽留流产组织中染色体异常的临床研究
ＣＬＩ ＮＩ ＣＡＬ Ｓ ＴＵＤＹ ｏＦ ＣＨ ＲｏＭ ｏＳｏＭ ＡＬ ＡＢＮｏＲＭ ＡＬＩ ＴＹ Ｉ Ｎ ＭＩ Ｓ Ｓ ＥＤ ＡＢＯＲＴＩ ｏＮ ＴＩ Ｓ Ｓ ＵＥ ＤＥＴＥＣＴＥＤ ＢＹ
Ｆ Ｌ ＵｏＲ Ｅ Ｓ Ｃ Ｅ ＮＣ Ｅ Ｉ Ｎ Ｓ Ｉ Ｔ Ｕ ＨＹ Ｂ ＲＩ ＤＩ Ｚ ＡＴ Ｉ ｏＮ Ｔ Ｅ Ｃ ＨＮＩ ＱＵＥ
ＷＡ Ｎ Ｇ Ｃ ｈ ｕ ｎ － ｊ ｕ ｎ ． Ｙ Ｕ Ｊ ｉ ｎ ｇ － ｆ ｅ ｎ ｇ
（ Ｗｕ ｈ ａ ｉ Ｍａ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｈ ｉ ｌ ｄ Ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ — Ｃ ａ ｒ ｅ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｗ ｕ ｈ ａ ｉ ０ １ ６ ０ ０ ０ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ检 测。结果 ： ４ ９ ． ５ ％的稽留流产是 由胎儿染 色体异常 引起 的； 染 色体 异 常的前 ３位 为三倍体 ， １ ６号染 色体 三体 ， ｘ 单体 ， 分别 占染色体异 常总发 生率的３ ２ ． ７ ％、 １ ５ ． ４ ％和１ ５ ． ４ ％； 高龄组 （ ≥３ ５岁） 和非 高龄 组 （ ＜ ３ ５岁） 异
王春 瑶 ， 于 晶峰
（ １ ． 乌海 市妇幼保健 院 妇科 ， 内蒙古 鸟海市 ０ １ ６ ０ ０ ０ ；２ ． 内蒙古 医科 大学 人体寄 生虫教研 室）
摘 要： 目的： 探讨稽 留流产胎 儿组 织细胞 中染色体 异常总发 生率及 异常种类和各种异常的发 生率。 方法 ：
采用１ ８ 、 ｘ 和 Ｙ染 色体着丝粒探 针及 １ ３ 、 １ ６ 、 ２ １ 、 ２ ２号染 色体单一序列探针 ， 对１ ０ ５例稽 留流产胎儿组织进行
测流产胚胎 ， 可 以快速、 准确发现较 常见的染 色体异 常 ， 为下一胎妊娠进行遗传咨询提供 资料 。 关键词 ： 稽 留流产 ； 染色体数 目异 常； 荧光原位杂 交
71例自然流产胚胎组织染色体微阵列检测结果分析
71例自然流产胚胎组织染色体微阵列检测结果分析周方元;李艳【摘要】目的:评估染色体微阵列分析技术(CMA)对自然流产病因分析的临床价值.方法:选取2017-10-2018-03武汉大学人民医院就诊的自然流产患者71例,收集流产的绒毛或胎儿组织.根据流产时孕龄,将受检者分为早期流产组(n=49)和晚期流产组(n=22);根据受检者此次流产之前是否具有流产史,将受检者分为有流产史组(n=49)和无流产史组(n=22);根据受检者是否为辅助生殖技术(ART)受孕,将受检者分为ART组(n=14)和非ART组(n=57).采用CMA对流产绒毛或胎儿组织进行染色体组拷贝数变异检测,分析其结果并比较各组的异常率差异.结果:CAM技术成功获得结果71例,检测成功率为100.00％,染色体异常31例,异常率43.66％;早期流产组中染色体异常率显著高于晚期流产组(57.14％ vs 13.64％,P=0.001);有流产史组异常率显著高于无流产史组(55.10％ vs 27.27％,P=0.03);ART组染色体异常率与非ART组的异常率无明显差异(42.86％vs45.45％,P=0.946).结论:染色体异常是自然流产的主要原因,应用CMA检测技术,可以为自然流产原因的分析提供重要遗传学信息.【期刊名称】《微循环学杂志》【年(卷),期】2018(028)004【总页数】4页(P57-60)【关键词】染色体微阵列;自然流产;染色体异常;辅助生殖技术【作者】周方元;李艳【作者单位】武汉大学人民医院检验科,武汉430060;武汉大学人民医院检验科,武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R714.21;R446.11+3自然状态(非人为目的造成)发生的流产称为自然流产。
在所有临床确认的妊娠中，自然流产的发生率约为15%[1]。
发生在12周以前的流产定义为早期流产，妊娠12周至不足28周的流产定义为晚期流产。
其中连续自然流产2次以上称为复发性流产[2]，在育龄期妇女中发生率为4.1%[3]。
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流产组织染色体异常检测
流行病学:
据估计，人类妊娠中自然流产的发生率为50%～60%，且大多都发生在孕早期。
引起自然流产的因素众多，如遗传、免疫、血型、感染、解剖、内分泌、环境等，所以准确找到流产原因并有针对性的进行临床指导就显得尤为重要。
而这其中，超过一半的孕早期流产都是由遗传缺陷所导致的，其中胚胎染色体数目异常和结构异常是最主要的两个原因。
数目异常有三体、三倍体及X单体等；结构异常有染色体断裂、倒置、缺失和易位。
染色体异常的胚胎多数结局为流产，极少数可能继续发育成胎儿，但出生后也会发生某些功能异常或合并畸形。
若已流产，妊娠产物有时仅为一空孕囊或已退化的胚胎。
目前临床对于流产遗传因素分析，并没有清晰一致的检测方案，往往检测之后还是不能明确病因。
而新基因格医学检验所的流产组织染色体异常检测可明确流产是否由遗传因素中的染色体异常所导致，以及确定异常大小和定位，从而帮助临床医生科学地解释相关临床问题，降低习惯性流产的发生率及其给家庭成员尤其是孕妇带来的生理、心理伤害。
导致胚胎染色体异常的危险因素：
1.遗传因素：
2.抗胚胎抗体阳性
3.宫内环境异常
4.环境因素：如孕期接触电离辐射，化学物品和微生物感染。
检测技术:
流产组织染色体异常检测，通过采集流产组织、刮宫组织、引产组织等样品，从中挑取由受精卵发育成的胎儿、胚胎或绒毛等细胞提取DNA，然后对其进行下一代高通量测序(NGS)，并通过生物信息学分析，即可准确分析流产样本染色体数目异常及5M以上的染色体缺失/重复异常的状况。
通过这种对流产组织染色体异常状况进行分析，再结合夫妻双方的遗传背景，即可辅助分析造成流产的遗传因素，为后续的诊断治疗提供科学依据，从而将有助于寻找到流产发生的根源所在，便可提示医生从更科学的角度合理的指导夫妇再次备孕。
下一代高通量测序技术NGS优势：
1、适用性广：可检测几乎所有自然流产、人工流产甚至稽留流产组织样本；
2、检测全面：一次性覆盖全部23对染色体，大大提高阳性检出率；
3、成功率高：无需细胞培养、制片、杂交等常规繁琐操作，干扰因素少，检测成功率高；
4、准确率高：阳性样本验证检出率大于99%；
5、分辨率高、拓展性强：全基因组扫描，可检测5MB以上缺失/重复，并可发现新的缺失/重复片段和基因遗传多态；
6、快速高效：同时进行多样本多位点检测，过程自动化。
流产组织染色体异常检测试用人群：
不良妊娠的孕妇；
反复流产的孕妇；
孕期接触过电化学辐射或受到感染的孕妇；
任何关注胎儿健康的孕妇。
服务流程：
检测咨询—签署知情同意书—样本采集—DNA提取—上机测序及信息分析—生成检测报告—报告解读及发送
检测周期：
自收到样本后10个工作日出检测报告。