免疫组化法和qPCR技术检测FBP1在结直肠腺癌中的表达及临床意义
IQGAP1在肺癌中的表达及其临床意义
IQGAP1在肺癌中的表达及其临床意义【摘要】目的探讨肺癌中支架蛋白IQGAP1的蛋白表达水平，及IQGAP1对肺癌细胞运动侵袭能力的影响。
方法RT-PCR检测IQGAP1 mRNA的表达，免疫组织化学SABC法及Western blot检测IQGAP1蛋白的表达，并采用Transwell 实验探讨IQGAP1蛋白促进侵袭转移的作用机制。
结果研究发现其在肺癌组织存在高表达，IQGAP1蛋白可以通过提高肺癌细胞的运动能力促进肺癌的侵袭转移。
结论IQGAP1与肺癌密切相关，可能在肺癌的侵袭和转移中起重要做用。
【Abstract】Objective To investigate the expression of Scaffold protein IQGAP1 in lung cancer, and the influence to cell invasion and metastasis.Methods The expression of IQGAPI mRNA was studied by RT-PCR, the expression of IQGAPl Protein was analyzed by immunohistochemistry and western blot, invasion and metastasis of IQGAP1was test by Transwell. Results The abnormal high expression of IQGAP1 in lung cancer tissues compared with non-cancerous tissues. The IQGAP1 expression was positive correlated with the survival of lung cancer. IQGAP1 promote lung cancer invasion and metastasis by improve cancer cell motility. Conclusion The IQGAP1 expression is closely related to lung cancer, may play important role in invasion and metastasis in human lung cancer.【Key words】lung cancer; IQGAP1; Cell movement; Invasion and metastasis1 材料与方法收集新鲜肺癌组织标本36份，标本离体后迅速切取肺癌组织；人肺正常细胞；低和高转移肺巨细胞癌细胞株95C和95D。
5种蛋白在肠道腺癌中的表达及临床意义
5种蛋白在肠道腺癌中的表达及临床意义唐大峻;文立新;秦胡兰【摘要】目的：探讨肠道腺癌中肺耐药相关蛋白（LRP）、P‐糖蛋白（P‐gp／P170）、拓扑易构酶（ToPoⅡ）、胸腺嘧啶合成酶（Ts）及谷胱甘肽转移酶（GST ）‐π的表达水平及其临床意义。
方法采用免疫组化法检测96例原发性肠道腺癌及15例正常肠黏膜中Ts、P170、ToPoⅡ、LRP、GST‐π的表达情况，并综合分析其与各临床参数和预后的关系。
结果 LRP、P170、ToPoⅡ、Ts在肠道腺癌组织中呈高表达状态；5种蛋白在癌组织中的表达水平与年龄、性别无关，但在有淋巴结转移者表达高于无淋巴结转移者，LRP、P170在低分化腺癌组织中的表达明显高于高中分化腺癌，而Ts的表达明显低于高中分化腺癌；浸润肌层及以内的腺癌表达ToPoⅡ明显高于浸润至浆膜者；LRP、P170、Ts阳性表达患者的5年存活率低于阴性表达者。
结论 Ts、P170、ToPoⅡ、LRP、GST‐π5种耐药蛋白与肠道腺癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及5年存活率均有不同程度的相关性，这在制订肠道腺癌的个性化化疗方案以及患者预后评估上具有重要的临床意义。
%Objective To investigate the expression and clinical significance of Thymine synthetase (Ts) ,P‐glycoprotein(P170) ,toposiomerase(ToPoⅡ) ,lung resistance‐related protein(LRP) ,glu tathione tfan sferase(GST‐π) in colorectal carcinoma tissue .Methods The expression of Ts ,P170 ,ToPoⅡ ,LRP and GST‐πin 96 patients with colorectal carcinoma and 15 healthy persons were detected by immunohistochemical technique ,and their relationship with clinical indicators and prognosis of carcinoma were explored .ResultsLRP ,P170 ,ToPo Ⅱ and Ts in in testinal tissues showed high expression inintestinal adenocarcinoma .The five kinds proteins expression levels in the adeno‐carcinoma had no relationship with age and gender ,but these were higher in the cases with lymph node metastasis than those without lymph node metastasis .The levels of LRP ,P170 in low differentiation adenocarcinoma were sig‐nificant higher than that in high differentiation adenocarcinoma ,while the expression of Ts was significant lower than that in high differentiation adenocarcinoma .The expression of ToPo Ⅱ was significant higher in invasion muscle layer than that of infiltratedserosa .The five years survival rate of patients with positive expression of LRP ,P170 were lower than that of the negative expressioncases .Conclusion Ts ,P170 ,ToPo Ⅱ ,LRP and GST‐πhave relationships with intestinal adenocarcinoma differentiation degree ,invasion depth ,lymph node metastasis and the survival rate of five years ,these relationships important for personalized chemotherapy scheme and prognostic evaluation .【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】4页(P454-456,459)【关键词】肠道腺癌;多药耐药;免疫组织化学【作者】唐大峻;文立新;秦胡兰【作者单位】重庆市石柱土家族自治县人民医院病理科 409100;重庆市石柱土家族自治县人民医院普外科 409100;重庆市石柱土家族自治县人民医院病理科409100【正文语种】中文联合化疗是中晚期肠道癌的综合性治疗手段之一，而肿瘤对化疗药物产生耐药是导致化疗失败的重要原因之一。
【精编】免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用
人工智能
通过机器学习算法对免疫 组化图像进行自动识别和 分析，减少人为误差。
未来发展方向与前景
标准化和规范化
制定统一的免疫组化操作指南和标准，提高诊断的一致性和可靠 性。
临床转化应用
加强免疫组化技术在临床实践中的应用，提高肿瘤诊断和治疗水 平。
多学科合作
加强病理学、肿瘤学、免疫学等多学科合作，共同推动免疫组化 技术的发展和应用。
乳腺癌免疫组化诊断
总结词
乳腺癌免疫组化诊断是利用免疫组织化学技术对乳腺癌进行诊断的方法。
详细描述
通过检测乳腺癌组织中特定抗原的表达，有助于确定肿瘤的分子分型，预测患者的预后和指导治疗。常见的乳腺 癌免疫组化指标包括雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体2（HER2）等。
肺癌免疫组化诊断
05
案例分析
乳腺癌免疫组化诊断案例
总结词
乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，免疫组化在 乳腺癌的诊断中具有重要作用。
详细描述
通过免疫组化技术，可以检测乳腺癌组织中 雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和 人表皮生长因子受体2（HER2）的表达情况 。这些标志物的表达状态对于乳腺癌的分类 、预后评估和指导治疗具有重要意义。例如 ，ER和PR阳性提示患者可能对内分泌治疗 敏感，而HER2阳性则提示患者可能从靶向 治疗中受益。
总结词
肺癌免疫组化诊断是利用免疫组织化学技术对肺癌进行诊断的方法。
详细描述
通过对肺癌组织中特定抗原的表达进行检测，有助于肺癌的分类、分期和预后评估。常 见的肺癌免疫组化指标包括细胞角蛋白（CK）、甲状腺转录因子1（TTF-1）等。
结直肠癌免疫组化诊断
总结词
结直肠癌免疫组化诊断是利用免疫组织 化学技术对结直肠癌进行诊断的方法。
免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用
二、免疫组化在肿瘤诊断中的应用
（一）上皮性肿瘤标记
1．角蛋白（Keratin）：一种中间丝蛋白，分 （1）表皮角蛋白（Epidermal keratin， EK）——鳞状上皮或高分化鳞癌标记；（2） 细胞角蛋白（cytokeratin，CK）——低分子 角蛋白，对腺癌、移行细胞部及低分化鳞癌 标记。一般用广谱型角蛋白抗体为好，常用。
（七）癌基因与抗癌基因，促转移与转移抑制 基因蛋白抗体标记。
目前应用很多，因方法比分子生物学技术 简单，但是这种结果不能直接反应肿瘤基因的 活性，只能间接反应肿瘤基因代谢活性，要注 意正确评价它的价值。
一、免疫组化在诊断中的应用原则
1．防止假阳性与假阴性，防止操作中的污染， 规范操作，设阳性与阴性对照。
2．选用2种以上同类抗体：目前肿瘤均为相 关抗原，特异性不足，多种同类抗体可提高 阳性率。
3．正确评价免疫组化的结果：其结果受抗 体、特异性与质量、操作、标本固定等多种 因素影响。
4．合理的选择抗体：既要符合设计的要求， 价廉物美，分1、2、3线抗体。
4．癌胚抗原（Carcinoembrgonic antigen， CEA）：是从结肠癌中分离而得一种球蛋白， 定位于细胞膜上，对肠、胃、肺、胰、肝、 乳腺等腺癌标记阳性，但个别非上皮肿瘤也 可阳性。
5．甲胎蛋白（Alpha Fetoprotein，AFP）： 由胎肝细胞提取的一种酸性糖蛋白，细胞浆 和膜上表达，它对肝细胞癌、卵黄囊癌的特 异性标记。睾丸
2．结蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、横纹 肌均可阳性。
3．肌动蛋白（Actin）：平滑肌、血管内皮、 肌上皮细胞标记，HHF35特异。
采用组织芯片技术分析P21在胰腺癌中的表达及与预后的关系
采用组织芯片技术分析P21在胰腺癌中的表达及与预后的关系方华;玉素甫•买买提;黄韬;谢二娟【摘要】目的：分析P21蛋白在胰腺癌和癌旁组织中的表达及与预后的关系。
方法共90例胰腺癌患者纳入研究,每例均有完整的临床资料及对应的癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化技术进行芯片染色。
分析免疫组化染色结果中P21的表达与胰腺癌临床病理特征的关系,并进行生存分析,探讨 P21对预后的判断价值。
结果90例胰腺癌组织中P21阳性表达率为48.9%。
P21阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期及细胞核增殖抗原(Ki-67)表达等相关(P<0.05)。
P21阳性组患者的总生存期(Overall survival,OS)低于 P21阴性组患者(P=0.022)。
Cox多因素分析显示胰腺癌和癌旁组织中P21的阳性表达以及胰腺癌组织中Ki-67阳性表达为患者不良预后的独立影响因素。
结论胰腺癌组织中P21阳性表达预示胰腺癌的不良预后,Ki-67与P21在胰腺癌组织中同时阳性表达或胰腺癌癌旁组织中 P21阳性表达可增加不良预后风险。
%Objective To explore the P21 expression in pancreas cancer and paracancerous tissues,and its correlation with the prognosis of pancreas cancer.Methods Immunohistochemistry was used to detect the P21 expression in 90 cases of pancre-as cancer and paracancerous tissues via tissue microarrays.The clinical data were analyzed retrospectively.Survival analysis and the COX proportional hazards model were used to explore the prognostic value of the P2 1 expression in pancreas canc-er.ResultsThe positive rate of P21 expression in 90 cases of pancreas cancer tissues was 48.9%.The P21 expression was signifi-cantly associated with tumor size,lymph node metastasis,clinicalstage,and Ki-67 expression (P<0.05 for all).The overall survival (OS)in patients positive for the P2 1 expression was significantly shorter than in those negative for the P2 1 expression (P=0.022).Multivariate analysis revealed that the P21 expression in pancreas cancer and paracancerous tissues,and the Ki-67 expression in pancreas cancer tissues were independent predictors of poor prognosis in patients with pancreas cancer.Conclusion The P21 expression predicts a poor prognosis in patients with pancreas cancer.The simultaneous expression of P21 and Ki-67 in pancreas cancer tissues or P2 1 expression in paracancerous tissues may increase the risk of poor prognosis in pancreas carci-noma.【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(045)003【总页数】4页(P331-334)【关键词】胰腺癌;P21;预后;细胞核增殖抗原【作者】方华;玉素甫•买买提;黄韬;谢二娟【作者单位】湖北省医学会，武汉430071;华中科技大学同济医学院附属协和医院乳腺甲状腺外科，武汉 430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院乳腺甲状腺外科，武汉 430022;湖北省医学会，武汉430071【正文语种】中文【中图分类】R735.9胰腺癌恶性度极高[1]，早期即可转移至肝脏，预后差。
FOXG1p21在结直肠腺癌中的表达及意义
65.3
52
34.7 园援园缘源
66
44.0
臆远园 岁
86
45
52.3
41
47.7
29
33.7
性别
男性
员圆圆
75
61.5
47
38.5
54
44.3
女性
114
68
59.6
46
40.4 0.791
41
36.0
部位
左半结肠、直肠
89
60
67.4
29
32.6
41
46.1
右半结肠
147
83
56.5
64
43.5 0.101
40
40.0
阅期
16
11
68.8
5
31.3 0.016
7
43.8
淋巴结转移 无
127
68
53.5
59
46.5
45
35.4
有
109
75
68.8
34
31.9 0.023
随着结直肠腺癌分化程度的降低即恶性程度 的升高 责圆员 蛋白表达丢失率逐渐升高 源猿.5豫（圆园/ 源远）、缘怨援愿豫（愿圆/员猿苑）、苑猿援6豫（猿怨/缘猿），差异有统计学 意义（P越园援园园猿）；与性别、年龄、部位、阅怎噪藻泽 分期及 淋巴结转移均无明显相关性（表 1）。 圆援猿 云韵载郧员、责圆员 表达与结直肠腺癌患者预后的 关系：生存时间约圆 年、圆 年内复发/转移的结直肠腺 癌患者的 云韵载郧员 的表达阳性率和 责圆员 的表达丢
窑 228 窑
·医学检验·
山西医药杂志 2019 年 1 月第 48 卷第 2 期 Shanxi Med J，January 2019，Vol. 48. No.2
Caveolin-1蛋白在直肠癌组织中的表达及其临床意义
Caveolin-1蛋白在直肠癌组织中的表达及其临床意义刘卫梅【摘要】目的探讨Caveolin-1蛋白在直肠癌发生、发展过程中表达的变化及其临床意义.方法应用免疫组化S-P法检测直肠癌旁正常组织20例、腺瘤26例及直肠癌88例中Caveolin-1蛋白的表达情况,并讨Caveolin-1蛋白表达与直肠癌各参数之间的联系.结果 Caveolin-1蛋白在癌旁正常组织中、腺瘤及直肠癌阳性表达率分别为85.0％(17/20)、57.7％(15/26)及29.5％(26/28),3组间两两比较,差异有统计学意义(P＜0.01);不同组织学类型癌组织Caveolin-1蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P＞0.05);直肠癌浸润深度与浅度Caveolin-1的阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05);直肠癌高、中分化与低分化Caveolin-1的阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05);直肠癌区域淋巴结有转移与无转移Caveolin-1的阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05);直肠癌有远处转移与无远处转移Caveolin-1的阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Caveolin-1蛋白在癌旁正常黏膜、腺瘤及癌组织中呈渐进性低表达,可能在直肠癌的发生、发展中起重要作用,有可能成为直肠癌非常重要的生物学标志物.【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2016(024)003【总页数】2页(P1-2)【关键词】胞膜窖;窖蛋白-1;直肠癌;免疫组化【作者】刘卫梅【作者单位】河南省焦作市第二人民医院病理科,河南焦作454001【正文语种】中文【中图分类】R449直肠癌是消化系统较常见的恶性肿瘤，近些年来，我国直肠癌发病率呈持续上升趋势,发病率和死亡率分别为9.4/10万和10.4/10万。
直肠癌的发生、发展是一个十分复杂的过程，涉及许多肿瘤相关分子，Caveolin-1是微囊蛋白的主要结构，它与恶性肿瘤的发生、浸润、发展及转移密切相关。
免疫组化染色法及肿瘤标志物检测在结直肠癌患者中的诊断价值
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U D HA R Y V,G A R G A U C．N e o n a t a l h yＧp o x i cＧi s c h e m i c e n c e p h a l o p a t h y:a r a d i o l o g i c a l r e v i e w[J]．J P e d i a t rN e u r o s c i,２０１７,１２(１):１Ｇ６．[１３]Y A N GCS,L I NYZ,G U O Q,e t a l．C h i n e s e h e r b a lm e d iＧc i n ex i n g n a o j i n g i n j e c t i o n,f o rh y p o x i c i s c h e m i ce n c e p h aＧl o p a t h y i nn e w b o r n s:a s y s t e m a t i c r e v i e wa n dm e t aＧa n a l yＧs i s[J]．C h i n J I n t e g rM e d,２０１８,２４(３):１Ｇ９．(收稿日期:２０１９Ｇ０２Ｇ１７㊀㊀修回日期:２０１９Ｇ０５Ｇ２２)临床探讨 D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７２Ｇ９４５５．２０１９．１９．０４８免疫组化染色法及肿瘤标志物检测在结直肠癌患者中的诊断价值雷文珍江西省宜春市高安市瑞州医院检验科,江西宜春３３０８００㊀㊀摘㊀要:目的㊀探究免疫组化染色法检测及肿瘤标志物在结直肠癌患者中的诊断价值.方法㊀选取２０１８年１－１０月在该院治疗的２４例结直肠癌患者作为研究组,另选取同期来该院进行健康体检的２４例健康人作为对照组.采用免疫荧光基因检测法分别检测两组研究对象抑癌基因K A I１的表达情况,抽取两组研究对象空腹静脉血检测肿瘤标志物水平并进行比较分析.结果㊀研究组和对照组正常组织中抑癌基因K A I１表达分布差异无统计学意义(P＞０．０５);研究组中正常组织㊁癌旁组织㊁癌组织抑癌基因K A I１表达分布占比逐渐降低,差异有统计学意义(P＜０．０５);研究组肿瘤标志物癌胚抗原(C E A)㊁糖类抗原(C A)１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９检出率及检测水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜０．０５).结论㊀免疫组化染色法检测是肿瘤患者可选的重要检查,能检出患者抑癌基因的异常与否,有助于结直肠癌患者的诊断.肿瘤标志物C E A㊁C A１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９等是结直肠癌诊断㊁治疗及预后判断的重要标志物.关键词:免疫组化染色法;㊀结直肠癌;㊀肿瘤标志物中图法分类号:R４４６．６;R７３５．３文献标志码:A文章编号:１６７２Ｇ９４５５(２０１９)１９Ｇ２８９８Ｇ０３㊀㊀随着社会的发展㊁科学的进步,医疗技术日新月异,人们对于疾病的认识也越来越深入,而临床上癌症患者也越来越多,结直肠癌是消化系统中常见的恶性肿瘤之一,严重威胁患者的生命健康[１].结直肠癌患者确诊时往往已到了中晚期,生存率不太乐观[２].临床上对于结直肠癌的诊断方法很多,包括直肠指诊㊁C T㊁肠镜,最直观而准确的方法就是肠镜[３].由于基因检测费用昂贵,所以临床患者接受度差,而基因检测可准确评估患者癌症的发生和发展情况[４].结直肠癌的治疗方法有手术㊁化疗㊁放疗等,在治疗过程中常常会发生各种并发症及不良反应,严重影响患者的正常生活,对患者的生理及心理均造成严重伤８９８２ 检验医学与临床２０１９年１０月第１６卷第１９期㊀L a b M e dC l i n,O c t o b e r２０１９,V o l．１６,N o．１９害[５].目前国内外对于结直肠癌的诊断和治疗也有很多争议,近年来,关于抑癌基因K A I１的研究也有一定进展,该基因在抑制大肠癌细胞生长㊁增殖㊁转移方面有重要作用.癌胚抗原(C E A)㊁糖类抗原(C A)１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９是结直肠癌重要的肿瘤标志物,对于结直肠癌的诊断和治疗有重要意义.本研究选取２０１８年１－１０月在该院治疗的２４例结直肠癌患者和进行健康体检的２４例健康人作为研究对象,探究免疫组化染色法检测在结直肠癌患者中的诊断效果及肿瘤标志物的相关性,现报道如下.１㊀资料与方法１．１㊀一般资料㊀选取２０１８年１－１０月在本院治疗的２４例结直肠癌患者作为研究组,其中男１１例,女１３例,另选取同期来本院进行健康体检的２４例健康人作为对照组,其中男１２例,女１２例.对照组年龄４５~６５岁,平均(５１．８ʃ５．９)岁;研究组年龄４４~６５岁,平均(５１．３ʃ６．８)岁.两组研究对象年龄等一般资料比较,差异无统计学意义(P＞０．０５),具有可比性.１．２㊀纳入和排除标准１．２．１㊀纳入标准㊀研究组符合西医诊断结直肠癌标准;对照组明确无癌症疾病;自愿参与本研究并签署知情同意书.１．２．２㊀排除标准㊀不符合纳入标准者;精神病患者㊁神经官能症患者㊁有严重系统性疾病患者㊁其他系统癌症患者;孕妇㊁哺乳期女性㊁近期有妊娠要求者;使用过化疗药物治疗者;正在参与其他临床试验患者.１．３㊀方法㊀对两组研究对象先行腹部C T㊁M R I㊁结肠镜等检查,然后进行呼吸㊁血压㊁心率㊁脉搏等生命体征检查,并对所有研究对象进行常规处理,采取相应的措施对并发症进行预防,如对患者进行补液治疗,以纠正患者电解质紊乱.分别对研究组和对照组进行基因检测,测定体内抑癌基因K A I１分布情况;从研究组癌灶处取癌组织㊁癌旁组织㊁正常组织,采用免疫组化染色法检测,从对照组提取正常大肠组织,将组织制成标本,对标本进行染色,然后在高倍镜下观察并记录抑癌基因K A I１蛋白表达阳性率.抽取两组研究对象空腹静脉血检测血清肿瘤标志物水平.１．４㊀观察指标㊀比较两组研究对象抑癌基因表达情况及血清肿瘤标志物C E A㊁C A１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９检测水平.１．５㊀统计学处理㊀采用S P S S１９．０统计软件进行数据处理及统计分析,计数资料以例数或百分率表示,两组间比较采用χ２检验;呈正态分布的计量资料以xʃs表示,两组间比较采用独立样本t检验.以P＜０．０５为差异有统计学意义.２㊀结㊀㊀果２．１㊀研究组和对照组不同组织中抑癌基因K A I１分布情况比较㊀研究组正常组织中抑癌基因K A I１表达分布占比为８０．２％㊁癌旁组织为６０．１％㊁癌组织为２１．４％,正常组织㊁癌旁组织㊁癌组织中抑癌基因K A I１表达分布占比逐渐降低,差异有统计学意义(P＜０．０５).对照组正常组织中抑癌基因K A I１表达分布占比８６．３％,研究组与对照组正常组织中抑癌基因K A I１表达分布占比差异无统计学意义(P＞０．０５).２．２㊀两组肿瘤标志物检出率比较㊀见表１.研究组肿瘤标志物血清C E A㊁C A１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９检出率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜０．０５).表１㊀㊀两组肿瘤标志物检出率比较[n(％)]组别n C E A㊀C A１２Ｇ５㊀C A１９Ｇ９㊀对照组２４１(４．１７)０(０．００)２(８．３３)研究组２４２１(８７．５０)１８(７５．００)１９(７９．１７)χ２５．３９４６．３９１６．１２５P＜０．０５＜０．０５＜０．０５２．３㊀两组血清肿瘤标志物检测水平比较㊀见表２.研究组血清C E A㊁C A１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９检测水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜０．０５).表２㊀㊀两组血清肿瘤标志物检测水平比较(xʃs,μg/L)组别n C E A C A１２Ｇ５C A１９Ｇ９对照组２４４．６ʃ２．４１６．８ʃ１．４２５．１ʃ６．７研究组２４１６．８ʃ１．４３３．４ʃ１．８１０８．０ʃ１１．４t１１．２９４１０．３９１１１．１２５P＜０．０５＜０．０５＜０．０５３㊀讨㊀㊀论㊀㊀结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一,其恶性程度高㊁病程发展较快㊁５年生存率相对较低.随着社会和经济的发展,人们的生活节奏越来越快,加之一些不良的生活习惯,癌症患者越来越多[６].结直肠癌的发生或许与身体机能变化有关,年轻人较少发生,发病年龄主要在６０~７０岁,男性发病率高于女性.无论是发达国家还是发展中国家,结直肠癌的发病率均较高,病死率也较高.结直肠癌病因还没有完全明确,是环境和遗传因素共同作用结果.结直肠癌的早期症状主要是排便习惯的改变㊁腹痛㊁腹胀等消化道症状,临床上对于结直肠癌常常采用手术治疗,但是术后发生不良反应的现象较多,严重威胁患者的生命健康,降低患者生活质量[７].有些患者适合术前化疗(即新辅助化疗),化疗结束后再行手术治疗,手术以后再根据病理分型选择放疗或化疗方式.有研究表明,抑癌基因K A I１可以抑制肿瘤细胞的增殖㊁侵袭和转移,并且诱导肿瘤细胞凋亡[８].恶性肿瘤最基本的生物学特性是细胞恶性增殖,细胞的９９８２检验医学与临床２０１９年１０月第１６卷第１９期㊀L a b M e dC l i n,O c t o b e r２０１９,V o l．１６,N o．１９恶性增殖是因为失去相关基因的调控,健康人体内有致癌基因也有抑癌基因,细胞不会发生恶性增殖就是因为抑癌基因的调控作用,人体内有许多抑癌基因,熟知的有P５３㊁P１５等[９].当抑癌基因发生基因突变时,细胞周期调控机制紊乱,细胞发生不可控制的增殖,细胞呈现出低分化状态进而发展为癌.不同的抑癌基因作用不同,有的直接抑制肿瘤细胞增殖,有的可以诱导其他基因或者蛋白的活性来调控基因.细胞周期在正常调控下,机体才能正常运转,遗传物质才能稳定,不发生突变[１０].正确认识和了解抑癌基因在不同组织内的表达及对肿瘤细胞生物学作用的影响,可以更明确地认识癌症,更好地作出诊断,进而有针对性地进行治疗.本研究相关数据显示,两组正常组织中抑癌基因K A I１表达分布占比比较,差异无统计学意义(P＞０．０５),抑癌基因K A I１在正常组织㊁癌旁组织㊁癌组织中表达分布占比逐渐降低,差异均有统计学意义(P＜０．０５),由此表明抑癌基因K A I１对癌细胞具有调控作用,能够抑制癌细胞的生长㊁增殖.健康人体内抑癌基因K A I１的存在对人体是有利而无害的.癌症患者尤其是大肠癌患者体内抑癌基因K A I１表达降低,可能是受环境因素或基因突变的影响,使该基因发生变异,表达下降[１１].肿瘤标志物是肿瘤组织在发生和发展过程中所产生的特异性物质,是由肿瘤相关基因及其表达产物表达产生的,对肿瘤的诊断有重要意义.本研究中研究组肿瘤标志物C E A㊁C A１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９检出率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜０．０５);研究组血清C E A㊁C A１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９检测水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜０．０５).C E A是结直肠癌诊断中常用的标志物,但由于其在肿瘤发展到晚期有转移时才会明显增高,因此C E A的灵敏度和特异度并不理想,只能作为参考诊断依据.C A１２Ｇ５也是结直肠癌重要的标志物之一,在临床上应用广泛,肝癌患者腹水中也可发现C A１２Ｇ５,在诊断结直肠癌时要排除肝癌的可能.C A１９Ｇ９是结直肠癌发生时血清中水平升高的标志物之一,有一定诊断价值.每种肿瘤标志物都有其特定的意义,单一检测肿瘤标志物对于结直肠癌的诊断意义并不重要,当联合检测时,每种肿瘤标志物检测水平均升高,对于结直肠癌的诊断才有说服力.综上所述,免疫组化染色法检测是肿瘤患者可选的重要检查,能检出患者抑癌基因的异常与否,有助于结直肠癌患者的诊断.肿瘤标志物C E A㊁C A１２Ｇ５㊁C A１９Ｇ９等是结直肠癌诊断㊁治疗及预后的重要标志物,值得临床进一步推广应用.参考文献[１]沈小东,王喜．老年结肠癌１８FＧ氟代脱氧葡萄糖P E T/C T 摄取值与肿瘤标志物及临床特征的相关性[J]．中国老年学杂志,２０１６,３６(１０):１７１２Ｇ１７１３．[２]K I M D H,K I M B,C HO I JH,e t a l．T u m o r c h a r a c t e r i s t i c sa s s o c i a t e dw i t hm a l i g n a n t l a r g eb o w e l o b s t r uc t i o n i n s t a g eI V c o l o r e c t a lc a n c e r p a t i e n t s u n d e r g o i n g c h e m o t h e r a p y[J]．I n t JC o l o r e c t a lD i s,２０１６,３１(１１):１７６７Ｇ１７７４．[３]黄坚,胡可．结直肠癌患者采用扶正消癌汤联合化疗治疗疗效及对其免疫功能㊁临床症状及生活质量的影响[J]．中华中医药学刊,２０１７,３６(６):２７４Ｇ２７７．[４]汤军,欧俐苹,陈玲,等．４种血清肿瘤标志物及粪便隐血的联合检测在D u k e sB期结肠癌诊断中的应用[J]．重庆医学,２０１７,４６(２２):５５Ｇ５８．[５]龚庆豪,戴刚,陈海群,等．抗瘤增效方联合替吉奥治疗晚期结直肠癌疗效及对患者生存质量㊁血清肿瘤标志物的影响[J]．中国实验方剂学杂志,２０１７,２４(１１):１７１Ｇ１７６．[６]韩茜,李五生,陈卫东,等．替吉奥联合健脾丸对老年结直肠癌转移患者血清肿瘤标志物㊁C O XＧ２及MM PＧ２水平影响研究[J]．中华中医药学刊,２０１６,３５(１１):２７３４Ｇ２７３７．[７]华红,郝贵亮,韩彩惠,等．血清m i RＧ２１㊁m i RＧ９２联合检测对结直肠癌诊断效能分析及术后复发的预测价值[J]．山东医药,２０１８,５８(２２):１５３Ｇ１５５．[８]姚宏伟,姚响芸,孙涛,等．腹腔镜结直肠癌根治性切除联合同期腹腔镜或开腹肝大部切除术治疗同时性结直肠癌肝转移的疗效分析[J]．中华消化外科杂志,２０１６,１５(２):１２８Ｇ１３４．[９]刘建化,黄成智,曾卫强,等．R A S突变和微卫星不稳定与Ⅲ期结直肠癌患者临床病理特征及预后的相关性分析[J]．中国病理生理杂志,２０１７,３４(１０):２２４Ｇ２２５．[１０]曾俊,董丹丹,李芳华．白细胞介素６在结直肠癌中的表达及其与增殖细胞核抗原表达的相关性[J]．中华病理学杂志,２０１７,１８(２):３４２Ｇ３４５．[１１]惠菲菲,刘凯,杨家和,等．同时性结直肠癌肝转移结直肠癌组织中K i s sＧ１蛋白和基质金属蛋白酶９蛋白的表达及意义[J]．中华消化外科杂志,２０１６,１５(２):１５３Ｇ１５６．(收稿日期:２０１９Ｇ０１Ｇ１０㊀㊀修回日期:２０１９Ｇ０４Ｇ０２)００９２ 检验医学与临床２０１９年１０月第１６卷第１９期㊀L a b M e dC l i n,O c t o b e r２０１９,V o l．１６,N o．１９。
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免疫组化法和qPCR技术检测FBP1在结直肠腺癌中的表达及临床意义刘家有;邓世山;朱剑军;侯令密;谢少利;黄波【摘要】Objective:To explore the expression of FBP1 in colorectal adenocarcinoma and its clinical significance.Methods:46 pairs of fresh human colorectal adenocarcinoma tissues and its adjacent normal tissues were collected from the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College from September 2014 to February 2016,Quantitative RT-PCR was used to detect the expression level of FBP1 mRNA in tissues.30 specimens of human colorectal adenocarcinoma tissues and its adjacent normal tissues were collected from the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College from July 2015 to June 2016,immunohistochemical was used to exam the level of FBP1.Results:Quantitative RT-PCR show that the expression level of FBP1 mRNA in colorectal adenocarcinoma tissues was remarkably lower than that in adjacent normal colorectal tissues(t=2.934,P=0.006).The expression level of FBP1 decreased as the increase of malignancy degree and Duke's stages and distant lymph metastases in colorectal adenocarcinoma (P=0.000).The expression level of FBP1 mRNA in male patients was higher than that in those females,but the difference was not significant (t=1.294,P=0.165).Immunohistochemical results show that the expession level of FBP1 in colorectal adenocarcinoma tissues was lower than that in adjacent normal colorectal tissues(χ2=19.461,P=0.000).Conclusion:The decreased expression level of FBP1mRNA and its protein may act a critical role in colorectal adenocarcinoma and may be used as a potential therapeutic target for colorectal adenocarcinoma.%目的:探讨果糖-1,6-二磷酸酶1 (fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)基因在结直肠腺癌的表达水平及其与临床病理特征的联系.方法:qPCR技术检测川北医学院附属医院2014年9月至2016年2月新鲜结直肠腺癌组织及癌旁正常组织46 例中FBP1基因的表达水平.免疫组化方法检测川北医学院附属医院2015年7月至2016年6月结直肠腺癌及癌旁对照组织的蜡块标本30例中FBP1的表达及分布情况.结果:qPCR技术检测结果表明,FBP1 基因在结直肠腺癌组织中的表达水平低于在癌旁正常组织中的表达水平(t=2.934,P=0.006);FBP1基因在结直肠腺癌组织中的表达水平随着结直肠腺癌肿瘤的恶性程度的增加(F=13.267,P=0.000)、Duke's 分期的增加(F=15.864,P=0.000)、远处淋巴结的转移(t=14.285,P=0.000)而降低;FBP1基因在男性患者的结直肠腺癌组织中的表达水平高于其在女性患者的表达水平,但差异无统计学意义(t=1.294,P=0.165).免疫组化结果显示FBP1在结直肠腺癌组织中低表达甚至缺失,而在癌旁正常组织中高表达,二者差异具有统计学意义(χ2=19.461,P=0.000).结论:FBP1 基因及蛋白质的低表达可能在结直肠腺癌的发生发展中有着重要的作用,是其潜在的治疗靶标.【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2017(032)002【总页数】5页(P167-171)【关键词】结直肠腺癌;果糖-1,6-二磷酸酶1;免疫组化法;qPCR【作者】刘家有;邓世山;朱剑军;侯令密;谢少利;黄波【作者单位】川北医学院人体解剖学教研室,四川南充 637000;川北医学院人体解剖学教研室,四川南充 637000;川北医学院人体解剖学教研室,四川南充 637000;川北医学院附属医院普外科,四川南充 637000;川北医学院附属医院普外科,四川南充 637000;川北医学院临床技能培训中心,四川南充 637000【正文语种】中文【中图分类】R735.3结直肠腺癌是消化道第二位的常见恶性肿瘤，位居癌症死亡率第四位，严重威胁人类的健康[1]，探索与结直肠腺癌发病的相关基因，对结直肠腺癌的早期预防和诊治具有重要意义。
果糖-1，6-二磷酸酶1 (fructose-1，6-bisphosphatase1,FBP1)是葡萄糖异生的关键酶之一，在机体内源性葡萄糖的合成、输出及调控中发挥重要作用[2]。
研究发现FBP1与许多肿瘤的发生发展相关，如FBP1基因表达水平的降低或缺失导致肾透明细胞癌的恶性程度增加、患者的预后变差[3]；FBP1在乳腺癌中和在肝细胞癌中的表达水平也降低，且随着恶性程度的增加而降低[4-5]。
但在结直肠腺癌中FBP1基因的表达情况如何，目前尚未见相关文献报道。
本文通过免疫组化方法和qPCR技术检测FBP1在结直肠腺癌中的表达情况，探讨FBP1与临床病理特征之间的关系，为结直肠腺癌早期诊断、治疗及寻找潜在的靶标提供理论基础。
1.1 研究对象收集川北医学院附属医院2014年9月至2016年2月新鲜结直肠腺癌(该诊断均经病理证实)及对照癌旁正常组织(距肿瘤边缘大于5 cm以上，病理未发现癌细胞)标本46例，年龄37～79岁，平均年龄57.5岁，中位年龄59岁。
标本收集后立即置于液氮中速冻，及时提取组织总RNA并进行逆转录。
收集川北医学院附属医院2015年7月至2016年6月结直肠腺癌及癌旁正常组织标本30例，年龄28～77岁，平均年龄56.8岁，中位年龄58岁。
1.2 主要试剂Trizol试剂购自Ambion公司；Revert Aid first strand cDNA Synthesis Kit 反转录试剂盒购自Thermo Scientific公司；SYBR ®Premix Ex TMTaq Ⅱ试剂购自TaKaRa 公司；琼脂糖购自碧云天公司；Goldenview购自于碧云天公司；Marker Ⅰ 购自 Tiangen 公司；MS anti-FBP1 购自abcom 公司，Goat anti-MS购自abcom 公司，免疫组化(SP)试剂盒与DAB 显色试剂盒均购自北京中杉金桥公司。
1.3 RNA 提取及反转录取新鲜组织 50～80 mg，液氮中研磨均匀成末，按照Trizol说明书操作提取组织总RNA，按照 Revert Aid first strand cDNASynthesis Kit 反转录试剂盒说明书将细胞总RNA逆转录为 cDNA。
1.4 qPCR引物设计按照qPCR引物设计原则，运用 Primer 3.0 软件设计引物，经验证成功设计的基因序列见表1。
qPCR 反应条件：95 ℃预变性3 min，94 ℃变性10 s，54 ℃退火10 s，72 ℃延伸10 s， 40个循环，每个循环结束后进行荧光信号收集。
为判断PCR产物的特异性，在扩增程序结束后，加设一个溶解程序，来形成熔解曲线，溶解温度设置为65～90 ℃,每0.5 ℃为一个梯度，进行荧光信号收集。
每个样本设置3个复孔，取Ct平均值进行计算。
ΔCt=Ct FBP1-Ct GAPDH，ΔCt值越小说明该目的基因的表达量越高，反之亦然。
2-ΔCt表示目的基因相对于内参基因的表达量；本实验用2-ΔCt来表示46个样本中FBP1基因的表达量。
1.5 免疫组化检测所有蜡块由川北医学院附属医院病理科代为切片，SP 法染色，按试剂盒说明书操作，其中一抗和二抗的浓度均为1∶200 ，DAB 显色，苏木素复染。
高倍镜下选取 9个视野计数细胞，按着色深浅评分：无显色0分，弱着色1分，中等着色2分和强着色3分。
根据阳性细胞数占同类细胞数的百分比评分：<25%为1分，25%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。
取两项评分的乘积作为总积分，>5分为高表达，≤4分则为低表达。
以高表达判为阳性。
1.6 统计学分析SPSS 19.0 软件对数据进行分析。
卡方检验检测FBP1蛋白在30例结直肠腺癌组织与对照癌旁组织中表达阳性率的差异；配对t检验检测FBP1 基因在结直肠腺癌中与对照癌旁组织中表达水平的差异；独立样本t检验检测FBP1 基因表达水平差异与结直肠腺癌患者的年龄、性别、淋巴结转移的相关性；方差检验检测FBP1表达水平差异与结直肠腺癌患者Duke’s 分期、肿瘤分化类型的相关性。
P< 0.05 为差异有统计学意义。
2.1 FBP1蛋白在组织中的表达情况免疫组化的结果(图1)显示，FBP1在结直肠细胞中主要分布于细胞核和细胞膜，其在30例癌旁正常组织中表达为阳性有25例，阳性表达率为83.33%；FBP1在30例结直肠腺癌组织中表达为阳性有8例，阳性表达率为26.67%(表2)。