色谱条件的选择
正相色谱条件选择
正相色谱条件选择
正相色谱是一种常用的分离技术，其条件选择对于获得良好的分离效果至关重要。
以下是一些常见的正相色谱条件选择：
1. 流动相选择：正相色谱通常使用非极性溶剂作为流动相，如石油醚、氯仿等。
这些溶剂可以与样品中的极性化合物形成氢键，从而实现分离。
在选择流动相时，需要考虑样品的性质和目标分析物的极性。
2. 固定相选择：正相色谱的固定相通常是具有不同孔径和表面积的硅胶或聚合物颗粒。
固定相的选择取决于样品的性质和目标分析物的分子大小。
较大的分子通常需要较大的孔径来容纳，而较小的分子则需要较小的孔径来实现更好的分离。
3. 柱温选择：柱温对于正相色谱的分离效果也有一定的影响。
较高的柱温可以提高样品在固定相上的扩散速率，从而加快分离速度。
然而，过高的柱温可能导致样品分解或固定相的降解。
因此，在选择柱温时需要权衡分离速度和样品稳定性。
4. 流速选择：流速决定了样品在色谱柱上的停留时间，从而影响分离效果。
较高的流速可以减少分析时间，但可能导致分离不完全。
较低的流速可以提高分离度，但会增加分析时间。
因此，在选择流速时需要根据样品的性质和分析要求进行平衡。
5. 检测器选择：正相色谱常使用紫外可见光检测器（UV-
Vis）或荧光检测器进行检测。
选择合适的检测器需要考虑目标分析物的吸收或发射特性以及检测器的灵敏度和选择性。
6. 进样量选择：进样量的大小会影响色谱图的分辨率和分离度。
过大的进样量可能导致峰形变宽和分离不完全，而过小的进样量可能降低检测灵敏度。
因此，在选择进样量时需要根据样品的性质和分析要求进行优化。
气相色谱分离操作条件的选择
气相色谱分离操作条件的选择气相色谱（GC）是一种广泛应用于化学分析的分离技术。
在进行气相色谱分离操作时，需要选择合适的操作条件以保证分离效果和分析结果的准确性。
操作条件的选择涉及到以下几个方面：1.色谱柱选择：色谱柱是GC分离的关键。
选择适合待分析物性质和样品基质的色谱柱非常重要。
常见的色谱柱有填充型和毛细管型两类，填充型色谱柱适用于绝大多数分析，毛细管型色谱柱适用于高分辨、高效率以及样品量较少的分析。
2.色谱流动相选择：色谱流动相的选择主要受样品性质、待测分子的化学活性以及待测物的反应性等因素的影响。
通常选择常见的有机溶剂（如乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇等）作为色谱流动相。
3.蒸发器温度选择：蒸发器温度影响样品的蒸汽压和蒸发速率。
温度过低会导致待分析物不能完全蒸发，影响分离的效果；温度过高则可能导致样品的不稳定性和分解。
因此，需要根据待分析物的特性选择合适的蒸发器温度。
4.柱温选择：柱温是影响GC分离效果的关键因素之一、低温时，分离速度较慢，但分离程度较好；高温时，分离速度较快，但分离程度较差。
因此，柱温需要根据样品和待测物的性质以及分离要求进行调整。
5. 柱流速选择：柱流速影响分析的快速性以及分离效果。
流速过快会导致分离效果较差，分离峰变宽，而流速过慢则分离时间较长。
常用的柱流速一般为1-2 mL/min，根据样品性质和分析时间的要求进行选择。
6.应用适当的柱保护剂：GC分析过程中，待分析物有可能对柱产生损害，因此通常要考虑使用柱保护剂。
柱保护剂可减少来自于样品中杂质的残留和柱的损伤，提高色谱分析的稳定性和重复性。
选择合适的柱保护剂需要考虑样品性质、柱类型和待分析物化学性质等因素。
7.检测器选择：GC常用的检测器有火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、质谱检测器（MS）等。
根据分析要求选择合适的检测器。
8.样品前处理：样品前处理是样品在进入色谱仪之前的处理步骤，目的是去除样品中的杂质、浓缩待测物等。
离子色谱分析条件的选择
离子色谱分析条件的选择引言离子色谱分析是一种常用的分析技术，广泛应用于环境监测、食品安全、药物研究等领域。
在进行离子色谱分析前，选择适当的分析条件对于保证分析结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍离子色谱分析条件的选择过程。
柱体的选择离子色谱柱是离子色谱分析的核心部分，它负责分离和保留待测离子。
在选择柱体时，需要考虑以下几个因素：1.样品类型：不同的样品对柱体的要求不同。
常见的离子色谱柱包括强阳离子交换柱、强阴离子交换柱、单一离子交换柱等。
根据样品中离子的性质，选择适合的离子交换柱。
2.pH条件：钟离子交换柱的分离效果与样品的pH值密切相关。
在选择离子柱时，需要根据样品pH值确定柱体的选择。
3.柱体长度：柱体长度影响分离效果和分析时间。
一般来说，柱体越长，分离效果越好，但分析时间也会相应延长。
在实际使用中，根据分离要求和分析时间的限制，选择适当长度的柱体。
流动相的选择流动相是离子色谱中负责运载离子并传递到检测器中进行检测的溶液。
流动相的选择需要考虑以下因素：1.离子强度：离子强度对分离效果有很大影响。
离子强度越大，分离效果越好。
在选择流动相时，需要注意离子强度的调节。
2.pH条件：流动相的pH值也会影响离子的分离效果。
根据样品的pH值选择合适的流动相pH。
3.溶剂选择：流动相的溶剂选择需要根据样品的性质来确定。
一般来说，常用的离子色谱流动相包括水、醋酸溶液、甲醇、乙腈等。
根据样品的特点选择合适的流动相溶剂。
检测器的选择检测器是离子色谱分析的重要组成部分，负责检测离子并生成信号。
在选择检测器时，需要考虑以下几个因素：1.检测灵敏度：不同的检测器对离子的灵敏度有所差别。
根据实际需求选择具有足够灵敏度的检测器。
2.选择性：检测器的选择性直接影响结果的准确性。
一般来说，离子选择性较好的检测器包括阳离子选择性检测器、阴离子选择性检测器等。
3.检测方式：常见的离子色谱检测方式包括电导检测、荧光检测、紫外检测等。
试述气相色谱法色谱条件的选择
试述气相色谱法色谱条件的选择
气相色谱法的色谱条件选择主要包括以下几个方面：
1. 色谱柱选择：色谱柱是气相色谱法的关键部分，合适的色谱柱应具有良好的分离性和高效性。
选择色谱柱时需要考虑样品的性质、分离目标和分析条件等因素，常用的色谱柱包括非极性柱、极性柱和选择性柱等。
2. 柱温选择：柱温是气相色谱法中一个重要的操作条件，它会影响样品在色谱柱上的保留时间
和分离度。
一般通过改变柱温来调节分离效果，通常柱温的选择要考虑到样品稳定性、分离度
和分离速度等因素。
3. 柱衬底选择：柱衬底可以提高色谱柱的稳定性和降低分析物对柱的吸附性，常用的柱衬底材
料有聚硅氧烷和聚脂木素等。
4. 柱流速选择：柱流速是指气相色谱法中气相流速的选择，它会影响分离度和分析时间。
一般
来说，柱流速越高，分析时间越短，但可能会影响分离度。
柱流速的选择要综合考虑分离度、
分析时间和样品浓度等因素。
5. 检测器选择：气相色谱法常用的检测器包括火焰离子化检测器（FID）、热导率检测器（TCD）、质谱检测器（MS）等。
选择合适的检测器要考虑到样品的性质、检测灵敏度和选
择性等因素。
综上所述，气相色谱法的色谱条件选择需要综合考虑样品的性质、分离目标、分析条件和实验要求等因素，通过合理选择色谱柱、柱温、柱衬底、柱流速和检测器等条件，来达到最佳的分
离和分析效果。
气相色谱法色谱条件的选择
气相色谱法色谱条件的选择
气相色谱法（Gas Chromatography, GC）是常用的一种分离和
定性分析方法，其色谱条件的选择对于分析结果的准确性和稳定性至关重要。
以下是一些建议的气相色谱法色谱条件的选择：
1. 色谱柱选择：根据分析物的性质选择合适的色谱柱，如非极性柱、极性柱、离子柱等。
需要注意柱长、内径和填充物粒径的选择，这些参数可以根据分离目标和分析物的性质进行优化。
2. 载气选择：常用的载气包括氮气、氢气和乙烷等。
选择载气时要考虑分析物的挥发性、稳定性以及色谱柱的耐受性等因素。
此外，压力和流速也是需要考虑的参数，可以根据柱长和类型进行调整。
3. 柱温选择：柱温对于色谱分离的效果和分析时间有很大影响。
一般情况下，柱温可以根据分析物的挥发性和热稳定性进行优化，一般在室温至300℃之间选择。
4. 检测器选择：常用的检测器有火焰离子化检测器（Flame Ionization Detector, FID）、热导率检测器（Thermal Conductivity Detector, TCD）、质谱检测器（Mass Spectrometry, MS）等。
选择检测器时要考虑分析物的性质以
及灵敏度、选择性等因素。
5. 标准品选择：根据分析物的特性和分析要求选择合适的标准品，可以是单一化合物的标准品、混合标准品或是内标法等。
综上所述，选择适合的色谱条件是确保气相色谱法分析准确性和稳定性的重要环节，需要综合考虑分析物特性和要求、色谱柱、载气、柱温、检测器和标准品等各方面因素进行优化。
简述气相色谱分离操作条件的选择
气相色谱分离操作条件的选择包括以下几个方面：
1.柱温选择：柱温是气相色谱分离操作中最关键的因素之一，它直接影响到分离效果和分离速度。
一般来说，选择较高的柱温可以提高分离速度，但也会降低分离效果。
因此，需要根据样品的性质和分析目的来选择适当的柱温。
2.载气流速选择：载气流速也是影响气相色谱分离效果的重要因素之一。
一般来说，选择较高的载气流速可以提高分离速度，但也会降低分离效果。
因此，需要根据样品的性质和分析目的来选择适当的载气流速。
3.进样方式选择：进样方式包括顶空进样和液相进样两种方式。
顶空进样适用于挥发性较强的样品，而液相进样适用于挥发性较弱的样品。
需要根据样品的性质和分析目的来选择适当的进样方式。
4.柱子选择：柱子的选择也是影响气相色谱分离效果的重要因素之一。
不同类型的柱子具有不同的分离效果和分离速度，需要根据样品的性质和分析目的来选择适当的柱子。
5.检测器选择：检测器的选择也是影响气相色谱分离效果的重要因素之一。
不同类型的检测器具有不同的灵敏度和响应速度，需要根据样品的性质和分析目的来选择适当的检测器。
总之，选择适当的气相色谱分离操作条件需要综合考虑样品的性质、分析目的、仪器设备等多个因素，并通过试验和优化来确定最佳的操作条件。
色谱分离操作条件的选择
配比较低时，固定相的负载量低，允许的进样 量较小。分析工作中通常倾向于使用较低的配比。
2020/5/23
3.柱长和柱内径的选择
增加柱长对提高分离度有利（分离度R正比于 柱长L2），但组分的保留时间tR↑，且柱阻力↑，不 便操作。 柱长的选用原则是在能满足分离目的的前提下， 尽可能选用较短的柱，有利于缩短分析时间。 填充色谱柱的柱长通常为1~3米，内径3~4mm。
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4.柱温的确定
(1) 首先应使柱温控制在固定液的最高使用温度（超过该温度 固定液易流失）和最低使用温度（低于此温度固定液以固体形 式存在）范围之内。
(2) 柱温↑，被测组分的挥发度↑，即被测组分在气相中的浓
度↑，K↓，tR↓，低沸点组份峰易产生重叠。
(3) 柱温↓，分离度↑，分析时间↑。对于难分离物质对，降 低柱温虽然可在一定程度内使分离得到改善，但是不可能使之 完全分离，这是由于两组分的相对保留值增大的同时，两组分 的峰宽也在增加，当后者的增加速度大于前者时，两峰的交叠 更为严重。
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2.气化温度的选择
色谱仪进样口下端有一气化器，液体试样进样后 ，在此瞬间气化; 气化温度一般较柱温高30~50℃
防止气化温度太高造成试样分解。
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2. 载气流速的选择
作图求最佳流速。实际流速稍大于最佳流速，缩短时 间。
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三、 其它操作条件的选择
1.进样方式和进样量的选择
液体试样采用色谱微量进样器进样，规格有1μL， 5μL，10μL等。 进样量应控制在柱容量允许范围及检测器线性检测范 围之内。进样要求动作快、时间短。 气体试样应采气体进样阀进样。
影响气相色谱操作条件选择的因素
影响气相色谱操作条件选择的因素气相色谱操作条件的选择主要从如下几点考虑：１、柱长，柱内径一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。
气相色谱仪分析用柱管一般内径为3—6毫米，柱长为1—4米。
2、载气流速载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。
一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。
流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在10—100亳升之间。
3、柱温柱温是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。
选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。
提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。
一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。
4﹑进样一般讲进样快，进样量小，进样温度高其分离效果好。
对进液体样，速度要快，汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值，一次汽化，保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。
当进样量在一定限度时，色谱峰的半峰宽是不变的。
若进样量过多就会造成色谱柱超载。
一般讲柱长增加四倍，样品的许可量增加一倍。
对于常规分析，液体进样量为1—20微升；气体进样量为0.1—5毫升。
5﹑固定相固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。
a.固体吸附剂或担体粗细：一般采用40—60目、60—80目、80—100目。
当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗的好些。
b.固定液含量：固定液含量对分离效率的影响很大，它与担体的重量比一般用15%—25%。
比例过大有损于分离，比例过小会使色谱峰拖尾。
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柱温：室温
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1. 胞苷
2.尿苷
3.鸟苷
4.胸苷
5.腺苷
分析条件：
色谱柱：ODS柱 （15cm× 6.0mm） （经甲烷基化处理的ODS柱）
流动相：100mM磷酸缓冲液和 200mM高氯酸钠溶液 梯度洗脱
流速：1.5ml/min
柱温：50℃
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1.未知峰
2.胞嘧啶
3.尿嘧啶
4.鸟嘌呤
5.腺嘌呤
6.胞苷
7.尿苷
8.胸腺激素
9.腺苷
10.鸟苷
11.胸苷
核酸
色谱柱选择方法
糖的分离
★糖的种类很多，可分为单糖（木糖，阿拉伯糖；葡萄糖，果糖，半乳 糖）、二糖（蔗糖，麦芽糖）、低聚糖和多糖。
★单糖和二糖可以使用氨基柱分离（分离异构体效果不很好），还可以 使用阴离子交换柱分离，缺点是分离时间较长。
色谱柱选择方法
肽和蛋白质
凝胶过滤：根据分子量的大小差别进行分离 离子交换：根据分子所带的电荷的差别进行分离 反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进行分离 亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进行分离
蛋白质
分析条件：
色谱柱：Shim-pak Diol－300 （50cm× 7.9mm） （二醇基水溶性凝胶柱，
进行洗脱；
分析条件：
核酸
色谱柱：Shim-pak WAX－1
（5cm× 4.0mm）
（叔氨基阴离子交换柱，
用于分析核苷酸）
流动相：20mM磷酸缓冲液（ pH＝7 ）
480mM磷酸缓冲液（ pH＝6.8 ）
梯度洗脱
流速：1.0ml/min
柱温：45℃
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1.尿苷酸
2.胞苷酸
（1）10cm～50cm内径为制备柱 （2）4cm～8cm内径为标准柱 （3）3cm一下内径为小孔柱或微孔柱和毛细管柱 （4）柱长一般为15cm、25cm、30cm；50cm一般用于制
备柱或特殊柱型，5cm一下为快速柱(包括预柱和保护 柱)
色谱柱选择方法
1.氨基酸
ห้องสมุดไป่ตู้
NH2
R C COOH H
(1)结构特殊，一般使用离子交换柱分离，阳离子交换柱是使用最广 泛,是最成熟的方法。分离氨基酸的阳离子柱分为锂型柱和钠型柱， 锂型柱可以分离谷氨酰胺和谷氨酸。
色谱柱的选择
• 大多数化合物是可以使用C18柱分离
• C18优点：柱便宜，流动相便宜，使用时间长，易于通 过改变流动相得到最佳分离，
• 药品本身具有纯度高的特点，容易分离，辅料和分解 产物是分离的难点。
• 比中药成分的分离，体液中药物成分的分离，微量成 分的分离，杂质成分的分离，食品中药物残留的分离 简单的多。
色谱柱的分类
1． 根据担体材料分类
（1）硅胶型：SiO2；C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯 基
（2）聚合物型： 聚苯乙烯类（离子交换；凝胶色谱柱）； 聚丙烯酸酯（离子交换）； 聚乙烯醇：C18；离子交换
（3）钛柱：比硅胶型的稳定性提高 （4）其它类型
色谱柱的分类
2. 根据分离方式分类
选择色谱条件的方法
• 1．查文献，学习别人的方法
• 2．文献中没有的新药和新化合物可以使用结构类似化 合物的色谱条件
• 3．自己积累药物分析的色谱条件，从中寻找规律，尤 其是要总结解决问题的方法。把自己积累的方法用于 以后的色谱分析中。
不建议在自己对被分离物质的性质不了解的情况下，自己摸索色谱条件
(2)反相柱也可以分离氨基酸，但不能分离所有氨基酸。柱前衍生化 法分离水解氨基酸也非常有效，且方法简便，所用的仪器简单。
氨基酸分析
分析条件：
色谱柱：Shim-pak ISC-07/S1504Li（15cm× 4.0mm） （Li型磺酸基，氨基酸分析专用柱） 流动相：柠檬酸缓冲溶液，梯度洗脱 流速：0.3ml/min 柱温：55℃ 检测器：荧光（Ex.238nm,Em450nm） 方法：OPA柱后衍生化法
(1)正相：SiO2； CN；NH2；苯基 (2)反相：C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2 ；苯基 (3)离子交换：弱碱阴离子交换；弱酸阳离子交换
强碱阴离子交换；强酸阳离子交换 (4)凝胶过滤：水溶性凝胶过滤；油溶性凝胶过滤 (5)其它类型：手性柱等
色谱柱的分类
3.根据色谱柱尺寸分类
N HN
NH2 N
N
N
N CH2OH
HH
H
H
OH OH
NH2 N
N
N
OH
N HO P O CH2
O
HH
H
H
OH OH
NH2 N
N
腺嘌呤（核酸碱基）
腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）
腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）
腺嘌呤（核酸碱基）和腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）用阳离子交换柱或反相柱进行分离； 腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）用阴离子交换柱分离，选择合适的流动相也可以用反相柱
流动相：硫酸铵/磷酸缓冲液（ pH＝7 ） 梯度洗脱
流速：0.5ml/min 柱温：室温 检测器：紫外（220nm） 色谱峰：1.细胞色素C 2.肌红蛋白
3.核糖核酸酶A 4.铁传递蛋白 5.糜蛋白酶原A
色谱柱选择方法
核酸
核酸在生命科学领域中占有重要位置，在今后的新药研发领域中同样占有重要位 置。核酸可以分为一下三类：
蛋白质分析专用柱）
流动相：10mM磷酸缓冲液（ pH＝7 ） 和0.1MNaCl
流速：1.0ml/min 柱温：室温
检测器：紫外（280nm）
色谱峰：1.谷氨酸脱氢酶 2.乳酸脱氢酶
3.烯醇酶
4.腺苷酸激酶
5.细胞色素C
蛋白质
分析条件：
色谱柱：Shim-pak Diol－300 （50cm× 7.9mm） （消除残留硅醇基C2柱， 300A多孔硅胶）
色谱条件包括以下内容：
1.仪 器：生产商，型号 2.色谱柱：柱商品名称，填料商品名称，填料类型，
色谱 柱长度（cm）和内径（mm），填料粒经（um） 3.流动相：流动相组成和比例，流速（ml/min） 4.检测器：型号及参数（如波长nm） 5.进样量：体积（ul） 6.柱 温：（℃）
其中我们更为关心的是：色谱柱和流动相（本章节主要讨论的问题）
3.腺苷酸
4.鸟苷酸
5.尿苷二磷酸 6.胞苷二磷酸
7.腺苷二磷酸 8.尿苷三磷酸
9.鸟苷二磷酸 10.胞苷三磷酸
11.腺苷三磷酸 12.鸟苷三磷酸
核酸
分析条件：
色谱柱：Shim-pak SBC－C8
（15cm× 2.5mm）
（小孔径硅胶键合C8）
流动相：20mM磷酸二氢钾缓冲液/甲醇（93/7）
流速：0.5ml/min