碱性蛋白与酸性蛋白的显示
第二章细胞生物学的研究技术和方法
第二章细胞生物学的研究技术和方法一、选择题：1.在光学显微镜下所观察到的组织或细胞结构一般称为A.显微结构B.超微结构C.亚显微结构D.分子结构2.研究细胞的超微结构一般要利用下列哪种技术A.光学显微镜技术B.电子显微镜技术C.X射线衍射技术D.离心技术3.利用不同性质有机染料可对细胞中不同成分选择性染色，下列哪种结果有误A.碘液可使口腔上皮细胞的细胞质和细胞核呈深浅不同的棕黄色B.吉姆萨染液可使细胞核或染色体呈紫红色或桔红色C.甲基绿可使RNA分子呈蓝绿色D.派洛宁可使RNA分子呈红色4.适于观察无色透明活细胞显微结构的光学显微镜是A.相差显微镜B.暗视野显微镜C.荧光显微镜D.偏振光显微镜5.光学显微镜的分辨率（最小分辨率）可达A. 0.1?mB. 0.2?mC. 0.3?mD. 0.4?m6.关于电子显微镜，下列哪项有误A.组织或细胞在透射电镜观察前均需做超薄切片B.分为透射式和扫描两类C.分辨率最高可达0.2nmD.利用电子束作照明源7.关于透射式电子显微镜，下列哪项叙述是错误的A.适于观察细胞的外表形貌B.以电子束作为光源C.电子透过标本后在荧光屏上成像D.分辨率较高8.关于扫描电子显微镜，下列哪项有误A.20世纪60年代才正式问世B.景深长，成像具有强烈立体感C.电子扫描标本使之产生二次电子，经收集放大后成像D.适于观察细胞的内部构造9.福尔根反应（Feulgen reaction）是一种经典的细胞化学染色方法，常用于细胞内A.蛋白的分布与定位B.脂肪的分布与定位C.酸性磷酸酶的分布与定位D. DNA的分布与定位10.研究组织或细胞显微结构的主要技术是A.光镜技术B.电镜技术C.离心技术D.电泳技术11.研究细胞超微结构的主要技术A.光镜技术B.电镜技术C.离心技术D.电泳技术12.分离细胞内不同细胞器的主要技术是A.光镜技术B.电镜技术C.离心技术D.电泳技术13.利用放射性同位素标记物能使照相乳胶感光的原理来探测细胞内某种物质的含量与分布的方法是A.放射自显影技术B.免疫荧光镜技术C.免疫电镜技术D.原位杂交技术14.用荧光染料标记的抗体处理细胞后在荧光显微镜下对细胞中特殊分子进行定位属于A.放射自显影技术B.免疫荧光镜检术C.免疫电镜技术D.原位杂交技术15.直接取材于机体组织的细胞培养称为A.细胞培养B.原代培养C.传代培养D.细胞克隆16.当体外培养的细胞增殖到一定密度后以1：2以上的比例转移到几个容器中进行再培养,称为A.细胞培养B.原代培养C.传代培养D.细胞克隆17.模拟体内的条件使细胞在体外生存、生长和繁殖的过程称为A.细胞培养B.原代培养C.传代培养D.细胞克隆18.分离出单个细胞在适当的条件下使之增殖成均一的细胞群体称为A.细胞培养B.原代培养C.传代培养D.细胞克隆19.体细胞杂交又称为A.细胞培养B.原代培养C.传代培养D.细胞融合20.适于观察细胞内超微结构的显微镜是A.透射电镜B.扫描电镜C.荧光显微镜D.倒置显微镜21.从血液中分离收集血细胞一般利用A.流式细胞分析仪B.超速离心机C.高速离心机D.低速离心机22.从破碎的细胞中分离收集线粒体一般所需的仪器是A.流式细胞分析仪B.超速离心机C.高速离心机D.低速离心机23.要观察肝组织中的细胞类型及排列，应先制备该组织的A.切片B.滴片C.涂片D.装片24小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成细胞的（）来进行观察。
蛋白质的酸碱性质名词解释
蛋白质的酸碱性质名词解释蛋白质是生物体内最重要的基础物质之一，它在维持生命体的正常功能、参与各种生物过程起着至关重要的作用。
而蛋白质的酸碱性质则是指蛋白质分子中存在的酸性和碱性基团，以及蛋白质在不同pH下的电荷状态和溶解行为。
一、酸性基团蛋白质分子中常见的酸性基团有羧基(-COOH)和磷酸基团(-PO4)。
羧基是一种具有弱酸性的官能团，其在水溶液中会释放出H+离子，使环境呈酸性。
蛋白质中的羧基通常存在于氨基酸的侧链上，例如天冬氨酸和谷氨酸。
二、碱性基团蛋白质分子中常见的碱性基团有氨基基团(-NH2)和胺基基团(-NH3+)。
氨基基团是一种具有碱性的官能团，它可以接受H+离子形成氨基离子，使环境呈碱性。
蛋白质中的氨基基团通常存在于氨基酸的侧链上，例如赖氨酸和精氨酸。
三、电荷状态和溶解行为蛋白质的溶解行为受到其电荷状态的影响。
当蛋白质中的酸性基团和碱性基团接近平衡时，蛋白质呈现等电点，即在此pH值时蛋白质净电荷为零。
当溶液的pH值低于等电点时，蛋白质分子带正电荷；当溶液的pH值高于等电点时，蛋白质分子带负电荷。
此外，蛋白质的酸碱性质还影响其溶解性。
在低pH值条件下，蛋白质分子带正电荷，相互之间会产生静电排斥作用，使蛋白质分子离散分散在溶液中。
而在高pH值条件下，蛋白质分子带负电荷，相互之间会发生静电吸引作用，使蛋白质分子聚集在一起形成胶体。
总之，蛋白质的酸碱性质是由其分子中的酸性和碱性基团所决定的。
酸性基团的存在使蛋白质具有酸性性质，而碱性基团则使其具有碱性性质。
蛋白质的电荷状态和酸碱性质的变化，不仅对其溶解性有影响，还对其结构和功能产生重要作用。
虽然蛋白质的酸碱性质对于生物体的正常功能至关重要，但我们在日常生活中也能从中受益。
例如，了解蛋白质的酸碱性质有助于我们正确存储和烹饪食物。
在烹饪过程中，不同食材中的蛋白质会发生酸碱性变化，从而影响食物的质地、口感和营养价值。
因此，了解蛋白质的酸碱性质，我们可以根据需要来控制食物的烹调时间和温度，以确保食物的口感和营养。
实验九细胞内蛋白质的分布与显示
细胞内蛋白质 的显色与分布
(必做，综合性实验，4学时）
实验目的
ห้องสมุดไป่ตู้
掌握原位显示细胞内酸性、 碱性蛋白质的方法并了解细 胞内蛋白质的一般分布
实验原理
酸、碱性蛋白质的显示及分布
组织经三氯乙酸处理后可将核酸（DNA &RNA）抽提掉， 细胞内保留下组蛋白和其它蛋白，组蛋白为碱性蛋白， 其它蛋白呈酸性为酸性蛋白。蛋白质为两性电解质，在 较其等电点为碱性环境中，蛋白质本身带阴电荷，在较 其等电点为酸性环境中，蛋白质本身带阳电荷，组蛋白 的等电点约8.5，酸性蛋白的等电点约4.6—6.75，固绿 为酸性染料，其色素离子带阴电荷，在pH 2.2时，组蛋 白和酸性蛋白均带阳电荷，均可以与固绿色素离子结合 而着色。在pH8.0时，组蛋白带有阳电荷，仍然可以与固 绿色素离子结合着色，而酸性蛋白带有阴电荷，不能与 固绿的色素离子结合，不能显色。
缓冲液(pH2.2) 洗30s 制片镜检
缓冲液(pH8.0) 洗30s 制片镜检
实验结果
• 经固绿（pH2.2）染色后,细胞 质和细胞核均呈绿色 • 经固绿(pH8.0) 染色后,只有 细胞核被染成绿色
固绿染色法示细胞内总蛋白
固绿染色法示细胞内碱性蛋白
实验报告要求
摘要及关键词
前言 材料和方法 结果与分析 参考文献
实验材料及试剂
仪器：显微镜 水浴锅 材料：洋葱鳞茎 试剂：10%甲醛； 5%三氯乙酸； 0.1%固绿（pH2.2和pH8.0）； 磷酸缓冲液（ pH2.2和pH8.0）； 蒸馏水
实验流程
洋葱鳞茎内表皮
10% 甲醛固定 15 min
蒸馏水洗3次（吸去水) 5%三氯乙酸 90oC 15min 用蒸馏水轻缓洗涤至无气味 0.1% 固绿染色5min （pH2.2） 0.1%固绿染色5min （pH8.0）
实验报告 脂类的化学——苏丹三染色
姓名 xxxx 班级 xxxxxx 同组人 xxxxxxxx 科目细胞生物学实验题目脂类的化学——苏丹Ш染色组别第2组一．实验目的1.熟悉脂类的显示技术。
2.了解脂类在细胞中的分布。
二．实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。
脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。
用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。
常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：冰冻切片，明胶包埋冰冻切片，铺片法。
本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪。
当它与含有脂类的标本接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。
三．实验仪器及试剂1.仪器解剖盘，解剖剪，镊子，盖玻片，载玻片，显微镜，胶头滴管2.试剂苏丹Ш染液，甲醛钙溶液，70%乙醇溶液，蒸馏水3.材料小白鼠一只四．实验步骤1.断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
蛋白质的颜色反应和沉淀反应
蛋白质作为食品添加剂
ห้องสมุดไป่ตู้
01
蛋白质可以作为食品添加剂，如乳化剂、增稠剂等，改善食品
的口感和质地。
蛋白质作为营养强化剂
02
蛋白质可以作为营养强化剂添加到食品中，提高食品的营养价
值。
蛋白质在功能性食品中的应用
03
蛋白质可以用于制备功能性食品，如低脂、低糖、高纤维等。
在农业领域的应用
1 2
蛋白质作为肥料
蛋白质可以作为有机肥料，提供植物所需的营养 元素，促进植物生长。
质谱分析法
总结词
通过测量蛋白质离子的质量和电荷比值，可 确定蛋白质的分子量和结构。
详细描述
质谱分析法利用高能电子束或激光将蛋白质 离子化，然后在电场和磁场中进行分离和检 测。通过测量离子的质量和电荷比值，可以 确定蛋白质的分子量和结构。质谱分析法具 有高灵敏度和高分辨率的特点，是蛋白质纯 度检测的重要手段之一。
详细描述
考马斯亮蓝G-250是一种灵敏的染料，可以与蛋白质结合产生颜色变化，通过比色法可以测定蛋白质的含量。该 方法具有高灵敏度和准确性，被广泛应用于生物化学实验中蛋白质的定量分析。
02
蛋白质的沉淀反应
盐析法
总结词
通过向蛋白质溶液中加入高浓度的盐 溶液，降低蛋白质溶解度，使其从溶 液中沉淀出来。
紫外吸收法
总结词
紫外吸收法是一种利用蛋白质在紫外光区有特征吸收峰 的性质来定量测定蛋白质含量的方法。
详细描述
紫外吸收法的基本原理是蛋白质分子中的共轭双键在紫 外光区有特征吸收峰，通过测定特定波长下的吸光度值 ，可以计算蛋白质的含量。该方法具有较高的灵敏度和 准确性，适用于测定各种蛋白质，包括球蛋白、纤维蛋 白等。
细胞生物学实验手册：细胞组分的化学反应
实验七细胞组分的化学反应【实验目的】了解核酸、蛋白质、糖及酶的细胞化学反应原理，掌握Brachet反应及碱性蛋白、酸性蛋白、糖原和过氧化物酶的细胞化学染色方法。
【实验用品】一、材料和标本蟾蜍、小白鼠各一只、肝脏石腊切片、培养的Hela细胞。
二、器材和仪器光学显微镜、解剖器材、蜡盘、载玻片、吸水纸、染色缸、盖玻片、水浴箱。
三、试剂PBS缓冲液(pH7.2)、甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液、纯丙酮、l/2丙酮+1/2二甲苯、纯二甲苯、70％乙醇、5％三氯醋酸、0.1％碱性固绿、0.1％酸性固绿、0.5％硫酸铜、联苯胺混合液、1％番红、无水乙醇、过碘酸酒精液、Schiff 氏酒精液、亚硫酸水、Ehrlieh苏木精、95％乙醇、Carnoy固定液(甲醇：冰醋酸=3:1，体积比)【实验内容】细胞的组织化学方法，是研究细胞成分常用的方法之一。
它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。
一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA(一)原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后，其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应，一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力，且这两种染料的作用有选择性，甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色，呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。
由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。
(二)方法l．接种Hela细胞于盖片上并培养24～48小时，使长成单层。
2．取出盖片，用PBS(pH7.2)轻轻冲洗盖片表面去除残渣。
3．放入Carnoy固定液中固定l小时。
4．浸入甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液中30分钟染色。
酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的性质比较
酸性蛋白酶性质
（1）酸性蛋白酶的pH适应性 酸性蛋白酶的最适 pH 为 2.5 ～5.0， 但 不同微生物的酶稍有差异 （2）酸性蛋白酶的温度适应性 酸性蛋白酶的适宜温度 为 30 — 50 ℃ ， 最适作用温度为40 ℃左右。 在温度较低时，酶活性随温度的上升而增 大，在温度达到酶的最适温度后，酶活力随温 度升高而急剧下降，失活很快。一般50 ℃以下 可保持稳定，但随产酶微生物菌种不同而有所 差异。
碱性蛋白酶性质
大多数微生物碱性蛋白酶作用于肽链的中间，生成二个 肽。除酶本身的氨基酸残基外，不具有特定的活性基团， 酶发挥作用是不需要特定的激活剂，而需要金属离子激 活，如除去金属离子就不能作用，必须的金属离子有 Mn2+、Mg2+、Zn2+、Co2+、Fe2+等 。酶的活性中心有丝 氨酸，故又称丝氨酸蛋白酶。因此，这类蛋白酶遇到作 用于丝氨酸的试剂二异丙基氟磷酸（DFP）便失活，这 是碱性蛋白酶的一个重要特征。但是碱性蛋白酶对金属 螯合剂EDTA、重金属和巯基试剂却不敏感。钙离子对此 酶有一定的稳定作用。碱性蛋白酶有较大的耐热性， 55℃下放置30min能保留大部分活力。碱性蛋白酶作用 位点要求在水解点羧基侧具有芳香族或疏水性氨基酸 （如酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸等），它比中性蛋白酶 有更大的水解能力。此外，碱性蛋白酶还具有酯酶的活 力。
酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的性质比较
酸性蛋白酶 活性中心
最适pH 最适温度
碱性蛋白酶 丝氨酸残基
9-11（大多数） 分布范围较广 失活（重要特征）
天冬氨酸残基
2.5-5.0 30-50℃ 不敏感
对二异丙基氟磷 酸（DFP） 对EDTA
金属离子
不敏感
Ag+轻度抑制 Gu2+、Mn2+激活
蛋白质的沉淀反应实验报告结果
蛋白质的沉淀反应实验报告结果通过掌握蛋白质的沉淀反应，了解蛋白质的性质和结构，并掌握蛋白质的分离和纯化技术。
实验原理：蛋白质是生物体内最重要的基本物质之一，是构成细胞和组织的重要组成部分。
蛋白质的沉淀反应是利用酸、碱、盐等物质对蛋白质的特殊性质进行分离和纯化的一种方法。
蛋白质在不同的pH值下具有不同的电离状态，当pH值达到其等电点时，蛋白质处于等电点电荷中性状态，此时蛋白质的溶解度最小，易于沉淀。
沉淀反应的原理是利用酸、碱、盐等物质使蛋白质达到等电点电荷中性状态，从而使蛋白质沉淀出来。
实验过程：1.制备酸性和碱性蛋白质溶液：取鸡蛋清和牛奶各10ml，分别加入10%的盐酸和氢氧化钠，调节pH值至2和10。
2.沉淀反应：取酸性和碱性蛋白质溶液各1ml，加入等量的10%三氯醋酸，轻轻摇匀，放置1小时，观察沉淀情况。
3.沉淀物的洗涤：将沉淀物用去离子水洗涤3次，使其去除杂质。
4.沉淀物的溶解：将沉淀物加入0.1mol/L NaOH中，搅拌至溶解，调节pH值至7左右。
5.测定蛋白质浓度：采用比色法测定蛋白质浓度。
实验结果：1.酸性蛋白质溶液的沉淀反应：在酸性条件下，鸡蛋清溶液中的蛋白质与三氯醋酸反应，产生大量白色沉淀物，沉淀率高达90%以上。
2.碱性蛋白质溶液的沉淀反应：在碱性条件下，牛奶溶液中的蛋白质与三氯醋酸反应，产生少量白色沉淀物，沉淀率仅为10%左右。
3.沉淀物的洗涤：经过去离子水洗涤后，沉淀物变得干净透明，无杂质。
4.沉淀物的溶解：经过加入0.1mol/L NaOH的溶解，沉淀物完全溶解，呈现出淡黄色透明液体。
5.测定蛋白质浓度：利用比色法测定蛋白质浓度，鸡蛋清溶液中的蛋白质浓度约为0.6g/L，牛奶溶液中的蛋白质浓度约为0.1g/L。
实验结论：1.酸性条件下，鸡蛋清中的蛋白质易于沉淀，沉淀率高达90%以上；而在碱性条件下，牛奶中的蛋白质沉淀率仅为10%左右。
2.经过去离子水洗涤后，沉淀物变得干净透明，无杂质。
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1取一滴血滴于玻片的一端 2以另一玻片以30-45度的角度匀速向前推片，中间不 要停顿，不可反复涂片，动作要快以防止血液凝固。 3自然干燥后固定。
方法与步骤
1.新鲜血涂片自然干燥10min，入70%乙醇溶液中 固定10min。 2.取 出 晾 干 入7 0 － 9 0 ℃ 5 ％ 三 氯 醋酸 溶 液1 5 － 20min。 3.在冷5％三氯醋酸溶液漂洗后，蒸馏水洗3次 （每次5min）。 4.分别插入染色液中染色（酸性蛋白染色液染色 15min，碱性蛋白染色液染色45min） 5.取出，蒸馏水洗。 6.风干，二甲苯透明2min，树胶封片。
观察结果
酸性蛋白染色时，蟾蜍红细胞质内 遍布绿色，细胞核内绿色稀少。 碱性蛋白染色时，蟾蜍红细胞核为 绿色。
酸性蛋白与碱性蛋白的分布 有何区别？
显示细胞核内酸性蛋白 显示细胞内酸性蛋白
显 示 细 胞 核 内 碱 性 蛋 白
蟾蜍取血
常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组 织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体 和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头 部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及 一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直 l 2mm 插入此凹陷约l～2mm，随即将针尖转向头侧 插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转 向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其 四肢松软，呼吸消失为止。 以破坏脊髓法处死蟾蜍，将其腹面向上放人蜡 盘中，剪开胸腔，打开心包。小心将心脏剪一 小口，取心脏血一滴滴在干净载玻片一端，推 片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。
碱性蛋白与酸性蛋白 的显示
目的要求
1.学会制血涂片 2.了解碱性蛋白与酸性蛋白的显示方法的 原理及操作步骤 3.了解碱性蛋白与酸性蛋白的分布
实验原理
以酸性氨基酸成分为主的蛋白质为酸性 蛋白;以碱性氨基酸成分为主的蛋白质为 碱性蛋白。细胞核内有组蛋白（碱性蛋 白）及少量酸性蛋白，细胞质中主要有 酸性蛋白，标本经三氯醋酸处理抽提掉 核酸后，用不同pH值的快绿染液分别染 色，使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质 显示出来。
实验用品
1.器材：水浴锅，染色缸，载玻片，注射器等 器材：水浴锅，染色缸，载玻片， 器材 2.试剂：①70％乙醇溶液 ②5％三氯醋酸溶液 ③ 试剂： 70％ 试剂 005％Na2CO3 0.2％快绿 ④0.005％Na2CO3溶液 75mol/L HCL: 盐酸0 109ml 比重1 19） ml（ ⑤1.75mol/L HCL: 盐酸0.109ml（比重1.19）加蒸 馏水至100ml（若盐酸比重1 16则取 13ml 100ml 则取0 ml） 馏水至100ml（若盐酸比重1.16则取0.13ml） 酸性蛋白染色液（ pH2 ⑥ 酸性蛋白染色液 （ pH2.2）：0.2％ 快绿和等量 75mol/L HCL溶液混合而成 1.75mol/L HCL溶液混合而成 碱性蛋白染色液（ pH8 ⑦ 碱性蛋白染色液 （ pH8.0）：0.2％ 快绿和等量 005％Na2CO3溶液混合而成。 0.005％Na2CO3溶液混合而成。 3.材料：蟾蜍血涂片。 材料： 材料 蟾蜍血涂片。