实验酶循环法测定总胆汁酸
血清总胆汁酸
血清总胆汁酸血清总胆汁酸(TBA)测定1 目的总胆汁酸(TBA)是胆甾醇在肝内分解以及在肠—循环中胆汁酸代谢产物的总称。
又称为初级胆汁酸和二级胆汁酸。
血清胆汁酸水平反应肝实质性损伤，尤其在急性肝炎，慢活肝，酒精性肝损伤和肝硬化时有较灵敏的改变，是肝病实验室诊断的一项重要指标。
2 测定方法循环酶速率法3 原理胆汁酸被3α—羟基类固醇脱氢酶及Thio—NAD特异性氧化，生成3—酮类固醇及Thio—NADH。
此外，生成的3—酮类固醇在3α—羟基类固醇脱氢酶及NADH 存在下,生成胆汁酸和NAD。
如上述，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio—NADH吸光度的变化，以求得胆汁酸值。
4 标本4.1 静脉抽取病人空腹血，置于洁净干燥试管或含促凝剂的真空管内。
4.2 采血后应立即送到检验科生化室。
04.3 样品收到后立即分离血清，不能及时测定的血清应于2-8C保存。
4.4 严重溶血或脂血的标本不能测定。
5 设备及试剂5.1 日立7600全自动生化仪。
5.2 美康总胆汁酸试剂。
5.3 总胆汁酸试剂应贮存于2—8?冰箱。
6 操作步骤6.1样本的准备:将编好号的样品离心，取血清加入样品杯放到样品盘的规定位置，再把样品盘放到仪器中相应位置。
6.2试剂的检查:每天测定前先检查各种试剂的数量、效期、定标等情况，认无误后方可进行测定。
6.3 操作方法:详见7600生化仪操作手册。
7 校准程序7.1 校准品的准备和储存我室使用的校准品是朗道混合校准品，浓度为一定值校准品，根据批号浓度有一定的差异。
使用时从冰箱中拿出，室温放置一段时间后放入编辑好的架子位置上，根据校准程序进行操作。
7.2 校准条件在室内质控失控，更换仪器主要零配件，进行仪器大保养后和定期校准时均需校准。
7.3 校准程序将液体校准品恢复室温后放置在编辑好的架子位置上。
在calibration界面中选择TBA校准，选择校准方法，再放上校准架子，再点击Start，开始进行校准。
总胆汁酸(TBA)测定试剂(盒)(酶循环法)产品技术要求新产业
医疗器械产品技术要求编号：总胆汁酸（TBA）测定试剂（盒）（酶循环法）2.性能指标2.1外观试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。
2.2装量试剂装量的装量应按表1，液体装量的最大允许负偏差应为5%。
2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度试剂（盒）测试空白样本，在37 ℃±0.1 ℃ 、405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度应≤0.800 Abs。
2.3.2试剂空白吸光度变化率用试剂（盒）测试空白样本，在37℃ 0.1℃，405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度变化率≤0.010 Abs/min。
2.4分析灵敏度试剂（盒）测试27.1 μmol/L 的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）≥0.060 Abs/min。
2.5线性区间试剂（盒）线性在(0.00，200.00] μmol/L区间内：a) 线性相关系数r≥0.990；b) (0.00，50.00] μmol/L 区间内，线性绝对偏差应在±5 .00 μmol/L 范围内；(50.00，200.00]μmol/L 区间内，线性相对偏差应在±10%范围内。
2.6精密度2.6.1重复性试剂（盒）测试浓度在（25±5）μmol/L 和（49±10）μmol/L 范围内的样本时，变异系数CV≤4.0%。
2.6.2批间差试剂（盒）测试浓度在（25±5）μmol/L 和（49±10）μmol/L 范围内的样本时，相对极差R≤6.0%。
2.7准确度测可溯源至有证参考物质的校准品，相对偏差 B 在±10%范围内。
生化试剂对循环酶法测定血清总胆汁酸的干扰因素分析和改进措施
［ ］ 郑荣辉 ， ３ 李
２ ６—２ ８．
健， 黄赖机 ， 红景天 对鼻 咽癌 同步放 化疗 等．
期内患者生存 质量 的影 响 ［ ］ 现 代 医院 ，０ ０，０ １ ）： Ｊ． ２１ １ （Ｏ
后Ｅ Ｂ病毒抗原检测的阳性率明显增加； ３中， 表 年龄 ＞４ ０岁的健康 体检者 的血 清 Ｅ Ｖ Ａ— ｇ 、Ａ— ｇ Ｂ— Ｃ Ｉ Ｅ Ｉ Ａ Ａ
现代 医院 ２ １ ０ ２年 ２月第 １ ２卷第 ２期
专 业 技 术 篇
Ｍｏｅ Ｈ ｓｉｌ ｅ ０ ２Ｖ ｌ ２Ｎ ｄｍ ｏｐｔ ｂ２ １ ｏ ｏ２ ａＦ １
生 化 试 剂 对 循 环 酶 法 测 定 血 清 总 胆 汁 酸 的 干 扰 因素 分 析 Fra bibliotek 改 进措 施
梁耀 荣 谢 国强
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以 Ｔ Ａ为检 测项 目， Ａ Ｔ Ａ Ｔ等 ２ Ｂ 以 Ｌ 、Ｓ ０个 生化 常规
干扰 因素， 寻找 消除携 带污染的有效方法 。方法
血清总胆汁酸循环酶法测定法
血清总胆汁酸循环酶法测定法1. 实验原理胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
（胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶及Thio-NAD 特异性地氧化，生成3-酮类固醇及Thio-NADH，此外，生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶及NADH 存在下，和NAD。
如上所述，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
）2. 标本：2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。
2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。
应使用新鲜标本。
标本必须避光保存。
3. 标本存放4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂威特曼总胆汁酸测定试剂盒Good’s缓冲液120mmol/L3a-羟基类固醇脱氢酶(3a-HSD) 12.5 KU/L硫代辅酶(Thio-NAD) 6.1g/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻，试剂2必须避光保存。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
血清总胆汁酸测定标准操作规程
血清总胆汁酸测定（循环酶法）标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清总胆汁酸测定(缩写TBA)；组合项目申请：血生化中肝功能测定加选本项目。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，在冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理循环酶法。
胆汁酸被3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）氧化，生成3酮类固醇及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）。
生成的3酮类固醇在3a-羟基类固醇脱氢酶及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）存在下，生成胆汁酸及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如此进行循环反应，最后测定生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）的吸光度，求得胆汁酸浓度值。
胆汁酸测定试剂盒(循环酶法)标准化操作规程TBA-SOP
胆汁酸测定试剂盒（循环酶法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中胆汁酸的含量。
4 检验方法本试剂盒采用循环酶法测定胆汁酸的含量。
5 检验原理本试剂采用酶分析法测定血清总胆汁酸。
3α-羟基类固醇脱氢酶特异性作用于3α-羟甾族化合物，使之转化为相应的酮类固醇，反应中thio-NAD被还原为thio-NADH。
通过在405nm波长处测定单位时间内吸光度的变化值，可以计算出样品中总胆汁酸的含量。
6 标本要求6.1 样本为空腹患者血清。
样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。
6.2 样本应避免微生物污染，在2℃～8℃可稳定数月。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司胆汁酸试剂盒（循环酶法）7.27.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为12个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 试剂空白：试剂空白吸光度：A≤0.800。
试剂空白吸光度变化率：△A/min≤0.040。
8.2.2 分析灵敏度：测试1μmol/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＞0.0002。
8.2.3 线性范围：1μmol/L～180μmol/L；线性相关系数r≥0.9900；[1,36]μmol/L区间内，线性绝对偏差应不超过±7.2µmol/L；（36,180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15％。
8.2.4 准确度：比对试验：r≥0.9900；[1，36]μmol/L区间内，绝对偏差不超过±7.2μmol/L，（36，180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15%。
总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)产品技术要求zhongshengbeikong
总胆汁酸测定试剂盒（酶循环法）适用范围：本试剂盒与ABBOTT ARCHITECT c4000/c8000/c16000全自动生化分析仪配套使用，用于体外定量测定人血清中总胆汁酸的浓度。
1.1包装规格液体双剂型试剂1（R1）：60mL×2，试剂2（R2）：20mL×2，校准品：2mL×1；试剂1（R1）：53mL×2，试剂2（R2）：20mL×2，校准品：2mL×1；试剂1（R1）：70mL×4，试剂2（R2）：25mL×4，校准品：2mL×1。
1.2主要组成成分1.2.1 试剂1（R1）（液体）Thio-NAD+952.9mg/L1.2.2 试剂2（R2）（液体）NADH6.1g/L3-αHSD12500U/L 1.2.3 校准品（液体）在Mes-HCL缓冲液中添加甘氨胆酸钠，目标浓度：50.0μmol/L。
（每批定值，值有批特异性，详见值单）2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足：2.1.1 试剂1（R1）应为浅黄色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；2.1.2 试剂2（R2）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；2.1.3 校准品应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长405nm（400nm～420nm）处（光径1cm），试剂空白吸光度（A）应≤0.500；试剂空白吸光度变化率（△A/min）≤0.020。
2.4 准确度用中生试剂和已上市同类试剂分别测定40个在线性范围内不同浓度的样本，在[0.0,180.0]μmol/L检测范围内，比对两组数据的相关系数（r）及测值的偏差，要求r≥0.9900；在(10.0,180.0]μmol/L区间内，相对偏差应不超过±15%；在[0.0,10.0]μmol/L区间内，绝对偏差应不超过±1.5μmol/L。
血清总胆汁酸操作程序
血清总胆汁酸操作程序1.目的规范血清总胆汁酸（TBA）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4．1 测定方法：循环酶法4．2 测定原理：胆汁酸会被3α-羟甾醇脱氢(3α-HSD)以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)。
此外生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢(3α-HSD)及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)在405nm处的吸光度变化，以求的胆汁酸的浓度。
5. 标本采集与处理5．1标本种类：新鲜无溶血血清。
5．2标本采集：见生化标本采集程序。
5.3 标本稳定性：4℃保存可稳定1周，-20℃保存可稳定3个月。
6. 试剂6.1试剂：本科使用浙江伊利康生物工程有限公司试剂盒，为即用式液体双试剂。
试剂内各主要成分如下：试剂成分浓度试剂1 Good’缓冲液80mmol/LThio-NAD 0.95g/L试剂2 Good’缓冲液80mmol/L3α-羟甾醇脱氢13KU/LThio-NADH 6.10g/L防腐剂适量6.2 总胆汁酸校准血清：浙江伊利康生物工程有限公司浓度50μmol/L标准品。
6.3 试剂与校准血清的稳定性：未开瓶的试剂于2~8℃避光保存，可稳定至有效期（12个月）。
如试剂空白吸光度大于0.5即不能使用。
6.4 试剂不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
7. 仪器参数设定AU2700参数设定：科华试剂仪器参数设置参见试剂厂家提供相应仪器设置参数。
8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。