DNA的提取与鉴定
dna提取与鉴定实验报告
dna提取与鉴定实验报告《DNA提取与鉴定实验报告》DNA提取与鉴定是一项重要的实验技术，它在生物学、医学、犯罪学等领域都有着广泛的应用。
本实验报告将介绍DNA提取与鉴定的实验过程以及结果分析。
首先，我们需要准备实验所需的样本。
在本次实验中，我们选择了番茄作为实验样本。
番茄的细胞中含有丰富的DNA，是进行DNA提取的理想材料。
我们先将番茄样本切碎并加入提取液中，通过离心等步骤将DNA从细胞中分离出来。
经过提取过程，我们成功地获得了番茄DNA的提取物。
接下来，我们对提取得到的DNA进行鉴定。
通过PCR扩增和电泳分析，我们成功地对番茄DNA进行了鉴定。
PCR扩增是一种常用的DNA复制技术，它可以将DNA扩增成大量的复制物，从而方便后续的分析。
电泳分析则是通过电场作用将DNA分子按大小进行分离，从而得到DNA的特征条带。
通过PCR扩增和电泳分析，我们确认了提取得到的DNA样本的纯度和完整性。
最后，我们对实验结果进行了分析。
通过实验，我们成功地提取并鉴定了番茄DNA，证明了提取与鉴定实验的可行性。
这项实验为我们提供了一个重要的技术平台，可以在日后的研究中应用到DNA提取与鉴定的相关领域，为生物学、医学和犯罪学等领域的研究工作提供了重要的技术支持。
总的来说，DNA提取与鉴定实验是一项重要的实验技术，它在生物学、医学、犯罪学等领域都有着广泛的应用前景。
通过本次实验，我们对DNA提取与鉴定的实验过程有了更深入的了解，为今后的研究工作提供了重要的技术支持。
希望通过我们的努力，可以为相关领域的研究工作做出更大的贡献。
dna粗提取与鉴定实验知识点
dna粗提取与鉴定实验知识点一、实验原理。
1. DNA的溶解性。
- DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。
在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，在此浓度下，DNA的钠盐形式会从溶液中析出；而在2mol/L的NaCl溶液中，DNA的溶解度较高。
- DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。
2. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。
- 蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。
- 大多数蛋白质不能忍受60 - 80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
- 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA无影响。
3. DNA的鉴定原理。
- 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
二、实验材料的选取。
1. 选用鸡血细胞作为实验材料的原因。
- 鸡血细胞中红细胞有细胞核，含有丰富的DNA，而植物细胞需要研磨等复杂操作才能释放出DNA。
- 鸟类的血红细胞有细胞核，而哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，不能用于提取DNA。
三、实验步骤及注意事项。
1. 实验步骤。
- 制备鸡血细胞液：取鸡血细胞液（加柠檬酸钠抗凝），离心或静置后取下层血细胞。
- 提取细胞核物质：将血细胞放入蒸馏水中，细胞吸水涨破，释放出核物质（包括DNA和蛋白质等），然后用纱布过滤，取滤液。
- 溶解DNA：在滤液中加入2mol/L的NaCl溶液，使DNA溶解。
- 析出含DNA的黏稠物：向上述溶液中缓慢加入蒸馏水，使NaCl溶液浓度降低至0.14mol/L，此时DNA的溶解度最低，会析出，过滤后取黏稠物。
- 将DNA的黏稠物再溶解：将黏稠物放入2mol/L的NaCl溶液中，使DNA再次溶解。
- 过滤含DNA的NaCl溶液：用纱布过滤，除去不溶的杂质。
- 提取较纯净的DNA：向滤液中加入冷却的酒精溶液（体积分数为95%），DNA不溶于酒精，会析出白色丝状物，这就是较纯净的DNA，用玻璃棒搅拌后可以卷起。
DNA的粗提取与鉴定
DNA 的粗提取与鉴定
一、实验原理：
1、析出DNA 的原理：DNA 在NaCL 溶液中的溶解度是随着NaCL 浓度的变化而变化的，当NaCL 的物质的量浓度为0.14mol/L 时，DNA 的溶解度最低，高于或低于这一浓度溶解度都会增高。
如图：
2、提纯DNA 的原理：
DNA 不溶于冷酒精，而细胞中某些物质可溶于冷酒精。
3、鉴定原理：DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。
二、方法步骤：
材料准备：常用鸡血细胞液
柠檬酸钠(抗凝剂)+鸡血−−−→静置或离心
血浆(弃去)+鸡血细胞液。
如图：
说明：①柠檬酸钠防止血液凝固。
②弃去上清液，是因为DNA 存在于血细胞中，血浆很少(没有)。
③用鸟类血细胞是因为鸟类成熟红细胞含DNA ，而哺乳动物成熟红细胞不含DNA ，所以不能用。
④本实验还可以用菜花或动物肝脏等作实验材料。
第一次在2中，使DNA与蛋白质分离
①两次加入高浓度NaCL
第二次在5中，DNA再溶解
第一次在1中，使细胞吸水涨破
②两次加入蒸馏水
第二次在3中，降低DNA的溶解度
第一次在1中，取滤液(含核物质)
③三次过滤第二次在4中，取黏稠物质
第三次在6中，取滤液
说明：在第一、三次取滤液时，纱布1—2层，第二次取黏稠物时纱布应多层。
④5次搅拌均要求超一个方向，轻缓，防止DNA断裂。
(二
璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA。
分子生物学实验：DNA提取与鉴定生物教案
分子生物学实验：DNA提取与鉴定生物教案提取与鉴定生物教案一、教学目标：1.了解DNA分子的结构和基本特征。
2.理解DNA提取和测序的原理。
3.掌握实验操作技能，能够成功提取DNA并进行测序。
4.了解DNA在生物学研究中的重要性和应用价值。
二、教学内容：1.DNA的结构和基本特征DNA是一个双螺旋结构，由磷酸、脱氧核糖和碱基组成。
DNA分子的两个螺旋互相螺旋在一起，由氢键连接。
DNA分子的碱基有四种：腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶。
两个互补的碱基可以通过氢键进行配对，形成碱基对，例如腺嘌呤和胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤和胞嘧啶配对。
2.DNA提取和测序的原理DNA提取是从生物样品中提取DNA分子的过程。
一般来说，DNA提取需要先破坏细胞膜和核壁，释放出DNA分子，然后通过离心、酶解和纯化等步骤将DNA分离并提取出来。
DNA测序是对DNA分子的核苷酸序列进行测定的过程。
DNA测序是通过识别DNA分子不同碱基的序列来实现的。
目前常见的DNA测序方法有Sanger测序和高通量测序两种。
3.实验操作技能DNA提取实验的操作技能包括实验前的准备工作、标本的采集、样品的处理、DNA的纯化和保存等步骤。
具体的实验步骤包括：（1）样品的切割、切碎和研磨。
（2）样品的裂解和蛋白质分离。
（3）DNA的纯化。
（4）鉴定DNA的纯度和浓度。
（5）冷冻和保存DNA样品。
DNA测序实验的操作技能包括：（1）DNA准备。
（2）参比序列的准备。
（3）PCR扩增。
（4）测序反应。
（5）序列分析和组装。
4.DNA在生物学研究中的重要性和应用价值DNA是生物学研究中不可或缺的分子，在生物学、医学、农业、环境学等多个领域都有广泛的应用。
例如：（1）通过DNA测序，可以对人类基因组或其他物种的基因组进行研究，了解基因功能和基因变异等信息。
（2）DNA检测可以用于鉴定生物学样品的物种、性别和亲缘关系。
（3）DNA诊断可以用于疾病的诊断和治疗。
（4）DNA疫苗可以用于预防疾病。
dna粗提取和鉴定的原理
dna粗提取和鉴定的原理
DNA粗提取和鉴定主要是通过以下原理进行的：
1. 粗提取：DNA粗提取是将DNA从生物样本（如血液、唾液、组织等）中分离出来的过程。
最常用的方法是细胞裂解，以释放DNA。
细胞裂解可以通过物理方法（如机械切割、超声波
处理）或化学方法（如蛋白酶消化、洗涤剂裂解）来实现。
裂解后，可进行离心等步骤以去除细胞残渣和其他杂质，得到含有DNA的提取液。
2. 鉴定：DNA鉴定是通过比较DNA序列的相似性或特征来确定个体的身份、亲缘关系等。
主要有以下鉴定方法：
- 聚合酶链式反应（PCR）：PCR是通过复制特定DNA片段的方法，使得起始数量较少的DNA可以被扩增到足够数量以
进行分析。
PCR需要通过引物选择性扩增特定的DNA序列，
然后通过酶切、电泳等技术进行分析。
- DNA测序：DNA测序是确定DNA序列的方法。
常用的测
序技术有Sanger测序和下一代测序（如Illumina、Ion Torrent 等）。
测序后得到DNA的碱基序列，可以与数据库中的已知
序列进行比对，从而确定DNA的来源、身份等信息。
- DNA指纹技术：DNA指纹技术是根据DNA上的多态性位
点进行鉴定。
常用的方法是通过PCR扩增多个DNA位点，然后通过电泳等技术进行分析。
与其他个体相比较，每个个体的DNA指纹是独特的，可以用于身份鉴定、亲缘关系判定等。
这些原理在DNA粗提取和鉴定过程中相互作用，可以帮助科学家从生物样本中提取和鉴定DNA，为研究、法医学和医学诊断等领域提供有力的技术支持。
DNA的提取和鉴定
• 2 破碎细胞，获取含DNA的滤液
• 若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获 取含DNA的滤液？
在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅 拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量 洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。
• 在以上实验中，加入蒸馏水、洗涤剂和食 盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（ 滤纸、尼龙布）。
Thanks
• 3 去除滤液中的杂质
• 最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等 杂质，需要进一步提纯DNA。阅读教材提 供的三种方法，分析其中的原理。
• 方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液 中溶解度不同；
• 方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分 解DNA；
• 方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度 不同。
• ↓→除去细胞质中的大部分物质。
• DNA初步纯化………… 与等体积95％冷却 酒精混合，析出白色丝状物
• ↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。
• DNA鉴定……………… 二苯胺，沸水浴， 呈现蓝色
• 其它注意事项：
• 在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固；鸡血静 置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料 烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向 搅拌；玻棒搅拌要缓慢（细胞破裂快速搅 拌）；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂 要现用现配等。为了提高DNA纯度，在科 学实验中通常使用的洗涤剂有十六烷基三 甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（ SDS）。
• 3．实验操作 • 制备鸡血液…………加柠檬酸钠，静置或
离心
•↓ • 破碎细胞，释放DNA… 加蒸馏水，同一方
向快速通方向搅拌
• ↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。 • 溶解核内DNA………… 加入NaCl至2mol/L
dna的粗提取与鉴定
dna的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定一、粗提取粗提取的方法是通过物理和化学方法从一个或多个生物样品中提取DNA样品，通常是为了进行DNA分子生物学分析、基因组学以及其他科学研究。
1. 用拆解液拆解细胞使用拆解液拆解细胞是最常用的粗提取DNA技术。
主要使用的拆解液有Tris-EDTA（TE buffer）、Cetyltrimethyl ammonium bromide （CTAB）、Sarkosyl（SDS）和NaOH溶液等。
各种拆解液的比例和温度可以根据每个实验的要求进行调整。
2. 用磁珠或磁性分选器抽提也可以使用磁珠或磁性分选器来抽提DNA样品。
这种方法可以从多种生物样品中提取DNA，如血清、血浆、细胞粗提物以及血液细胞等。
磁珠抽提的原理是利用磁性珠子来吸附DNA样品，而磁性分选器则是利用磁场将DNA分离出来。
磁珠抽提的优点是简单快捷，缺点是提取的DNA质量不够高。
3. 改良的拆解方式一些改良的拆解方式可以用来考察某一特定细胞类型。
这些方法包括冷冻破碎、湿热破裂、极限温度破裂和化学破裂等。
这些技术可以有效地提高蛋白质和DNA的提取效率，但缺点是需要较高的技术要求，而且操作步骤较多，比较耗时。
二、DNA的鉴定DNA的鉴定是指用特定的方法和技术，明确某个DNA样品的鉴定。
常见的DNA鉴定技术有定性分析、定量分析和活性检测等。
1. 定性分析定性分析是指对DNA样品进行定性鉴定，识别出它们是哪种DNA，以确定其基本性质。
常用的定性分析方法有紫外光检测和酶切检测等。
紫外光检测是将DNA浓度调整至1μg/ml，然后放置在紫外光228纳米的紫外灯管（UV lamp）下，通过分析紫外光吸收光谱来鉴定DNA 样品。
酶切检测是将DNA样品与特定的酶进行反应，用来分析DNA的特征。
常用的酶有限制性内切酶（restriction enzymes），例如EcoRI、BamHI、PstI和HindIII等。
2. 定量分析定量分析是指对某一DNA样品的浓度和数量进行测量，以了解其容量。
人教版高中生物选择性必修第3册 DNA的提取和鉴定
为2 mL的4种不同溶液中，经搅拌后过滤，获得4种滤液，含DNA最少的是滤液 (填
表中字母)。
• 洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 • 食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 • 研磨不充分——使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少
破碎鸡血细胞，获取细胞核物质
【思考】：获取含细胞核的滤液中的可能有哪些细胞成分？ 可能有DNA、核蛋白、多糖、脂质和RNA等杂质。
过滤
溶解 滤液中
不溶解 滤渣中
去除杂质，将 DNA 与 其 他 大
滤 液 中 加 入 95% 冷 却 酒精
DNA不溶于酒精，某些蛋 白质杂质可溶
分子分离
玻璃棒卷起丝状物
DNA析出
溶液中
DNA的鉴定
A：2mol/L的NaCl+提取 •DNA 溶 解 于 2mol/L 的
丝状物+二苯胺
NaCl中
B：2mol/L的NaCl+二苯 •沸水浴中，DNA遇二苯
【例1】 下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验相关操作中所 选取的试剂，错误的是（ B ）
【例2】下图为“DNA的粗提取与鉴定”的实验装置，请回答 下列相关的问题：
(1)实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡 血细胞液中有较高含量的_D_N__A____。 (2)在图A所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是使血细胞吸水涨破， 通过图B所示的步骤取得滤液，再在滤液中加入质量浓度为2 mol/L的NaCl溶液的目的是__使__滤__液__中_的__D_N__A_溶__于_N__a_C_l溶__液___。 (3)图C所示实验步骤中加蒸馏水的目的__使__D_N__A_析__出________。
胺
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⒈ 破碎细胞，溶解DNA：
用提取液（裂解液）破坏细胞壁、细胞膜和核膜。
微生物样品提取液：含表面活性剂SDS、溶菌酶等 动物样品提取液：含SDS、蛋白酶K等 植物样品提取液：含CTAB
核酸酶可被Ca2+、Mg2+等激活，提取液均含有螯合剂（如EDTA， 柠檬酸等），螯合这些离子。
（SDS，破膜、蛋白质变性沉淀）——苯酚抽 提蛋白质——氯仿抽提、萃取苯酚
（二）复性 变性DNA在适当条件下，可使两条分开的单链重新形成双螺旋DNA
的过程称为复性（renaturation）。 当热变性的DNA经缓慢冷却后复性称为退火（annealing）。DNA
复性是非常复杂的过程，影响DNA复性速度的因素很多：DNA浓度高， 复性快；DNA分子大复性慢；高温会使DNA变性，而温度过低可使误配 对不能分离等等。最佳的复性温度为Tm减去25℃，一般在60℃左右。 离子强度一般在0.4mol/L以上。ຫໍສະໝຸດ 细胞DNA的提取过程：
裂解：破碎细胞，使细胞中的核酸游离 在裂解体系中
纯化：使核酸与其它杂质彻底分离， 如蛋白质、盐等
总原则：①应保证核酸一级结构的完整性；
②排除其它分子的污染。
鉴定：浓度、纯度、分子量、测序
（技术：分光光度技术、凝胶电泳技术等）
（一）样品预处理（获取分散细胞）
1、植物样品
新鲜组织先用无菌生理盐水洗； 干药材除去霉点，无菌水浸洗；
（二）基因 基因(遗传因子)是具有遗传效应的DNA片段，基因支持着生命的基
本构造和性能。
编码区：是可以被转录的区域 非编码区：不可以被转录的区域
密码子：遗传密码(英文：Genetic code)是一组规则，将DNA或RNA序 列以三个核苷酸为一组的密码子转译为蛋白质的氨基酸序列，以用于蛋 白质合成。 起始密码子为AUG(甲硫氨酸) ；终止密码子：UAA、UAG、UGA.
DNA样品：
OD260 / OD280 ＝1.8 ，DNA纯度高 OD260 / OD280 > 1.8，含RNA，或DNA部分降解 OD260 / OD280 < 1.8，含苯酚或蛋白杂质
热变性一半时的温度称为熔点或变性温度，以Tm来表示。 DNA的G+C含量影响Tm值。由于G≡C比A=T碱基对更稳定，因 此富含G≡C的DNA比富含A=T的DNA具有更高的熔解温度。根据 经验公式xG+C =（Tm - 69.3）× 2.44可以由DNA的Tm值计算 G+C含量，或由G+C含量计算Tm值。
核酸的降解:核苷酸间的磷酸二酯键的断裂
引起核酸变性的因素有：高温、强酸强碱 有机溶剂、尿素等
当呈双螺旋结构的DNA溶液缓慢加热时，其中的氢键便断开，双 链DNA便脱解为单链，这叫做核酸的“溶解”或变性。在适宜的 温度下，分散开的两条DNA链可以完全重新结合成和原来一样的 双股螺旋。这个DNA螺旋的重组过程称为“复性”。
捣碎或剪碎；加液氮研磨成粉状。
2、动物样品
（1）组织样品：
新鲜样品，生理盐水洗，直接使用（或分装、 -70℃/液氮低温保存）；
甲醛固定组织要先去掉甲醛；
石蜡包埋组织要经过组织切片和二甲苯脱蜡等处 理。
（2）血细胞样品： 来源：新鲜血液或者冻贮血液；
抗凝剂：一般用EDTA-Na2或柠檬酸钠（枸橼酸 钠 ），不可使用肝素；
经离心后溶液分为三层：上层是核酸溶液、 中间不溶物为变性蛋白质，下层是苯酚氯 仿溶液。
核酸溶液 蛋白质 苯酚氯仿
3.沉淀DNA
有机溶剂沉淀DNA：2倍体积无水乙醇（或1倍体积的异戊醇）
再用75%乙醇清洗多次。
4.重新溶解DNA
将DNA溶于水或TE溶液。
DNA提取的一般流程
二、核酸的鉴定
（一）核酸浓度检测
分离：红白细胞，一般用明胶，加缓冲液悬浮白细 胞。（血清DNA是研究肿瘤的材料之一）
（3）培养细胞： 离心，弃细胞培养液； 用缓冲液多次漂洗；
3、微生物培养物样品
离心获取菌体细胞， 加缓冲液洗涤， 加缓冲液悬浮菌体细胞。
4、微生物混合样品
用缓冲液悬浮菌体，低速离心，沉淀杂质。 高速离心获取菌体细胞。 用缓冲液洗涤菌体细胞。 加缓冲液悬浮菌体细胞。
2、核酸的溶解度与黏度
DNA与RNA都是极性化合物，都微溶于水，而不溶于乙醇、 乙醚、氯仿等有机溶剂。
DNA的黏度很大，当DNA溶液受热或其他因素作用下，发 生双螺旋结构变为无规则线团结构，此时黏度降低，因此可 用黏度做为DNA变性的指标。
3、核酸的紫外吸收 由于核酸的组成成分是嘌
呤碱、嘧啶碱（带有共轭双 键）具有强烈的紫外吸收， 所以核酸表现出强烈的紫外 吸收性质，其最大的吸收峰 在260nm。
1、DNA提取用具的处理
要求无菌；试剂、器材高压干燥等进行无 DNA酶处理。
2、RNA提取用具的处理
要求无菌，防止二次污染。 RNA易被RNase水解，RNase无处不在且 耐高温，提取条件要求严格。
二、真核生物基因组DNA的常规提取
裂解细胞，溶出DNA 除去杂质
沉淀、浓缩DNA 重新溶解DNA
OD260＝1时（比色皿厚度1.0cm） 双链DNA浓度为50 μg/ml， 单链DNA或RNA浓度为40 μg/ml。
DNA(μg/ml) = OD260×50 RNA（μg/ml ） = OD260×40
核酸在260 nm处有吸收峰，蛋白质在280 nm有吸 收峰
核酸的纯度用OD260/OD280比值表示。
核酸提取与鉴定
一、核酸的理化性质 核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核
酸(简称DNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息 的主要物质基础。
1、核酸的酸碱性质
核酸含有酸性的磷酸基和碱性的含氮的碱基，因此核酸 是两性的电解质，具有等电点。
但磷酸基酸性相对较强，所以核酸通常表现为酸性。在 一定的pH下，核酸能发生两性电离，从而使得核酸带上电荷， 具有电泳行为。
3、增色效应(hyperchromic effect)是指因高分子结构的改变， 而使摩尔吸光系数增大的现象
核酸变性时，双螺旋结构被破坏，嘌呤碱、嘧啶碱暴露出来， 其紫外吸收能力增强。
4、核酸的变性、复性及杂交 核酸的变性:在物理和化学因素的作用下，维系核酸二级结构的 氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双链解旋为单链的过程。