糖化血红蛋白检测原理及意义
糖化血红蛋白检测的临床意义

糖化血红蛋白检测的临床意义糖尿病的患病率在世界范围内呈增长趋势,成为继心脑血管疾病、肿瘤之后又一严重危害人类健康的慢性非传染性疾病。
HbA1c可以反应检测前60-90天内血糖平均水平,以了解糖尿病人的血糖情况,但不能反映近期的血糖水平。
糖化血红蛋白测定用于评价糖尿病的治疗效果及预后。
概念:糖化血红蛋白是指血中的葡萄糖与血红蛋白β 链 N-末端缬氨酸残基缩合而成的化合物,占成人血红蛋白 5%~8%,主要包括 HbA1a,HbA1b,HbA1c,其中 HbA1c 约占糖化血红蛋白的 80% 且浓度相对稳定。
因此,临床上常以HbA1c 代表总的糖化血红蛋白水平。
糖化血红蛋白和红细胞的寿命一样,红细胞的寿命约为 120 天,多数人已意识到空腹和餐后2小时血糖监测的重要性,并常常把二者的测定值作为控制血糖的标准。
其实不然,空腹和餐后2小时血糖是诊断糖尿病的标准,而衡量糖尿病控制水平的标准是糖化血红蛋白。
空腹血糖和餐后血糖是反映某一具体时间的血糖水平,容易受到进食和糖代谢等相关因素的影响,糖化血红蛋白可反映过去60-90天内体内血糖的平均水平,而与患者是否空腹、昼夜节律等因素无关。
因此,国际糖尿病联盟推出了新版的亚太糖尿病防治指南,明确规定糖化血红蛋白是国际公认的糖尿病监控"金标准"。
糖化血红蛋白结果以百分数表示,正常值为4%~6%(说明:2023 年美国 ADA 糖尿病诊疗指南提出HbA1c ≥ 5.7% 诊断糖耐量异常或糖尿病前期阶段)。
检测方法:糖化血红蛋白的检测方法有:阳离子交换色谱法、电泳法、亲和层析法、免疫分析法、离子层析法、等电点聚集法、化学发光法等。
实验室的检测结果可能因分析手段、样品保存时间和个体差异而不同。
两个平均血糖相同的人,糖化血红蛋白可能会有多至3%的差异。
结果也可能因多种因素而不可靠,如:手术后失血,输血,贫血,高红细胞更新率,慢性肾功能衰竭,肝脏疾病,高剂量维生素C摄入,红细胞生成素治疗等等。
最全糖化血红蛋白测定的原理与仪器解析

糖化血红蛋白(HbA1c)测定的原理方法与仪器解析及临床意义糖尿病目前在世界上发病率很高,占免疫病的比率,在发达国家高达2-5%,而我国糖尿病的发病率亦达2-3%,并且每年还以1‰的速度增长。
糖尿病是一种终生性疾病,其并发症是至残至死的主要原因,所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。
临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病,而血糖参数只代表抽血时的血糖水平,对确诊有局限性。
近年来的医学研究证明:血液中的糖化血红蛋白(HbA1c)浓度相对稳定,其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平,便于医生对糖尿病进行早期诊断;也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等,受到临床的广泛重视,目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白(HbA1c)占总血红蛋白(Hb)的百分含量的测定项目。
有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。
测定HbA1c比较常用的方法,目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种,分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。
1 HbA1c的临床意义糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查,不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。
能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况,同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切,在糖尿病学上有重要的临床参考价值。
1.1 增高:测定HbA1c可以了解糖尿病人在2~3个月的血糖控制情况。
此外,用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人,地中海贫血和白血病病人亦增高。
1.2 降低:溶血性及失血性贫血,慢性肾衰,慢性持续性低血糖症等。
1.3 作为糖尿病的病情监测指标1.3.1 作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。
1.3.2 不是诊断糖尿病的敏感指标,不能取代现行的糖耐量试验。
1.3.3 可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。
1.4 当HbA1c>9%时,说明患者存在着持续性高血糖,可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。
糖化血红蛋白检测及临床意义

糖化血红蛋白检测及临床意义摘要:糖化血红蛋白(hba1c)是用于糖尿病评价治疗方案有效性的金标准。
并因hba1c还是反应长期血糖变化的稳定指标而成为目前诊断糖尿病研究的热点。
这个反映长期血糖控制状况的金标准和糖尿病的重要手段,可以在临床上更好地应用指导糖尿病的治疗。
关键词:糖化血红蛋白临床检测【中图分类号】r4【文献标识码】b【文章编号】1008-1879(2012)11-0134-02糖化血红蛋白hba1c作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、疗效考核的有效检测指标,在临床中得到了广泛的使用,其理由有二个:目前hplc法测定hba1c使其准确性和重复性得到很大的提目前,糖化血红蛋白hba1c作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、疗效考核的有效检测指标,在临床中得到了广泛的使用。
1hba1c概述在hba1c与糖尿病关系的研究中,rahbar在1968~1969年的研究中发现快速泳动的hb实际上与hba1c的结构相同,在糖尿病患者中其浓度增加2~3倍。
从而确定了hba1c与糖尿病之间的初步关系并在以后的临床研究中证实了hba1c可作为糖尿病患者长期血糖控制的指标,这与糖尿病慢性并发症的发生及发展有密切关系。
hba1c与空腹血糖、过去数周的平均血糖水平等有关。
正常人维持一定的血糖水平,就会形成正常范围内的hba1c,当血糖浓度增加时,其β链上的糖基化位点数目也增加,据此hba1c是判断血糖控制程度的很好的指标。
糖化血红蛋白是红细胞中血红蛋白与葡萄糖持续且不可逆地进行非酶促蛋白糖基化反应的产物。
其寿命与红细胞一致。
人体内红细胞的寿命一般为120天,在红细胞死亡前,血中hba1c含量也会保持相对恒定。
因此,hba1c水平反映的是检测前120天内的平均血糖水平。
与采血时间、是否空腹及使用胰岛素等无关,是判断糖尿病患者长期血糖控制好坏的重要指标。
2诊断糖尿病检测指标的比较2.1血糖有波动性、瞬间性特点,反映的是某一点(测定当时)的血糖水平,变异率高、重现性差,不能反映患者全天血糖变化情况,是糖尿病微观控制的指标。
糖化血红蛋白检测原理

糖化血红蛋白检测原理
糖化血红蛋白是指血红蛋白分子与血液中游离的葡萄糖分子结合形成的化合物。
这个血红蛋白与葡萄糖相结合后,其分子结构发生改变,变得更加稳定持久。
这种稳定的结构可以持续在红细胞中存在120天以上。
因此,糖化血红蛋白的浓度可以反映出过去2-3个月的平均血糖水平。
首先,将小样本的全血取出,并与试剂盒中的特定试剂混合,使血红蛋白部分裂解。
然后向混合溶液中注入渗透剂,使血红蛋白和其他变性物质与离子交换剂快速结合。
此时,未结合的糖化血红蛋白会被反向高效液相色谱技术检测出来。
颜色的深浅可以反映出血液中的糖化血红蛋白含量的高低。
糖化血红蛋白检测可以有效地监测糖尿病患者的血糖控制情况,帮助医生和患者了解治疗效果以及是否需要调整治疗方案。
此外,糖化血红蛋白检测还可以用于糖尿病的预后评估,可提供关于疾病进展程度和心血管风险的相关信息。
总之,糖化血红蛋白检测是一种快速、准确、非常有效地监测糖尿病病情的方法。
它可以为糖尿病患者提供更好的治疗管理以及改善生活质量的支持。
糖化血红蛋白的检测及临床意义

糖化血红蛋白的检测及临床意义摘要】目的探讨胶乳凝集法测定糖化血红蛋白(HbA1c)及在临床中的应用价值,以便更好地服务于临床,帮助糖尿病患者控制血糖水平。
方法利用胶乳凝集反应法测定糖化血红蛋白,并对精密度、线性范围、准确度进行了分析,并检测100例健康人及92例糖尿病及高危人群。
结果健康人群HbA1c参考范围为5.0%±1.2%,糖尿病及高危人群HbA1c均值为7.30%±2.3%,线性范围:3%~14%,准确度:相对偏差≤±15%,精密度:批内CV 2.5%~3.98%,批间CV3.6%~4.88%。
结论该法特异性好,精密度高,结果准确,受到了临床医生及糖尿病患者的好评。
【关键词】糖化血红蛋白(HbA1c) 检测临床意义HbA1c的形成是一种无需酶催化、缓慢、连续、不可逆的化学反应,其生成速度与血糖浓度成正比,在红细胞生成的120d内,此反映自始至终进行着。
因此HbA1c水平所反映的是检测前120d内的平均血糖水平,而且与采血时间、患者是否空腹、是否用胰岛素等因素无关。
它稳定可靠地反映以前数周内的血糖水平控制情况,更适合作为糖尿病的监控指标[1]。
1 材料与方法1.1标本来源 2010年5月至12月来本院检测的糖尿病患者共92例,男55例,女37例,年龄为48岁~72岁。
2010年健康体检者100例,男64例,女36例,平均年龄44岁。
1.2试剂及仪器设备材料仪器为日立7180全自动生化分析仪。
1.3方法原理本法是利用抗原抗体反应直接测定总Hb中HbAlc中的百分含量的方法。
样品中总Hb和HbAlc与胶乳有相同的非特异性吸附而固相化,当加入HbAlc的特异性单克隆抗体后形成胶乳-HbAlc-鼠抗人HbAlc单克隆抗体的复合物,此复合物由于羊抗鼠lgG抗体而形成凝集,凝集量因胶乳表面固相化的HbAlc量的不同而不同。
通过测定其吸光度并与HbAlc百分度的标准曲线比较后,可求出样品中的HbAlc占Hb的百分含量。
糖化血红蛋白检测原理

糖化血红蛋白检测原理糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,简称HbA1c)是一种可以用来评估血糖控制情况的指标。
它是血红蛋白与葡萄糖发生非酶促的化学反应而形成的,因此可以反映出过去2-3个月的平均血糖水平。
糖化血红蛋白检测通过测量HbA1c的浓度来评估患者的血糖控制情况。
首先,血样被采集后,血液中的红细胞被裂解开,将其中的血红蛋白与其他成分分离开来。
然后,血红蛋白分离出来后会处于两个状态:糖化的和未糖化的。
为了将这两种状态的血红蛋白进行区分,可以利用高效液相色谱技术。
高效液相色谱是一种能够分离混合物的方法,它可以将不同成分以不同的速度通过一个填充了分离材料的管道。
在糖化血红蛋白检测中,血红蛋白分离后会通过高效液相色谱装置,在这个过程中,血红蛋白分子会根据其化学性质的不同被分离出来。
具体来说,在高效液相色谱装置中,血红蛋白会被暴露在一个与葡萄糖结合的固定相上,这个固定相可以选择性地与糖化血红蛋白结合。
未糖化的血红蛋白会在此过程中流经,并被洗出。
而糖化的血红蛋白则会黏附在固定相上,停留在色谱柱中。
最后,糖化血红蛋白的含量可以通过测量前面分离过程中未被洗出的血红蛋白的浓度来确定。
这通常是通过测量血红蛋白的吸光度或荧光强度来实现的。
测量结果可以与一个标准曲线进行比较,该曲线通过事先知道HbA1c浓度的校准样品进行绘制。
总结起来,糖化血红蛋白检测的原理是利用高效液相色谱技术来分离血红蛋白中的糖化和未糖化形式。
通过测量糖化血红蛋白的浓度,可以评估患者的血糖控制情况,提供有关过去2-3个月内的平均血糖水平的信息。
这种检测方法在临床中被广泛应用于糖尿病的诊断和管理。
检查糖化血红蛋白的意义是什么
检查糖化血红蛋白的意义是什么
一、检查糖化血红蛋白的意义是什么 1. 检测糖化血红蛋白可以指导血糖的调整 2. 检测糖化血红蛋白有助于及时发现糖尿病并发症 3. 检测糖化血红蛋白可以监测糖尿病二、手工微柱法可以检查糖化血红蛋白三、如何使糖化血红蛋白水平达标
检查糖化血红蛋白的意义是什么
1、检测糖化血红蛋白可以指导血糖的调整检查糖化血红蛋白可以了解糖尿病患者血糖总体控制情况,也可用于指导对血糖的调整,有助于糖尿病慢性并发症的认识。
另外还可以区别应激性血糖增高和妊娠糖尿病(GDM)。
当人体内的糖化血红蛋白85%时,空腹血糖所扮演的角色更重要。
2、检测糖化血红蛋白有助于及时发现糖尿病并发症由于 HbA1c 水平与糖尿病微血管并发症(如糖尿病视网膜病变、糖尿病神经病变及糖尿病肾病)密切相关,故 HbA1c 测定有助于判断糖尿病慢性并发症的预后,也有助于判断妊娠糖尿病是否会有致畸、死胎和子痫的发生。
此外,由于空腹血糖水平易受其他因素的影响,有些病人空腹血糖正常却可检测到糖化血红蛋白升高, 所以也可把糖化血红蛋白的检测用于糖尿病筛选。
3、检测糖化血红蛋白可以监测糖尿病糖化血红蛋白(Hb)是血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。
Hb越高表示血糖与血红蛋白结合越多,糖尿病病情也越重。
血糖与血红蛋白的结合过程很缓慢,而且是不可逆的,在红细胞死亡之前一直存在,故体内衰老红细胞比新生红细胞的Hb含量约高出1.5倍。
每一个红细胞内都有血红蛋白,而红细胞的寿命为120天,平均60天,所以Hb比例,能反应测定前1~2个月的平均血糖水平。
因而检查Hb已成为了解糖尿病控制良好与否的重要指。
糖化血红蛋白测定及临床意义
糖化血红蛋白测定及临床意义糖化血红蛋白测定的原理是利用血红蛋白与葡萄糖发生糖化反应的特点。
在正常情况下,血红蛋白经过120天的寿命后会被破坏并代谢掉,而在糖化的情况下,血糖会与血红蛋白相结合,形成HbA1c。
由于红细胞寿命相对固定,因此HbA1c的浓度可以反映出过去2-3个月的平均血糖水平。
糖化血红蛋白测定主要有离子交换色谱法和免疫测定法两种方法。
其中离子交换色谱法是目前主要的测定方法,其原理是利用血红蛋白中的HbA1c与非糖化血红蛋白(HbA0)之间的电荷差异,在特定条件下通过离子交换柱分离并测定。
糖化血红蛋白测定在糖尿病的诊断和治疗中具有重要的临床意义。
首先,它可以提供与糖尿病患者血糖控制相关的重要信息。
由于血糖波动性较大,仅仅通过随机血糖或餐后血糖无法全面评估患者的血糖控制水平。
而糖化血红蛋白作为平均血糖的指标,可以更准确地反映患者长期的血糖控制情况。
临床上一般将糖化血红蛋白水平分为:正常(<5.7%)、前期糖尿病(5.7%-6.4%)和糖尿病(≥6.5%),可以帮助医生准确评估患者的糖尿病风险,指导治疗方案的选择。
另外,糖化血红蛋白测定也可以用于评估糖尿病患者的疗效。
糖尿病治疗的目标是控制血糖水平,降低并发症的发生率。
通过定期测定糖化血红蛋白水平,可以监测患者的治疗效果,评估治疗方案的合理性,及时调整药物剂量或者治疗策略,以达到良好的血糖控制。
此外,糖化血红蛋白测定对糖尿病并发症的预测也具有重要价值。
糖尿病患者的高血糖状态会导致各种并发症的发生,包括心脑血管疾病、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变等。
糖化血红蛋白与这些并发症的发生存在相关性,研究表明,糖化血红蛋白每升高1%,与心脑血管疾病的风险增加约14%。
因此,通过测定糖化血红蛋白水平,可以对糖尿病患者的并发症风险进行预测和评估,提醒患者加强血糖控制,预防并发症的发生。
总之,糖化血红蛋白测定作为评估糖尿病患者长期血糖控制水平的重要指标,在糖尿病的诊断、治疗和预防并发症方面具有重要的临床意义。
糖化血红蛋白检测标准
糖化血红蛋白检测标准糖化血红蛋白检测标准及其临床意义糖化血红蛋白(HbA1c)检测是一种反映糖尿病患者血糖控制情况的常用方法。
糖化血红蛋白是血液中的葡萄糖与红细胞中的血红蛋白发生非酶促反应的产物,其浓度与血糖水平成正比。
因此,糖化血红蛋白检测可反映过去2-3个月的平均血糖水平,为糖尿病的诊断、治疗和监测提供重要依据。
本文将对糖化血红蛋白的检测标准进行详细阐述。
一、糖化血红蛋白检测原理糖化血红蛋白检测原理是基于血红蛋白与葡萄糖之间的非酶促反应。
在红细胞寿命期间,葡萄糖与血红蛋白β链的N-末端缬氨酸残基发生反应,生成稳定的酮胺化合物,即糖化血红蛋白。
由于红细胞的平均寿命为120天,因此糖化血红蛋白浓度可反映过去2-3个月的平均血糖水平。
二、糖化血红蛋白检测标准1.正常范围:在非糖尿病人群中,糖化血红蛋白的正常范围为4.0%-5.6%。
2.糖尿病诊断标准:根据世界卫生组织和国际糖尿病联盟的建议,糖化血红蛋白≥6.5%可作为糖尿病的诊断标准。
需要注意的是,糖化血红蛋白不能用于糖尿病的分型诊断。
3.血糖控制目标:对于糖尿病患者,糖化血红蛋白的控制目标因个体情况而异。
一般来说,大多数糖尿病患者的糖化血红蛋白控制目标为<7.0%。
但对于某些患者,如年轻人、无并发症者等,控制目标可能更为严格,如<6.5%。
而对于老年人、有并发症者等,控制目标可能相对宽松,如<8.0%。
三、糖化血红蛋白检测的临床意义1.糖尿病诊断:糖化血红蛋白检测可作为糖尿病的辅助诊断方法,特别适用于空腹血糖升高不明显的患者。
2.血糖控制评估:糖化血红蛋白检测可反映糖尿病患者过去2-3个月的血糖控制情况,帮助医生和患者了解血糖控制效果,调整治疗方案。
3.并发症预防:良好的血糖控制可以降低糖尿病并发症的发生风险。
通过定期监测糖化血红蛋白,可以及时发现血糖控制不佳的情况,采取干预措施,预防并发症的发生。
4.疗效评估:在糖尿病患者治疗过程中,糖化血红蛋白检测可用于评估降糖药物的疗效,指导治疗方案的调整。
糖化血红蛋白检测基础与临床意义
糖化血红蛋白检测基础与临床意义中国已成为继印度之后位居第2位的糖尿病国家。
传统的实验诊断方法往往以空腹血糖(FPG)和糖耐量试验(OGTT)作为诊断治疗的依据。
近年来,糖化血红蛋白(HbA1c)的检测,已开始应用于糖尿病的诊断。
由于HbA1c能反映病人2~3个月内糖代谢总体情况和血糖水平的控制程度,有助于从整体上准确地观察病情,了解治疗效果。
糖化血红蛋白的检测方法糖化血红蛋白(HbA1c)检测的方法很多,测定方法主要有四类:色谱法、电泳法、免疫法和化学法[1]。
色谱法主要有离子交换层析法、高效液相色谱法(HPLC)和亲和层析法等。
由于糖化血红蛋白的测定方法众多,还缺乏标准化参考方法,国际上正建立这类参考方法。
目前最常用的HbA1c测定方法是离子交换层析法和电泳法。
前者精密度高、重复性好且操作简单,已被临床广泛采用。
国内主要采用Bio-Rex70阳离子树脂微柱层析法,其微柱可重复使用多次。
正常参考值:HbA1c:X±2s=6.5±1.5%;>8.0%为HbA1c增高。
糖化血红蛋白的临床意义糖化血红蛋白的控制标准:HbAlc能够反映过去2~3个月血糖控制平均水平,它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响,因此对HbA1c测定,可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平。
世界权威机构对于HbA1c有着明确的控制指标。
ADA(美国糖尿病学会)建议,HbA1c控制在9%:血糖控制很差,是慢性并发症发生发展的危险因素,可能引发糖尿病性肾病,动脉硬化,白内障等并发症并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。
HbA1c是糖尿病辅助诊断指标:大多数DM患者,血糖高于正常。
其HbA1c 增高;对于FPG正常,而OGTT降低的患者HbA1c增高。
DM患者HbA1c值与FPG 往往呈正相关。
日本糖尿病协会(JDS)新增HbA1c≥6.5%作为DM诊断标准。
FPG和HbA1c 的联合作用,可筛查FPG结果正常的DM患者。
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糖化血红蛋白(HbA1c)测定的原理方法及临床意义综述2007年3月19日糖化血红蛋白(HbA1c)测定的原理方法及临床意义综述冯念伦范卫华刘捍东(山东省立医院济南250021)糖尿病(DM),主要是2型糖尿病的发病率,目前在世界上无论发达国家还是发展中国家均明显增加,占免疫病的比率,在发达国家高达2-5%,而我国糖尿病的发病率亦达2-3%,并且每年还以1‰的速度增长。
糖尿病是一种终生性疾病,其并发症已经成为病人至残和早亡的主要原因,所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。
有资料说美国用于糖尿病的治疗费约有1000亿美元,糖尿病已经成为世界各国的主要保健卫生问题,对糖尿病及其并发症防治的研究是20世纪后20年国际卫生保健研究的重点之一。
临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病,而血糖参数只代表抽血时的血糖水平,对确诊有局限性。
近年来的医学研究证明:血液中的糖化血红蛋白(HbA1c)浓度相对稳定,其浓度值能准确反映最近2-3个月期间的血糖水平,便于医生对糖尿病进行早期诊断;也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等,受到临床的广泛重视,目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白(HbA1c)占总血红蛋白(Hb)的百分含量的测定项目。
有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。
测定HbA1c有多种方法,目前临床上比较常用的方法有两种:乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法;分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自分析仪进行测定。
1、糖化血红蛋白(HbA1c)的形成及特点血液中红细胞内的血红蛋白Hb会在高糖的作用下发生缓慢的非酶促糖化反应, 血红蛋白Hb的β链N末端缬氨酸上的氨基与葡萄糖的醛基发生可逆的加成反应,,形成不稳定的中间产物--- 醛亚胺(前GHbA1c)迅速重排成不可逆的酮胺,然后缓慢重构形成HbA1c。
糖化血红蛋白HbA1c的特点:1.1 糖化血红蛋白HbA1c的百分比含量与即时所检测到的血糖水平无关。
1.2 由于红细胞在外周血中的寿命是90 -120天,所以糖化血红蛋白HbA1c百分比反映了测定前2-3个月的血糖平均水平。
而GHbA1c的合成始终在进行,其糖化程度与血液中的葡萄糖浓度及持续时间呈正相关;病人用药治疗后,较血糖、尿糖含量下降晚3-4周,糖化血红蛋白HbA1c的百分比含量是对糖尿病长期控制有重要意义的一项指标。
2、测定糖化血红蛋白HbA1c的方法测定糖化血红蛋白HbA1c的方法有(1)离子交换高压液相色谱法HPLC;包括:离子交换色谱及亲和色谱;(2)微柱法;(3)免疫分析法,包括:放射免疫法、酶免疫法和乳胶免疫凝集法。
(3)电泳法(4)电喷离子质谱等。
2.1、离子交换色谱分析法的原理:用高效微粒离子交换剂作固定相,以具有一定pH值的缓冲溶液作流动相,依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可逆性离子交换能力的差别而实现分离。
离子交换剂可以分成两种:阳离子交换剂和阴离子交换剂。
亲和色谱法是利用生物高分子能与相应的专一配基分子可逆结合的原理将配基通过共价键牢固地结合于固相载体上制得亲和吸附系统。
带有杂质的高分子分离目的物在一定条件下,能以某种次级键与已固相化的配基结合,而杂质则不吸附,除去杂质后变换条件,又可以使待分离的高分子物质重新解离,获得纯化。
化糖血红蛋白被一种牢固的但可逆的五环络合物所结合,通过它们的顺-乙二醇基被硼酸固定住。
首先洗脱的是非糖化血红蛋白,随后用含有山梨醇的缓冲液将糖化组分洗脱下来,此缓冲液与结合在柱上的糖化血红蛋白竞争硼酸结合位点。
2.2、免疫分析法使用单克隆或多克隆抗体直接测定血红蛋白β-链上糖基化的N末端的4-8个氨基酸,因此对HbA1c上的糖基特异性好。
但是许多同源的糖化血红蛋白变体也有相同的N末端结构,从而对结果造成干扰。
2.3、电泳法的分析原理是:非糖化血红蛋白游离的氨基末端能与硫酸根反应,改变分子的电泳迁移率。
而化糖血红蛋白不能与硫酸根反应,电泳迁移率不变。
血红蛋白容易受到琼脂板介质中磺酸盐基团或以醋酸纤维膜作支持物的缓冲液中的硫酸右旋糖的硫酸盐基团作用,经过电泳分离,可以将糖化血红蛋白从血红蛋白中分离出来。
2.4、电喷离子质谱(electrospray ionization mass spectrometry, ESI-MS)法研究证明,ESI-MS法测出的是真正的HbA1c,而目前临床上使用的各种方法测出的实际上是一系列混合物,包括糖化的a链、a链和b链双糖化及b链其他部位被糖化的产物。
因此,用ESI-MS法测出的数值要低于目前临床习用的各种方法。
由于ESI-MS法对仪器设备的要求较高,目前尚难广泛用于临床。
3、临床常用的测定糖化血红蛋白HbA1c的方法3.1、乳胶凝集反应法乳胶凝集反应法是利用抗原抗体直接测定总血红蛋白Hb中的糖化血红蛋白HbA1c的百分含量。
目前有国内外几家厂商可以提供HbA1c测定的试剂盒。
这种免疫反应是由被测血样品中的总Hb和HbA1c与试剂中的抗体结合而形成凝集,凝集量随HbA1c浓度的大小而变化。
使用生化分析仪器来进行比浊测定HbA1c的浓度,采用终点法,生化仪通过测定反应液的吸光度值,可直接反映出凝集量的多少;推算出HbA1c占Hb的百分含量,测定时,仪器多采用660nm单色光做主波长,800nm单色光做副波长,通过标准曲线得出实测值。
由于这种试验其标准曲线是非线性的,所以在测定前,首先用随试剂盒一起带有的5种不同浓度的定标液,做出5点非线性标准曲线。
曲线和数值存在生化仪的贮存器中,测定样品时,实测出的吸光度值A与标准曲线比较,由仪器CPU求出实测样品中的HbA1c百分含量。
乳胶凝集反应法测定HbA1c简便、不用增加仪器,可直接用自动生化分析对样品进行快速测定。
该方法也可以用手工的方法,在酶标仪进行测定,是目前使用较多的方法。
但是许多同源的糖化血红蛋白变体也有相同的N末端结构,所以乳胶凝集反应法其准确性和重复性均有欠缺。
3.2、离子交换高压液相色谱法HPLC使用离子交换高压液相色谱HPLC(high pressure liquid chromatography)来测定HbA1c的百分含量目前被认为是分析HbA1c的金标准。
采用HPLC方法工作的全自动糖化血红蛋白分析仪器,以其快速、简便、精巧、准确等特点,受到越来越多用户的欢迎。
3.2.1、高压液相色谱分析的基本原理及发展史色谱分析是一类利用混合物的各组分在不同相上的分配差别,在两相物质相对运动过程中,将混合物中的各种成份分离开的一种分析技术。
液相色谱是以液体或固体为固定相,以液体为液动相的色谱法的总称。
色谱法又叫色层或层析,这一技术在生命科学研究中用于生物活性物质的分析;生物活性物质是以混合物形式存在,人类血液中的蛋白质有上千种,只有把混在一起的被测蛋白分离出来,才能准确测定;在HbA1c的测定时,可以通过高精度HPLC,将HbA1c从Hb中分离出来,才能得到准确的数值。
在生命科学研究中,活性物质的分离主要应用的是液相柱色谱。
这种技术诞生于20世纪初叶,俄国化学家茨维特把植物色素混合液置于装有碳酸钙吸附剂的玻璃管顶端,用石油醚洗脱后,在玻璃柱上出现了几组颜色不同的色带,这些色带随着不断的洗脱,越分越开,先后从玻璃柱下端流出,茨维特把这样一种用流体洗脱色素混合液,使之通过碳酸钙做固定相从而实现分离的技术,起名叫“色谱法”。
这种方法被推广用于分离许多混合物中的各种物质,被分离物质已和颜色无关了,但“色谱”分析的名称仍沿用至今。
当然更贴切的名称应该叫“层析法”。
早期的“色谱柱”体积大,做固定相的物质颗粒大,分离时需要大量的洗脱液。
并且洗脱液靠重力流动,分离时间长,效率低。
随着科学技术的进步,20世纪60年代,人们研制出新型液相柱,同时采用高压输液泵自柱上端为洗脱液加压,大大加速了洗脱液的流速,开发出相应的高灵敏度的检测器,新的分析仪器—高压液相色谱仪在70年代诞生,很快就占领了分析化学的舞台。
特别是在生命科学的研究中,HPLC技术由于对被测物活性影响小,几乎可以测定生物医学中所有的非发挥性物质,如近年来利用离子交换HPLC法测定血液中的HbA1c的百分含量,被认为是糖尿病诊断的金标准。
3.2.2、离子交换HPLC法测定HbA1c离子交换HPLC法,是利用能交换离子的材料为固定相来分离离子型化合物的方法。
HbA1c 的百分比测定使用阳离子交换柱;当一定量的全血样品被取样针吸入到进样装置内,在稀释部分被溶血,释放出红细胞中的血红蛋白Hb,并由稀释液稀释,稀释好的已经溶血的样品,由高压泵注入离子交换柱。
柱内的固定相是最新开发的非多孔性,不溶和可渗透的交联高聚物,上面分布固定的带电荷基团和能游动的配衡离子;样品通过过滤器从交换柱顶端加入后,由三种不同浓度的盐洗脱缓冲液(流动相)洗脱,使样品向下移动。
此时溶液中所含血红蛋白(Hb)的各种组份即与固定相上能移动的离子进行交换,样品中的血红蛋白多种组份在固定相上连续进行可逆的交换吸着和解吸作用,而3种不同离子浓度的盐液,形成线性梯度洗脱,洗脱液No1叫起始缓冲液,含低离子浓度的盐,洗脱液No2、No3缓冲液,其离子浓度依次增高很多,这种流动相离子浓度的改变对分离效果的影响非常明显,前面洗脱出来的组分分离效果好,色谱峰很窄,后面组分也能在很短时间内洗脱出来,大大缩短了分离时间;所以全自动血红蛋白分析仪,在1分多钟内、Hb中的多种成份被分离成6个部分,其中的HbA1c、HbF、HbA1被有效、精确的分离;由交换柱流出的Hb成分到达仪器的检测器,检测器内装有发射单色光的发光二极管,通过双波长可见光比色法测定HbA1c、HbF、HbA1三个参数。
仪器的检测器检测出分离后HbA1c、HbF、HbA1组分的吸光度值,与HbA1c标准品吸光度值比较,分析计算出结果,最后以百分率表示的Hb组分结果与色谱图一起打印出来。
离子交换柱HPLC法对全血直接测定HbA1c,其批内和批间变异系数CV均可以小于1%(CV< 1%),结果精确,HbA1c检测结果不受存在的变异型血红蛋白及其衍生物的影响,特别适合于糖尿病人的监控。
4 平均血糖数值与糖化血红蛋白HbA1c的关系和换算血糖(mmol/L) >10 8- 10 < 8 4.7 6.3 8.2 10 11.9 13.9HbA1c (% ) > 8 7- 8 < 7 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0糖化血红蛋白HbA1c 正常值的参考范围:4.7 – 6.4 % 。
平均血糖数值的正常值的参考范围:3.9 – 6.3 mmol/L 。
5、糖化血红蛋白HbA1c的临床应用糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查,不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。