国家自然科学基金申请书模板

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国家自然科学基金申请书格式(精选多篇)

国家自然科学基金申请书格式(精选多篇)

国家自然科学基金申请书格式(精选多篇)第一篇:国家自然科学基金申请书《国家自然科学基金申请书》填报说明申请书采用ms-word文件方式,界面友好且操作简单。

每一栏目仅需填写一次,重复出现的信息由计算机自动填入。

为规范填写内容、减轻申请人负担,使申请者将撰写重心放在申请的主体内容上,申请书部分采用自带代码包,如单位代码、申请代码等,栏目采取下拉菜单方式选择。

申请书信息表格的内容以数据库方式按字段自动引入国家自然科学基金委员会项目管理系统。

要求信息表格所填内容务必准确、详实。

其主要包括以下几个部分:①基本信息;②项目组主要成员;③经费申请表;④报告正文;⑤签字盖章页;⑥根据不同要求添加附页或表格。

请申请者注意:您的申请书“基本信息表”一页的内容在获得资助后将以在基金委的网站等适当形式向社会公开,凡涉及保密和知识产权问题的内容不得写入,项目依托单位须认真核查。

必须写入摘要中的保密内容应特殊声明,并说明理由。

其声明和说明以书面形式作为附件随同纸质申请书一并申报,内容保密的摘要未提交声明而被公开的责任自负。

申请书的安装请详细阅读下载后的申请书帮助文档。

纸质文本的签字盖章页必须为本人签名的原件,印章必须是依托单位注册公章的原章盖印。

一.需要填写的信息:1.个人信息2.依托单位信息3.合作单位信息4.项目信息5.经费申请信息6.正文报告7.根据特殊情况所需的材料,如中级及以下专业技术职务(职称)申请者(无博士学位),需有2名相同领域具有高级专业技术职务科技人员的推荐信,在职博士生申请需提供导师推荐信。

二、申请人直接填写信息表申请者下载并解压缩国家自然科学基金申请书后,按照说明要求,选择“启用宏”打开空白申请书。

封面左上角显示“检查保护”按钮,请在底端填写申请日期。

“检查保护”按钮的功能为:申请书所有必填信息的检查和规范字段检查。

三、信息表分为下拉式菜单选择和自行填写两种方式四、具体填写说明申请者只需点击表格中灰色显示部分,之后将弹出一张更为详细的表,然后逐项填写,确定弹出表格填写无误后,按“保存”,则相关信息会自动读入表格中。

2024年国自然NSFC申请书模板

2024年国自然NSFC申请书模板

尊敬的国家自然科学基金委员会评审专家:
首先,感谢您的宝贵时间和对本申请的关注。

我是××大学××学院××教授,以下将向您介绍我们团队申请的课题和研究计划。

一、课题的研究背景和意义
(此部分应详细论述该课题在国内外的研究现状,分析其在学术和实际应用中所产生的理论和实际意义,明确研究目标,提出切实可行、有重要意义的科学问题)
二、研究基础和工作条件
(此部分应详细论述申请人在本领域的研究背景和已取得的成果,简要介绍所在单位的研究设备、仪器条件,以及已有人才配备情况)
三、研究内容、研究方案和可行性分析
(此部分要清晰、详细、具体阐述申请人拟开展的研究工作,包括研究思路、研究方法和技术路线,并论述其科学价值、技术可行性和实施可能性)
四、本课题的特色与创新之处
(此部分要突出本课题的特色和创新之处,指出与国内外同类研究存在的差距并论述该课题研究对学科发展的推动作用)
五、研究计划
(此部分应将研究工作分阶段、分任务进行具体规划,明确每一年的研究任务、研究方法和实验方案,并附上相应的时间表)
六、已有的研究成果
(此部分要详尽列出申请人在本领域已发表的与本课题相关的学术论文、专著、获奖情况等)
八、研究经费预算
以上是我们团队申请的课题和研究计划,希望能得到您的认可和支持。

如果需补充材料,请及时提醒我。

对于您在评审过程中提出的问题,我会
尽快做出回复。

再次感谢您的评审!
此致
敬礼
××教授。

2024年国自然NSFC申请书模板

2024年国自然NSFC申请书模板

有效的完成
申请2023年国家自然科学基金委员会(NSFC)项目的申请书
尊敬的NSFC审查委员:
我参加的是2023年国家自然科学基金项目,主题是XXXXXX,编号是:XXXXXX。

我非常荣幸提出这项申请,期望能够获得NSFC项目的资助。

本项目的目标是XXXXXXX,我的研究将尝试XXXXXXX。

我打算采用了XXXXXXX的方法来实现这一目标。

我有信心,本项目能够实现预期目标,
并将给周边的社区及社会带来重要的成果。

对于本项目,我们对协作单位的贡献十分重要,特别是对XXXXXXX协
作单位,我们将通过XXXXXXX的方式邀请他们参与项目的研究工作,使得
本项目能够得到更好的研究成果。

我非常重视这项研究,并已经向当地政府申请了相应的资金支持,全
面有效的组织了本项目研究的工作人员和资源需求,有效的实施了研究计划,并期望研究工作能够取得较为显著的成就。

同时,为了确保项目的诚
实可信,我们将高度重视保护知识产权、健全项目管理,科学开展研究工作,发挥项目经费的最大效用。

尊敬的审查委员,为了使本项目取得成功,我特别借此机会,对您申
请的NSFC资助表示衷心的感谢,期望能得到您的支持,资助我们有效实
施本项目,让我们取得更多更大的成果。

此致
敬礼
XXXXXXXXX。

2024年国家自然科学基金面上项目申请书模板

2024年国家自然科学基金面上项目申请书模板

尊敬的评审委员会:我是XXX,拟申请2024年国家自然科学基金面上项目,特向评审委员会提交本申请书。

我所在的机构是XXX,主要从事XXX研究,并拥有XXX等硕士/博士学位的研究团队。

我拟申请的项目名称为“XXX”,在XXX领域具有重要的理论和应用价值。

下面我将从项目的研究目标、创新点、研究内容和预期成果等方面,对本项目进行详细的阐述。

一、研究目标及重要性本项目旨在解决或探索XXX问题,通过研究XXX,对XXX进行深入的分析和研究。

这是目前该领域的一个热点问题,解决该问题将在理论和实践上具有重要的意义。

本研究的意义不仅在于填补了XXX的研究空白,也为XXX提供了理论支撑和实践指导。

二、创新点本项目的创新点主要体现在以下几个方面:1.XXX2.XXX3.XXX通过这些创新点,本项目有望在相关领域取得重要的突破,推动学科的发展。

三、研究内容和方法本项目的研究内容主要包括XXX、XXX等,具体的研究方法包括XXX、XXX等。

在研究过程中,我们将采用XXX方法,针对XXX问题进行实验观测、建模仿真、数据分析等。

同时,我们还将结合国内外最新的研究成果和相关的领域前沿,进行综合分析。

四、预期成果本项目的预期成果主要包括:1.XXX2.XXX3.XXX我们预计通过本项目的研究,能够取得重要的理论和实践成果,为相关领域的学术研究和应用开发提供关键支持。

综上所述,本项目具有重要的研究目标和创新点,研究内容和方法也经过了科学的设计和安排。

我们深信在优秀的研究团队和合理的预算安排下,本项目将顺利实施并取得预期的成果。

最后,我诚挚地希望评审委员会能够予以认可和支持,给予我机会继续深入研究和进一步探索。

衷心感谢您的评审!敬礼!XXX。

2024年国家自然科学基金青年基金申请书模板

2024年国家自然科学基金青年基金申请书模板

2024年国家自然科学基金青年基金申请书模板一、项目基本信息项目名称:XXXX申请人姓名:XXXX所在单位:XXXX申请时间:XXXX年XX月XX日二、研究背景与意义简要介绍国内外相关领域的研究现状、发展趋势及存在的问题。

阐明本项目的立项依据、研究目的和意义,以及预期在学术或实际应用方面的贡献。

三、研究内容与方法1.研究内容:详细描述研究的核心问题、关键科学点和创新点。

2.研究方法:提出将采用的研究手段、技术路线和实验设计,说明为何选择这些方法,并评估其可行性和潜在的局限性。

四、研究计划与时间表1.研究计划:分阶段描述项目的实施步骤,包括预期的阶段性成果和标志性节点。

2.时间表:为整个项目设置一个清晰的时间框架,注明关键的里程碑和完成日期。

五、研究基础与前期工作简述申请人在相关领域的学术背景、已取得的研究成果和前期准备情况,包括已具备的实验条件、技术储备和数据积累等。

六、预期成果与意义明确项目预期达成的具体成果,如论文发表、专利申请、技术突破等。

阐述这些成果对于推动学科发展或解决实际问题的价值。

七、团队成员与分工1.团队成员:介绍参与项目的核心团队成员,包括他们的专业背景、研究经验和在本项目中的角色。

2.分工:明确各团队成员的任务和职责,确保项目顺利进行。

八、经费预算与来源1.预算:根据项目需求,制定详细的经费预算,包括设备购置、实验材料、人力资源等方面的支出。

2.来源:说明经费的来源,如国家自然科学基金、企事业单位合作或其他资助渠道。

九、合作单位与协作内容如果项目涉及与其他单位或企业的合作,应在此部分描述合作的内容、目的及双方的职责与权益。

这有助于增强项目的可行性和实施效果。

国家自然科学基金申请书通用6篇

国家自然科学基金申请书通用6篇

国家自然科学基金申请书通用6篇国家自然科学基金申请书篇一尊敬的国家自然科学基金评审专家:我是XXX大学的XXX,非常荣幸能够向您提交我所申请的国家自然科学基金项目申请书。

我在此向您介绍我所计划的研究项目,并希望得到您的评估和支持。

项目名称:XXX项目摘要:本项目旨在探究XXX领域的XXX问题。

通过综合运用XXX技术和XXX方法,我们将深入研究XXX的XXX机制,并试图揭示其在XXX方面的作用。

本项目将从XXX的角度出发,通过XXX的实验和模拟,研究XXX的XXX特征,并探讨其对XXX的影响。

同时,我们还将进行XXX的XXX实验,以验证我们的研究结果,并提供理论支持。

研究目标:揭示XXX的XXX机制;研究XXX的XXX特征;探讨XXX对XXX的影响;验证研究结果并提供理论支持。

研究内容和方法:1、文献综述:对XXX领域的相关研究进行全面的文献综述,了解目前研究的现状和存在的问题;2、实验设计:根据研究目标,设计合理的实验方案,包括XXX的采集和处理方法,以及XXX的观察和测量方法;3、数据分析:对实验数据进行统计分析和解释,提取有意义的结果,并进行图表展示;4、模型构建:根据实验结果,构建合理的数学模型,以解释XXX的XXX特征和XXX机制;5、模拟实验:利用数学模型进行模拟实验,验证模型的可靠性和适用性;6、结果验证:通过XXX的XXX实验,验证研究结果的可靠性,并提供理论支持。

研究意义:本项目的研究结果将有助于深入了解XXX的XXX机制,揭示其在XXX方面的作用,为相关领域的研究提供理论依据和实验支持。

同时,本项目的研究成果还将为XXX的XXX应用提供指导和支持,推动相关领域的发展。

预期成果:1、发表高水平的学术论文,向学术界推广本项目的研究成果;2、参加国内外学术会议,展示研究成果,并与同行学者进行交流和合作;3、推广研究成果,为相关领域的应用提供指导和支持;4、培养研究生,提高科研人才的培养质量和数量。

自然基金申请书模板(3篇)

自然基金申请书模板(3篇)

第1篇一、基本信息项目名称:(此处填写项目名称,应简洁、准确反映项目内容)申请人基本信息:1. 姓名:2. 性别:3. 出生年月:4. 职称:5. 职务:6. 学位:7. 依托单位:8. 通讯地址:9. 邮编:10. 电话:11. 电子邮箱:项目基本信息:1. 项目类别:2. 项目来源:3. 项目起止时间:4. 项目经费总额:5. 项目资助方式:6. 项目资助机构:二、立项依据与意义1. 立项依据:(此处阐述项目立项的依据,包括但不限于以下内容:)- 国内外研究现状分析- 项目研究领域的创新性、前沿性- 项目研究内容的重要性和必要性- 项目研究目标的明确性和可实现性2. 研究意义:(此处阐述项目的研究意义,包括但不限于以下内容:)- 学术价值:对学科发展、理论创新等方面的贡献- 实践价值:对国民经济、社会发展和科技进步等方面的贡献- 应用前景:项目成果的可转化性和推广价值三、研究内容与目标1. 研究内容:(此处详细阐述项目的研究内容,包括但不限于以下方面:)- 研究背景和问题提出- 研究方法和技术路线- 研究步骤和实施方案- 研究成果和创新点2. 研究目标:(此处明确项目的研究目标,包括但不限于以下内容:)- 短期目标:项目实施期间要达到的具体目标- 中期目标:项目实施一段时间后要达到的目标- 长期目标:项目完成后要达到的目标四、研究方法与技术路线1. 研究方法:(此处介绍项目所采用的研究方法,包括但不限于以下内容:)- 定性研究方法:文献综述、案例分析、专家访谈等- 定量研究方法:统计分析、模型构建、实验研究等- 跨学科研究方法:结合多个学科的理论和方法2. 技术路线:(此处描述项目的技术路线,包括但不限于以下内容:)- 研究阶段划分- 各阶段研究任务和实施步骤- 技术手段和工具五、研究方案与进度安排1. 研究方案:(此处详细阐述项目的研究方案,包括但不限于以下内容:)- 研究对象和样本选择- 数据收集和分析方法- 研究结果的处理和解释2. 进度安排:(此处制定项目的研究进度安排,包括但不限于以下内容:)- 各阶段研究任务的起止时间- 各阶段研究成果的预期- 风险评估和应对措施六、预期成果与效益1. 预期成果:(此处列出项目预期取得的成果,包括但不限于以下内容:)- 学术论文- 科研报告- 知识产权- 学术专著2. 效益分析:(此处分析项目预期产生的效益,包括但不限于以下内容:)- 学术效益:对学科发展和理论创新的贡献- 经济效益:对国民经济和社会发展的贡献- 社会效益:对人民群众生活质量的提升七、经费预算1. 经费预算表:(此处填写项目经费预算表,包括但不限于以下内容:)- 设备费- 材料费- 人工费- 差旅费- 会议费- 其他费用2. 经费预算说明:(此处对经费预算进行说明,包括但不限于以下内容:)- 经费预算的依据和合理性- 经费使用的规范性和透明度八、研究基础与条件1. 研究基础:(此处介绍项目团队的研究基础,包括但不限于以下内容:)- 项目组成员的学术背景和研究经验- 项目依托单位的科研实力和条件- 已有的研究成果和专利2. 研究条件:(此处介绍项目的研究条件,包括但不限于以下内容:)- 实验室、设备等硬件设施- 数据资源、文献资料等软件资源- 项目团队的合作与分工九、项目组织与管理1. 项目组织:(此处介绍项目组织架构,包括但不限于以下内容:)- 项目负责人- 项目组成员- 项目协调人2. 项目管理:(此处介绍项目管理制度,包括但不限于以下内容:)- 项目进度管理- 项目质量管理- 项目经费管理十、项目预期风险与应对措施1. 预期风险:(此处列出项目预期可能遇到的风险,包括但不限于以下内容:)- 研究方法和技术路线的风险- 数据收集和分析的风险- 项目进度和经费的风险2. 应对措施:(此处针对预期风险提出应对措施,包括但不限于以下内容:)- 技术改进和优化- 数据补充和修正- 项目调整和优化十一、总结(此处对项目进行总结,包括但不限于以下内容:)- 项目的研究意义和价值- 项目的研究内容和目标- 项目的研究方法和技术路线- 项目的预期成果和效益十二、附件(此处附上相关附件,如项目组成员简历、依托单位证明、相关研究成果等)请注意,以上模板仅供参考,具体内容需根据实际情况进行调整和完善。

国家自然科学基金青年基金申请范文

国家自然科学基金青年基金申请范文

国家自然科学基金青年基金申请范文【国家自然科学基金青年基金申请范文】申请人基本情况申请人姓名:XXX职务:XXX职称:XXX工作单位:XXX大学联系方式:XXX研究领域:XXX主要研究成果:XXX一、研究背景自然科学基金的申请是为了支持优秀青年科学家在基础科学研究领域的创新性研究工作,提高我国基础科学研究的水平。

我对这方面的工作非常热衷,希望通过此次申请,能够得到更多的支持和鼓励,继续深入开展有意义的研究工作。

二、研究内容我的研究方向主要集中在XXX。

在过去的几年里,我团队已经取得了一定的研究成果,但在某些方面仍然存在一定的空白和不足。

因此,我打算通过此次申请,深入开展与XXX相关的研究,力求取得更多的进展和突破。

具体来说,我打算进行XXX方面的研究,希望能够通过我的努力,为该领域的发展做出一定的贡献。

三、研究意义XXX方面的研究对于推动我国基础科学研究的发展具有重要意义。

首先,这方面的研究可以为XXX提供更加深入和系统的了解,有助于解决相关领域的实际问题。

其次,通过该研究,可以为我国相关领域的发展提供更加丰富和全面的研究成果,有助于提高我国在该领域的学术地位和国际声誉。

四、研究目标通过此次项目的申请,我主要想实现以下几个方面的研究目标:1.深入了解XXX,并在此基础上,提出有创新性的研究思路和方法;2.通过具体的实验和数据分析,得出一些可靠和有意义的结果;3.撰写高水平的学术论文,发表在国际著名期刊上;4.在相关学术会议上,做详细的汇报和交流,向同行展示我的研究成果。

五、研究过程在实现以上目标的过程中,我将按照以下步骤来进行具体的研究工作:1.收集相关领域的文献资料,深入了解国内外在该领域的研究现状和进展;2.进一步明确自己的研究方向和目标,提出具体的研究方案和方法;3.进行具体的实验和数据采集,随时总结和分析研究过程中的具体成果和问题;4.撰写学术论文,并参加相关的学术交流和讨论。

六、研究预期成果通过以上的研究工作,我预期能够实现以下几个方面的科研成果:1.在相关领域发表一两篇高水平的学术论文,向国内外同行展示我的研究成果;2.参加相关的学术会议,做详细的汇报和交流,得到同行的肯定和认可;3.有可能就研究成果提交相关的专利申请,为科研成果的转化和应用奠定基础。

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一、立项依据与研究内容(一)项目的立项依据DNA错配修复(mismatch repair, MMR)系统广泛存在于生物体中,它是细胞复制后的一种修复机制[1-3]。

其功能是在含有错配碱基的DNA分子中切除配对错误的片段,然后通过DNA聚合酶和DNA连接酶等的作用,重新合成配对正确的片段,使DNA恢复正常的核苷酸序列。

因此,它起着增强DNA复制保真度、修复DNA错配、降低基因变异和维持基因组稳定性的作用[4-5]。

近来,MMR系统的研究越来越受重视,对MMR作用机制及该系统的组成结构与功能分析方面的研究正不断深入[6-8]。

由于在越来越多的肿瘤(如卵巢癌、肠癌、肾癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、胰腺癌、胆囊癌、甲状腺肿瘤等)细胞中找到DNA MMR基因突变或缺陷的痕迹[9-11]。

MMR系统与肿瘤的发生与恶化的关系成为近十年来的研究热点,MMR基因也成为继癌基因与抑癌基因之后被确认的第三类肿瘤相关基因[4]。

外源性的持续刺激是细胞复制出现DNA错配的重要原因之一,而日益严重的化学污染又使生物受到的外源毒素刺激与日俱增,生物细胞内DNA损伤与错配几率因而也急剧增加[12-15]。

错配的DNA序列如果不能得到修复,将导致突变频率增加,基因突变事件放大,最终会引起肿瘤等相关疾病的发生发展。

事实上,人类MMR系统不仅能识别多种需要进行核苷酸切除与重新合成的DNA错配,还能参与如O6-甲基鸟嘌呤和UV诱导的光产物等造成的DNA损伤的修复[16-19]。

这说明MMR系统极可能参与了暴毒后DNA损伤的修复。

另有研究显示,毒物暴露不但会使DNA错配概率显著提高而增加MMR系统的负荷,而且有些致癌物可能会直接损害MMR基因,使MMR活性降低甚至丧失。

其中,Feitsma等通过使用强致癌物乙基亚硝基脲来诱变获得MSH2、MLH1、MSH6和PMS2等MMR基因缺陷型斑马鱼就是一个重要的例证[20-26]。

因此,日益严重的环境污染对生物及人类构成的健康风险之一可能就是阻断或干扰细胞的DNA MMR活性。

然而,目前将DNA MMR活性分析与环境毒理学相结合的研究在国际上仍为空白,这与当前DNA MMR活性分析方法较为繁琐及环境毒理研究对所需的异源核酸分子的质与量要求很高有关。

除了本课题拟开展的活细胞DNA MMR活性分析技术以外,生物体MMR 功能的主要分析方法还有两种。

第一种是以噬菌体M13mp2及其衍生株为材料[27-30],该法利用噬菌体M13mp2及其一种衍生株作为材料,各自提供一条正链ssDNA和一条负链ssDNA,这两条ssDNA退火杂交后可形成一个带预设错配位点的环状异源dsDNA。

将这种含错配碱基的异源dsDNA转入自身错配修复功能缺失的宿主菌E.coli(NR9160),在培养平板上就会出现混合噬斑。

若将这种异源dsDNA与样本细胞提取物在体外作用后再次转化NR9162,样本细胞的MMR系统对错配位点的修复情况可通过指示板上的混合噬斑比率的变化来指示,进而分析样本的DNA MMR活性。

第二种以寡聚核苷酸为材料[31],该法采用人工合成的寡聚核苷酸来制备含有错配碱基的异源dsDNA,在错配碱基处预设特异性限制性内酶切位点.如果待测样本的MMR功能完整,其提取物在体外与这种异源dsDNA作用后,在错配碱基得到修后异源dsDNA即变为同源dsDNA,预设的酶切位点也就同步恢复。

通过电泳检测修复后的dsDNA的限制性酶切产物的有无和多少来对样本MMR功能做定性或初步的定量分析。

这两种方法自建立后,在一定程度上促进了对DNA MMR功能活性研究的发展,但也都存较大的局限性。

首先,这三种方法均为体外法,不能准确反应生物体内的真实状况。

其次,分析过程复杂,需要多个步骤,而且指标参数的灵敏度和准确度都较低。

由于这些方法仅限于特定生物体MMR活性的体外分析,很难在实际研究中广泛推广,这在一定程度上导致了国内在该研究领域力量比较薄弱的局面。

但是,复旦大学的王怡等[32]曾运用上述第一个方法建立了一个类似的DNA MMR活性体外分析模型,用以对淋巴瘤细胞的DNA MMR活性进行分析。

为了克服突破这些限制,美国得州大学孙鲁浙教授领衔的研究团队于2004年提出了一种利用绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescentprotein,EGFP)基因作为报告基因直接对活细胞DNA MMR活性进行定量分析的模型[33]。

该模型的原理是构建一对EGFP基因真核表达双链核酸分子,其中一个为碱基序列正确的同源双链核酸分子,可以在细胞中正常地表达EGFP;另一个为带一个错配碱基的异源双链核酸分子,这个错配碱基设计在EGFP基因的起始密码子处。

将异源双链核酸分子导入活细胞,如果错配没有修复,细胞就不能表达EGFP。

因此,把这对EGFP 双链核酸分子平行地导入细胞中,并检测其组间的EGFP表达率与表达强度,就可以评估该细胞株DNA MMR活性的强弱。

绿色荧光蛋白的发明及其在生物学研究中的应用获得2008年度诺贝尔奖,将其用于DNA MMR活性的定量检测具有显著的创新意念。

但在随后的应用中,人们发现该模型的异源双链核酸分子存在一定的EGFP本底表达(即错配未修复也有一定量的绿色荧光蛋白表达),原因是细胞内基因的表达并不完全依赖于起始密码子。

此外,如何大量得到高纯度核酸分子也是制约该技术应用的一个瓶颈。

近来,本课题组通过与孙教授的合作而引入此项技术。

目前,本课题组已在此项技术的应用上获得了两项突破:(1)采取无义突变策略(在EGFP基因合适位置引入终止密码子),建立了一种新的突变型EGFP表达质粒p189,运用质粒p111和p189所获得的异源双链核酸分子彻底消除了该模型EGFP的本底值问题[34],达到了能精确区分MMR活性缺失的细胞株和正常的细胞株(见插图);(2)开发出了一种为该模型大量制备高纯度ssDNA 的技术[详见前期基础],为此项技术在毒理学及其它领域的推广应用提供了技术保障。

本项目拟在前期研究的基础上,为该EGFP双链核酸模型再引入一个红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)基因作为报告基因,构建一个全新的双荧光蛋白基因双链核酸分子(含有同时可表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的基因)。

该模型的技术改进特点是:⑴让双链核酸分子自身多带了一个RFP报告基因,可直接定量指示转染效率,而当前技术需要采用与RFP表达质粒共转染的方法;⑵只需要制备一种带错配的异源核酸底物,无需再制备一种无错配的同源核酸底物;⑶检测过程只需将异源核酸底物导入活细胞中,无需再设空白对照组和同源核酸底物组。

由此可见,新模型的思路是将所有参数在一组细胞中同时获得,而原方法的不同参数需要在不同的细胞组中获得。

因此,新模型由于所有参数完全同步而具更的精确度与灵敏度,而且还可起到简化分析和提高效率的作用。

但是,经过优化的检测模型在细胞毒理学研究方面的前景如何?这就需要进行科学与系统的验证与评估。

因此,本课题拟先用已知的强致癌化学污染物乙基亚硝基脲来验证该模型应用于细胞毒性研究的适用性,再用几种已知的具有DNA突变和致癌毒性的化学污染物(如铬(Cr)、镉(Cd)、砷(As)、多氯联苯(PCBs)、多环芳烃(PAHs)和DDT 等)及几种毒性较弱的新型持久性有机污染物(如全氟辛烷磺酸(PFOS)、多溴二苯醚(PBDE)和双酚A(BPA)等)来评估该模型应用于细胞毒性研究的优越性。

如果活细胞MMR功能活性分析模型可以应用于环境毒理学研究中,我们不仅可为环境污染物的致突变毒性、遗传毒性与致癌毒性的定量评价增加一个强有力的选项,更可以在微观上发掘环境污染物生物毒性的分子机制。

主要参考文献:1. Wiesendanger, M., M.D. Scharff, and W. Edelmann, Somatic hypermutation, transcription,and DNA mismatch repair. Cell, 1998. 94(4): p. 415-8.2. Gou-Min Li, Mechanisms and functions of DNA mismatch repair. Cell Research, 2008. 18: p. 85–98.3. Kirkpatrick, D.T. and T.D. Petes, Repair of DNA loops involves DNA-mismatch andnucleotide-excision repair proteins. Nature, 1997. 387(6636): p. 929-31.4. Meyers, M., et al., A role for DNA mismatch repair in sensing and responding tofluoropyrimidine damage. Oncogene, 2003. 22(47): p. 7376-88.5. Strathdee, G., et al., A role for mismatch repair in control of DNA ploidy following DNAdamage. Oncogene, 2001. 20(15): p. 1923-7.6. Strand, M., et al., Destabilization of tracts of simple repetitive DNA in yeast by mutationsaffecting DNA mismatch repair. Nature, 1993. 365(6443): p. 274-6.7. Obmolova, G., et al., Crystal structures of mismatch repair protein MutS and its complexwith a substrate DNA. Nature, 2000. 407(6805): p. 703-10.8. Prolla, T.A., et al., MLH1, PMS1, and MSH2 interactions during the initiation of DNAmismatch repair in yeast. Science, 1994. 265(5175): p. 1091-3.9. Marra, G. and J. Jiricny, DNA mismatch repair and colon cancer. Adv Exp Med Biol, 2005.570: p. 85-123.10. Bronner, C.E., et al., Mutation in the DNA mismatch repair gene homologue hMLH1 isassociated with hereditary non-polyposis colon cancer. Nature, 1994. 368(6468): p. 258-61.11. Goodfellow, P.J., et al., Prevalence of defective DNA mismatch repair and MSH6 mutationin an unselected series of endometrial cancers. Proc Natl Acad Sci U S A, 2003. 100(10): p.5908-13.12. Planck, M., et al., Microsatellite instability and expression of MLH1 and MSH2 incarcinomas of the small intestine. Cancer, 2003. 97(6): p. 1551-7.13. Deguchi, M., et al., DNA mismatch repair genes in renal cell carcinoma.J Urol, 2003.169(6): p. 2365-71.14. Gao, P., et al., Effects of PCB153 on DNA damage and DNA repair-related genesexpressions induced by PBDE-47 in human neuroblastoma cells in vitro.Wei Sheng Yan Jiu, 2008. 37(5): p. 525-8.15. He, W., et al., Effects of PBDE-47 on cytotoxicity and genotoxicity in human neuroblastomacells in vitro. Mutat Res, 2008. 649(1-2): p. 62-70.16. Oakley, G.G., et al., Oxidative DNA damage induced by activation of polychlorinatedbiphenyls (PCBs): implications for PCB-induced oxidative stress in breast cancer.Chem Res Toxicol, 1996. 9(8): p. 1285-92.17. Srinivasan, A., et al., Production of DNA strand breaks in vitro and reactive oxygen speciesin vitro and in HL-60 cells by PCB metabolites. Toxicol Sci, 2001. 60(1): p. 92-102.18. Kaneko, T., et al., Accumulation of oxidative DNA damage, 8-oxo-2'-deoxyguanosine, andchange of repair systems during in vitro cellular aging of cultured human skin fibroblasts.Mutat Res, 2001. 487(1-2): p. 19-30.19. Yu, Z., et al., Human DNA repair systems: an overview. Environ Mol Mutagen, 1999. 33(1):p. 3-20.20. Mu, D., et al., Recognition and repair of compound DNA lesions (base damage andmismatch) by human mismatch repair and excision repair systems.Mol Cell Biol, 1997.17(2): p. 760-9.21. Feitsma, H., A. Akay, and E. Cuppen, Alkylation damage causes MMR-dependentchromosomal instability in vertebrate embryos.Nucleic Acids Res, 2008. 36(12): p.4047-56.22. Feitsma, H. and E. Cuppen, Zebrafish as a cancer model. Mol Cancer Res, 2008. 6(5): p.685-94.23. Feitsma, H., et al., Mismatch repair deficiency does not enhance ENU mutagenesis in thezebrafish germ line. Mutagenesis, 2008. 23(4): p. 325-9.24. Feitsma, H., et al., Zebrafish with mutations in mismatch repair genes developneurofibromas and other tumors. Cancer Res, 2008. 68(13): p. 5059-66.25. Feitsma, H., et al., Mlh1 deficiency in zebrafish results in male sterility and aneuploid aswell as triploid progeny in females. Genetics, 2007. 175(4): p. 1561-9.26. Leal, M.C., et al., Completion of meiosis in male zebrafish (Danio rerio) despite lack ofDNA mismatch repair gene mlh1. Cell Tissue Res, 2008. 332(1): p. 133-9.27. Jain, N., et al., Influence of flanking sequence context on the conformational flexibility ofaminofluorene-modified dG adduct in dA mismatch DNA duplexes.Nucleic Acids Res, 2009.28. Thomas, D.C., J.D. Roberts, and T.A. Kunkel, Heteroduplex repair in extracts of humanHeLa cells. J Biol Chem, 1991. 266(6): p. 3744-51.29. Thomas, D.C., J.D. Roberts, and T.A. Kunkel, Measurement of Heteroduplex Repair inHuman Cell Extracts.Methods, 1995. 7(2): p. 187-197.30. Larson, E.D., D. Nickens, and J.T. Drummond, Construction and characterization ofmismatch-containing circular DNA molecules competent for assessment of nick-directed human mismatch repair in vitro. Nucleic Acids Res, 2002. 30(3): p. E14.31. Shimodaira, H., et al., Functional analysis of human MLH1 mutations in Saccharomycescerevisiae. Nat Genet, 1998. 19(4): p. 384-9.32. 王怡等. 异源双链DNA体外错配修复功能分析模型的构建。

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