HUVEC细胞培养心得
huvec小管生成实验方法
huvec小管生成实验方法HUVEC小管生成实验是一种常用的细胞实验方法，旨在研究人体血管内皮细胞（HUVEC）在体外形成管状结构的能力。
本文将介绍HUVEC小管生成实验的整体流程和关键步骤。
一、实验前准备在进行HUVEC小管生成实验之前，需要准备以下实验材料和设备：1. HUVEC细胞系：HUVEC细胞系是由人体血管内皮细胞培养而成的细胞株，可通过购买或实验室培养获得。
2. 培养基：HUVEC细胞的培养基通常为含有生长因子和营养物质的培养基，如EGM-2培养基。
3. 细胞培养器具：培养皿、离心管、移液器等。
4. 细胞培养条件：实验室内需要提供恒温恒湿的培养箱，并保持细胞培养条件稳定。
二、实验步骤1. HUVEC细胞的处理将培养好的HUVEC细胞从培养瓶中取出，用PBS缓冲液洗涤细胞，以去除培养基中的残留物。
然后加入胰酶等胰蛋白酶类物质，使细胞与培养瓶底分离，放置一段时间，使细胞形成单细胞悬浮液。
2. 细胞计数和制备细胞悬液用显微镜和细胞计数板对HUVEC细胞进行计数，以确定细胞的浓度。
根据所需实验的细胞密度，将细胞悬液稀释至适当浓度。
3. 细胞培养和形成小管将稀释后的HUVEC细胞悬液均匀地加入预先涂覆有基质（如Matrigel）的培养皿中，使细胞悬液均匀分布。
然后将培养皿置于培养箱中，保持适宜的温度和湿度进行培养。
在一定时间后，通过显微镜观察细胞是否形成管状结构。
4. 小管形成的评估使用显微镜观察和拍摄HUVEC细胞形成的小管结构，并记录相关数据。
可以通过图像处理软件对小管网络的形态参数进行分析，如长度、分支数等。
5. 对实验结果的统计分析根据实验数据，使用统计学方法（如t检验、方差分析等）对不同处理组的小管生成能力进行比较和分析，以获得可靠的实验结果。
三、实验注意事项1. HUVEC细胞的培养条件和培养基的配方需要根据实验目的和相关文献进行优化选择。
2. 在实验过程中应注意细胞的无菌操作，避免细胞受到污染。
人脐静脉血管内皮细胞HUVEC
第三：铺板加样方法错误。
• 6孔、12孔、24孔、48孔与96孔的细胞接种铺板过程中，你的 加样方式是哪种？你觉得加样方式对后期的接种均匀度影响大 吗？例如你是否有过垂直加入96孔板的经历？是不是有的孔就 比较均匀，而有的孔就聚集在了一起？六孔板怎么摇晃也不均 匀？其实也许你离铺好板就差一种适合你的方法。
• 2、不是所有细胞消化后都会变成圆形
• 有些细胞(比如U87，U251)消化好了也不会变成圆形， 只是呈半沙状。
• 3、有些细胞即使变圆，也有脱落的细胞，但还是没消化好 • 比如7860，要等到大部分细胞脱落培养皿底部才可以停
止消化，否则很难吹打下来，这种情况一般发生于难以消化 的细胞。
• 4、对于一些特殊的细胞需要消化过一点 • 有些细胞吹成单个细胞反而对细胞的状态会好一点，一
6孔板、12孔板或24孔板
• 为防止表面张力导致的中间液面太低细胞聚集的现象。通常 每孔首先滴加少量培基，轻轻晃动浸润整个孔底以保证板子 的孔底都是湿润的，这样加液后细胞悬液会平铺在整个孔底， 可以避免加在中间位置和加在周边晃匀后周边细胞局部太多 的现象，细胞分散会较均匀。注意加完细胞悬液后要放工作 台静置一下（5-10分钟）。镜下观察细胞均匀度，如不均匀 可采用以下8字法、十字法及震荡法等方法进行细胞均匀度 处理
• HUVEC细胞培养难度较高，建议使用内皮细胞专用培养基， 选用优质胎牛血清。细胞推荐传代比例为1:2-1:3，胰酶消化室 温1-2分钟，传代周期通常为3-4天。需要注意的是，如 HUVEC出现聚团生长，可能由于培养板亲水性差或者血清中 促贴壁因子不足，可考虑用人纤维粘连蛋白包被培养板，能有 效预防细胞聚团。
第二：细胞吹打次数不够，细胞悬
液密度不均匀。
原代HUVECs分离培养关键影响因素分析
的原代 ＨＵ Ｅ ｓ Ｖ Ｃ 的培 养方 法 ， 并探讨 影 响脐 静脉 内皮 细胞 分离 培养 成败 的关 键 因素 ．
１ 实验 材 料
１ １ 材 料 ．
２１ ０ １年 ２月
中央 民族 大 学学 报 （ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ｕｎ ｌ ｆ Ｃ（ ａｕａ Ｓ ｉ ｃ ｓＥ ｉｏ ） ｏ ｒａ ｏ ＭＵ Ｎ ｔｒｌ ｃｅ０ １
Ｖｏ＿０ １ ２ Ｎｏ １ ．
第２ ０卷
第 １ 期
脐带 由北 京市 海淀 区妇 幼保 健 院手 术室 提供 ， 选择 羊水 无 污染 的健康 新 生儿脐 带 ．
１ ２ 试 剂 ．
胎牛 血清 （ ｙｌｎ ， 国 ） 内皮 细胞 生长 因子 （ ｎ ｏ ｅ ａ ｃｌｇｏ ｔ ｃ ｒＥ Ｇ ， ｏｈ ， 国 ） 明 Ｈ ｃ ｅ美 ｏ ； ｅ ｄｔ ｌ ｌ ｅ ｒｗｈｆ ｔ ， Ｃ Ｆ Ｒ ｃ ｅ 美 ｈ ｉ ｌ ａｏ ； 胶 （ ｉ ａ 美 国） Ｓｇ ， ｍ ；Ｍ１９培养 基 、 ９ 高糖 Ｄ Ｍ培 养基 （ ｉｃ ＭＥ Ｇｂ ｏ美 国公 司 ） Ｉ型胶 原 酶 （ｎｉｏ ｅ ， 国 ） ； ｖ ｒｇｎ 美 Ｉ ｔ 、 胰酶 、 Ｄ Ａ（ ｍ ｅｃ ， 国 ） 兔 抗人 Ⅷ 因子抗 体 、 ＩＣ标记 的羊抗兔 二抗 （ ａｔ ｒｚ 美 国 ） Ｅ Ｔ Ａ ｒｓｏ 美 ； ＦＴ Ｓ ｎ Ｃｕ ， ａ ．
原 代 Ｈ Ｖ Ｃ 分 离培 养关 键 影 响 因素 分 析 Ｕ Ｅｓ
朱 丹 ， 丽 丽 ， 秀兰 古 黄
（ 央 民族 大 学 中 国少 数 民族 传 统 医 学 研 究 院 ，北 京 １０ ８ ） 中 ０ ０ １
细胞培养技术心得体会范文
细胞培养技术心得体会范文细胞培养技术是现代生物科学研究中非常重要的实验技术之一，它可以使科研人员对细胞进行体外培养和研究。
在我进行细胞培养技术学习的过程中，我深深感受到了它的重要性和应用的广泛性。
下面是我对细胞培养技术的一些心得体会。
首先，细胞培养技术是一门基础的实验技术。
在进行任何与生物学相关的实验研究时，细胞培养技术都是不可或缺的。
通过细胞培养技术，科研人员可以获得大量的特定类型细胞，并对其进行后续的实验操作。
比如，通过细胞培养技术，可以获得肝细胞、肺细胞等特定细胞，然后可以对这些细胞进行药物检测、基因转染等实验，从而研究细胞的生命活动和相关机制。
因此，细胞培养技术是生物学等学科的基础。
其次，细胞培养技术对实验操作的要求非常高。
在进行细胞培养的过程中，需要严格控制培养液的成分、温度、湿度、CO2浓度等多个参数，以保证细胞能够正常生长和繁殖。
同时，需要注意培养器具的消毒和无菌操作，以避免培养过程中的细菌和真菌污染。
因此，细胞培养技术对科研人员的实验技术和操作规范要求非常高，这也是我在学习过程中深受启发的地方。
另外，细胞培养技术需要耐心和细心。
由于细胞生长和繁殖的周期相对较长，所以在进行细胞培养实验时，需要耐心等待细胞的生长和繁殖。
此外，由于细胞对环境的变化非常敏感，稍有不慎可能导致细胞的死亡或繁殖异常。
因此，细胞培养技术需要科研人员具备细心和耐心的品质，随时观察和调整培养条件，以保证实验的顺利进行。
此外，细胞培养技术也存在一定的风险。
细胞培养液中的成分和培养条件可能会对细胞产生毒性影响，导致细胞的死亡或繁殖异常。
此外，细胞也可能会被真菌、细菌等微生物污染，从而影响实验结果。
因此，在进行细胞培养实验时，需要对培养液和培养条件进行严格控制和检测，以降低实验风险。
细胞培养技术不仅在科研领域中有广泛应用，在医学领域也有重要的应用价值。
通过细胞培养技术，可以获得人体细胞，并进行药物筛选和毒理学评价等实验。
细胞培养个人工作总结范文
细胞培养个人工作总结范文细胞培养是生物学实验中非常重要的一个环节，我在进行细胞培养工作中取得了一些经验和收获，现做以下总结：首先，在进行细胞培养实验时，我要保证实验室环境的洁净，经常对实验设备进行消毒和清洁，以防止细菌或其他有害物质的污染。
同时，在进行细胞培养时，要注意无菌操作，避免外界微生物的污染。
其次，我在培养细胞过程中，掌握了种植细胞的最佳条件和方法。
比如，在细胞培养的过程中，我严格控制培养基的pH值、营养物质的添加和细胞密度的控制，以保证细胞的健康生长和增殖。
另外，在细胞培养过程中，我也注意到了细胞的形态学变化和生长速度等指标的监测和记录，及时发现细胞的异常情况，以便及时调整培养条件。
最后，我在细胞培养实验中，还积累了大量的实践经验和技能，这些都将对我今后的科研工作产生积极的影响。
总而言之，通过细胞培养的个人工作总结，我进一步加深了对细胞培养工作的理解，提高了细胞培养技能，为今后的科研工作奠定了更加扎实的基础。
希望在今后的科研工作中，我能够不断积累经验，提高专业素养，为科学研究做出更多的贡献。
在细胞培养的工作实践中，我还学会了如何选择合适的细胞培养基和添加剂，以促进细胞的健康生长。
同时，我也学会了如何判断细胞的状态和纯度，并且掌握了一些常见的检测方法和技术，如细胞计数、细胞鉴定、细胞凋亡检测等。
这些技能不仅为我日常的细胞培养工作提供了坚实的保障，也为我未来的科研探索和学术研究奠定了基础。
在进行细胞培养的工作中，我还注意到了实验中的一些常见问题和解决方法。
比如，细胞在培养过程中出现的感染、细胞质纺锤体形成异常、细胞黏附不良等情况，这些都需要我们认真研究问题的根源，并采取相应的措施解决。
通过对实验过程中遇到的问题进行分析和总结，我得以不断提高自己的动手能力和解决问题的能力，使得我在工作中更加得心应手。
在实验的过程中，我发现了培养过程中一些可能的改进点。
比如，改进培养基的配方、优化培养条件、探索新的细胞培养技术等，这些都是我在细胞培养工作中不断努力的方向。
HUVEC细胞培养心得
HUVEC 培养交流讨论：各位仁兄，我查了一下，关于HUVEC 的贴子有几千篇，不知有那位知道的多的能给总结一下？我想应该有以下几1、讲清HUVEC 与ECV304区别2、HUVEC 原代与细胞株的关系、区别问题3、能否总结一下国内有哪些单位可以买到HUVEC ？是原代还是细胞株？4、培养中到底添加ECGS 还是ECGF ？5、有些推荐细胞的应该讲清自己的是原代还是细胞株，能养多少代。
希望能抛砖引玉。
票数+收藏2回帖16浏览2686我也要发帖举报∙浙江医院招聘浙江省老年医学研究所（临床医学） ∙请教关于HUVEC 细胞的培养 ∙求购HUVEC ∙【互助小组】正在养或已经养过HUVEC 的请进。
docter_zhao∙0 2004-08-03 15:14 消息 引用 分享 huvec 必需加ECGS 及肝素，否则很难生长增殖 举报 ∙zjqlucky∙15 ∙ 5∙7 2004-08-03 17:27 消息 引用 分享docter_zhao wrote: huvec 必需加ECGS 及肝素，否则很难生长增殖这个好像也未必吧，我养的原代的huvec 只用20％胎牛血清的RPMI1640也长的很好呀，只是传ecgs 能传这么多代吧票数+收藏1举报 ∙2004-09-08 00:20 消息 引用 分享我们曾试过用m199或DMEM 加20％胎牛血清原代培养，感觉效果不佳，后来加了ECGS 及肝素，发现细胞长得能有改变票数+收藏1举报引用 分享huvec 是脐静脉内皮细胞,不是那么难养,细胞可以从脐带自己提取,卖现成的细胞株也不贵,用内皮细胞的配套培email-sinian19988@∙∙细胞系查询培养基培养用常用试剂各品牌评定cairuiyanzi入门站友 ∙积分 ∙得票 ∙3粉丝加关注 2012-08-16 10:02 消息 引用 分享哪位大虾知道HUVEC 加肝素的目的？谢谢了！ 我现在养着HUVEC ，第二代是用新配的GIBCO 的M19培养两天发现细胞状态不好，似大面积凋亡，并伴有部分脱落。
细胞培养技术个人总结
总结---细胞培养一．基本理论概论原代培养: 也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。
传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。
细胞系：原代培养物成功传代后，则称之为细胞系。
(如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。
)细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
培养类型：细胞培养，组织培养，器官培养。
细胞生长的方式：贴附生长，悬浮生长培养细胞的形态（形态不一定，环境改变形态可能改变）：成纤维性型细胞，上皮型细胞（单层膜样生长），游走性细胞（游散生长，常有伪足跟突起）二．培养过程及要点（切记无菌操作）（一）工作环境的处理1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
吸管口切勿碰到容器瓶口4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
实验室常用实验方法-人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养
实验室常用实验方法-人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养1.将15-20cm长的新生儿脐带放入无菌的PBS溶液中储存。
注：4℃下最多贮存24小时，室温下不超过6小时，否则废弃）2.用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的PBS溶液冲洗3-5次，将污血冲洗干净为止。
3.用手术钳夹紧脐带下端，加入15ml的胶原酶（1mg/ml）室温下消化15-20分钟，并不时上下摇动脐带。
4.消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50ml 无菌离心管中，用无菌的PBS溶液冲洗脐带2-3次。
5.将收集液离心（2000转/分）3分钟。
6.倒去上清，加入10mlM199培养基（加入10U/ml的bFGF），用弯管吹散细胞，将所有液体转入一个用明胶包被好的培养瓶中，37℃培养。
注：每个培养瓶中加入3-4ml无菌的1%的明胶溶液，摇匀使得明胶溶液完全铺满瓶底，放入37℃孵育，最少2小时，用前将明胶溶液倒了即可，明胶包被有利于细胞贴壁。
）7.培养24小时后，倒掉培养基，并用无菌的PBS溶液清洗2-3次，洗掉红细胞和死细胞，加入10ml新鲜的M199培养基。
9.一般培养5-7天，细胞可长满至80-90%单层，这时可以传代。
10.倒掉造就基，用无菌的PBS溶液清洗2-3次，插手2-3ml消化液（0.25%胰酶0.1%EDTA）消化细胞，在显微镜下窥察，一旦细胞变圆，即插手2-3倍的有血清的DMEM培养基终止反应。
11.用弯管将细胞吹打下来，并将所消化的细胞转移到一个50ml无菌离心管中。
2000转/分，离心3分钟。
12.倒掉上清,加入10ml新鲜培基,一般一瓶细胞可传代3-4瓶.以后照此传代培养.13.一般传代2-3代（培养了20天左右）用于做各种实验效果最好。
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HUVEC 培养交流讨论：
各位仁兄，我查了一下，关于HUVEC 的贴子有几千篇，不知有那位知道的多的能给总结一下？我想应该有以下几
1、讲清HUVEC 与ECV304区别
2、HUVEC 原代与细胞株的关系、区别问题
3、能否总结一下国内有哪些单位可以买到HUVEC ？是原代还是细胞株？
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浙江医院招聘浙江省老年医学研究所（临床医学） ∙
请教关于HUVEC 细胞的培养 ∙
求购HUVEC ∙
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docter_zhao
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0 2004-08-03 15:14 消息 引用 分享 huvec 必需加ECGS 及肝素，否则很难生长增殖 举报 ∙
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7 2004-08-03 17:27 消息 引用 分享
docter_zhao wrote: huvec 必需加ECGS 及肝素，否则很难生长增殖
这个好像也未必吧，我养的原代的huvec 只用20％胎牛血清的RPMI1640也长的很好呀，只是传ecgs 能传这么多代吧
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2004-09-08 00:20 消息 引用 分享
我们曾试过用m199或DMEM 加20％胎牛血清原代培养，感觉效果不佳，后来加了ECGS 及肝素，发现细胞长得能有改变
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huvec 是脐静脉内皮细胞,不是那么难养,细胞可以从脐带自己提取,卖现成的细胞株也不贵,用内皮细胞的配套培email-sinian19988@
∙∙细胞系查询培养基
培养用常用试剂各品牌评定
cairuiyanzi
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加关注 2012-08-16 10:02 消息 引用 分享
哪位大虾知道HUVEC 加肝素的目的？谢谢了！ 我现在养着HUVEC ，第二代是用新配的GIBCO 的M19培养两天发现细胞状态不好，似大面积凋亡，并伴有部分脱落。
本人怀疑肝素钠终浓度太低，今
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• 【原创】全职二战考了253分，去年277！！！
surkim
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-5 2012-08-20 15:54 消息 引用 分享 HUVEC 细胞销售的很多，外资企业像allcells 等。
发表的文章影响因子也挺高的，需要联系我（票数+收藏+ 举报
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复旦IBS 细胞库 血清大促销 刺客之心
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加关注 2012-11-06 22:55 消息 引用 分享 我养的是胎盘血管内皮细胞，因为课题要求，只用了高糖DMEM+20%FBS+PS 和两性也没有什么问题
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∙ 巴罗克开春送祝福啦！
ninifeixiang1112 2013-06-18 17:09 消息 引用 分享
现在开始养HUVEC 细胞，有什么特别需要注意的问题吗？请各位多给建议啊。
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∙ 人间充质干细胞无血清培养基
泸医郎中2013-06-18 20:36 消息引用分享
ninifeixiang1112 wrote:
现在开始养HUVEC细胞，有什么特别需要注意的问题吗？请各位多给建议啊。
没有什么注意的，不要把这个细胞无限传代哈，这个细胞容易老化。
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艾裴儿
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加关注2013-09-06 14:39 消息引用分享
泸医郎中wrote:
没有什么注意的，不要把这个细胞无限传代哈，这个细胞容易老化。
那这个细胞能传多少代呢？
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艾裴儿wrote:
那这个细胞能传多少代呢？
这个要看是原代细胞还是细胞株哈。
ATCC的细胞株可以传50代以内，原代不行哈票数+收藏1
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没有人用MCDB吗？
我用的这个加百分之15的胎牛血清细胞长势很好，20代以内基本不变。
还要加一点bFGF。