293细胞培养心得
293T细胞培养攻略
293T细胞培养攻略1.培养基准备293T细胞通常使用DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）作为培养基，配以10%胎牛血清（FBS），1%青霉素/链霉素（Penicillin/Streptomycin）。
在培养293T细胞之前，首先将适量的DMEM加热至37°C，并将相应数量的胎牛血清和抗生素加入其中。
2.细胞传代传代细胞是保持293T细胞健康生长和细胞性能的重要步骤。
当细胞达到80-90%的密度时，可以开始细胞传代。
首先，用无菌PBS（磷酸盐缓冲液）将细胞培养瓶中的培养基洗涤一次，然后用0.25%胰酶/EDTA（乙二胺四乙酸）溶液将细胞溶解5-10分钟。
溶解后，加入与胰酶/EDTA液体相等的培养基，轻轻悬浮细胞，并将其移至新的培养瓶中。
将新的培养基加入新瓶中，以使其达到适当的细胞密度。
3.293T细胞的培养条件4.细胞转染293T细胞被广泛用于转染实验。
细胞转染是将外源DNA转运到293T 细胞中的方法，以研究基因功能或进行蛋白表达。
293T细胞的易于转染性质使其适合于多种转染实验，包括常规的钙磷法和化学法（如聚乙烯亚胺）以及电穿孔法。
在进行转染实验之前，应将细胞培养至80-90%的密度，并在转染之后对其进行恢复。
5.结束实验时的保存和冻存细胞在完成实验后，如果有需要保存细胞的需求，可以将293T细胞冻存。
为此，收集细胞，并用DPBS（无菌磷酸盐缓冲液）洗涤细胞。
然后，用0.25%胰酶/EDTA液解细胞5分钟，并加入相等体积的培养基以停止胰酶的作用。
将细胞离心，并以适当的速度冻存保护液（如10%DMSO和90%FBS）重新悬浮细胞。
将细胞悬浮液分装至冻存管中，并使用液氮保存。
总结：293T细胞是一种常用的细胞系，在生物医学研究中发挥着重要作用。
通过遵循上述培养攻略，可以获得高质量和可靠的293T细胞培养结果。
有针对性的细胞传代、定期更换培养基、温度和CO2的适当控制以及正确的细胞转染和细胞冻存步骤可以确保细胞的生长和稳定性，为细胞实验提供最佳条件。
七个293-T细胞培养的注意事项
七个293-T细胞培养的注意事项
培养293细胞应注意以下几个方面：
1.用1640加10%胎牛血清，有的种系用DMEM.血清要求质量较高，在普通血清中细胞生长不太好。
1640用双蒸水溶解，按说明加入碳酸氢钠。
2.培养液中应加入HEPES，起缓冲pH值的作用，否则会影响细胞状态。
如果用20%的HEPES，每次配培养液时每200ml培养液可加入 5ml.加入HEPES后1640培养液颜色略呈橘黄色而非暗红色。
3.消化所用胰酶可选择0.125%浓度，且不要消化时间太长。
也有研究者认为不用胰酶，直接吹打使细胞脱壁，但使用胰酶效果较好。
消化时在镜下观察到细胞形态稍有变化即可，不要等形态明显变化后再停止。
可以不用加血清终止消化，只要将胰酶倒出来，加上培养液吹打即可。
4.传代密度不宜过高也不易过低，一般1瓶传3瓶可能比较合适。
5.培养液应该适当偏酸性，在7.0-7.2之间比较好。
一般加上HEPES后，pH值是不用调的。
6.细胞代数越高生长越快，同时性状和原代差别也更大。
一般2-3天传代一次比较合适。
7.传代时细胞密度在80%左右比较好，如果超过90%融合再传会影响细胞状态。
HEK293细胞
兄弟最近在培养HEK293细胞，细胞是刚从美国ATCC买回来的，问题是复苏后几代，细胞表现出2种形态，请大家看一下，哪个是正常的，不正常的是什么原因呢？
附图
图2
我的细胞也出现了这种现象，即使是同一瓶细胞传代，也可能出现一瓶像图1，一瓶像图2。
图1的瓶底出现点状物，细胞很容易漂浮。
我认为可能是血清质量问题，建议换一批血清或提高血清浓度试一下，把那种长得网状的细胞丢弃，几代之后再看看情况如何。
我觉得图2的状态比较正常,图1中的细胞状态不太好了.我分析有以下几个原因:
1.HEK293因为贴壁能力非常差,所以培养皿的质量很重要,一般我每次传代都会换新的培养皿,如果一个培养皿多次传代的话,细胞的贴壁就很差了.
2.传代后24小时内不要移动和观察细胞,否则细胞容易漂.
3.HEK293的传代次数超过30代以后,状态会变差,需要重新复苏培养了.。
细胞培养心得
目录293和293T293T细胞的培养心得293T细胞的培养与传代Jurcat细胞的传代悬浮细胞培养方法Jurcat细胞培养方法293T细胞的培养心得点击次数： 12 发表于：2008-08-24 23:25转载请注明来自丁香园来源：丁香园293T细胞差点被我养死，幸好我又将它起死回生，一点心得。
细胞传代：当细胞在细胞培养瓶内长满达到80％时就要传代，一传二，24小时后再传代。
48小时传就不好了，如果在24小时后细胞没有长到80％，应该换新的培养基，不然，培养基变黄，细胞脱落。
细胞消化：将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清），混匀，不能吹打，分装2瓶，如果细胞没长满就脱落，则只需加入5mlMEM，不分装。
如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固，培养基上清没有细胞脱落碎片，且细胞长满达到80％以上，吸走培养基，加入5ml 的PBS+EDTA(0.02%)，迅速轻微晃动，竖立培养瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超过3min，细胞完全消化脱壁，取出加入10ml培养基轻微吸打混匀，分装2瓶。
培养基：MEM(GIBCO)+10%胎牛血清（杭州四季青）＋双抗293T细胞的培养与传代点击次数： 24 发表于：2008-08-25 20:47转载请注明来自丁香园来源：丁香园293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。
大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。
我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。
293、293T细胞培养及转染一点经验
qq ：439572370HEK-293是用DMEM 培养基培养吗？
HEK-293细胞是我在锐赛生物实验室做项目时常培养的细胞，DMEM+10%血清+双抗+谷氨酰胺，这类的细胞贴壁性不是太强，所以不要消化过久，容易损伤细胞。
状态较好的293细胞
细胞生长较快，一般1:3~1:5传代，30%~50%融合度2-3
天即可长满。
细胞状态不好后会变瘦、产生大量黑点（细胞碎片）。
网友咨询：我们这里的293转染质粒效率一直不高，
各种方法均试过了，很少能达到50%，老板说他在
国外做293转染很容易达到80%以上。
我想问一下哪里有好的293细胞卖？非常感谢。
答：293系列的细胞都是非常好转染的：注意点：
1.转染前细胞的铺板密度、细胞状态
2.转染的时间
3.转染试剂与质粒的比值
干扰载体转染293T 细胞48h 的图片，供参考。
293T 细胞生长速度更快，形态较293A 细胞小，贴壁性比293
细胞弱很多，消化时间更要注意，没培养过的刚接手细胞要在注意留种的同时多试验消化几次，掌握经验值。
293
细胞常用于腺病毒包装、293T
细胞常用于慢病毒包装。
HEK293细胞培养心得
HEK293细胞培养心得首先，为了成功培养HEK293细胞，一个优良的细胞培养基是必不可少的。
一般来说，培养基应包含必需的营养物质，比如氨基酸、维生素、糖类和无机盐等。
同时，培养基还应该含有足够的抗生素以预防细菌和真菌的污染。
最好使用无血清的培养基，以避免动物源性成分对细胞培养的影响。
其次，准备一个合适的细胞培养环境也是至关重要的。
温度、湿度和二氧化碳浓度等条件应符合HEK293细胞的生长要求。
一般来说，细胞应在37°C的温度下培养，在5%的二氧化碳气氛中保持培养皿内的湿度。
细胞的传代是维持细胞活力和健康状态的重要步骤。
对于HEK293细胞，通常使用胰酶进行消化和洗涤来分离细胞。
对于细胞的新鲜分离，可以将细胞培养皿放入冰箱中进行预冷却，然后使用含有胰酶的PBS缓冲液进行洗涤。
定期检查细胞的密度和健康状况，并及时进行传代是非常重要的。
在培养细胞的过程中，细胞污染是一个常见的问题。
为了避免细菌和真菌的污染，可以在细胞培养过程中添加抗生素。
此外，操作时应注意细胞培养器具的无菌性，使用经过消毒的培养器具并保持培养环境的清洁是必要的。
细胞的冻存是为了保存和传递细胞的重要方法。
在将细胞冻存之前，应通过使用逐渐降低培养基中血清含量的方法适应细胞在无血清条件下生长。
然后使用冷冻保护剂配制适当的冻存液，将细胞分装到冻存管中，并使用液氮罐进行快速冷冻。
最后，定期检查细胞的健康和生长状态是维持细胞培养的重要步骤。
观察细胞的形态和贴壁情况，并使用显微镜检查细胞的活力和细胞数目。
如果细胞出现异常形态或生长减慢，可能是因为细菌或真菌污染，应及时采取相应的措施。
总之，HEK293细胞的培养需要一定的技巧和经验。
通过优化培养基、培养条件和消毒措施，加强细胞观察和细胞传代，可以有效地培养和维持HEK293细胞的活性和生长。
这些心得经验将有助于研究人员在实验室中更好地使用HEK293细胞进行相关研究。
细胞培养入职培训心得体会
细胞培养入职培训心得体会细胞培养是生物医学实验中非常重要的一个环节，它对实验结果的准确性和可重复性有着至关重要的影响。
在我入职的第一个月，我接受了公司的细胞培养入职培训，通过授课和实际操作，我对细胞培养有了更加深入的认识和了解。
在培训的过程中，我不仅学到了细胞培养的基本理论和技术，还体会到了团队合作和沟通的重要性。
在这篇文章中，我将分享我在细胞培养入职培训中的心得体会。
在第一次接触细胞培养的时候，我对这个过程感到非常陌生。
虽然在学校里学过相关理论知识，但在实际操作中还是感到非常吃力。
因此，我对细胞培养的重要性产生了更加深刻的认识。
这也激发了我对细胞培养的学习热情，我希望通过这次培训，能够掌握细胞培养的基本技术，为日后实验工作的顺利开展打下坚实的基础。
培训的第一天，我们就开始了理论知识的学习。
导师详细讲解了细胞培养的流程、原理和注意事项，并且配以图文并茂的PPT，使我们更加直观的了解了这方面的内容。
在理论课上，我学到了许多新知识，例如：细胞的培养条件、培养环境的要求、细胞培养的基本流程等。
这些知识的学习使我对细胞培养有了一个全面的认识，也为后续的实际操作打下了良好的基础。
除了理论课，我们还进行了细胞培养实操课。
导师为我们带来了不同种类的细胞，通过操作视频和实际操作，在导师的指导下，我们逐步学会了细胞培养的基本技术。
例如：细胞的传代、培养基的配制、细胞的分离和传代等。
通过实操，我进一步加深了对细胞培养技术的理解，并且掌握了细胞培养的基本操作流程。
在实操课中，我最大的收获就是学会了严格控制细胞培养的条件。
比如，细胞培养必须在无菌操作条件下进行，培养皿和器具都必须经过高温高压消毒，培养基和培养液的配制也需要按照一定的比例和方法进行。
这些细节性的操作确保了细胞培养的可靠性和准确性。
此外，在细胞培养中，对于细胞的分代和传代也有着严格的要求。
要注意细胞的数量和活力，不可使细胞过度密集或过度释放，要及时传代，保证细胞在健康状态下进行培养。
细胞培养技术心得体会范文
细胞培养技术心得体会范文细胞培养技术是现代生物科学研究中非常重要的实验技术之一，它可以使科研人员对细胞进行体外培养和研究。
在我进行细胞培养技术学习的过程中，我深深感受到了它的重要性和应用的广泛性。
下面是我对细胞培养技术的一些心得体会。
首先，细胞培养技术是一门基础的实验技术。
在进行任何与生物学相关的实验研究时，细胞培养技术都是不可或缺的。
通过细胞培养技术，科研人员可以获得大量的特定类型细胞，并对其进行后续的实验操作。
比如，通过细胞培养技术，可以获得肝细胞、肺细胞等特定细胞，然后可以对这些细胞进行药物检测、基因转染等实验，从而研究细胞的生命活动和相关机制。
因此，细胞培养技术是生物学等学科的基础。
其次，细胞培养技术对实验操作的要求非常高。
在进行细胞培养的过程中，需要严格控制培养液的成分、温度、湿度、CO2浓度等多个参数，以保证细胞能够正常生长和繁殖。
同时，需要注意培养器具的消毒和无菌操作，以避免培养过程中的细菌和真菌污染。
因此，细胞培养技术对科研人员的实验技术和操作规范要求非常高，这也是我在学习过程中深受启发的地方。
另外，细胞培养技术需要耐心和细心。
由于细胞生长和繁殖的周期相对较长，所以在进行细胞培养实验时，需要耐心等待细胞的生长和繁殖。
此外，由于细胞对环境的变化非常敏感，稍有不慎可能导致细胞的死亡或繁殖异常。
因此，细胞培养技术需要科研人员具备细心和耐心的品质，随时观察和调整培养条件，以保证实验的顺利进行。
此外，细胞培养技术也存在一定的风险。
细胞培养液中的成分和培养条件可能会对细胞产生毒性影响，导致细胞的死亡或繁殖异常。
此外，细胞也可能会被真菌、细菌等微生物污染，从而影响实验结果。
因此，在进行细胞培养实验时，需要对培养液和培养条件进行严格控制和检测，以降低实验风险。
细胞培养技术不仅在科研领域中有广泛应用，在医学领域也有重要的应用价值。
通过细胞培养技术，可以获得人体细胞，并进行药物筛选和毒理学评价等实验。
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293细胞培养
293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。
它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与ey于1976年用DNA转染技术构建而成。
293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。
哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。
293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。
单层培养细胞在5-10％FBS-DMEM中能生长很好。
一般来讲，1:10传代后，一周可以长满。
严禁过度生长，这点很重要。
因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染，传代时也不易打散。
悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定。
293细胞在传代120次以后，其表型可能改变，生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。
293细胞培养特性：
1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。
一般用高糖的DMEM培养基。
2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。
12小时-24小时90%以上细胞贴壁。
293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例为1：3。
3、293细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液，最好购入时先大量冻存。
4、复苏293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。
细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀,若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的70%～80%时消化冻存,复苏时将其全部接种至2个50ml瓶中时较为合适。
刚复苏的293贴壁很慢，复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。
复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适,如果用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。
换液前宜将培养基预热。
5、转染：体外应用293细胞进行细胞转染时，如果是采用磷酸钙转染，一定要注意293细胞不要全部长满细胞培养盘，长满细胞时加入磷酸钙就会使293细胞大片的脱落，最好是当293生长到1/2或2/3时进行磷酸钙转染，可以避免细胞的大量脱落。
其它的经验：1、用大瓶培养较小瓶要好，可能是更有利于293均匀的分布，利于营养的摄取
2、培养液要新鲜，每次只配1000ml，分为2-4瓶，不用的培养液，冻存在-20度，
3、要及时传代，最好是细胞基本铺满培养瓶底部，但是细胞之间还没有完全贴紧，总是多少有空隙的时候最好。
4、如果细胞贴壁不好，可能是消化过久，或是培养瓶不够干净，当然要除外细胞污染。
5、如果使用用玻璃培养瓶或皿，可以采用高压灭菌的0.2%明胶溶液预处理培养瓶/培养皿，方法是将明胶加入培养皿，使之浸泡到底面的各个部分，然后吸出，置超净台内晾干即可使用。
这样处理后细胞贴壁效果好且镜下细胞立体感强。
如果是新的塑料培养瓶就不用处理。
培养基；GIBCO DMEM粉剂，加双抗，HEPES，NaHCO3
配置高糖的DMEM培养基1000ml，
1.一袋DMEM培养基（GIBCOBRL)用去离子水溶解
2.加入NaHCO3 2.0g
3.加入谷氨酰胺0.146g（终浓度为5mM）
4.加入青霉素10万U（终浓度100u/ml），链霉素6.5万U（终浓度100u/ml）
5.定容900ml
6.过滤除菌、分装到两个消毒的500ml瓶子中
7.加入灭活小牛血清100ml。